竞争ELISA

摘要： 为了解蓝舌病(bluetongue,BT)在云南边境地区的流行和分布情况,2020年采用竞争ELISA方法,在云南省边境地区12个县市随机采集135个养殖场、活畜交易市场和散养户的3800份牛血清样品进行蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)抗体检测.结果显示:12个边境县市均检出阳性血清样品,平均样品阳性率为77.9％,场户阳性率为93.3％;样品阳性率有一定的地区差异,其中陇川县最高(92.0％),孟连县最低(48.0％),差异存在统计学意义(P<0.05);境外牛血清样品阳性率(84.8％)显著高于本地牛(67.9％),P<0.05;不同饲养方式下的样品阳性率存在差异,其中舍饲最高(81.4％),半放牧半舍饲(62.5％)最低,P<0.05;黄牛样品阳性率(80.0％)明显高于水牛(61.4％),P<0.05.结果推断,BT在云南边境地区可能广泛存在且流行严重,需要持续开展血清学调查、监测,重点加强对境外牛的控制.本研究为我国西南边境地区BT防控提供了数据参考.

摘要： 目的:通过建立开放式三明治酶联免疫分析方法(OE-ELISA),对雌二醇进行检测。方法:通过基因拼接构建质粒后在原核表达系统中制备小分子泛素相关修饰物蛋白-大肠杆菌麦芽糖结合蛋白-抗体轻链可变区(sumo-MBP-VL)和碱性磷酸酶-抗体重链可变区(ALP-VH)融合蛋白,并从产量和可溶性角度对两种蛋白的表达条件进行优化。将得到的两种蛋白纯化后分别作为包被抗体和酶标抗体,建立检测雌二醇的OE-ELISA方法。应用竞争ELISA和OE-ELISA测定不同浓度的雌二醇标准品,绘制标准曲线并计算两种方法的敏感性。结果:在质粒中加入sumo标签后,实现了sumo-MBP-VL融合蛋白的可溶性表达。在Rosetta宿主菌中37°C诱导后得到大量的ALP-VH和sumo-MBP-VL融合蛋白。OE-ELISA测定雌二醇标准品的标准曲线为y=0.0296x+1.3029,r^(2)=0.9961,敏感性为532 pg/mL,优于竞争ELISA 803 pg/mL的敏感性。结论:成功建立了检测雌二醇的OE-ELISA方法。

摘要： 1材料和方法1.1血清采集某猪场保育猪、育肥猪、母猪、种公猪血样96份,并分离血清,-20°C保存待检。1.2试剂口蹄疫O型竞争ELISA抗体检测试剂盒;猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒、猪蓝耳病毒抗体ELISA检测试剂盒、伪狂犬病毒gB抗体ELISA检测试剂盒、伪狂犬病毒gE抗体ELISA检测试剂盒。1.3方法按各试剂盒说明书进行操作,根据说明书计算方式计算结果并作出判定。

摘要： 在用竞争ELISA法检测布鲁氏菌病过程中,影响因素有很多,试验终止反应后这一步骤常被忽略,本文就该步骤影响OD值的因素进行探讨。结果表明,气泡的存在及静置时长均会增大反应孔的OD值,从而影响结果的准确性。

摘要： 为掌握云南省边境地区牛群中的阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)流行情况和分布特征,采用竞争ELISA检测方法,对2019—2020年采自云南省边境地区10个县市的牛群血清样品进行AKAV抗体检测与分析。结果显示:在采集的4437份牛血清样品中,检出抗体阳性样品1367份,平均抗体阳性率为30.81%;2019年抗体阳性率为27.88%,2020年为32.14%,差异不显著(P>0.05);入境牛抗体阳性率显著高于本地牛(P0.05);舍饲牛群的抗体阳性率显著高于半放牧半舍饲和系牧饲养(P<0.05),黄牛的抗体阳性率明显高于水牛(P<0.05)。结果表明,云南省边境地区存在一定程度的AKAV感染且有加重趋势,入境牛感染风险较高,需持续开展血清学调查和监测,加强境外牛的检疫和移动控制,降低AKAV向内地扩散的风险。本研究摸清了云南省边境地区牛群中的AKAV流行本底,为今后该病毒流行控制策略的研究与制定提供了参考。

摘要： 为快速准确地监测1型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)在我国的流行情况,本研究以分子筛纯化灭活的PRRSV-1(ZD-1株)为包被抗原,利用PRRSV-1的特异性单克隆抗体(MAb EU-1)为竞争抗体,经条件优化,建立了检测PRRSV-1的竞争ELISA(EU-C-ELISA)方法。反应条件优化结果显示,最佳抗原包被量为455 ng/孔,PRRSV-1 MAb EU-1的最佳稀释度为1:8。EU-C-ELISA结果判定标准:血清样品抑制率PI≥45%时判定为阳性,PI<45%判定为阴性。特异性试验结果显示,该方法仅能检测PRRSV-1阳性血清,与各谱系PRRSV-2及其他常见猪病毒和细菌阳性血清均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法能检测出16倍稀释的阳性标准血清,并且最早可在PRRSV ZD-1株感染猪后第7 d检测到血清中PRRSV-1抗体阳转;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%,对比试验结果显示该方法特异性和敏感性均显著优于现有试剂盒对PRRSV-1抗体的检测。利用该方法对2020年采自黑龙江、辽宁、河北、山东省10个猪场的432份临床血清样品进行检测,2个猪场检出PRRSV-1抗体阳性,猪场阳性率达20%,样品总阳性率为15.0%,显示PRRSV-1抗体已存在于我国部分地区猪群中。本研究在我国首次建立了PRRSV-1竞争ELISA抗体检测方法,为监测PRRS-1在我国的流行情况及科学防控该病提供了检测手段。

摘要： 塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)感染猪可引起口鼻、蹄和冠状动脉带等部位出现水疱,严重危害猪的健康。VP1蛋白是SVA重要的结构蛋白,含有病毒主要的抗原表位并可诱导猪产生中和抗体。本研究采用原核表达系统,将VP1基因分别克隆入表达载体pET32a和pGEX6P1中构建重组质粒,通过优化诱导表达条件,利用亲和层析介质纯化,成功制备了重组蛋白VP1-His和VP1-GST。以纯化的VP1-His蛋白免疫BALB/c小鼠,以纯化的VP1-GST蛋白建立间接ELISA,成功筛选获得3株稳定分泌抗VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株3A2、5D12和6G10,经Western-blot及间接ELISA鉴定,3株单克隆抗体具有良好的特异性,其腹水效价分别为1∶51200、1∶25600、1∶12800。应用效价最高的3A2抗体初步建立了检测猪血清中抗SVA抗体的竞争ELISA。临床样品检测结果表明,建立的竞争ELISA具有高敏感性,高特异性和高准确性。VP1蛋白单克隆抗体的制备为SVA致病机制的研究提供了材料支撑;竞争ELISA的建立对于SVA感染的防控具有重要意义。

摘要： 为评价口蹄疫病毒A型竞争ELISA(cELISA)抗体检测试剂盒在流行病学调查中的应用前景,对2017年从福建省三明市采集的336份黄牛、奶牛、羊和猪血清样品,用A型cELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测.结果显示,92份黄牛血清、92份羊血清、92份猪血清、60份奶牛血清的A型抗体阳性率分别为13.04％、11.96％、20.65％、86.67％.从上述4种血清中,各挑选10份血清(阴性、阳性各5份)共40份,采用口蹄疫病毒液相阻断ELISA(LPB-ELISA)抗体检测试剂盒进行验证.结果显示:cELISA检测为阳性的20份血清中,用LPB-ELISA检出阳性19份;cELISA检测为阴性的20份血清中,用LPB-ELISA检出阴性17份;两种方法的κ值为0.8,总符合率为90.00％.结果表明,A型cELISA试剂盒与LPB-ELISA试剂盒的符合率和一致性均较高,可用于口蹄疫流行病学调查和血清学监测.

摘要： 为了解牛流行性出血病(epidemic hemorrhagic disease,EHD)在云南省的流行和分布情况,采用竞争ELISA方法,2019年对11个县市的1199份牛血清进行流行性出血病病毒(epidemic hemorrhagic disease virus,EHDV)抗体检测,同时从各县市检测出的阳性血清中,随机选取18～50份通过微量血清中和试验进行血清型鉴定.结果显示:云南省11个县市均检测出EHDV抗体阳性样品,阳性率介于49.3％～91.3％,平均为81.8％;各地普遍存在3个及以上血清型,其中EHDV-7、-10、-6、-5血清型检出率较高,EHDV-8、-2血清型检出率较低,未检出EHDV-1型.结果表明,EHD在云南省流行广泛且较严重,流行血清型复杂.结果提示,需持续开展EHDV血清学监测,重视对该病的防控.此次血清学调查为我国西南地区EHD防控提供了数据参考.

摘要： 试验建立了IBR病毒抗体竞争ELISA检测方法,并进行了验证.经试验研究,封闭液用1.5％Casein酪蛋白、包被液用0.02M的PB溶液、包被浓度为1/1000,酶标单抗浓度为1/1000,酶稀释液为小反刍酶稀时,该IBR病毒抗体竞争ELISA检测方法的灵敏度和稳定性最佳,此时的板内变异系数为7.7％,板间变异系数为9.41％,均低于10％,且热稳定性良好.试验建立的竞争ELISA抗体检测方法具有良好的稳定性、特异性和灵敏度,可用于IBR病毒抗体的检测.

摘要： 本研究从山东省泰安、滨州、聊城、烟台四个不同地区七个不同区县捕获自然条件下生存的麻雀7批共143只,采集其中49只麻雀的血清样品,通过竞争ELISA方法没有检测到抗CAV抗体;采集所有麻雀的组织样品,通过PCR和核酸探针杂交方法检测鸡传染性贫血病毒(CAV)的携带情况,结果表明有53.85％(77/143)的麻雀体内携带CAV,根据核酸序列测定结果进行同源性分析,表明麻雀源性的CAV与鸡源性CAV的同源性在96.2％～100％.实验结果表明麻雀可能是CAV在自然界中除鸡之外的另一宿主.

摘要： 本研究从山东省泰安、滨州、聊城、烟台四个不同地区七个不同区县捕获自然条件下生存的麻雀7批共143只,采集其中49只麻雀的血清样品,通过竞争ELISA方法没有检测到抗CAV抗体;采集所有麻雀的组织样品,通过PCR和核酸探针杂交方法检测鸡传染性贫血病毒(CAV)的携带情况,结果表明有53.85％(77/143)的麻雀体内携带CAV,根据核酸序列测定结果进行同源性分析,表明麻雀源性的CAV与鸡源性CAV的同源性在96.2％～100％.实验结果表明麻雀可能是CAV在自然界中除鸡之外的另一宿主.

摘要： 本研究从山东省泰安、滨州、聊城、烟台四个不同地区七个不同区县捕获自然条件下生存的麻雀7批共143只,采集其中49只麻雀的血清样品,通过竞争ELISA方法没有检测到抗CAV抗体;采集所有麻雀的组织样品,通过PCR和核酸探针杂交方法检测鸡传染性贫血病毒(CAV)的携带情况,结果表明有53.85％(77/143)的麻雀体内携带CAV,根据核酸序列测定结果进行同源性分析,表明麻雀源性的CAV与鸡源性CAV的同源性在96.2％～100％.实验结果表明麻雀可能是CAV在自然界中除鸡之外的另一宿主.

摘要： 本研究从山东省泰安、滨州、聊城、烟台四个不同地区七个不同区县捕获自然条件下生存的麻雀7批共143只,采集其中49只麻雀的血清样品,通过竞争ELISA方法没有检测到抗CAV抗体;采集所有麻雀的组织样品,通过PCR和核酸探针杂交方法检测鸡传染性贫血病毒(CAV)的携带情况,结果表明有53.85％(77/143)的麻雀体内携带CAV,根据核酸序列测定结果进行同源性分析,表明麻雀源性的CAV与鸡源性CAV的同源性在96.2％～100％.实验结果表明麻雀可能是CAV在自然界中除鸡之外的另一宿主.

摘要： 本研究从山东省泰安、滨州、聊城、烟台四个不同地区七个不同区县捕获自然条件下生存的麻雀7批共143只,采集其中49只麻雀的血清样品,通过竞争ELISA方法没有检测到抗CAV抗体;采集所有麻雀的组织样品,通过PCR和核酸探针杂交方法检测鸡传染性贫血病毒(CAV)的携带情况,结果表明有53.85％(77/143)的麻雀体内携带CAV,根据核酸序列测定结果进行同源性分析,表明麻雀源性的CAV与鸡源性CAV的同源性在96.2％～100％.实验结果表明麻雀可能是CAV在自然界中除鸡之外的另一宿主.

摘要： 本发明提供了FMDV A型牛源广谱中和单抗W145及其制备的中和抗体竞争ELISA检测试剂盒，属于病毒抗体检测技术领域。FMDV A型牛源广谱中和单克隆抗体W145，包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示轻链可变区。单克隆抗体W145在制备中和FMDV A型病毒的试剂中的应用。FMDV A型牛源广谱中和单克隆抗体组合物，包括单克隆抗体W145和单克隆抗体E32，在制备基于直接竞争法检测FMDV A型中和抗体的免疫试剂盒中的应用。该试剂盒的检测结果与病毒微量中和试验结果显著相关，说明该试剂盒可用于血清中和抗体的检测。

摘要： 本发明提供了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N)的猪源单个B细胞抗体及竞争ELISA抗体检测试剂盒，属于病毒检测技术领域。本发明提供了PRRSVN蛋白的猪源单个B细胞抗体C8。试验表明以FMDV的3A表位单抗3A24作为包被抗体，捕获3AN融合蛋白后形成包被酶标板，以C8单抗作为检测抗体，采用竞争ELISA反应模式检测猪血清PRRSV抗体，制备的PRRSV抗体检测试剂盒，具有很好的敏感性和特异性，为PRRSV血清流行病学调查提供了一种新工具。

摘要： 一种旋毛虫竞争ELISA抗体检测试剂盒及其检测方法，属于血清学免疫检测技术领域。为了更稳定、准确检测多宿主旋毛虫感染，本发明提供了一种旋毛虫竞争ELISA抗体检测试剂盒，所述试剂盒含有：底板包被有旋毛虫Ts‑WN10重组抗原的96孔反应板，生物素标记的单克隆抗体Ts‑WN10‑1H9溶液，辣根过氧化氢酶HRP标记的亲和素溶液，洗涤液，TMB显色底物，终止液，和阴性质控；其中，所述阴性质控为浓度为1μg/mL的生物素标记的单克隆抗体Ts‑WN10‑1H9溶液。本发明制备的试剂盒具有特异性强、灵敏度高等特点，可用于猪/鼠/人等多宿主旋毛虫病的抗体检测。

摘要： 本发明涉及一种基于鸭黄病毒E蛋白及其单抗的竞争ELISA方法，同时涉及鸭黄病毒E蛋白表达及其单抗制备方法，属于动物免疫学检测技术领域。本发明利用引物对C1、C2和引物对E1、E2扩增得到鸭黄病毒E蛋白的基因序列，通过表达质粒构建、表达质粒导入原核表达宿主，诱导表达、纯化得到鸭黄病毒E蛋白，以鸭黄病毒E蛋白为抗原，通过杂交瘤技术获得鸭黄病毒E蛋白单抗，并基于鸭黄病毒E蛋白及其单抗建立了能够用于检测鸭黄病毒抗体的竞争ELISA方法。本发明检测方法特异性强、稳定性好，可用于鸭黄病毒血清抗体的检测。本发明以鸭黄病毒病E蛋白1为包被抗原，鸭黄病毒病E蛋白的单抗为竞争抗体。

摘要： 本发明公开了一种利用间接竞争ELISA高通量快速筛查多种内分泌干扰物的方法。本发明提供的方法，包括如下步骤：采用多孔板通过间接竞争ELISA检测双酚A、雌二醇和壬基酚；多孔板中，部分孔用于检测双酚A、部分孔用于检测雌二醇、部分孔用于检测壬基酚；作为包被原的双酚A抗原的包被浓度为0.18‑0.2μg/mL；作为一抗的双酚A抗体的工作浓度为0.8‑1μg/mL；作为包被原的雌二醇抗原的包被浓度为3.1‑3.2μg/mL；作为一抗的雌二醇抗体的工作浓度为9‑10μg/mL；作为包被原的壬基酚抗原的包被浓度为0.3‑0.4μg/mL；作为一抗的壬基酚抗体的工作浓度为2‑3μg/mL。本发明操作简便，无需对抗体进行标记，可以实现多种内分泌干扰物的同时检测。本发明非常适用于水环境中内分泌干扰物的快速检测。

摘要： 本发明提供了一种猪A型塞内卡病毒中和性抗体，利用上述抗体制备的SVA竞争ELISA检测试剂盒及相应检测方法，所述检测试剂盒包括：包被有猪A型塞内卡病毒中和性单克隆抗体1M5并捕获抗原的反应板，生物素标记的猪A型塞内卡病毒中和性单克隆抗体1M25，阳性对照血清，阴性对照血清，血清稀释液，底物溶液，终止液，洗涤液。本发明利用SVA中和性抗体用于ELISA检测，相比SVA特异性抗体，中和性抗体更能准确反应SVA感染或者疫苗免疫水平；且本发明试剂盒和检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性；检测操作简便，检测周期短，单次检测时间约为90min。

摘要： 本发明公开了一种马流产沙门氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有由保藏编号为CGMCCNo.21990的杂交瘤细胞株分泌产生的抗马流产沙门氏菌FljB蛋白的单克隆抗体。此外，本发明还建立了马流产沙门氏菌竞争ELISA抗体检测方法，与TAT方法相比，本发明建立的竞争ELISA方法的敏感性更高：对标准阳性血清能检测到的最大稀释度为32倍稀释，TAT检测最大稀释度为原倍。竞争ELISA方法的特异性更好：与常见的马传贫、马流感、马鼻肺炎、马动脉炎等病毒病以及马腺疫、鼠伤寒沙门氏菌感染、都柏林沙门氏菌感染等细菌病的血清抗体均不反应，仅与马流产沙门氏菌特异性抗体反应。因此，本发明的提出为马流产沙门氏菌抗体的检测提供了一种新的技术手段。

摘要： 利用金纳米花增强信号的双酚S竞争ELISA试剂盒与方法，该试剂盒包含BPS完全抗原、金纳米花和HRP联合标记的BPS单克隆抗体。利用5‑溴戊酸甲酯做为中间产物制备了BPS的完全抗原，然后以BPS完全抗原免疫小鼠获得了BPS高亲和力和高特异性的单克隆抗体；随后使用HRP对抗体进行标记，然后利用金纳米花具有较高的比表面积和生物结合性，使用更多的抗体结合其上，建立了具有更高灵敏度的BPS竞争ELISA，其检测范围为：15.625‑2000 ng/mL，检出限为15.625 ng/mL。本发明可以用于环境基质，生物样品，食品和药品中的BPS检测工作。同时，该方法与目前常用的化学方法相比，更为简便、快捷，不需要昂贵的设备和复杂的前处理过程。

摘要： 本发明公开了一种针对SARS‑CoV‑2 RBD结构域的特异性中和抗体竞争法ELISA试剂盒，该试剂盒含有包被有人ACE2蛋白的固相载体、生物素标记的RBD蛋白。该试剂盒可用于提高新冠检测率，一定程度上弥补核酸检测假阴性带来的漏检问题；可用于检测新冠康复病人体内中和抗体含量，以判断是否可以复工复产及是否存在再次感染风险；还可有效地监测临床研究中的疫苗接种反应及作为后期疫苗效果的评价指标；中和抗体测定可支持强化监测措施，如普遍检测、活动性病例发现、接触者追踪和联系群集。

摘要： 本发明涉及牛传染性鼻气管炎病毒的抗体检测，具体涉及一种牛传染性鼻气管炎病毒的竞争ELISA抗体检测试剂盒及其应用。本发明提供一种抗牛传染性鼻气管炎病毒的单克隆抗体，由保藏号为CGMCC No.23005的杂交瘤细胞所分泌。还提供一种牛传染性鼻气管炎病毒的抗体检测试剂盒，其包含所述单克隆抗体。本发明基于所述单克隆抗体以及本发明设计和表达的截短的牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白，建立了一种牛传染性鼻气管炎病毒的抗体检测方法。该方法具有特异性强、敏感性好、操作简便、快速的优点。