百日咳杆菌

摘要： 目的对深圳市3929例支气管炎儿童鼻咽拭子百日咳杆菌核酸检测结果分析,了解百日咳在儿童的流行情况,为深圳市儿童百日咳的防治提供科学依据。方法选取2019年1月1日至2021年9月20日3929例临床申请单上诊断为支气管炎的儿童患者作为研究对象,采用PCR方法检测百日咳杆菌核酸。结果3929例鼻咽拭子百日咳核酸检测出236例阳性,阳性率为6.01%。其中男童阳性率为5.45%,女童6.81%,比较差异无统计学意义(P=0.10)。不同年龄组阳性率比较,学龄组(8.27%)>婴儿组(6.28%)>学龄前组(5.54%)>幼儿组(4.26%),比较差异均无统计学意义(P>0.05)。不同季节阳性率比较,2019年,夏>春>秋>冬,春夏两季阳性率显著高于秋冬两季;2020年,春>秋>夏>冬,春季阳性率显著高于其他三季;2021年,秋>夏>春,三季比较差异均有统计学意义(P2020年春>2021年春,2019年和2020年春季比较差异无统计学意义(P=0.61),其他两两比较差异均有统计学意义(P2021年夏>2020年夏,差异均有统计学意义(P2019年秋>2020年秋,2019和2021年秋季比较差异无统计学意义(P=0.32),其他两两比较差异均有统计学意义(P2020年冬,比较差异均有统计学意义(P<0.01)。2019年、2020年和2021年三组阳性率呈凹字型分布。结论深圳市儿童百日咳在各年龄段均可发生,春夏季高于秋冬季,应加强监测工作和提高疫苗的有效性和覆盖率。

摘要： 目的:研究实时荧光PCR检测百日咳杆菌与百日咳抗体的价值.方法:观察对象择取2018年5月—2019年12月我院采集的380份患者标本,同时检测标本的百日咳抗体-IgM(PT-IgM)、百日咳抗体-IgG(PT-IgG)、百日咳杆菌核酸(BP-DNA),分析PT-IgM、PT-IgG、BP-DNA阳性率.结果:(1)380份标本中,PT-IgM阳性标本数为108份,PT-IgG阳性标本数为224份,PT-IgG阳性率(58.95％)高于PT-IgM阳性率(28.42％),P<0.05;(2)380份标本中,BP-DNA阳性标本数为148份,阳性率为38.95％;BP-DNA阳性者主要为<1岁者,占比为85.81％,且三个年龄段间的检测阳性率存在明显差异,P<0.05;148例BP-DNA阳性者中,男性多于女性,P<0.05.结论:通过检测百日咳杆菌以及百日咳抗体,可有效了解百日咳复制状况,为病情诊断提供可靠依据,值得推广.

摘要： 目的:评价实时荧光PCR应用于百日咳杆菌与百日咳抗体检测的价值.方法:将2017年9月-2019年8月在我院确诊为百日咳的56例患儿作为研究对象,采集患儿咽拭子,进行百日咳杆菌实时荧光PCR检测,采集患儿血液标本进行百日咳抗体IgM实时荧光PCR检测,统计检测结果,以百日咳杆菌与百日咳抗体IgM均为阳性作为百日咳诊断标准,统计实时荧光PCR联合检测百日咳杆菌、百日咳抗体诊断百日咳的准确率.结果:56例患儿百日咳杆菌的阳性率为85.70％,百日咳抗体IgM的阳性率为75.00％.实时荧光PCR联合检测两者诊断百日咳的准确率为73.21％.结论:实时荧光PCR检测百日咳杆菌及百日咳抗体IgM对百日咳的临床诊断具有辅助价值.

摘要： 百日咳是一种传染性极强的呼吸道传染病。百日咳是由百日咳杆菌感染后引起的急性上呼吸道传染性疾病,在有效疫苗接种的前提下,百日咳仍然是导致儿童死亡的十大原因之一[1]。百日咳在16世纪首次被描述,在17世纪开始流行。百日咳在疫苗前时代每隔1~2年流行一次。自1950年引进全细胞疫苗后,百日咳得到控制,致病率及病死率显著降低[2]。但与许多其他的传染病不同,人类在被百日咳杆菌感染或接种疫苗后不能获得持久的免疫力。在百日咳的报告周期中,即使在疫苗预防时代,百日咳每隔2~5年也会暴发一次[3-4]。近年来,百日咳在各个国家重新流行,疾控中心估计全世界每年有3000万~5000万例百日咳病例,其中有30万例死亡[5]。“百日咳再现”已经出现。随着百日咳发病率的上升,近年来其防治研究进展不少。现就百日咳的治疗及预防现状进行总结。

摘要： 无细胞百日咳疫苗接种后的免疫持久性下降和百日咳杆菌变异是导致"百日咳再现"的两个重要原因.百日咳杆菌变异株不表达无细胞百日咳疫苗中所包含的抗原成分,其中以黏附素蛋白的缺失最为常见.大量研究表明黏附素蛋白的缺失对百日咳杆菌的侵袭力和致病性并无明显影响,被认为可以由其他毒力因子代偿.黏附素蛋白缺失株产生的原因,包括IS481序列插入等菌株自身变异相关的分子机制,以及无细胞百日咳疫苗接种后的免疫环境造成的选择性压力.我国目前处在无细胞百日咳疫苗接种初期,尚未报道发现黏附素蛋白缺失株.

摘要： 中医认为,金银花味甘性寒,具有清热解毒、疏风散热的功效。现代药理研究表明,金银花对链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌、百日咳杆菌等均有较强的抑制作用.蜂蜜具有和胃润肠的功效,配合在一起,能有效缓解热结所致的便秘。

摘要： 目的 探讨儿童百日咳与类百日咳综合征的临床特点.方法 收集2016年2月至2016年10月苏州大学附属儿童医院收治的58例疑似百日咳患儿的呼吸道分泌物,应用Real-time PCR检测百日咳杆菌双目标基因.结果 入组患儿58例,PCR检测阳性患儿27例,阳性率46.6％;未接种百日咳疫苗的有19例(70.4％).≤3月龄组阳性患儿有9例(33.3％);＞3个月龄组阳性患儿有18例(66.7％);百日咳患儿中以阵发性痉咳(85.2％)、面色涨红 (85.2％)和阵发性青紫(22.2％)为主要表现;≤3个月组和＞3个月组百日咳患儿的临床表现比较无明显差异;27例百日咳患儿中,9例(33％)混合有其他病原感染,单纯百日咳组与百日咳混合其他病原感染组的临床表现比较无明显差异;31例PCR阴性患儿中,10例检出肺炎支原体感染,4例检出人鼻病毒感染,2例检出副流感3病毒感染.百日咳组的白细胞、淋巴细胞计数,住院时间明显高于类百日咳组,痉挛样咳嗽、鸡鸣样回声、面色涨红、咳后呕吐、阵发性青紫、并发症及肺部体征比较无明显统计学差异(P＞O.05).结论 未接种百白破疫苗的婴儿博德特百日咳杆菌感染率较高,＞3个月龄组百日咳杆菌感染并不少见,≤3个月组和＞3个月组患儿的临床表现无明显差别;肺炎支原体、人鼻病毒和副流感病毒3是引起类百日咳的主要病原,单纯从临床表现不能区别百日咳与类百日咳.

摘要： 目的 探讨百日咳患儿合并感染的临床特点.方法 收集2016年2月至2017年9月苏州大学附属儿童医院因疑诊百日咳而住院治疗的患儿,进行痰博德特百日咳杆菌聚合酶链反应(PCR)检测、细菌培养、呼吸道病毒抗原及血清肺炎支原体抗体检测 结果 共有198例患儿纳入研究,其中105例患儿百日咳PCR检测阳性,单纯感染37例(35.2％),合并其他病原感染68例(64.8％).其中合并1种病原者51例(75.0％),前3位依次为鼻病毒26例(50.9％)、肺炎支原体7例(13.7％)、肺炎链球菌6例(11.8％)各年龄合并感染率比较差异无统计学意义(P=0.08),合并支原体感染随着年龄增长而增加.合并感染组的患儿年龄比单纯感染组大[(11.77±2.31)个月vs.(6.74±8.07)个月,P=0.017],发热、呼吸困难和肺部阳性体征的比例均高于单纯感染组(0 Vs.10.3％;20.6％ vs.5.4％;76.5％ vs.36.4％);胸部影像学大多表现为斑片状影,而外周血白细胞总数、中性粒细胞计数、C反应蛋白、入院前病程及住院时间比较差异均无统计学意义(均P＞ 0.05).年龄＞3个月(OR=3.0,95％CI1.1 ～ 8.5,P=0.03)和发热(OR=2.5,95％CI 1.1～6.7,P=0.03)是合并感染的独立危险因素.结论 百日咳住院患儿存在较高的合并感染率,以鼻病毒最常见,其次为肺炎支原体和肺炎链球菌;合并感染会加重百日咳病情,发热和年龄＞3个月是合并感染发生的高危因素.

摘要： 目的：了解我国新近分离百日咳杆菌主要抗原基因百日咳毒素S1亚基(ptxS1)、百日咳粘附素(prm)、菌毛蛋白2(fim2)和菌毛蛋白3(fim3)基因特征。rn 方法：收集6株新近分离的百日咳杆菌，进行ptxS1、prn、fim2、fim3 4种抗原基因的PCR扩增和测序，并与我国的百日咳杆菌疫苗生产株以及GenBank中收录的百日咳杆菌的基因序列进行比较分析。rn 结果：完成了6株临床分离株主要抗原基因的序列测定。基因序列分析结果显示，新近分离的6株菌ptxS1基因亚型与我国疫苗生产菌株不同，均为ptxS1A亚型，发现了三种Prn基因亚型和三种fim3基因亚型。核苷酸和氨基酸序列与我国疫苗生产菌株同源性均在98%以上。基因进化树显示与其他菌株的同源性也较高。rn 结论：我国的临床分离菌株与疫苗生产菌株的主要抗原基因序列存在一定变异，这些资料为百日咳的流行病学研究和疫苗的质量控制、研制奠定了一定的基础。

摘要： 目的：克隆百日咳腺苷酸环化酶毒素(ACT，cyaA)基因，并进行表达和纯化，为进一步开展其应用研究奠定基础。rn 方法：从百日咳杆菌CS株的基因组DNA中PCR扩增目的片段，克隆人质粒pET30a，构建表达载体pET30a-ACT，转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)。挑选阳性转化子，IPTG诱导表达，得到以包涵体为主的重组蛋白。目的蛋白用8M尿素变性，透析复性，再通过DEAE阴离子交换柱纯化。最后用WesternBlot法，分别检测其与全细胞百日咳疫苗免疫、无细胞百日咳疫苗免疫和未经免疫的小鼠血清的反应性。rn 结果：PCR扩增得到5kb左右的DNA片段。经一步过柱纯化可得到纯度达90%以上的重组蛋白，WesternBlot显示在预期位置可见蛋白显色条带。rn 结论：成功在大肠杆菌中表达了重组ACT，为下一步ACT的应用研究奠定了基础。

摘要： 目的：了解百日咳杆菌对抗生素的敏感性情况,为临床合理用药提供依据。方法 以2000年7月至2007年4月北京儿童医院临床分离的16株和20世纪70年代临床培养的4株百日咳菌株为研究对象,采用琼脂稀释法、Etest法和纸片扩散法检测菌株对红霉素的敏感性,其中琼脂稀释法还检测了菌株对阿齐霉素、克拉霉素、克林霉素和环丙沙星4种抗生素的敏感性。结果 2000年以后菌株:红霉素的琼脂稀释MIC均是0.125μg/ml,Etest MIC范围是0.047~0.125μg/ml,纸片法获得的抑菌环直径都>42mm(范围45~55mm);在琼脂稀释法中,阿齐霉素、克林霉素的MIC范围分别是0.031~0.063μg/ml、0.25~2μg/ml;克拉霉素的MIC均是1μg/ml;环丙沙星的MIC均是2μg/ml。对于红霉素、克拉霉素和克林霉素,与20世纪70年代百日咳菌株相比,2000年以后菌株是相对敏感的。结论 本次研究没有发现红霉素耐药株,2000年以后分离的16株百日咳菌株对红霉素均敏感,治疗百日咳仍可首选红霉素。

摘要： 支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)可引起猪发生肺炎和萎缩性鼻炎.更重要的是,该菌的先期感染易于导致其它多种病原的继发感染,加重病情造成较严重损失.百日咳杆菌黏附素是由Bbprn基因编码的一种重要的黏附因子,被认为是Bb最主要的保护性抗原. 本研究克隆了猪源Bb强毒株HH0809的prn基因,利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)表达系统在大肠杆菌中进行了融合表达。克隆基因的核苷酸和氨基酸序列与GeneBank已经提交的所有猪源Bb的prn序列均具有98％以上的同源性。利用ProtParam软件对融合表达蛋白的理化性质进行预测分析,结果显示不稳定系数为38.33,属于稳定型蛋白质.SDS-PAGE和Western blot检测证实该基因获得高效表达并具有良好的免疫学活性。经GST融合蛋白纯化试剂Glutathione SepharoseTM 4B纯化后,得到浓度为207.3μg/mL、纯度为90.1％的融合蛋白GST-PRN.在小鼠免疫保护力试验中,重组蛋白免疫组BalB/C小鼠能够抵抗3.2×LD50量的Bb强毒株HH0809的呼吸道气雾攻击,保护率为100％(20/20),而GST载体蛋白对照组和PBS空白对照组的小鼠分别存活了4只和3只.这证明原核表达的PRN蛋白具有天然PRN外膜蛋白的免疫效力,可考虑作为新型疫苗或疫苗添加成分.通过凝血酶Thrombin酶切融合表达产物GST-PRN并回收,获得纯度为93.1％、浓度为120.5 μg/mL的不含GST载体蛋白的PRN蛋白片段。以PRN蛋白片段为抗原建立检测百日咳杆菌黏附素抗体的间接ELISA方法。方阵滴定结果显示,血清最佳稀释度为1:40,PRN抗原最佳稀释度为1:320(43.9 μg/孔)。阴阳性临界点。为0.335.重复实验中变异系数最大为7.83％,最小为3.51％。猪巴氏杆菌病、猪大肠杆菌病、仔猪副伤寒、猪传染性胸膜肺炎、副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病、猪气喘病阳性血清和5份猪波氏菌病阴性血清用ELISA检测都呈阴性。ELISA方法对2份接种了猪波氏菌病灭活菌苗的猪血清和2份Bb感染猪血清的检测结果均为阳性。敏感性试验表明,该ELISA方法的敏感性比本实验室已经建立的乳胶凝集试验方法高4～128倍；该ELISA方法能够检测到人工感染Bb仔猪14 d的血清抗体IgG.该ELISA方法对临床送检的1229份猪血清的检测阳性率为32.7％。同时,该方法对湖北2个阳性猪场各年龄段猪群的临床监测结果表明,生长前期(36～55日龄)和育肥期(56～90日龄)猪群的阳性率明显高于断奶前(15～21日龄)和保育期(22～35日龄)猪群. 本研究建立的PRN抗体监测ELISA方法具有较好的重复性、特异性和敏感性,有望成为一种准确、快速和实用的猪波氏菌病血清学诊断方法。

摘要： 目的:观察OVA+pertussis共同致敏,OVA单独致敏和pertussis单独致敏所造成的大鼠哮喘模型的差异,确定一种较成功的哮喘大鼠模型.rn 方法:用3种方法分别致敏大鼠,抗原攻击后,用Medlab生物信号采集处理系统记录仪记录甲酰胆碱激发的气道高反应性。行支气管肺泡灌洗和腹腔灌洗,计数支气管肺泡灌洗液中细胞总数并分类,观察肺组织病理改变.rn 结果:OVA+pertussis共同致敏,OVA单独致敏和pertussis单独致敏都可引起一定的大鼠肺功能下降、炎性反应细胞浸润增加以及肺组织病理改变,OVA+pertussis共同致敏效果优于OVA单独致敏和pertussis单独致敏.rn 结论:OVA+pertussis共同致敏再进行雾化攻击是一种比较成功的哮喘大鼠模型。

摘要： 目的:观察OVA+pertussis共同致敏,OVA单独致敏和pertussis单独致敏所造成的大鼠哮喘模型的差异,确定一种较成功的哮喘大鼠模型.rn 方法:用3种方法分别致敏大鼠,抗原攻击后,用Medlab生物信号采集处理系统记录仪记录甲酰胆碱激发的气道高反应性。行支气管肺泡灌洗和腹腔灌洗,计数支气管肺泡灌洗液中细胞总数并分类,观察肺组织病理改变.rn 结果:OVA+pertussis共同致敏,OVA单独致敏和pertussis单独致敏都可引起一定的大鼠肺功能下降、炎性反应细胞浸润增加以及肺组织病理改变,OVA+pertussis共同致敏效果优于OVA单独致敏和pertussis单独致敏.rn 结论:OVA+pertussis共同致敏再进行雾化攻击是一种比较成功的哮喘大鼠模型。

摘要： 目的:观察OVA+pertussis共同致敏,OVA单独致敏和pertussis单独致敏所造成的大鼠哮喘模型的差异,确定一种较成功的哮喘大鼠模型.rn 方法:用3种方法分别致敏大鼠,抗原攻击后,用Medlab生物信号采集处理系统记录仪记录甲酰胆碱激发的气道高反应性。行支气管肺泡灌洗和腹腔灌洗,计数支气管肺泡灌洗液中细胞总数并分类,观察肺组织病理改变.rn 结果:OVA+pertussis共同致敏,OVA单独致敏和pertussis单独致敏都可引起一定的大鼠肺功能下降、炎性反应细胞浸润增加以及肺组织病理改变,OVA+pertussis共同致敏效果优于OVA单独致敏和pertussis单独致敏.rn 结论:OVA+pertussis共同致敏再进行雾化攻击是一种比较成功的哮喘大鼠模型。

摘要： 目的:观察OVA+pertussis共同致敏,OVA单独致敏和pertussis单独致敏所造成的大鼠哮喘模型的差异,确定一种较成功的哮喘大鼠模型.rn 方法:用3种方法分别致敏大鼠,抗原攻击后,用Medlab生物信号采集处理系统记录仪记录甲酰胆碱激发的气道高反应性。行支气管肺泡灌洗和腹腔灌洗,计数支气管肺泡灌洗液中细胞总数并分类,观察肺组织病理改变.rn 结果:OVA+pertussis共同致敏,OVA单独致敏和pertussis单独致敏都可引起一定的大鼠肺功能下降、炎性反应细胞浸润增加以及肺组织病理改变,OVA+pertussis共同致敏效果优于OVA单独致敏和pertussis单独致敏.rn 结论:OVA+pertussis共同致敏再进行雾化攻击是一种比较成功的哮喘大鼠模型。

摘要： 目的:观察OVA+pertussis共同致敏,OVA单独致敏和pertussis单独致敏所造成的大鼠哮喘模型的差异,确定一种较成功的哮喘大鼠模型.rn 方法:用3种方法分别致敏大鼠,抗原攻击后,用Medlab生物信号采集处理系统记录仪记录甲酰胆碱激发的气道高反应性。行支气管肺泡灌洗和腹腔灌洗,计数支气管肺泡灌洗液中细胞总数并分类,观察肺组织病理改变.rn 结果:OVA+pertussis共同致敏,OVA单独致敏和pertussis单独致敏都可引起一定的大鼠肺功能下降、炎性反应细胞浸润增加以及肺组织病理改变,OVA+pertussis共同致敏效果优于OVA单独致敏和pertussis单独致敏.rn 结论:OVA+pertussis共同致敏再进行雾化攻击是一种比较成功的哮喘大鼠模型。

摘要： 本发明提供了一种百日咳或百白破疫苗中百日咳杆菌气管细胞毒素的筛查方法及含量测定方法，含量检测方法包括以下步骤：(1)标准工作曲线的绘制：称取适量百日咳杆菌气管细胞毒素对照品，配制成标准工作溶液；将标准工作溶液用高效液相色谱串联质谱进行分析，即可得到对照品的色谱图，根据溶液浓度与对应色谱峰面积的关系得到标准工作曲线；样品检测：取待测样品加入同等体积乙腈，混匀后，离心，取上清液用高效液相色谱串联质谱进行分析检测，根据待测组分的响应峰面积和标准工作曲线，得出待测组分百日咳杆菌气管细胞毒素的含量。本方法具有超高灵敏度，且比欧洲药典要求的限度低1409倍。

摘要： 本发明公开百日咳和副百日咳杆菌药物靶点筛选方法，根据反向疫苗学理论和构建百日咳杆菌和副百日咳杆菌的蛋白质相互作用网络筛选针对二者的交叉保护抗原和药物靶点。应用反向疫苗学理论和生物信息学方法以及DNA芯片数据从3436个ORFs中初步筛选到最后191个候选抗原。它们都符合以下标准：（1）在百日咳杆菌和副百日咳杆菌都高度表达，或者与百日咳的致病和毒力密切相关；（2）都暴露在细菌的表面；（3）不与宿主同源，不会对宿主产生危害；（4）在165株百日咳杆菌和副百日咳杆菌中高度保守。这大大减少了实验的工作量和时间，并将直接促进百日咳新疫苗的发展。

摘要： 本发明公开了一种能合成百日咳杆菌寡糖抗原的重组大肠杆菌，属于基因工程和合成生物学领域。本发明敲除了大肠杆菌MG1655基因组上O‑抗原基因簇wbbL‑galF，核心糖基因簇rfaD‑waaQ，肠共同抗原基因簇rfe‑rffM，克拉酸基因簇wcaM‑wza和转录结合因子metJ基因，并过表达百日咳CS菌株核心糖，百日咳CS菌株三糖和控制三糖单元长度基因簇，得到重组菌MDCO020/pWpBpD5。在相同发酵条件下，MDCO020/pWpBpD5菌株合成细胞干重是CS菌株的1.63倍；MDCO020/pWpBpD5菌株寡糖抗原的产量是CS菌株的2倍。

摘要： 本发明公开了一种同时检测百日咳杆菌DNA及其耐药突变位点的荧光PCR检测方法，将待测样本DNA和内标加入荧光PCR反应液中进行扩增反应，再根据荧光信号检测通道的Ct值对反应结果进行判读，区分待测样品是百日咳杆菌还是耐药百日咳杆菌，从而指导临床正确使用抗生素，防止抗生素的滥用。本发明还提供了用于上述百日咳杆菌及其耐药突变位点的检测方法的试剂盒，所述试剂盒包含百日咳杆菌检测用的荧光PCR反应液和内标。本发明的方法和试剂盒能节省检测时间和成本，且检测准确度高、灵敏度高、特异性好、精密度好。

摘要： 本发明公开了一种百日咳杆菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒及其专用引物和探针，属于生物医学检测技术领域。本发明提供的试剂盒包括核酸提取液、检测液a、检测液b和SAT酶液，通过优化设计更适合于百日咳杆菌检测的引物和探针，并在检测过程中分步添加各组分进行分步反应可以实现对百日咳杆菌快速、准确检测，并且特异性好，灵敏度高，扩增产物RNA易降解不会引起样本交叉污染和环境污染。

摘要： 本发明涉及一种获得百日咳杆菌来源的PRN蛋白的方法，该方法包括能够有效提高PRN蛋白的提取水平的冷冻和解冻过程。在本发明中，发现当在用尿素处理之前将粒料冷冻，然后在低温下缓慢融化时，与在其他条件下的实验组相比，PRN蛋白的提取水平有效地增加。另外，即使当该方法应用于大规模生产时，也有效地提高了PRN提取水平。因此，包括冷冻和解冻过程的百日咳杆菌的预处理方法，可以有效地用于批量生产为百日咳疫苗所用的PRN。

摘要： 本发明公开了百日咳杆菌的基于LAMP技术的检测试剂盒。LAMP引物根据百日咳杆菌的特异保守序列设计，每组引物包含4条寡核苷酸，通过LAMP反应体系利用恒温扩增仪对百日咳杆菌进行荧光鉴定检测。本发明为百日咳杆菌测提供了一个新的技术平台，适宜在基层单位、现场监测和床旁检测中推广应用。

摘要： 本发明提供一种百日咳杆菌核酸检测试剂盒。所述百日咳杆菌核酸检测试剂盒包括用于检测靶多核苷酸的探针、用于扩增靶多核苷酸的上游引物以及下游引物。本发明提供的所述百日咳杆菌核酸检测试剂盒解决了现有技术的百日咳的PCR的快速诊断所采用的引物灵敏度不高技术问题。

摘要： 本发明提供了一种百日咳或百白破疫苗中百日咳杆菌气管细胞毒素的筛查方法及含量测定方法，含量检测方法包括以下步骤：(1)标准工作曲线的绘制：称取适量百日咳杆菌气管细胞毒素对照品，配制成标准工作溶液；将标准工作溶液用高效液相色谱串联质谱进行分析，即可得到对照品的色谱图，根据溶液浓度与对应色谱峰面积的关系得到标准工作曲线；样品检测：取待测样品加入同等体积乙腈，混匀后，离心，取上清液用高效液相色谱串联质谱进行分析检测，根据待测组分的响应峰面积和标准工作曲线，得出待测组分百日咳杆菌气管细胞毒素的含量。本方法具有超高灵敏度，且比欧洲药典要求的限度低1409倍。

摘要： 本发明公开了一种快速检测百日咳杆菌的试剂盒及其检测方法。特异的探针与高耐受性聚合酶技术相结合，样本经过简单的加热处理后可以直接扩增，无需提核酸步骤，减少百日咳样本的处理样本的时间。百日咳杆菌检测的所用的成分制备成干粉制剂，显著提高了试剂盒的热稳定性，可用于常温运输。多成分干粉剂的单管包装减少了配液的步骤。实验结果证明，本发明所述的试剂盒及其检测方法，特异性强，灵敏度高，操作简单，能够对百日咳杆菌进行直接快速准确的检测。