短发夹状RNA

摘要： 背景 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）在细胞的生长中发挥重要作用,其在人品状体上皮细胞（HLECs）中的过度表达与白内障术后的并发症,如后发性白内障有关,将mTOR短发夹状RNA（shRNA）质粒成功转染至HLECs可为寻找预防和治疗后发性白内障的靶点提供实验支持.目的 探讨HLECs中m TOR基因沉默后对细胞形态和功能的影响.方法 分别将mTOR shRNA质粒、空白质粒和PBS加入细胞培养液感染293T细胞以进行慢病毒包装.常规培养HLECs,然后分别用各组包装成功的慢病毒感染HLECs72 h,分为mTOR shRNA转染1、2、3,组空白质粒组和PBS组.利用Western blot法检测并比较不同组间HLECs中mTOR蛋白的表达以确定mTOR被沉默,从mTOR shRNA转染l、2、3组中筛选出沉默效率最高组进行后续实验.采用流式细胞仪检测G1期HLECs细胞比例;采用Western blot法检测细胞中上皮和间质标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-Cadherin蛋白的表达;采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组细胞的增生能力.结果 mTORshRNA转染1、2、3组293T细胞上清液中含有大量包装成功的慢病毒,对绿色荧光蛋白（GFP）呈阳性反应,而空白质粒组和PBS组未见GFP反应的绿色荧光.mTOR shRNA转染1、2、3组及空白质粒组转染的质粒具有嘌呤抗性,转染后的HLECs均生长良好,mTOR shRNA转染1、2、3组80％以上的细胞对GFP呈阳性反应,PBS组细胞无嘌呤抗性,可见较多细胞死亡.Western blot法检测显示mTORshRNA转染3组mTOR mRNA表达最弱,用于后续实验.mTORshRNA转染3组α-SMA表达条带明显弱于空白质粒组和PBS组,而E-Cadherin表达明显强于空白质粒组和PBS组.CCK8法检测证实,实验后lh、2h3个组间细胞增生值（A值）的总体差异比较均有统计学意义,其中mTOR shRNA转染3组的细胞增生值均明显低于空白质粒组和PBS组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.流式细胞仪检测表明,mTORshRNA转染3组细胞周期阻滞于G1期的细胞比例约为（60.00±1.78）％,明显高于空白质粒组的（53.48±1.86）％和PBS组的（53.02±1.49）％,总体比较差异有统计学意义（F=18.910,P=0.002）.结论 mTOR shRNA转染HLECs后可使mTOR基因沉默,从而逆转HLECs中上皮-间质转化（EMT）的进程,抑制细胞增生,延长细胞周期.

摘要： 背景 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在细胞的生长中发挥重要作用,其在人品状体上皮细胞(HLECs)中的过度表达与白内障术后的并发症,如后发性白内障有关,将mTOR短发夹状RNA(shRNA)质粒成功转染至HLECs可为寻找预防和治疗后发性白内障的靶点提供实验支持.目的 探讨HLECs中m TOR基因沉默后对细胞形态和功能的影响.方法 分别将mTOR shRNA质粒、空白质粒和PBS加入细胞培养液感染293T细胞以进行慢病毒包装.常规培养HLECs,然后分别用各组包装成功的慢病毒感染HLECs72 h,分为mTOR shRNA转染1、2、3,组空白质粒组和PBS组.利用Western blot法检测并比较不同组间HLECs中mTOR蛋白的表达以确定mTOR被沉默,从mTOR shRNA转染l、2、3组中筛选出沉默效率最高组进行后续实验.采用流式细胞仪检测G1期HLECs细胞比例;采用Western blot法检测细胞中上皮和间质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-Cadherin蛋白的表达;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组细胞的增生能力.结果 mTORshRNA转染1、2、3组293T细胞上清液中含有大量包装成功的慢病毒,对绿色荧光蛋白(GFP)呈阳性反应,而空白质粒组和PBS组未见GFP反应的绿色荧光.mTOR shRNA转染1、2、3组及空白质粒组转染的质粒具有嘌呤抗性,转染后的HLECs均生长良好,mTOR shRNA转染1、2、3组80％以上的细胞对GFP呈阳性反应,PBS组细胞无嘌呤抗性,可见较多细胞死亡.Western blot法检测显示mTORshRNA转染3组mTOR mRNA表达最弱,用于后续实验.mTORshRNA转染3组α-SMA表达条带明显弱于空白质粒组和PBS组,而E-Cadherin表达明显强于空白质粒组和PBS组.CCK8法检测证实,实验后lh、2h3个组间细胞增生值(A值)的总体差异比较均有统计学意义,其中mTOR shRNA转染3组的细胞增生值均明显低于空白质粒组和PBS组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).流式细胞仪检测表明,mTORshRNA转染3组细胞周期阻滞于G1期的细胞比例约为(60.00±1.78)％,明显高于空白质粒组的(53.48±1.86)％和PBS组的(53.02±1.49)％,总体比较差异有统计学意义(F=18.910,P=0.002).结论 mTOR shRNA转染HLECs后可使mTOR基因沉默,从而逆转HLECs中上皮-间质转化(EMT)的进程,抑制细胞增生,延长细胞周期.

摘要： 目的：研究慢病毒介导生存素(survivin)基因特异性短发夹状RNA(shRNA)对人子宫内膜在裸鼠腹腔种植生长的影响。方法将45只裸鼠随机分为实验组、阴性对照组及空白对照组，每组15只，将子宫内膜异位症患者在位内膜注射入裸鼠腹腔，同时将survivin-shRNA慢病毒、空载慢病毒及磷酸盐缓冲液分别注射至3组裸鼠腹腔内，2周后观察各组子宫内膜种植成功率，光镜下观察异位病灶的形态学特点，免疫组化方法检测各组病灶中survivin的表达水平。结果实验组子宫内膜种植成功率（26.67%）明显低于阴性对照组（73.33%）及空白对照组（80%，P<0.01）；实验组成活的异位内膜腺体发育不良，间质伴有不同程度的坏死；该组病灶中survivin蛋白表达亦明显下降，与两对照组比较差异有显著性（P<0.001）。结论慢病毒介导survivin基因特异性shRNA能够通过靶向沉默survivin基因明显抑制人子宫内膜在裸鼠腹腔中的种植生长。%Objective To investigate the inhibitory effect of lentiviral vector-mediated short hairpin RNA targeting survivin (LV-survivin shRNA) on the growth of human endometrium xenograft in the abdominal cavity of nude mice. Methods The endometrium xenografts from 8 women with endometriosis were injected into the peritoneal cavities of 45 nude mice. The mice were then randomly assigned to receive intraperitoneal injection of LV-survivin shRNA, pGCL-NC-GFP (negative control) or PBS (blank control). Two weeks later, the number and morphometry of endometriotic lesions were quantified and the expression of survivin protein were detected by immunohistochemistry. Results The formation of endometriotic lesions was significantly suppressed in mice receiving LV-survivin shRNA injection as compared with those in the two control groups (P<0.001). The mice in LV-survivin-shRNA group showed significantly down-regulated expression levels of survivin protein compared with those in the negative and blank control groups, presenting also necrosis in the endometriosis-like lesions in microscopic observation. Conclusion Lentiviral vector-mediated shRNA can effectively inhibit the expression of survivin in human endometrium xengrafts and suppress the formation and growth of endometriotic lesions in the abdominal cavities of nude mice.

摘要： 目的：设计以NF-E2-related factor2(Nrf2)基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒表达载体并转染大鼠肝星状细胞株HSC-T6,观察其对Nrf2表达的影响。方法应用重组DNA技术,将设计好的4条基因特异性shRNA序列插至慢病毒表达载体pGLV3-GFP中,构建pGLV3-GFP-Nrf2-shRNA-1/2/3/4,并应用脂质体法转染293T细胞,进行病毒包装及滴度测定。采用实时荧光定量PCR( RT-PCR)及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染72 h和96 h后大鼠肝星状细胞株HSC-T6 Nrf2基因的表达情况。结果测序证实慢病毒载体构建成功,并测定滴度为1×109 TU/ml,pGLV3-GFP-Nrf2-shRNA转染后72 h和96 h可抑制Nrf2基因mRNA及蛋白的表达。结论成功构建Nrf2基因的shRNA慢病毒载体,可有效抑制大鼠肝星状细胞株HSC-T6中Nrf2基因的表达。%Objective To construct lentiviral vector targeting NF-E2-related factor2 ( Nrf2 ) gene and evaluate its silencing effect on Nrf2 gene in rat hepatic stellate cell line HSC-T6. Methods Four short hairpin RNA( shRNA) fragments targeting Nrf2 were de-signed and cloned into lentiviral vector pGLV3-GFP to construct pGLV3-GFP-Nrf2-shRNA1/2/3/4. Then the silencing effects on Nrf2 gene were confirmed by real-time PCR and Western blot in transfected HSC-T6 cells at 72 h and 96 h. Results The Nrf2 shRNA lentiviral vectors were successfully constructed and confirmed by sequencing when the virus reached a titer of 1 × 109 TU/ml. The expres-sion of Nrf2 in both mRNA and protein levels were inhibited by real-time PCR and Western blot. Conclusion The shRNA expressing lentiviral recombinants targeting the Nrf2 gene are successfully constructed and could effectively silence expression of Nrf2 gene in HSC-T6 cells.

摘要： 目的构建靶向cortactin基因的sh RNA重组质粒,并筛选出沉默cortactin基因效果最明显的sh RNA重组质粒。方法设计并合成3对针对cortactin基因不同位点的sh RNA片段,构建相应的重组质粒(命名为p BSilence1.1-cortactin-sh RNA1-3),并进行酶切鉴定和测序分析。通过脂质体转染方法将各重组质粒及阴性对照质粒分别转染至人肝癌Hep G2细胞中,转染24 h后荧光显微镜下观察各组细胞的转染情况,并采用RT-PCR检测各组细胞m RNA的表达情况。结果构建的重组质粒经酶切鉴定与测序分析证实完全符合设计要求,转染成功的细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光,3组重组质粒组Hep G2细胞的cortactin基因m RNA表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。与p BSilence1.1-cortactin-sh RNA1和p BSilence1.1-cortactin-sh RNA2两组相比,p BSilence1.1-cortactinsh RNA3组的cortactin基因m RNA表达降低更加显著(P<0.05)。结论成功构建并筛选的重组质粒能有效抑制Hep G2细胞中cortactin基因m RNA表达,为下一步研究沉默cortactin基因对肝癌细胞生物学行为的影响提供了实验基础。

摘要： 目的：设计以 Rap1b 基因为靶点的短发夹状 RNA（shRNA），构建重组慢病毒表达载体并转染食管鳞癌细胞，观察其在食管鳞癌细胞中的表达。方法：应用重组 DNA 技术，将设计好的4条基因特异性 shRNA 序列插至慢病毒表达载体 pGLV3- GFP 中，构建 pGLV3- GFP - Rap1b - shRNA1/2/3/4。并应用脂质体法转染293T 细胞，进行病毒包装及滴度测定。采用实时荧光定量 PCR（RT - PCR）及 Western blot 分别从 mRNA 和蛋白水平检测转染食管鳞癌细胞株 Eca109后 Rap1b 基因的表达情况。结果：测序证实慢病毒载体构建成功，并测定滴度为1×109 TU/ ml，pGLV3- GFP - Rap1b - shRNA3/4转染后72h 和96h 均可显著抑制 Rap1b 基因mRNA 及蛋白的表达。结论：成功构建 Rap1b 基因的 shRNA 慢病毒载体，所介导的 RNAi 能有效抑制食管鳞癌细胞 Eca109中 Rap1b 基因的表达。%To construct lentiviral vector targeting Rap1b gene and evaluate its silencing effect on Rap1b gene in esophageal squamous cell carcinoma. Methods:Four short hairpin RNA(shRNA)fragments targeting Rap1b were designed and cloned into lentiviral vector pGLV3 - GFP to construct pGLV3 - GFP - Rap1b - shRNA1 /2 / 3 / 4. Then the silencing effect on Rap1b gene were confirmed by real - time PCR and Western bolt in transfected gene in esophageal squamous cell carcinoma cell line Eca109. Results:The Rap1b shRNA lentiviral vectors were suc-cessfully constructed confirmed by sequencing and the virus reached a titer of 1 × 109 TU/ ml. pGLV3 - GFP - Rap1b- shRNA3 / 4 could significantly inhibit the mRNA and protein expression of Rap1b among four shRNA fragments. Conclusion:shRNA expressing lentiviral recombinants targeting the Rap1b gene were successfully constructed,which had silencing effect on Rap1b gene in esophageal squamous cell carcinoma cell line Eca109.

摘要： 目的:利用慢病毒介导特异性短发夹状RNA(LV-shRNA) 靶向沉默生存素基因,观察其对子宫内膜异位症裸鼠模型异位病灶中caspase-3表达的影响.方法:建立人子宫内膜裸鼠皮下种植模型,将LV-shRNA、空载慢病毒及磷酸盐缓冲液分别注射至裸鼠皮下异位病灶,观察病灶生长情况.分别采用RT-PCR及免疫组化检测异位病灶中生存素、caspase-3 mRNA及蛋白的表达.结果:LV-shRNA处理组病灶体积、重量明显低于两对照组.与两对照组相比,LV-shRNA处理组生存素 mRNA及蛋白的表达量明显降低,caspase-3的表达量明显升高,而生存素及caspase-3的表达在两对照组之间相比,差异均无统计学意义.结论:LV-shRNA可明显抑制裸鼠异位子宫内膜病灶的生长,其机制可能与其通过下调生存素蛋白、激活下游的caspase-3诱导细胞凋亡有关.

摘要： 目的 设计以NF-E2-related factor2(Nrf2)基因为靶点的短发夹状RNA (shRNA),构建重组慢病毒表达载体并转染大鼠肝星状细胞株HSC-T6,观察其对Nrf2表达的影响. 方法 应用重组DNA技术,将设计好的4条基因特异性shRNA序列插至慢病毒表达载体pGLV3-GFP中,构建pGLV3-GFP-Nrf2-shRNA-1/2/3/4,并应用脂质体法转染293T细胞,进行病毒包装及滴度测定.采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染72 h和96 h后大鼠肝星状细胞株HSC-T6 Nrf2基因的表达情况. 结果 测序证实慢病毒载体构建成功,并测定滴度为1×109 TU/ml,pGLV3-GFP-Nrf2-shRNA转染后72 h和96 h可抑制Nrf2基因mRNA及蛋白的表达. 结论 成功构建Nrf2基因的shRNA慢病毒载体,可有效抑制大鼠肝星状细胞株HSC-T6中Nrf2基因的表达.

摘要： 目的:设计以MAG基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒载体并鉴定此RNA干扰体系对MAG基因表达的影响.方法:将3条靶向大鼠MAG基因的shRNA片段插入至慢病毒载体pWPI,与pCDNA3-MAG-FLAG质粒用Lipofectamine 2000共转染293T细胞,Western blotting法鉴定出最有效的shRNA.此重组质粒与pAX2和pMD2G经293T细胞包装后,产生的重组慢病毒感染少突胶质细胞,48 h后Western blotting法检测MAG蛋白的表达情况.结果:经双酶切后测序鉴定,构建了MAG shRNA慢病毒载体pWPI-MAG,鉴定出shRNA-2为最为有效的shRNA.重组慢病毒能明显抑制少突胶质细胞中MAG的表达.结论:慢病毒介导的shRNA 干扰技术可特异性阻断MAG的表达,为进一步探讨MAG特异性shRNA治疗神经系统髓鞘损伤奠定了基础.

摘要： 目的 抑制Glioma-associated oncogene homoglog(GLI)基因在卵巢癌SKOV3细胞中的表达,探讨GLI1表达抑制对SKOV3细胞增殖的影响.方法 构建并筛选GLI1基因的RNAi表达质粒,转染SKOV3细胞,CCK-8法比较转染前后卵巢癌细胞增殖变化,流式细胞仪检测紫杉醇诱导转染前后细胞凋亡比例,流式细胞仪检测转染前后SKOV3的细胞周期情况.Westem blot检测cyclinD、Bcl-2及Capase3蛋白表达的影响.结果 转染48 h后,在SKOV3细胞中Control组、N-Control组、GLI1 shRNA-1组、GLI1 shRNA-2组、GLI1shRNA-3组、GLI1 shRNA-4组的GLI1 mRNA水平分别为1.00±0.00、1.03 ±0.02、0.73±0.07、0.98 ±0.08、0.53±0.08、0.68±0.04,与Control组相比,GLI1 shRNA-1、GLI1 shRNA-3、GLI1 shRNA-4组GLI1 mRNA表达量均下降(P＜0.05),转染GLI1 shRNA-3的SKOV3细胞中GLI1蛋白表达水平低于GLI1 shRNA-1、GLI1shRNA-2、GLI1 shRNA-4组(P＜0.05),具有显著的干扰效果.转染GLI1 shRNA-3的SKOV3细胞增殖受到明显抑制(P＜0.05),在紫杉醇的诱导下细胞凋亡比例明显增加,细胞周期主要阻滞在G1/S期.Western blot检测发现Bcl-2蛋白表达下降(P＜0.05),Capase3蛋白表达升高(P＜0.05),细胞周期蛋白CyclinD1蛋白表达下降(P＜0.05).结论 GLI1 shRNh对SKOV3细胞增殖抑制作用明显,促进细胞凋亡,GLI1信号可通过抑制cyclinD1活化抑制细胞恶性增殖.%Objective To explore the effects of GLII signaling on the proliferation of ovarian cancer cell.Methods Ovarian cancer SKOV3 cells were transfected for 48 hours by the mediation of LipofectamineTM 2000.CCK-8 kit and real time RT-PCR were employed to study the effects of GLI1 mRNA transfection on the proliferation of SKOV3 cell,the apoptosis rate induced by paclitaxel detected by flow cytometry,the cell cycle of SKOV3 cells following the treatments was measured with flow cytometry and the expression of cyclinD1 protein detected by western blot.Results In the Control,negative-control group,GLI1 shRNA-1 group,GLI1 shRNA-2 group,GLI1 shRNA-3 group,GLI1 shRNA-4 group,of SKOV3 cells,the expression of GLI1 mRNA relative to GAPDH was 1.00 ±0.00,1.03 ±0.02,0.73 ±0.07,0.98 ±0.08,0.53 ±0.08,0.68 t0.04,respectively.Contrast to Control group,the GLI1 mRNA expression in GLI1 shRNA-1 group,GLI1 shRNA-3 group,GLI1 shRNA-4 group declined (P ＜ 0.05),moreover the GLI1 mRNA expression in GLI1 shRNA-3 group obviously lower than other 3 groups (P ＜ 0.05).Meanwhile the expression of GLI1 protein decreased.SKOV3 cell proliferation and CyclinD1 protein significantly inhibited under the condition of transfected by GLI1 shRNA-3.The apoptosis rate increased induced by paclitaxel after GLI1 down-regulated.The expression of Bcl-2 and CyclinD1 were decreased and the expression of Caspase3 was increased.Conclusions GLI1 shRNA visibly inhibit the proliferation of ovarian cancer cell and induce the cell apoptosis,GLI1 signaling could induce cell proliferation by actived CyclinD1.

摘要： 目的:探讨短发夹状RNA(shRNA)对C57BL/6J小鼠T淋巴细胞CD28共刺激分子基因沉默效应,评价shRNA对目的基因干扰效应的时效性和稳定性,筛选出高效的干扰序列用于后期的动物实验.方法:首先构建3个载有CD28特异性shRNA(shRNA1～3)的表达质粒和1个非特异性shRNA表达质粒,将其分别转染小鼠脾淋巴细胞,以非特异性的shRNA表达质粒组和未转染组分别作为阴性对照和空白对照,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法分别从基因和蛋白质水平评价转染1～20d内CD28 shRNA对CD28基因的干扰效应,并筛选出干扰效率最高的序列.

摘要： 目的:探讨短发夹状RNA(shRNA)对C57BL/6J小鼠T淋巴细胞CD28共刺激分子基因沉默效应,评价shRNA对目的基因干扰效应的时效性和稳定性,筛选出高效的干扰序列用于后期的动物实验.方法:首先构建3个载有CD28特异性shRNA(shRNA1～3)的表达质粒和1个非特异性shRNA表达质粒,将其分别转染小鼠脾淋巴细胞,以非特异性的shRNA表达质粒组和未转染组分别作为阴性对照和空白对照,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法分别从基因和蛋白质水平评价转染1～20d内CD28 shRNA对CD28基因的干扰效应,并筛选出干扰效率最高的序列.

摘要： 目的:探讨短发夹状RNA(shRNA)对C57BL/6J小鼠T淋巴细胞CD28共刺激分子基因沉默效应,评价shRNA对目的基因干扰效应的时效性和稳定性,筛选出高效的干扰序列用于后期的动物实验.方法:首先构建3个载有CD28特异性shRNA(shRNA1～3)的表达质粒和1个非特异性shRNA表达质粒,将其分别转染小鼠脾淋巴细胞,以非特异性的shRNA表达质粒组和未转染组分别作为阴性对照和空白对照,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法分别从基因和蛋白质水平评价转染1～20d内CD28 shRNA对CD28基因的干扰效应,并筛选出干扰效率最高的序列.

摘要： 目的:探讨短发夹状RNA(shRNA)对C57BL/6J小鼠T淋巴细胞CD28共刺激分子基因沉默效应,评价shRNA对目的基因干扰效应的时效性和稳定性,筛选出高效的干扰序列用于后期的动物实验.方法:首先构建3个载有CD28特异性shRNA(shRNA1～3)的表达质粒和1个非特异性shRNA表达质粒,将其分别转染小鼠脾淋巴细胞,以非特异性的shRNA表达质粒组和未转染组分别作为阴性对照和空白对照,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法分别从基因和蛋白质水平评价转染1～20d内CD28 shRNA对CD28基因的干扰效应,并筛选出干扰效率最高的序列.

摘要： 本发明提供基于RNA干扰(RNAi)现象来抑制流行性感冒传染和/或复制的方法和组合物，以及用于鉴别有效地抑制流行性感冒病毒的siRNA和shRNA的系统，和用于研究流行性感冒病毒传染机制的系统。本发明还提供用于抑制其它传染病病原体的感染、致病性及/或复制的方法和组合物，尤其是用于那些感染可从体外直接接近的细胞(例如，皮肤细胞或粘膜细胞)的传染病病原体。此外，本发明还提供包含RNAi诱导体(例如，一靶向于流行性感冒病毒转录物的siRNA、shRNA或RNAi诱导载体)和任何一种输送剂的组合物。本发明进一步包含使用该等组合物治疗流行性感冒的方法。

摘要： 针对人类次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)的强效短发夹RNA(shRNA734)通过调节和体内选择策略来提高基因修饰的干细胞的植入速率，所述调节和体内选择策略赋予对临床可用的鸟嘌呤类似物抗代谢物6TG的抗性，以实现基因修饰干细胞的有效阳性选择。包含shRNA734的多核苷酸的用途包括用于敲除细胞中的HPRT的方法，用于在细胞中赋予鸟嘌呤类似物抗代谢物抗性的方法，用于产生可选择的遗传修饰细胞的方法，用于从多个细胞中选择用目的基因遗传修饰的细胞的方法，用于从多个细胞中去除用目的基因遗传修饰的细胞的方法，以及用于治疗感染HIV的受试者的方法。

摘要： 本发明公开了一种Dp71蛋白的短发夹RNA干扰质粒及其应用方法。首次成功构建了Dp71蛋白的短发夹RNA(Dp71‑shRNA)干扰质粒，将其转染至肺腺癌细胞株A549中，构建稳定转染Dp71‑shRNA质粒的细胞株。发现削减A549细胞中的Dp71蛋白可以抑制A549细胞的增殖，浸润，侵袭迁移，在体肺腺癌细胞株裸鼠移植动物模型也证实，削减A549细胞中的Dp71蛋白的表达，可以从在体水平抑制A549移植瘤的生长。而且发现削减Dp71蛋白的表达可能是通过降低laminB1,Bcl‑2和MMP‑2蛋白来达到抑制A549细胞的恶性程度。本发明将为肺癌的治疗提供新线索和途径，具有重大意义。

摘要： 本发明公开一种携带短发夹RNA的重组质粒的制备方法及用途，其步骤是首先选定siRNA靶序列；其次是设计靶向的三对shRNA的正义链和反义链；第三是靶向的三对shRNA的合成；第四是质粒载体的线性化；第五是构建质粒PEGFP-shVEGF、PEGFP-shTERT、PEGFP-shBcl-x1；第六是构建质粒pEGFP-shVEGF-shTERT；第七是构建质粒pEGFP-shVEGF-shTERT-shBcl-x1。方法易行，操作简单。该重组质粒在制备治疗喉鳞癌的RNA干扰基因治疗药物中的应用，有效地抑制了肿瘤细胞的生长增殖。

摘要： 本发明公开了一种用于干扰白介素‑38表达的短发夹RNA片段，该短发夹RNA片段的序列如下：正义链：5’‑UGCAGACCAGAAGGCUCUAUA‑3’(SEQ ID NO:5)；反义链：5’‑UAUAGAGCCUUCUGGUCUGCA‑3’(SEQ ID NO:6)。该短发夹RNA片段能够干扰目的基因IL‑38的表达，干扰效率达到70％，具有防治牙周炎的应用前景。

摘要： 本发明涉及一种核酸序列，该核酸序列包括：(a)编码嵌合抗原受体(CAR)融合蛋白的第一多核苷酸，所述融合蛋白从N末端到C末端包括：(i)包括VH和VL的单链可变片段(scFv)，其中，scFv与肿瘤抗原特异性结合，(ii)跨膜结构域，(iii)至少一个共刺激结构域，和(iv)激活结构域；以及(b)编码IL‑6短发夹RNA(shRNA)序列或检查点抑制剂shRNA的第二多核苷酸，其中，所述检查点抑制剂是PD‑1、CTLA‑4、TIM‑3、TIGIT或LAG‑3。

摘要： 本发明涉及生物工程领域，尤其涉及绵羊Lrh‑1短发夹RNA及其干扰载体。本发明根据绵羊Lrh‑1基因的cDNA序列及设计原则筛选出靶序列，根据靶序列设计有短发夹RNA结构的单链寡核苷酸，经变性退火为双链寡核苷酸插入融合有绿色荧光的pENTR/U6载体，构建pENTR/U6‑shRNA‑GFP干扰载体。通过转染到湖羊卵巢颗粒细胞中，利用实时荧光定量PCR方法在mRNA水平检测，证实Lrh‑1‑shRNA干扰载体可以有效抑制绵羊体细胞中Lrh‑1基因的表达。

摘要： 针对人类次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)的强效短发夹RNA(shRNA734)通过调节和体内选择策略来提高基因修饰的干细胞的植入速率，所述调节和体内选择策略赋予对临床可用的鸟嘌呤类似物抗代谢物6TG的抗性，以实现基因修饰干细胞的有效阳性选择。包含shRNA734的多核苷酸的用途包括用于敲除细胞中的HPRT的方法，用于在细胞中赋予鸟嘌呤类似物抗代谢物抗性的方法，用于产生可选择的遗传修饰细胞的方法，用于从多个细胞中选择用目的基因遗传修饰的细胞的方法，用于从多个细胞中去除用目的基因遗传修饰的细胞的方法，以及用于治疗感染HIV的受试者的方法。

摘要： 本发明公开了一种Dp71蛋白的短发夹RNA干扰质粒及其应用方法。首次成功构建了Dp71蛋白的短发夹RNA(Dp71-shRNA)干扰质粒，将其转染至肺腺癌细胞株A549中，构建稳定转染Dp71-shRNA质粒的细胞株。发现削减A549细胞中的Dp71蛋白可以抑制A549细胞的增殖，浸润，侵袭迁移，在体肺腺癌细胞株裸鼠移植动物模型也证实，削减A549细胞中的Dp71蛋白的表达，可以从在体水平抑制A549移植瘤的生长。而且发现削减Dp71蛋白的表达可能是通过降低laminB1,Bcl-2和MMP-2蛋白来达到抑制A549细胞的恶性程度。本发明将为肺癌的治疗提供新线索和途径，具有重大意义。

摘要： 本发明包括用于制备和使用能够降低K-ras基因，例如突变的K-ras基因表达的双功能shRNA的组合物和方法，其中所述双功能RNA分子的至少一个靶位点序列位于K-ras基因内并且其中所述双功能RNA分子能够激活切割依赖性和非切割依赖性RNA诱导的沉默复合物，用于降低K-ras的表达水平。