等电聚焦

摘要： 血红蛋白A1c(HbA1c)是糖尿病诊断的关键生物标志物,目前其常用的分析方法为阳离子交换高效液相色谱法(CX-HPLC,5/50 mm分离柱),此方法虽然具有稳定、快捷与自动化等众多优点,但临床CX-HPLC(VARIANTⅡsystem)谱图中仍存在未知峰,尤其干扰HbA1c准确测定的谷胱甘肽化血红蛋白A3(HbA3)在色谱图中的相对位置仍不清楚.针对这一问题,该文以人新鲜血液为样本,首先利用低分辨CX-HPLC对血样进行分析,提示未知峰P3存在.然后通过微阵列等电聚焦(IEF)电泳和高分辨阳离子交换HPLC(Mono-S 5/50 mm分离柱)对血样的主要血红蛋白(Hb)成分进行分析,提示未知峰P3为HbA3峰.随后,通过血红蛋白谷胱甘肽化实验,利用HbA1c峰降低、HbA3峰明显增强这一信息,进一步推测未知峰P3即是HbA3峰,其在CX-HPLC中的保留时间在1.50 min左右.最后,结合前期研究讨论了体内应激情况下Hb谷胱甘肽化对HbA1c检测的影响.该研究丰富了CX-HPLC的未知峰P3的色谱信息,为更精准诊断糖尿病提供了有价值的参考.

摘要： 本研究以海生红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料,用DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析和Butyl Sepharose 4 Fast Flow疏水作用层析,从Sephacry S-300(S-300)凝胶过滤所得R-藻红蛋白中分离纯化出在带电性和疏水性表现结构特性差异的2种R-藻红蛋白组分,R-PEI和R-PEII.这2种R-藻红蛋白在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)和非变性等电聚焦(native isoelectric focusing,Native-IEF)中均表现单一条带,等电点(pI)分别为R-PEI 4.7,R-PEII 4.6.R-PEI和R-PEII有着相同的荧光光谱和400～750 nm吸收光谱,仅在波长小于400 nm时R-PEI表现出大于R-PEII的紫外光吸收.SDS-PAGE多肽组成分析结果证明,R-PEI和R-PEII不仅有相同的α、β、γ 等有色亚基,而且含有相同无色多肽.这些结果表明,R-PEI和R-PEII来自于多肽链的结构特性变化,没有对R-藻红蛋白各亚基的发色团构象及其微环境产生明显影响.

摘要： 双向电泳系统仪器中文名:双向电泳系统仪器英文名:Two-dimensional electrophore sissystem规格型号:PROTEANIEF制造商:bio-rad产地:美国主要技术指标:1.系统包括PROTEAN等电聚焦槽和IPG预制胶条,用于双向电泳的一向分离,简单,高效重复性好。

摘要： Objective To develop a platform method using imaged capillary isoelectric focusing (iCIEF) for measuring charge heterogeneity of monoclonal antibody (mAb) and validate its suitability with different isoforms of mAbs (IgG1,IgG2,IgG4).Methods The volumes of carrier ampholyte and cathode stabilizer,focusing time,and urea concentration were optimized in iCIEF method development.The specificity,precision,linearity,accuracy,and robustness of this method were validated using 3 isoforms of mAbs (IgG1,IgG2,IgG4).Results Under following conditions:70μl 3 mol/L urea-0.5 ％ methyl cellulose,4 μl broad-range carrier ampholyte (pH3-10),2 μl cathode stabilizer (500 mmol/L Arg),2μl each isoelectric point 6.14 and 9.99 Markers,0.2 mg/ml mAb (sample) was prepared.The detection parameters were determined to be pre-focusing 1 min at 1 500 V and focusing 8 min at 3 000 V.The specificity of the platform method was good,and formulation buffer had no interference with detection.Repeated testing of 6 parallel samples and testing 12 samples by different persons at different time both showed that,the relative standard deviations of all compositions met requirements.The linear coefficients of determination (R2) were ≥0.99 for main and acidic compositions in mAb and ≥0.98 for basic composition,when the final concentrations of mAbs (samples) were 0.1-0.3 mg/ml.The accuracies of the platform method for detecting different composition contents in mAbs were 92％-105 ％.The robustness results of design of experiment showed that carrier ampholyte volume and capillary lot had significant impacts on this platform method.Conclusions The iCIEF platform method for analysis of charge heterogeneity of different isoforms of mAbs is developed,which has high separation resolution and good precision,accuracy,and robustness.This method can provide a more effective tool for charge heterogeneity characterization and quality control of mAbs.%目的 采用成像毛细管等电聚焦电泳技术(imaged capillary isoelectric focusing,iCIEF)建立分析单克隆抗体(单抗)电荷异质性的平台方法,并用不同亚型单抗(IgG1、IgG2、IgG4)确认该平台方法的适用性.方法 优化该平台方法的部分参数,包括两性电解质和阴极稳定剂体积、聚焦时间和尿素浓度.采用3种亚型单抗(IgG1、IgG2、IgG4)对该平台方法的专属性、精密度、线性、准确度和耐用性进行验证.结果 对样品(单抗)的处理条件为:3 mol/L尿素-0.5％甲基纤维素溶液70μl、两性电解质(pH3～10)4 μl、阴极稳定剂(500 mmol/L精氨酸)2 μl、等电点6.14和9.99 Marker各2μl,最终完成0.2 mg/ml单抗(样品)的制备.检测参数:预聚焦1 500V、1 min,聚焦3 000V、8 min.该平台方法的专属性良好,制剂缓冲液对检测无干扰.重复检测6份平行样品以及不同分析员于不同时间检测12份样品各成分含量的相对标准偏差均符合规定的要求.单抗(样品)终浓度为0.1～0.3 mg/ml时,主要和酸性成分的线性决定系数(R2)≥0.99,碱性成分的线性R2≥0.98.该平台方法检测样品各成分的准确度为92％～105％.耐用性实验设计结果表明,两性电解质(pH3～10)体积和毛细管批次对该平台方法有显著影响.结论 建立的iCIEF平台方法分离度较高,精密度、准确度和耐用性良好,为单抗制品的电荷异质性表征和质量控制提供了更有效的工具.

摘要： In order to study the most efficient 2-DE protocol of Fokienia hodginsii proteomics, three different methods including TCA-acetone, phenol extraction method and TCA-phenol extraction method were tested in the experiment. Besides, three different IPG strips of pH3~10, pH5~8, pH4~7 combined with three different focusing parameter which showed 20 000, 25 000, 30 000 Vh respectively were performed in IEF. Finally, different concentration separation gel (10%,12.5%)were performed in all SDS-PAGE trial. The results indicated that more protein spots were detected on 2-DE gels by phenol extraction method, IPG strips of pH4~7, 25 000 Vh focusing parameter, and 10% separate gel were the best settings of the 2-DE protocol. The experiment preliminary established the 2-DE protocols of F. hodginsii leaves which would be beneficial for the further study of proteinmics.%蛋白质双向电泳是蛋白质组学研究方法之一,但蛋白质双向电泳技术体系却因物种不同而有所差异,因而蛋白质双向电泳体系的建立是进行蛋白质分离、鉴定的首要步骤。本文对福建柏叶片蛋白质提取方法、IPG胶条、等电聚焦参数设定、丙烯酰胺分离胶浓度等因子进行单因素分析,对福建柏双向电泳技术进行优化。结果表明,采用三氯乙酸-丙酮提取福建柏叶片的蛋白点多且图像清晰, pH4~7的 IPG 胶条最适合福建柏叶片蛋白的分离,等电聚焦参数设定为20000 Vh,浓度为10%的分离胶进行福建柏双向电泳最好。本研究初步建立了福建柏叶片蛋白质双向电泳体系,为深入研究福建柏蛋白质组学提供依据。

摘要： 人促卵泡激素(human follicle stimulating hormone,h FSH)是垂体前叶嗜碱性细胞合成和分泌的一种糖蛋白类促性腺激素[1].在不孕不育的诊断和治疗中,FSH起着不可缺少的作用.应用现代生物技术,成功生产出重组人促卵泡激素(rh FSH).重组人促卵泡激素在临床上使用的优点是蛋白安全、稳定、一致性高,避免了天然FSH提取过程中出现的糖基化差异[2].本文则应用GE healthcare多功能水平电泳仪和Invitrogen垂直电泳仪对重组人促卵泡激素进行等电聚焦项目的 检测,比较重组人促卵泡激素蛋白在水平与垂直电泳条件下的检测差异,从而建立的一种高分辨率的蛋白质分离分析检测方法 .

摘要： 蛋白质双向电泳是蛋白质组学研究方法之一,但蛋白质双向电泳技术体系却因物种不同而有所差异,因而蛋白质双向电泳体系的建立是进行蛋白质分离、鉴定的首要步骤。本文对福建柏叶片蛋白质提取方法、IPG胶条、等电聚焦参数设定、丙烯酰胺分离胶浓度等因子进行单因素分析,对福建柏双向电泳技术进行优化。结果表明,采用三氯乙酸-丙酮提取福建柏叶片的蛋白点多且图像清晰,pH4~7的IPG胶条最适合福建柏叶片蛋白的分离,等电聚焦参数设定为20000Vh,浓度为10%的分离胶进行福建柏双向电泳最好。本研究初步建立了福建柏叶片蛋白质双向电泳体系,为深入研究福建柏蛋白质组学提供依据。

摘要： 为建立适合于大葱花蕾总蛋白的双向电泳体系，该研究以大葱花蕾为材料，对大葱花蕾总蛋白提取方法、IPG胶条梯度范围、上样量、等电聚焦等双向电泳的关键步骤进行优化。

摘要： 双向电泳技术是蛋白质组学研究中最流行的一种技术,是大规模筛选蛋白质差异表达的最佳方法.该技术主要通过等电聚焦和SDS-PAGE相结合的方法,通过等电点和分子量大小对蛋白质进行分离.因其具有方便、快速及良好的重复率和分辨率,是蛋白质组学研究中最广泛应用的技术.本文就其技术产生、原理、影响因素及其在乳酸菌研究中的应用做一综述.

摘要： Preparative ampholyte-carrier-free isoelectric focusing electrophoresis was established to separate small zwitterionic compounds.The pH gradient buffer solution was prepared by introducing a series of mixed acid and alkali solution at different pH value into a column containing agarose gel.After loading sample,addi-tional electric field was applied on the column to perform isoelectric focusing electrophoresis.With the continu-ous addition of last buffer solution,the samples were focused at certain pH value zone and eluted from the col-umn one by one,so that they could be fractionatedly collected.The effect of additional electric field on pH gra-dient was investigated.The effects of additional electric field and pH gradient on isoelectric focusing electropho-resis were also studied.Separation results of model samples revealed that small zwitterionic compounds could be separated according to the pI values by this method.%建立了无需两性电解质的等电聚焦微量制备方法，可以分离两性小分子物质。采用混合酸性和碱性溶液在填充琼脂糖凝胶的色谱柱中制备了 pH 值梯度变化的缓冲溶液，上样后，在色谱柱上外加电场进行等电聚焦分离，随着终止缓冲溶液的连续加入，各种样品被聚焦在一定的 pH 值区域并依次洗脱，分段收集。考察了外加电场对 pH 梯度的影响以及外加电场、pH 梯度对等电聚焦分离的影响。模式样品的分离结果表明，所建立的方法可以实现两性小分子物质按照等电点顺序依次分离。

摘要： 等电聚焦(isoelectricfocusing,IEF)是一种根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术.Hjerten和Zhu首次报道了在毛细管内进行等电聚焦(capillary isoelectric focusing,CIEF)的方法之后,CIEF被广泛应用于不同等电点蛋白质混合物的分离.在自由溶液中进行等电聚焦必须添加较高浓度的两性电解质(CAs)以形成等电聚焦所必须的pH梯度.由于CAs本身是十分复杂的混合物,并且具有较强的紫外吸收,所以使用CAs会带来重现性差,不稳定及检测灵敏度降低的等缺点.通过其它方法,如:电解水、热致pH梯度、流体聚焦等进行等电聚焦的技术也有报道,但大多存在所需仪器设备复杂、分辨率低、过程复杂等缺点。

摘要： 等电聚焦(IEF)广泛应用于具有不同等电点的蛋白质混合物的分离。传统的IEF是在凝胶板上进行的。1985年Hjenen等人首次报道了在毛细管中进行的等电聚焦,此后,cIEF得到了不断地发展。1999年Hofmann等人报道了在玻璃芯片上进行的等电聚焦,证明在芯片上进行IEF具有快速、高效、简便及所需样品量少等优点。本文在涂层的PDMS/玻璃芯片采用等电聚焦两步法一化学发光检测对三种蛋白质进行了分析。

摘要： 用简便易行且价廉快速的方法在从复杂蛋白样品中快速发现蛋白标志物和对特定蛋白质进行定性定量分析中仍具有现实意义.近些年,纸基分析装置(PAD)因具有便携、价廉和易操作等优点在POCT领域中的应用潜力重新受到了广泛关注.如何将蛋白质预分离技术与纸基分析装置结合以实现复杂蛋白质样品的分析仍面临很多问题.等电聚焦(IEF)是在一定pH梯度条件下基于两性分子的等电点进行分离的一种电泳方法.因其具有浓集和分离能力,在蛋白质组研究中具有重要的地位.本文成功展示了一种在简单开放的纸流体通道上进行IEF的方法,用模型蛋白及血清样品展示了其IEF分离过程,用SDS-PAGE对IEF结果进行了验证,还用直接染色比色法定量分析了人血清中的白蛋白的含量,初步展示了该PAD IEF在POCT分析中的潜力.

摘要： 目的：琼脂糖等电聚焦结合双抗体过氧化物酶标记、亲和素-生物素放大技术检测CSF寡克隆区带，研究该方法的敏感性和特异性。rn 方法：琼脂糖等电聚焦结合双抗体过氧化物酶标记、亲和素-生物素放大技术检测21例MS患者、42例神经系统炎性疾病(NID)患者和19例神经系统非炎性疾病(NNID)患者的CSF及对照血清。rn 结果：MS患者寡克隆区带阳性率为47.6%，诊断特异性为98.4%，MS组与NlD组、NNID组的差异均有统计学意义(P<0.0125)。rn 结论：该方法敏感、特异，是MS临床诊断最有价值的免疫学指标。我国MS患者寡克隆区带的阳性率较欧美地区低，但与亚洲一些国家及我国的台湾和香港地区接近，阳性率差异可能与东西方MS患者的免疫遗传背景不同有关。

摘要： 本文对用鸡卵黏蛋白为配基亲和层析法分离纯化麦胚凝集素,并对纯化的麦胚凝集素进行性质分析的问题进行了研究.研究结果证明,此亲和层析方法使麦胚凝集素纯化约1000倍,是一种经济适用的纯化方法.文章对实验方法和研究过程进行了介绍.

摘要： 本文对用鸡卵黏蛋白为配基亲和层析法分离纯化麦胚凝集素,并对纯化的麦胚凝集素进行性质分析的问题进行了研究.研究结果证明,此亲和层析方法使麦胚凝集素纯化约1000倍,是一种经济适用的纯化方法.文章对实验方法和研究过程进行了介绍.

摘要： 本文对用鸡卵黏蛋白为配基亲和层析法分离纯化麦胚凝集素,并对纯化的麦胚凝集素进行性质分析的问题进行了研究.研究结果证明,此亲和层析方法使麦胚凝集素纯化约1000倍,是一种经济适用的纯化方法.文章对实验方法和研究过程进行了介绍.

摘要： 本文对用鸡卵黏蛋白为配基亲和层析法分离纯化麦胚凝集素,并对纯化的麦胚凝集素进行性质分析的问题进行了研究.研究结果证明,此亲和层析方法使麦胚凝集素纯化约1000倍,是一种经济适用的纯化方法.文章对实验方法和研究过程进行了介绍.

摘要： 本文对用鸡卵黏蛋白为配基亲和层析法分离纯化麦胚凝集素,并对纯化的麦胚凝集素进行性质分析的问题进行了研究.研究结果证明,此亲和层析方法使麦胚凝集素纯化约1000倍,是一种经济适用的纯化方法.文章对实验方法和研究过程进行了介绍.

摘要： 本发明提供一种含无患子总皂苷的蛋白质提取液，以质量百分比计所述提取液含2％‑10％的无患子总皂苷，应用于蛋白质的提取，能够更加完全的提取细胞或组织中的全蛋白质，且对SDS‑PAGE兼容性最好；提取液天然可降解，无环境污染。本发明还公开一种无患子总皂苷在蛋白质非变性凝胶电泳中的应用，能使蛋白质复合物保持高度的完整性。本发明还公开一种含无患子总皂苷的等电聚焦裂解液，以质量百分比计所述提取液含2％‑10％的无患子总皂苷，应用于蛋白质的等电聚焦中，能将细胞或组织的全蛋白质得以更好的分离和展现。

摘要： 本发明提供了一种毛细管等电聚焦(cIEF)测定重组蛋白质等电点的方法，它包括以下步骤：1)取重组蛋白，经浓缩脱盐，得到浓缩蛋白溶液；2)将载体两性电解质、凝胶、助溶剂、占位剂、等电点标记物与步骤1)的浓缩蛋白溶液进行混合，制备为供cIEF分析的样品混合液；3)用不同溶液对毛细管进行活化；4)将步骤2)中的样品混合液上样于毛细管中，20°C下进行聚焦分离，采用迁移溶液迁移，紫外吸收检测器记录cIEF图谱。5)根据步骤4)中的cIEF图谱，确定待分析样品混合物中重组蛋白各异构体的等电点。本发明所使用的方法具有分离效果好、峰容量高、重复性好、重现性强等优点，且适用于酸性重组蛋白质的质量控制。

摘要： 本发明为微管内等电聚焦和剪断吹出培养测定微生物等电点的方法，属于生物分析领域。本发明首先将载体两性电解质溶液在毛细管内采用恒定电压进行等电聚焦，使毛细管内形成了连续pH梯度的两性电解质；然后根据所加两性电解质形成的pH梯度与毛细管总长的线性关系，对毛细管进行等分剪断；最后对每段微管样品进行菌落培养，根据有菌落生长的微管在总管长中所处的位置来确定微生物的pH范围。本发明测定方法简单，快速，直观，该方法不仅可用于各种微生物等电点测定，并可用于微生物菌种的筛选。

摘要： 本发明涉及一种毛细管电泳用于微生物等电点的测定方法，属于生物分析领域。本发明首先将载体两性电解质溶液在毛细管内采用恒定电压进行等电聚焦，使毛细管内壁上形成连续pH梯度的两性电解质；其次将样品溶液注入毛细管中，采用恒定电压等电聚焦；然后采用固定气压，将毛细管内样品从聚焦段匀速推动经过检查窗口，可确定样品聚焦点的位置；最后根据pH梯度与毛细管长的线性关系，求出聚焦点的pH值。本方法可用于多种微生物同时在线检测，对于微生物等电点检测具有普适性。

摘要： 本发明提供一种含无患子总皂苷的蛋白质提取液，以质量百分比计所述提取液含2％‑10％的无患子总皂苷，应用于蛋白质的提取，能够更加完全的提取细胞或组织中的全蛋白质，且对SDS‑PAGE兼容性最好；提取液天然可降解，无环境污染。本发明还公开一种无患子总皂苷在蛋白质非变性凝胶电泳中的应用，能使蛋白质复合物保持高度的完整性。本发明还公开一种含无患子总皂苷的等电聚焦裂解液，以质量百分比计所述提取液含2％‑10％的无患子总皂苷，应用于蛋白质的等电聚焦中，能将细胞或组织的全蛋白质得以更好的分离和展现。

摘要： 本发明公开了一种重组蛋白的等电聚焦电泳等电点检测方法，包括如下步骤：S1、材料准备；将实验所用的各类材料准备妥当，以保证试验顺利进行；S2、试剂准备；实验所需试剂，待检样品与对照品，需及时备好，以供实验使用；S3、仪器准备；实验仪器提前清洗完毕后备好；S4、配制试剂；将实验无法直接使用的试剂，进行人工配制，以供使用，保证实验的顺利进行；S5、检验方法；主要以电泳作为方法对其检验；S6、分析判断结果；通过对比对照品分析判断出结果；本发明涵盖了材料、试剂、仪器的准备，试剂的合理配制，科学的检验方法，严谨的分析判定，做到了将重组蛋白进行等电聚焦电泳等电点检测，结果科学合理，具有说服力。

摘要： 本发明提供了一种毛细管等电聚焦(cIEF)测定重组蛋白质等电点的方法，它包括以下步骤：1)取重组蛋白，经浓缩脱盐，得到浓缩蛋白溶液；2)将载体两性电解质、凝胶、助溶剂、占位剂、等电点标记物与步骤1)的浓缩蛋白溶液进行混合，制备为供cIEF分析的样品混合液；3)用不同溶液对毛细管进行活化；4)将步骤2)中的样品混合液上样于毛细管中，20°C下进行聚焦分离，采用迁移溶液迁移，紫外吸收检测器记录cIEF图谱。5)根据步骤4)中的cIEF图谱，确定待分析样品混合物中重组蛋白各异构体的等电点。本发明所使用的方法具有分离效果好、峰容量高、重复性好、重现性强等优点，且适用于酸性重组蛋白质的质量控制。

摘要： 本发明涉及一种毛细管电泳用于微生物等电点的测定方法，属于生物分析领域。本发明首先将载体两性电解质溶液在毛细管内采用恒定电压进行等电聚焦，使毛细管内壁上形成连续pH梯度的两性电解质；其次将样品溶液注入毛细管中，采用恒定电压等电聚焦；然后采用固定气压，将毛细管内样品从聚焦段匀速推动经过检查窗口，可确定样品聚焦点的位置；最后根据pH梯度与毛细管长的线性关系，求出聚焦点的pH值。本方法可用于多种微生物同时在线检测，对于微生物等电点检测具有普适性。

摘要： 本发明为微管内等电聚焦和剪断吹出培养测定微生物等电点的方法，属于生物分析领域。本发明首先将载体两性电解质溶液在毛细管内采用恒定电压进行等电聚焦，使毛细管内形成了连续pH梯度的两性电解质；然后根据所加两性电解质形成的pH梯度与毛细管总长的线性关系，对毛细管进行等分剪断；最后对每段微管样品进行菌落培养，根据有菌落生长的微管在总管长中所处的位置来确定微生物的pH范围。本发明测定方法简单，快速，直观，该方法不仅可用于各种微生物等电点测定，并可用于微生物菌种的筛选。

摘要： 本发明提供了一种分析乙肝表面抗原病毒样颗粒的全柱成像毛细管等电聚焦电泳的方法，其包括如下步骤：配制上样溶液：将乙肝表面抗原病毒样颗粒样品溶液、甲基纤维素溶液、两性电解质载体、等电点标记物、尿素和亚氨基二乙酸溶解于水中，得到上样溶液；其中，所述两性电解质载体为pH 3‑10两性电解质载体；所述亚氨基二乙酸在上样溶液中的摩尔浓度为10‑20mmol/L；上机分析：采用全柱成像毛细管等电聚焦电泳测试仪对所述上样溶液进行等电聚焦，聚焦完成后得到等电聚焦图谱。本发明的分析方法依据不同电荷变异体的等电点(pI)特征进行测定，具有较好的稳定性和重现性。