盾叶薯蓣

摘要： 土壤酸性改良不到位是蓝莓定植死亡率过高的主要原因之一.使用薯蓣皂素提取行业的废弃物资源-强酸性皂素废水为原料,建立了液体土壤酸性改良方法,并与传统的硫磺粉改良法进行了对比研究.结果表明,土壤pH调控的准确性和稳定性是影响蓝莓幼苗存活的关键因素.稀释废水、稀硫酸和10 g硫磺粉处理组可以准确稳定地调控土壤pH在5.5左右,127 d试验周期结束时,3组蓝莓幼苗存活率均为100％,而5、30、50、100 g硫磺粉改良组的土壤pH变化幅度过大,幼苗存活率均为0％.土壤pH适合时,硫磺粉处理组的幼苗生长情况优于稀释废水组和稀硫酸组.10 g硫磺粉处理组的生物量、根体积、根长、株高、叶数、分枝数指标约为稀释废水组和稀硫酸组的两倍.3组处理对土壤过氧化氢酶、蔗糖酶、脲酶、磷酸酶活性的影响较小.总之,土壤pH是影响蓝莓定植存活的关键因素,而硫磺粉可能对蓝莓具有显著的营养作用.

摘要： 探讨超声粉碎技术辅助酸水解制备盾叶薯蓣中薯蓣皂素的工艺.通过单因素及正交实验优化细胞粉碎前处理盾叶薯蓣的工艺,最后进行水解和萃取,液相色谱检测薯蓣皂素,计算得率.超声最优工艺是提取功率60％(570 W),提取时间45 min,提取温度70°C,验证实验取得薯蓣皂素的产率为0.880 2％.萃取的最佳条件:采用90～120°C的石油醚回流萃取6 h时薯蓣皂素得率最高.利用超声粉碎技术辅助酸水解制备薯蓣皂素比直接酸解提高了29.88％的产率,应用潜力大.%To study the technology of ultrasonic comminution to assist the preparation of diosgenin from DioscoreaZingiberensisC.H.Wright by acid hydrolysis.Single factor and orthogonal experiments were applied to optimize the pretreatment process of cell Dioscorea zingiberensis,and then the hydrolysis and extraction were carried out,and the yield of diosgenin was determined by liquid chromatography.The optimal ultrasonic technology is extraction power of 60％(570 W),extraction time 45 min,extraction temperature of 70 degrees centigrade,and the yield of diosgenin is 0.880 2％.The best extraction condition: The yield of diosgenin was the highest when the petroleum ether was refluxed at 90～120 C for 6 h.Compared with the acid hydrolysis,the ultrasonic assisted acid hydrolysis improved the yield of 29.88％and with more application potential.

摘要： 从盾叶薯蓣根茎清洗液中,筛选出一株产薯蓣皂苷水解酶菌株Aspergillus sp.,对该菌株产酶发酵条件进行优化研究.单因素试验结果表明,0.3％葡萄糖为碳源、0.4％蛋白胨为氮源,薯蓣皂苷水解酶活力为0.78 U/mL.正交试验结果表明,蛋白胨含量对酶活力的影响较大,产酶发酵培养基最佳配方为0.5％葡萄糖,0.6％蛋白胨,0.2％薯蓣皂苷,0.1％ K2HPO4,0.05％MgSO4·7H2O,0.05％KCl,0.001％ FeSO4·7H2O.在此最佳培养基配方条件下,薯蓣皂苷水解酶活力为0.96 U/mL.0.2％麦冬、0.2％绞股蓝、0.2％薯蓣三种混合皂苷作为诱导物时,薯蓣皂苷水解酶活力最高,达1.26 U/mL.%Aspergillus sp.with dioscin hydrolase activity was isolated from the rhizosphere of Dioscorea zingiberensis.The optimization of fermentation conditions for the dioscin hydrolase production by Aspergillus sp.was studied in this paper.Single factor experiments results showed that dioscin hydrolase activity was 0.78 U/ml with glucose 0.3％ as carbon source and peptone 0.4％ as nitrogen source.The orthogonal experiments results showed that peptone concentration was the primary factor affecting dioscin hydrolase activity.The optimum formula of fermentation medium was glucose 0.5％,peptone 0.6％,dioscin 0.2％,K2HPO4 0.1％,MgSO4·7H2O 0.05％,KC1 0.05％,FeSO4·7H2O 0.001％.The strain producing dioscin hydrolase was greatly induced by the mixed dioscin,and the activity reaching 1.26 U/ml.

摘要： 目的 建立盾叶薯蓣提取物中4种皂苷含量的快速测定方法.方法 采用HPLC-MS/MS法,以甘草次酸为对照,采用多级反应监测(MRM)法,同时测定薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷的含量.用于定量分析的离子反应分别为m/z 867.5→721.3(薯蓣皂苷)、m/z 1 061.6→915.5(甲基原薯蓣皂苷)、m/z 1 029.3→883.1(伪原薯蓣皂苷)、m/z 1 047.6→901.4(原薯蓣皂苷)、m/z469.3→425.3(内标甘草次酸).结果 采用液质联用法测得,薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷质量浓度分别在44～220μg/ml、9～60 μg/ml、3～15 μgl、8.8～66 μg/ml内,线性关系良好,R2分别为0.999 1、0.999 8、0.999 6和0.999 3(n=5),平均加样回收率分别为107.1％、90.6％、88.3％、93.4％.结论 所建立方法快速、简便、准确、重现性好,可用于盾叶薯蓣提取物质量控制.%Objective To establish an HPLC-MS/MS method for simultaneous content determination of four kinds of saponin in the rhizome of Dioscorea zingiberensis C.H.Methods An HPLC-MS/MS method was established using multiple-reaction monitoring (MRM) to quantify dioscin,methylprotodioscin,pseudoprotodioscin,protodioscin.Fragmentation reactions were rm/z 867.5→721.3 (dioscin),m/z 1 061.6→915.5 (methylprotodioscin),m/z 1 029.3→883.1 (pseudoprotodioscin),rm/z 1 047.6→901.4 (protodioscin)and m/z 469.3→,425.3 (internal standard glycyrrhetinic acid) separately.Results The mass concentration and the peak area ratio presented good linearity within 44 ～ 220 μg/ml,9 ～ 60 μg/ml,3 ～ 15 μg/ml,8.8 ～ 66 μg/ml,respectively,R2=0.999 1,0.999 8,0.999 6,0.999 3 (n =5) correspondingly.The average recovery (n =9) was 107.1％,90.6％,88.3％,93.4％,respectively.Conclusion This method is proved to be simple,fast,reproduceable and reliable,which can be used for quality control ofDioscorea zingiberensis rhizome extract.

摘要： Objective To study the chemical constituents of steroid saponins from Dioseorea zingiberensis C.H.Wright (D.zingiberensis).Methods The bioactive ingredients of D.zingiberensis were isolated and purified using normal column chromatography combined with preparative HPLC.The structures of single compounds were identified by 1H-NMR,13C-NMR and MS.Results 20 compounds were finally obtained from the rhizomes of D.zingiberensis among which 7 were firstly isolated from this plant.Conclusion Steroid saponins in the rhizome of D.zingiberensis were mainly composed of spirostanol and furostanol saponins.%目的 对盾叶薯蓣根茎中甾体皂苷类的化学成分进行研究.方法 利用常规柱层析法与制备型HPLC法相结合对盾叶薯蓣中的活性成分进行分离纯化,通过1H-NMR、13C-NMR和MS等光谱法鉴定单体化合物的结构.结果 从盾叶薯蓣根茎中共分离得到了20个甾体皂苷化合物,其中7个化合物为首次从该植物中发现.结论 盾叶薯蓣根茎中主要含有螺甾烷型和呋甾烷型甾体皂苷.

摘要： 综述了薯蓣皂苷元生物合成途径的研究进展及相关酶的研究进展,对其生物合成途径进行了推断,以期为盾叶薯蓣皂苷元合成相关的研究以及利用生物工程进行生产奠定基础.

摘要： 目的:建立盾叶薯蓣药材的质量标准,为该药材及其制剂的质量控制提供有效方法.方法:采用显微和薄层色谱法鉴别,并对10批药材的水分、浸出物进行检查,采用HPLC对药材中薯蓣皂苷元含量进行了测定.结果:确定了盾叶薯蓣药材的显微特征,建立了TLC鉴别方法,拟定了其水分、浸出物限量.薯蓣皂苷元的进样量在2.36 ～21.24 μg线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为97.33％,RSD=1.28％(n=6).结论:该方法操作简单、重现性好、准确可靠,可较全面地控制盾叶薯蓣药材及其制剂的质量.

摘要： Dioscin chemical compositions are the main effective components in clinical commonly used Chinese medicines such as Diaoxinxuekang capsules and Xinnaoshutong capsules etc , which show distinct curative effect on cardiovascular and cerebrovascular diseases.Meanwhile, they are the important raw materials for the synthesis of steroid hormone drugs .The studies on the extraction technology exhibit important significance in the exploration of pharmacological activities of the components , which also are the external requirements for the growing demand of steroid hormone drugs market .In this paper , the relatively mature extraction methods re-searched in recent years were summarized ,and the advantages and disadvantages of the different processes were discussed in order to provide reference for the further studies and application .%薯蓣皂苷类化学成分是地奥心血康、心脑疏通胶囊等临床常用中成药的主要有效成分，用于治疗心脑血管疾病疗效显著，也是医药工业合成甾体激素药的重要原料。其提取方法的研究对进一步探明这类化合物药理学活性具有重要意义，同时也是甾体激素药物市场需求不断扩大的外在要求。本文对近年研究较为成熟的提取方法进行了综述，总结了不同工艺的优缺点，以期为这类化合物进一步开发利用提供指导。

摘要： 目的:本研究利用近红外漫反射光谱技术,建立一种快速测定盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷含量的方法。rn 方法:首先扫描76份盾叶薯蓣样本的近红外光谱图,通过对光谱预处理方法及建模波段的考察,选择标准归一化+一阶导数作为最优光谱预处理方法,4007.37～10118.36cm-1为建模最佳波段.在此基础上,以HPLC法测定的伪原薯蓣皂苷的含量为参考值,结合偏最小二乘法(PLS)建立NIR光谱与伪原薯蓣皂苷HPLC分析值之间的定量分析模型.rn 结果:建立的模型具有良好的预测能力,其相关系数(R2)为0.97596,内部交叉验证均方差(RMSECV)为0.16975,预测均方差(RMSEP)为0.0896.rn 结论:利用近红外光谱技术可以快速、准确地测定盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷的含量。

摘要： 目的：探索盾叶薯蓣种植资源的离体保存方法。方法：以盾叶薯蓣试管苗为材料，考察植物生长调节剂、温度及渗透压对试管苗保存时间、生长恢复状况及遗传稳定性的影响。结果：在培养室温度15°C、光照度15001x、每日光照时间16 h的环境下，盾叶薯蓣试管苗在培养基MS+Sugar 60g/L+Agar3.7g/L+CCC，1.0mg/L+PP3332.0mg/L+ABA 1.0mg/L中保存6个月，存活率超过60％，生长恢复状况及遗传稳定性良好。结论：本研究结果可实现盾叶薯蓣种质资源的中短期保存，能够满足科研和生产实际的需要。

摘要： 本课题组已开展了盾叶薯蓣化学成分的研究，建立了转化体系中甾体皂苷和苷元的定量分析方法，开展了米曲霉转化盾叶薯蓣生产薯蓣皂苷元的研究，为了完善生物转化法生产薯蓣皂苷元和白藜芦醇的方法,开展了盐析萃取法提取盾叶薯蓣和虎杖发酵液中薯蓣皂苷元和白藜芦醇的研究。

摘要： 运用植物解剖学方法对三个倍性盾叶薯蓣营养器官进行比较研究,结果显示:(1)盾叶薯蓣为多年生草本植物,叶片表皮层不具有明显角质层、蜡质和表皮毛,栅栏组织占叶片总厚度比例较小,三倍体值最高也仅为0.431。主脉维管束不发达,木质化程度较低,缺少大型导管等,这些特征表现出盾叶薯蓣对阴生环境的适应;气孔仅分布于下表皮,具有气孔下室,栅栏组织细胞竖向排列,胞间隙小等特征又显示其具有一定的耐寒和耐早性。根状茎发达,具有次生保护组织也显示其对环境较强的抗性。(2)不同倍性盾叶薯蓣之间的结构差异主要表现在叶片厚度、栅栏组织厚度、栅栏组织厚/海绵组织厚(P/S)、栅栏组织厚/叶片厚(P/L),茎维管束中导管所占比例(vR),以及根状茎周皮厚度,其中栅栏组织厚度、P/S、P/L和VR四个值三倍体植株表现最高,叶片厚度和周皮厚度则是四倍体植株表现最高。

摘要： 通过对二倍体(2x=20)、三倍体(3x=30)、四倍体(4x=40)盾叶薯蓣叶片上下表皮细胞密度、细胞形状系数,气孔器大小、指数、密度,以及气孔器保卫细胞叶绿体数与倍性相关性的比较,探讨多倍体在盾叶薯蓣倍性育种上的前景。结果表明:随着倍性增加,盾叶薯蓣表皮细胞密度、气孔器面积、长、宽、以及保卫细胞宽、保卫细胞叶绿体数均明显增大。气孔器面积和保卫细胞宽与倍性成正比,且差异显著,可以作为倍性鉴定的手段之一。关于盾叶薯蓣三倍体资源,目前未见报道。

摘要： 盾叶薯蓣(D.zingibiernsis C.H.Wright.)是我国特有资源植物，其根茎内薯蓣皂素的含量一般为2%左右，是目前世界上最好的激素类药源植物。是合成多种甾体激素比较理想的重要原料。本文从提取分离、废水处理及前景展望等三个方面对盾叶薯蓣的生产工艺进行了概述。

摘要： 本研究筛选得到了高效转化盾叶薯蓣中甾体皂苷生产薯蓣皂苷元的微生物DL3012,形态学鉴定表明该菌属于木霉属。微生物直接转化中药材的过程优化结果表明,最佳转化条件为接种量6%，37°C下反应84小时。反应体系为pH6.0的0.05 mol/LNa2HPO4-KH2PO4 缓冲液,5%中药材,添加 0.06%(w/v)表面活性剂Tween85,0.002mol/L的Fe2+。优化条件下,木霉DL3012 转化薯蓣皂苷元,总甾体的摩尔转化率达到了61.65%,薯蓣皂苷元的得率26.4±0.8 mg/(g 药材),达到酸水解方法(28.5mg/g 药材)的92.7%。木霉DL3012的转化过程分析显示转化后甾体(皂苷+苷元)的总摩尔数比1溶剂提取法和酸水解法分别提高96.3%和56.5%。

摘要： 目的 优化米曲霉直接转化盾叶薯蓣药材生成薯蓣皂苷元的工艺条件。方法 从培养基缓冲盐、药材载量、微生物接种量、温度等几个方面对转化过程进行了优化。结果 选用pH5.0或6.0的1/15mol/L的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液，药材载量为3.33%，米曲霉接种量8%，37°C培养84h后提温至50°C再继续转化8h，能够达到最大的转化率。薯蓣皂苷元 的最大得率为17.06mg/g药材。结论 米曲霉能够将盾叶薯蓣中的甾体皂苷转化为薯蓣皂苷元，且转化后总的甾体皂苷有大量释放，可达到转化前的1.73倍。

摘要： 文章采用STA 409PC综合热分析仪，氧化铝样品池。在氮气气氛下，加热温度从室温30°C到800°C，加热速率为10°C/min，用热重法(TG)和差示扫描量热法(DSC)研究了盾叶薯蓣粉末的热性质。同时以玉米淀粉、棉花纤维素为参照物。

摘要： 本研究筛选得到了高效转化盾叶薯蓣中甾体皂苷生产薯蓣皂苷元的微生物DL3012，形态学鉴定表明该菌属于木霉属。微生物直接转化中药材的过程优化，实现了最佳转化条件。木霉DL3012的转化过程分析显示转化后当体(皂苷+昔元)的总摩尔数比溶剂提取法和酸水解法分别提高96.3%和56.5%。显示通过微生物转化可以明显促进和细胞壁紧密结合的转化底物的“释放”，大大提高转化底物的浓度，且与酸水解相比具有条件温和的特点，减少了街体母核在水解中的破坏。以上研究结果表明生物转化法生产薯蓣皂苷元有望成为一种能够代替当前污染严重的酸水解法的新方法。

摘要： 本发明公开了盾叶薯蓣来源的薯蓣皂素合成相关蛋白及编码基因与应用。本发明提供的盾叶薯蓣来源的薯蓣皂素合成相关蛋白为SEQ ID No.9和SEQ ID No.7所示的两个蛋白质。利用本发明所提供的盾叶薯蓣来源的薯蓣皂素合成相关基因，与细胞色素P450还原酶编码基因一起导入能够合成胆固醇的酿酒酵母菌，能够得到能够合成薯蓣皂素的酿酒酵母工程菌株。本发明实现了酿酒酵母薯蓣皂素的生物合成。

摘要： 本发明公开了一种快速测定盾叶薯蓣中甲基原薯蓣皂苷含量的方法，属于医药技术领域。步骤为1）对照品、内标溶液制备；2）供试品溶液制备；3）HPLC‑QqQ‑MS联用仪进行检测，多级反应检测模式进行扫描，锁定甲基原薯蓣皂苷结构，用外标法计算甲基原薯蓣皂苷含量。用于定量分析的离子反应为m/z 1061.6→915.5（甲基原薯蓣皂苷）、m/z 469.3→425.3（外标甘草次酸）。本发明摸索方法快速、简便、准确、重现性好，可用于盾叶薯蓣提取物质量控制。

摘要： 本发明属于微生物次生代谢产物技术领域，公开一种盾叶薯蓣内生菌发酵制备薯蓣皂素的方法，薯蓣皂素从盾叶薯蓣内生菌的发酵液中分离获得，发酵方法包括下述步骤：1)将盾叶薯蓣内生菌接入种子培养基中进行种子培养，得到发酵菌种；2)将所述发酵菌种接入盛装有发酵培养基的发酵罐中，开启搅拌，设定发酵条件为发酵温度24‑32°C、发酵pH5.5‑8.5、通气量1.0‑5.5L/min；3)酸解发酵液，中和后得到所述薯蓣皂素。本发明建立了5L小罐发酵生产薯蓣皂素的基本工艺，显著提高了薯蓣皂素的产量，克服了现有薯蓣皂素生产产量低、耗能高的技术缺陷，为盾叶薯蓣内生菌的开发利用提供了研究基础。

摘要： 本发明公开了液态发酵盾叶薯蓣制备薯蓣皂苷元的方法。该制备薯蓣皂苷元的方法包括用含有盾叶薯蓣的液态培养基培养镰孢属真菌，得到薯蓣皂苷元；所述镰孢属真菌为镰孢属菌种(Fusarium sp.)CPCC 400226。实验证明，采用本发明的液态发酵培养基，在28°C下液态发酵培养镰孢属菌种(Fusarium sp.)CPCC 400226 11天，薯蓣皂苷元的得率为2.48±0.21％。本发明可用于清洁生产薯蓣皂苷元。

摘要： 本发明公开了盾叶薯蓣来源的薯蓣皂素合成相关蛋白及编码基因与应用。本发明提供的盾叶薯蓣来源的薯蓣皂素合成相关蛋白为SEQ ID No.9和SEQ ID No.7所示的两个蛋白质。利用本发明所提供的盾叶薯蓣来源的薯蓣皂素合成相关基因，与细胞色素P450还原酶编码基因一起导入能够合成胆固醇的酿酒酵母菌，能够得到能够合成薯蓣皂素的酿酒酵母工程菌株。本发明实现了酿酒酵母薯蓣皂素的生物合成。

摘要： 本发明属于微生物次生代谢产物技术领域，公开一种盾叶薯蓣内生菌发酵制备薯蓣皂素的方法，薯蓣皂素从盾叶薯蓣内生菌的发酵液中分离获得，发酵方法包括下述步骤：1)将盾叶薯蓣内生菌接入种子培养基中进行种子培养，得到发酵菌种；2)将所述发酵菌种接入盛装有发酵培养基的发酵罐中，开启搅拌，设定发酵条件为发酵温度24‑32°C、发酵pH5.5‑8.5、通气量1.0‑5.5L/min；3)酸解发酵液，中和后得到所述薯蓣皂素。本发明建立了5L小罐发酵生产薯蓣皂素的基本工艺，显著提高了薯蓣皂素的产量，克服了现有薯蓣皂素生产产量低、耗能高的技术缺陷，为盾叶薯蓣内生菌的开发利用提供了研究基础。

摘要： 本发明公开了一种快速测定盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷含量的方法，属于医药技术领域。步骤为1）对照品、内标溶液制备；2）供试品溶液制备；3）HPLC‑QqQ‑MS联用仪进行检测，多级反应检测模式进行扫描，锁定伪原薯蓣皂苷结构，用外标法计算伪原薯蓣皂苷含量。用于定量分析的离子反应为m/z 1029.3→883.1（伪原薯蓣皂苷）、m/z 469.3→425.3（外标甘草次酸）。本发明摸索方法快速、简便、准确、重现性好，可用于盾叶薯蓣提取物质量控制。

摘要： 本发明公开了一种快速测定盾叶薯蓣中甲基原薯蓣皂苷含量的方法，属于医药技术领域。步骤为1）对照品、内标溶液制备；2）供试品溶液制备；3）HPLC‑QqQ‑MS联用仪进行检测，多级反应检测模式进行扫描，锁定甲基原薯蓣皂苷结构，用外标法计算甲基原薯蓣皂苷含量。用于定量分析的离子反应为m/z 1061.6→915.5（甲基原薯蓣皂苷）、m/z 469.3→425.3（外标甘草次酸）。本发明摸索方法快速、简便、准确、重现性好，可用于盾叶薯蓣提取物质量控制。

摘要： 本发明公开了一种快速测定盾叶薯蓣中原薯蓣皂苷含量的方法，属于医药技术领域。步骤为1）对照品、内标溶液制备；2）供试品溶液制备；3）HPLC‑QqQ‑MS联用仪进行检测，多级反应检测模式进行扫描，锁定原薯蓣皂苷结构，用外标法计算原薯蓣皂苷含量。在线检测时间缩短为8分钟。用于定量分析的离子反应为m/z 1047.6→901.4（原薯蓣皂苷）、m/z 469.3→425.3（外标甘草次酸）。本发明摸索方法快速、简便、准确、重现性好，可用于盾叶薯蓣提取物质量控制。

摘要： 本发明公开了一种快速测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷含量的方法，属于医药技术领域。步骤为1）对照品、内标溶液制备；2）供试品溶液制备；3）HPLC‑QqQ‑MS联用仪进行检测，多级反应检测模式进行扫描，锁定薯蓣皂苷结构，用外标法计算薯蓣皂苷含量。用于定量分析的离子反应为m/z 867.5→721.3（薯蓣皂苷）、m/z 469.3→425.3（外标甘草次酸）。本发明摸索方法快速、简便、准确、重现性好，可用于盾叶薯蓣提取物质量控制。