番茄黄化曲叶病毒

摘要： 【目的】明确番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)的寄主范围,为防控陕西省番茄黄化曲叶病毒提供理论基础。【方法】对陕西省大荔县、泾阳县、杨凌示范区3个基地不同时间段番茄产区周边11种作物的158份样品、32种常见杂草的283份样品进行TYLCV的PCR检测。【结果】黄瓜、辣椒、茄子、豇豆及杂草苋菜均携带TYLCV,为番茄黄化曲叶病毒的中间寄主,是该病毒的重要侵染来源。序列比对结果进一步确认这些作物上的病原为番茄黄化曲叶病毒。【结论】TYLCV可以侵染黄瓜、辣椒、茄子、豇豆这4种作物及杂草苋菜,为TYLCV的中间寄主。

摘要： 番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)是一种由烟粉虱传播的单链环状DNA病毒,在田间可与多种病毒发生复合侵染,如番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus,ToCV)等。本文对比了TYLCV单独侵染和TYLCV与ToCV复合侵染对烟粉虱获取和传播TYLCV的影响。结果表明,与取食TYLCV单独侵染的番茄相比,取食复合侵染番茄的烟粉虱对TYLCV的传毒率显著提高,且番茄植株和烟粉虱体内TYLCV的病毒积累量也显著提高。试验结果说明复合侵染会提高烟粉虱的传毒率,促进TYLCV的发生与流行。

摘要： 【目的】番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)是对农业生产造成威胁的主要病毒之一,自然条件下通过媒介昆虫烟粉虱Bemisia tabaci传播。已有研究表明烟粉虱雌成虫比雄成虫具有更强的获毒与传毒能力。本研究旨在探明烟粉虱化学感受蛋白(chemosensory protein,CSP)基因BtabCSP6表达对病毒传播的影响,为控制病毒发生寻找新途径。【方法】使用TYLCV侵染性克隆方法获得带毒番茄植株,微虫笼收集不带毒烟粉虱MED隐种成虫固定在感染TYLCV的番茄植株叶片获毒48 h;利用RT-qPCR技术测定分别取食感染和未感染TYLCV番茄植株的烟粉虱MED隐种雌雄成虫体内BtabCSP1-8基因表达量变化;通过饲喂法利用RNAi对烟粉虱MED隐种雌成虫BtabCSP6基因进行干扰48 h后饲喂TYLCV感染的番茄植株,测定烟粉虱MED隐种雌成虫的获毒率和传毒率。【结果】RT-qPCR检测结果表明,与未侵染的烟粉虱MED隐种雌成虫相比,侵染TYLCV的雌成虫体内BtabCSP3和BtabCSP6基因的表达量变化最为显著。同样地,在侵染TYLCV的雄成虫体内,BtabCSP4和BtabCSP6表达量的变化最为明显。饲喂dsBtabCSP648 h后,烟粉虱MED隐种雌成虫体内BtabCSP6表达量降低;取食感染TYLCV番茄植株不同时间烟粉虱MED隐种雌成虫的获毒率和不同数量雌成虫对未感染TYLCV的番茄植株的传毒率与对照相比均显著降低。【结论】下调烟粉虱MED隐种雌成虫体内BtabCSP6基因的表达,可显著降低烟粉虱MED隐种雌成虫的获毒率和传毒率,说明BtabCSP6可能影响TYLCV传播。

摘要： 番茄种植中最常见、危害最大的主要是番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒,再加上烟粉虱等作为媒介进行传播扩散,极易造成暴发性、毁灭性病害。如何防治这些病毒病?1.品种选择:选用抗病毒病、耐热、生长势强的番茄品种。

摘要： 番茄褪绿病毒Tomato chlorosis virus (ToCV)是一种由烟粉虱Bemisia tabaci传播的正义单链RNA病毒,在田间常与番茄黄化曲叶病毒Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV)复合侵染而造成番茄生产上重大的经济损失.为了明确ToCV与TYLCV的复合侵染对烟粉虱传播ToCV所造成的影响,本文采用RT-PCR以及qRT-PCR检测了复合侵染的番茄对烟粉虱获取和传播ToCV的影响.研究表明,烟粉虱取食复合侵染的番茄后对ToCV的传播效率显著提高,仅25头烟粉虱的传毒率即可达到100％,ToCV在烟粉虱以及番茄体内的累积量均显著提高.说明这种复合侵染促进了烟粉虱对ToCV的传播,在田间应当及时防控烟粉虱,警惕病毒与烟粉虱的蔓延.

摘要： [目的]明确侵染贵州番茄的番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)分离物与其他地区TYLCV的系统进化关系,为贵州番茄黄化曲叶病毒病的防控提供科学依据.[方法]将采自贵州省关岭县的番茄疑似TYLCV样品提取DNA,用菜豆金色黄花叶病毒属(Begomovirus)通用引物Be-goAFor1/BegoARev1进行PCR检测,并用TY3/TY5引物扩增并克隆TYLCV贵州分离物的DNA-A全长序列,分析序列同源性及系统进化情况.[结果]从病样中分离得到的致使贵州番茄叶片表现黄化、皱缩等症状的病原为TYLCV,通过构建系统进化树可知,TYLCV贵州分离物(TYLCV-GZ)的DNA-A与TYL-CV-Mexico和TYLCV-XJKS的相似性最高,核苷酸一致性达99％以上,其与国内其他地区TYLCV分离物归属一致,属于TYLCV-IL株系,且与TYLCV-SDLC(山东)和TYLCV-XJKS(新疆)聚在一个分支上,说明其亲缘关系最近.[结论]引起贵州关岭县番茄叶片黄化、皱缩的病原为番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV),且属于TYLCV-IL株系.

摘要： 番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)病是威胁广东省番茄生产的主要病毒病害.为给番茄抗病毒育种工作积累材料基础,本研究采用基于TYLCV侵染性克隆的番茄抗病性测定方法,对103份番茄材料进行了抗TYLCV鉴定,获得抗病番茄材料8份、耐病材料14份,这些材料可用于后续番茄抗TYLCV育种及其抗病机理等相关研究.

摘要： 番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)和番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)是近几年危害番茄较严重的病毒.本试验利用11份携带不同抗TYLCV基因的番茄材料,在TYLCV和ToCV共同侵染下对ToCV的耐性进行了研究.结果表明:携带不同抗TYLCV基因的番茄材料对ToCV耐性存在差异,只含有单个TY-2/ty-2抗性基因的材料对ToCV有一定的耐性,但株高和单株坐果数受到较大影响;而同时含有TY-1/ty-1、TY-2/ty-2、TY-3/ty-3抗性基因的材料对ToCV的耐性较强,病情指数低于43.5,且植株生长势、坐果率、果实成熟度受影响较小.对ToCV的CP基因和TYLCV的DNA-A全基因进行克隆和序列分析,结果表明复合侵染时ToCV的CP基因核苷酸序列与国内分离物同源性均达到99％以上,TYLCV的DNA-A基因核苷酸序列与国内分离物同源性均在98％以上,表明复合侵染时TYLCV和ToCV没有产生新的病毒菌株.

摘要： 为了获得高抗番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)番茄材料,本研究通过人工设计以TYLCV病毒基因V1、C1为靶标的双链RNA(dsRNA),通过农杆菌介导法转化番茄,探索RNAi技术在番茄抗TYLCV中的防御效果。结果表明,通过RNAi技术干扰TYLCV V1和C1基因可以延缓病毒症状的发生,提高番茄植株对TYLCV的抗性。田间试验结果发现,以TYLCV V1和C1为靶标的RNAi株系RNAi-CP-2和RNAi-Rep-12,不仅可以干扰病毒V1、C1的表达,而且可以干扰TYLCV其他4个基因V2、C2、C3和C4,表明RNAi技术可以在靶标基因附近传递,影响相邻其他基因的表达。本研究结果为番茄抗病毒研究奠定了理论基础。

摘要： 番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)严重威胁茄科蔬菜作物的生产。抗性标记Ty-1和Ty-3是一对等位基因,在番茄抗TYLCV育种中应用较为广泛。为了探究Ty-1/Ty-3抗病毒分子机制,本研究以携带Ty-1/Ty-3抗性标记的番茄Y19为材料,利用病毒诱导基因沉默(VIGS)技术,沉默RNA干扰(RNAi)机制关键基因,即番茄核糖核酸内切酶编码基因2a/b/c/d(SlDCL2)和番茄核糖核酸内切酶编码基因4(SlDCL4),初步分析其在Ty-1/Ty-3抗TYLCV中的功能。PCR与测序结果发现SlDCL2、SlDCL4的VIGS沉默载体pTRV2∶SlDCL2和pTRV2∶SlDCL4构建成功。以沉默番茄八氢番茄红素脱氢酶(SlPDS)基因为标记植株,定量PCR检测SlDCL2、SlDCL4沉默株系中SlDCL2、SlDCL4基因的沉默效率,结果显示SlDCL2、SlDCL4沉默株系中对应基因的表达均小于对照植株的50%,表明SlDCL2、SlDCL4沉默载体确实可以降低对应基因的表达,且不影响其他DCL基因的表达。VIGS沉默植株SlDCL2、SlDCL4基因后接种TYLCV,接种TYLCV 30dpi结果显示,Y9材料表现出明显的TYLCV病毒症状,通过比较植株发病严重度发现,SlDCL2、SlDCL4沉默株系发病严重度分别为1.97、2.35,显著高于空载体注射株系(0.14)和对照株系(0.07)。本研究结果表明RNAi通路关键基因SlDCL2、SlDCL4在Ty-1/Ty-3抗TYLCV中发挥着重要作用,这为利用Ty-1/3抗性标记基因育种奠定了基础。

摘要： 近年来，在全国各地相继发现一种毁灭性的番茄新病害—番茄黄化曲叶病毒病，本研究利用原核表达载体pET-32a(+)和pET-28a(+)成功构建了番茄黄化曲叶病毒(Tomato Yellow Leaf Curl Virus,TYLCV)外壳蛋白(Coat Protein,cP)基因的重组质粒p32a-CP和p28a-CP,并通过PCR和双酶切鉴定了序列连接的正确性,测序结果也表明TYLCV-CP基因已定向插入p32aCP和p28a-CP中,再分别将两载体转化至BL21(DE3)中,采用不同浓度的IPTG对其进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示分子量约为50kD的目的蛋白在重组载体p32a-CP中得到了高效表达,而在重组载体p28a-CP中没有表达.

摘要： 利用双生病毒简并引物PA/PB,对山东寿光保护地疑似感染番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)的番茄植株进行PCR检测,结果证明番茄病叶由TYLCV侵染所致.以提取的病叶总DNA为模板,扩增得到长约770bp的TYLCV-CP基因片段,克隆至pEASY-T1Simple载体,然后用XhoⅠ和EcoRⅠ将其切下并插入到pET-32a表达载体中,构建了寿光地区TYLCV分离物的外壳蛋白基因原核表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG(异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)诱导获得了50kD重组蛋白,Ni2+-NTA亲和层析纯化和Western印迹分析证明目的蛋白为TYLCV外壳蛋白,且具有良好的抗原活性.下一步将制备针对目的蛋白的特异性抗血清，为TYLCV的ELISA检测方法的建立奠定基础。

摘要： 番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus，TYLCV)作为世界性传播病毒，发病率高达95％。产量损失在60％以上，对番茄生产造成毁灭性危害，已成为世界许多地区番茄生产的重要限制因子。2009年6月山东临沂地区冷棚越夏番茄大面积感染该病毒，病田植株均表现为植株矮化，叶片上卷，叶缘黄化，尤其项部叶片褪绿发黄、变小，不能正常开花结果，危害十分严重。通过对田间发病植株连续喷施雷力极可普(含有2.6％甲壳胺低聚糖水剂)产品，发病症状明显改善。为进一步确定2.6％甲壳胺低聚糖对番茄黄化曲叶病毒的防治效果，通过室内接种番茄黄化曲叶病毒，测定甲壳胺低聚糖活性，发现2.6％甲壳胺低聚糖的活性随着稀释倍数的增加而降低，稀释浓度为400～600倍时防治效果最佳，最高可达86.35％：结合田间药效试验发现：于发病初期加水稀释400～800倍．每隔3 d喷施，对温室番茄黄化曲叶病毒的防效可达82.23％～79.13％，叶片症状明显减轻．病叶率降到10％以下．叶片伸展。叶色加深：每隔7～10 d喷施。防效降为77.22％～72.00％，病叶率又高达13.2％～18.0％．效果明显下降。试验结果表明甲壳胺低聚糖对番茄黄化曲叶病毒有显著的抑制作用，发病初期及时防治，加强喷施频次。防效显著，且对番茄无毒害作用，值得在生产中推广应用。

摘要： 本文指出中国番茄黄化曲叶病毒编码的AV2为RNA沉默抑制子，进而介绍了AV2的亚细胞定位方法，研究了AV2基因对致病性及抑制基因沉默的能力。

摘要： 中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus, TYLCCNV) Y10分离物(Y10)是从云南烟草上分离的乌翅分begomovirus，伴随有卫星DNAp分子(Y10β)，Y10β为辅助病毒在田间诱导典型症状的目淀因子，并与之构成，TYLCCNV/DNAp病害复合体。近年来对DNAp与辅助病毒之间的互作研究表明，TYLCCNV等begomoviruses与其伴随的卫星DNAa是共进化的，两者在遗传进化起源上可能具有紧密联系。研究已发现在本氏烟、番茄等寄主内Y10种群具有丰富遗传多样性及较高变异水平，其结构具有与RNA病毒相似的“准种”特征。因此对Y10β的种群结构遗传变异进行分析，为进一步了解此类病毒与其伴随卫星的相互关系及遗传进化与蔓延为害规律具有重要意义。意义。本研究将Y10和Y10β的侵染性克隆经农杆菌介导共同接种心叶烟，从Y1叩的分子克隆出发，对心叶烟中Y10β的种群结构、变异水平、突变分布及碱基替换突变类型进行了分析。结果表明，Y10种群具有丰富的遗传多样性及较高的变异水平，所获得的43个Y10β全长克隆在核昔酸水平均发生不同程度的变异，突变克隆百分比达100%，且没有任意两个克隆具有完全相同的突变，表明这3个Y10β种群均是杂合的，即由一系列近乎相似但不完全一致的序列变异体组成。

摘要： 卫星DNAβ是与一些单组份双生病毒伴随的并是病毒在自然寄主上引起典型症状所必需的致病相关分子.迄今发现的所有DNAβ分子在互补链上都含有一个位置和大小保守的βC1基因.本文对中国番茄黄化曲叶病毒的缺失βC1基因的DNAβ突变体(DNAAC1β)与异源病毒接种后的致病性及稳定性进行了研究.PCR和Southern印迹证实该突变体能利用赛葵黄脉病毒、烟草曲茎病毒、中国胜红蓟黄脉病毒、假马鞭曲叶病毒等多种异源双生病毒复制并系统侵染本氏烟.接种后65天内的PCR检测和序列分析显示,该突变体与其它辅助双生病毒接种后在寄主细胞中的复制是稳定.

摘要： 克隆番茄黄化曲叶病毒的复制酶基因,并构建其植物表达载体.通过农杆菌介导法将番茄黄化曲叶病毒的复制酶基因转入番茄子叶外植体.经过共培养、潮霉素筛选和分化再生,获得了21株潮霉素抗性植株.PCR检测和Southern Blot检测结果表明,有3株呈阳性检测反应,说明TYLCV-Rep基因已整合到番茄基因组中,阳性率为14.3％.通过烟粉虱接种试验表明:番茄转基因植株较非转基因植株对番茄黄化曲叶病毒的抗性明显增强.实验结果为进一步研究番茄抗病性和培育抗病番茄新品种奠定了基础.

摘要： 本发明公开了一种同时检测番茄黄化曲叶病毒及伴随的越南番茄黄化曲叶卫星DNAβ的方法及其专用引物组。本发明提供的引物组，由引物对TY和引物对β组成；所述引物对TY由名称为TY‑F的引物和名称为TY‑R的引物组成；所述TY‑F为序列表中序列1所示的单链DNA；所述TY‑R为序列表中序列2所示的单链DNA；所述引物对β由名称为β‑F的引物和名称为β‑R的引物组成；所述β‑F为序列表中序列4所示的单链DNA；所述β‑R为序列表中序列5所示的单链DNA。实验证明，本发明提供的方法可准确的检测番茄黄化曲叶病毒和/或越南卫星DNAβ。

摘要： 本发明提供一种快速鉴别番茄上两种类似病毒(番茄黄化曲叶病毒和中国番木瓜曲叶病毒)的方法，属植物保护领域。根据番茄黄化曲叶病毒和中国番木瓜曲叶病毒核苷酸序列设计三条引物，PA_F362，TY_F833，PATY_R，其中PA_F362/PATY_R组合检测中国番木瓜曲叶病毒，TY_F833/PATY_R组合检测番茄黄化曲叶病毒。样品提取总DNA后，只需一次PCR，即可实现番茄黄化曲叶病毒和中国番木瓜曲叶病毒两种病毒的鉴别。该方法克服了传统的生物学、血清学、电镜观察等方法上存在的问题，与传统的一次PCR检测一种病毒的方法相比，又减少了成本，节约了时间，是一种特异、灵敏、经济而又方便的检测方法。

摘要： 本发明名称为‘一种番茄SolyWRKY54转录因子调控番茄黄化曲叶病毒的鉴定及应用’。本发明从番茄中鉴定到一个响应番茄黄化曲叶病毒的WRKY转录因子基因SolyWRKY54，该基因编码的蛋白属于WRKY转录因子家族中的III类亚族。半定量PCR结果表明感病品种‘金棚1号’中病毒积累量高于抗病品种‘浙杂301’。荧光定量PCR分析表明在抗病番茄品种‘浙杂301’中，SolyWRKY54基因的表达量降低。病毒诱导基因沉默实验进一步证明了SolyWRKY54基因在响应番茄黄化曲叶病毒过程中的负调控功能。本发明鉴定到的SolyWRKY54转录因子基因有利于分析研究番茄响应番茄黄化曲叶病毒的抗性机制，可用于抗病番茄的培育。

摘要： 本发明提供一种快速同步检测番茄上两种病毒组分(番茄黄化曲叶病毒及其伴随中国番茄黄化曲叶病毒卫星)的方法，属植物保护领域。根据番茄黄化曲叶病毒和中国番茄黄化曲叶病毒卫星核苷酸序列设计两对引物，TYmF/TYmR，TycnbF/TycnbR，其中TYmF/TYmR组合检测番茄黄化曲叶病毒，TycnbF/TycnbR组合检测中国番茄黄化曲叶病毒卫星。样品提取总DNA后，只需一次PCR，即可实现番茄黄化曲叶病毒及其伴随的中国番茄黄化曲叶病毒卫星两种组分的检测。该方法克服了传统的生物学、血清学、电镜观察等方法上存在的问题，与传统的一次PCR检测一种病毒的方法相比，又减少了成本，节约了时间，是一种特异、灵敏、经济而又方便的检测方法。

摘要： 本发明公开了一种同时检测番茄黄化曲叶病毒及伴随的越南番茄黄化曲叶卫星DNAβ的方法及其专用引物组。本发明提供的引物组，由引物对TY和引物对β组成；所述引物对TY由名称为TY-F的引物和名称为TY-R的引物组成；所述TY-F为序列表中序列1所示的单链DNA；所述TY-R为序列表中序列2所示的单链DNA；所述引物对β由名称为β-F的引物和名称为β-R的引物组成；所述β-F为序列表中序列4所示的单链DNA；所述β-R为序列表中序列5所示的单链DNA。实验证明，本发明提供的方法可准确的检测番茄黄化曲叶病毒和/或越南卫星DNAβ。

摘要： 本发明提供一种快速鉴别番茄上两种类似病毒(番茄黄化曲叶病毒和中国番木瓜曲叶病毒)的方法，属植物保护领域。根据番茄黄化曲叶病毒和中国番木瓜曲叶病毒核苷酸序列设计三条引物，PA_F362，TY_F833，PATY_R，其中PA_F362/PATY_R组合检测中国番木瓜曲叶病毒，TY_F833/PATY_R组合检测番茄黄化曲叶病毒。样品提取总DNA后，只需一次PCR，即可实现番茄黄化曲叶病毒和中国番木瓜曲叶病毒两种病毒的鉴别。该方法克服了传统的生物学、血清学、电镜观察等方法上存在的问题，与传统的一次PCR检测一种病毒的方法相比，又减少了成本，节约了时间，是一种特异、灵敏、经济而又方便的检测方法。

摘要： 本发明公开了一种番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒的单叶嫁接接种方法，步骤如下：S1、处理砧木：取番茄幼苗或侧枝，选择合适的结点，从结点上移开健康叶片，在受体幼苗的茎上做斜切切口；S2、处理接穗：取长势良好的单叶为接穗材料，将接种单叶的叶柄削成楔形；S3、插接嫁接：将接穗斜插入砧木切口中，用嫁接夹固定后培养即可。本发明采用上述的一种番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒的单叶嫁接接种方法，不受传毒介体的影响，不受季节限制，嫁接材料容易获得，操作简便。

摘要： 本发明提供一种快速鉴别番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒的方法，属植物保护领域。根据番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒核苷酸序列设计三条引物，[A]TYTO_R，[B]TY_F，[C]To_R，其中A/C组合检测番茄褪绿病毒，A/B组合检测番茄黄化曲叶病毒。样品提取总RNA后，只需一次RT‑PCR，即可检测番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒两种病毒，实现了两种病毒的鉴别。由于番茄黄化曲叶病毒是一种DNA病毒，番茄褪绿病毒是一种RNA病毒，因此传统的检测方法往往需要分别提取DNA和RNA进行检测，该方法仅需提取样品RNA，即可实现两种病毒的同步检测，大大减少了成本，节约了时间，是一种特异、灵敏、经济而又方便的检测方法。

摘要： 本发明涉及一种鉴别番茄褪绿病毒与番茄黄化曲叶病毒的双重PCR引物及方法，步骤如下：(1)提取植株的总RNA；(2)以植株的总RNA为模板进行反转录合成cDNA；(3)以cDNA为模板对ToCV和TYLCV衣壳蛋白编码的核酸序列进行PCR扩增；(4)对步骤(3)制得的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。本发明涉及上述PCR引物组合，利用双重PCR方法来进行ToCV与TYLCV的鉴定，结果准确、方法快速简便，节约检测成本，大大提高了病毒检测效率，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明提供一种治愈番茄黄化曲叶病毒、蕨叶病毒的菌剂，该菌剂的制备方法是：取植物粕1000公斤，加水泡制后，堆成长行，自然发酵48小时，堆内温度升到70‑80°C，后每24小时翻堆一次，发酵5‑6天，即可得到蛋白酵素菌，该方法制备出一种好痒性酵素菌，对多种霉菌、鬼伞菌有抑治菌丝生长功能，经酵素菌发酵后的产物，应用于番茄植株感染的黄化曲叶病毒、蕨叶病毒，有极强的杀毒功效，且治愈效果好，见效快，制备方法简单、方便使用，不影响番茄产量及质量。