番茄斑萎病毒

摘要： 2021年在宁夏银川地区病害调查时发现番茄植株茎秆和未成熟果实上出现了褐色、不规则形病斑等疑似病毒病的症状。采用Trizol法提取番茄病株样品的总RNA,使用常见侵染番茄的病毒特异性引物进行RT-PCR检测。结果显示:番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)和南方番茄病毒(southern tomato virus,STV)的特异性引物分别从样品cDNA中扩增出777 bp和681 bp的目的产物,通过对产物测序并进行BLAST比对和系统发育分析,发现宁夏银川地区番茄上的TSWV与西班牙辣椒上的TSWV分离物聚在同一分支上,进化关系最近;STV分离物与法国、巴基斯坦、哥伦比亚番茄上的STV分离物的进化关系最近,与其他地区的STV分离物关系较远,表明宁夏银川地区的番茄被TSWV和STV复合侵染。

摘要： 【目的】探明有色地膜对西花蓟马种群数量及番茄斑萎病毒病发生的影响,为烟草番茄斑萎病毒(TSWV)的绿色防控提供理论依据。【方法】采用5点取样法和盘拍法调查黑色、银灰色及银黑色3种地膜处理烟草西花蓟马的种群数量及番茄斑萎病毒病的发生动态。【结果】6月20日至8月10日,银黑色地膜处理烟草上西花蓟马的累计百株虫量为138.67头,显著低于黑色地膜(217.33头)和银灰色地膜(180.00头)处理;6月10日以后,黑色地膜烟田的TSWV发病率和病情指数分别为46.67%和44.07,显著高于银黑色地膜(24.33%和22.78)和银灰色地膜(26.33%和24.33)处理。【结论】银黑色地膜及银灰色地膜均能有效降低烟田TSWV发病率和病情指数,对传毒介体西花蓟马具有明显的趋避作用,银黑色地膜对蓟马的防治效果较银灰色地膜更佳;生产上可采用银黑色地膜覆盖栽培对西花蓟马及烟草番茄斑萎病毒病进行防治。

摘要： 将番茄斑萎病毒(TSWV)的NSm、NSs基因200 bp左右构建到pTRV−PTV00沉默载体上,通过农杆菌GV3101浸润本氏烟。注射10 d左右,待注射PDS基因的植株发白,将注射pTRV−PTV00−NSm、pTRV−PTV00−NSs以及pTRV−PTV00载体的植株接种TSWV,显症后采集系统叶(接种叶上一叶)应用实时荧光定量PCR检测NSm、NSs基因表达量。通过测定NSm、NSs基因表达量发现NSm基因的沉默效率为86.7%、NSs基因的沉默效率为92.00%。结果表明:通过pTRV−PTV00载体构建NSm、NSs基因沉默载体沉默效率接近90.00%,此载体适用于病毒基因沉默载体的构建,且NSm、NSs基因沉默载体能应用后续基因功能研究。

摘要： 【目的】研究番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)侵染寄主植物辣椒(Capsicum annuum)时辣椒的防御反应,揭示其病变规律。【方法】摩擦接种TSWV,于接种后1、3、7、14和21 d采集辣椒系统叶片,利用苯胺蓝染色法和透射电子显微镜技术观察胼胝质沉积及超微结构变化。【结果】TSWV接种于辣椒后,辣椒细胞内观察到TSWV病毒粒子,在辣椒系统叶片气孔、筛管和细胞壁上均观察到胼胝质沉积,同时细胞超微结构发生病变,叶绿体结构被破坏,出现变形和解体现象,严重时引发细胞死亡。【结论】TSWV侵染辣椒后,辣椒启动胼胝质沉积进行防御反应,以阻止病毒进一步入侵;但同时也会引起细胞发生病变,导致植物出现褪绿、畸形和坏死等现象。

摘要： 为研究辣椒CaWRKY30转录因子与番茄斑萎病毒互作的响应机制,以辣椒湘研11为试验材料,通过RNA提取、RT-PCR、切胶纯化及克隆等试验获得CaWRKY30编码序列。生物信息学分析结果表明,CaWRKY30全长1122 bp,编码373个氨基酸,该基因编码的蛋白含有1个WRKY保守结构域和1个C_(2)H_(2)结构域,属于典型的Ⅱ(e)亚家族成员。系统发育分析表明,与马铃薯StWRKY22氨基酸序列的亲缘关系最近。本氏烟叶片亚细胞定位试验发现,CaWRKY30在本氏烟幼苗中定位于细胞核和细胞膜,并且导致细胞膜加厚。实时荧光定量PCR分析结果表明,观察番茄斑萎病毒机械摩擦接种辣椒后的病毒积累量,发现病毒积累量在接种1~14 d逐渐上升,在接种后14 d处于最大值,接种14 d后病毒积累量逐渐下降;同时,CaWRKY30受番茄斑萎病毒接种后诱导,在接种病毒1~14 d CaWRKY30表达量上调,14 d达到峰值,14 d以后表达量逐渐下降。综上,获得了CaWKRY30转录因子基因序列,该转录因子定位于细胞核和细胞膜,并初步阐述了辣椒CaWRKY30转录因子在番茄斑萎病毒胁迫下的表达趋势。

摘要： 世界范围内,由蓟马传播的番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)是危害花生的主要病毒之一。过去的40年中有关花生上斑萎病毒病的病原学、病害流行学以及综合治理等方面都取得了许多重要进展,本文简要回顾了花生上TSWV的发现和研究历史,重点介绍了花生上斑萎病毒病的流行规律、农艺防治、化学防治及抗病育种等方面所取得的进展与成就。近年来,TSWV在我国多种作物上不断被发现,给花生生产带来了越来越大的威胁,本文也介绍了2021年在大连地区花生上观察到的TSWV为害症状,并结合我国目前花生上斑萎病毒病的危害现状提出了应对潜在威胁的建议。

摘要： 【目的】探明番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt tospovirus,TSWV)和介体西花蓟马(Frankliniella occidentalis)之间的分子互作关系,探索介体因子如何参与病毒侵染过程,以期为解析西花蓟马蛋白调控介体传毒机理奠定基础。【方法】通过若虫期饲毒获得高带毒西花蓟马群体,借助SMART技术构建TSWV侵染的西花蓟马酵母双杂交三框cDNA文库。【结果】3种读码框初级cDNA文库的库容量分别为3.0×10^(6)、2.0×10^(6)和2.0×10^(6) cfu,文库实际扩增基数大于1.5×10^(6) cfu(3种读码框均大于5×10^(5))。扩增文库平均插入片段主要分布在0.5~3.0 kb。对文库随机挑选16个克隆,测序后与GenBank数据库比对,结果显示各插入片段具有同源序列。【结论】构建的cDNA文库具有较高的库容量和重组率,可用于后续筛选西花蓟马与TSWV互作的蛋白。

摘要： 据《中国烟草科学》报道,山东省临沂市平邑县烟区种植的烟草叶片感染了番茄斑萎病毒,这是山东省烟区首次发现该病毒。研究人员对山东临沂和潍坊两个烟区进行实地采样调查,首次在山东临沂平邑县采集到疑似病样,并通过RT-PCR和全基因组序列测定,明确了番茄斑萎病毒在山东烟区的侵染,这是首次在山东临沂烟区发现番茄斑萎病毒的侵染。

摘要： [目的]研究番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)核衣壳蛋白基因(N)对辣椒抗病性的影响.[方法]以易感TSWV的辣椒湘研11为研究对象,采用同源序列克隆获得辣椒CaPDS基因和TSWV N基因;利用烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)和病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene si-lencing,VIGS)技术构建辣椒CaPDS基因沉默载体(pTRV2-CaPDS)和TSWVN基因沉默载体(pTRV2-N),农杆菌GV3101注射接种辣椒,通过qRT-PCR检测重组载体沉默效率.[结果]湘研11接种含pTRV2-CaP-DS载体菌液3周后,新叶出现白化现象,说明辣椒上的pTRV2-CaPDS沉默载体构建成功.qRT-PCR结果表明:pTRV2-N载体可高效沉默N基因,其表达量仅为6.79％±2.56％,说明沉默N基因后,湘研11不易感染TSWV.[结论]本研究成功构建了pTRV2-N沉默载体,沉默TSWV的N基因后辣椒对入侵的TSWV产生一定的抗性.

摘要： [目的]番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)在全球范围内严重危害农业生产,病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术主要用于植物内源基因的功能研究,而其沉默植物外源病毒基因用于病毒防控鲜有报道.本研究利用VIGS技术在辣椒中沉默植物外源病毒TSWV的NSm基因,为辣椒产业防控TSWV病害奠定技术基础.[方法]以辣椒(Capsicum annuum L.)为研究材料,首先构建辣椒PDS基因的沉默载体pTRV2-PDS以评估该沉默载体在辣椒中的有效性,再构建TSWV NSm基因的沉默载体pTRV2-NSm评估该沉默载体对TSWV NSm基因的沉默效果.[结果]构建的沉默载体pTRV2-PDS在辣椒中有效,沉默载体pTRV2-NSm可以高效沉默TSWV的NSm基因,NSm的表达量仅为对照组的4.6％,且表现出对TSWV的抗性.[结论]构建的沉默载体pTRV2-NSm可以沉默TSWV的NSm基因,并使辣椒对TSWV产生一定的抗性.

摘要： @@高压冷冻一冷冻置换技术(HPF-FS)是近年发展起来的电镜生物样品处理技术，可以更有效地保存细胞原始生活状态，克服传统化学固定带来的人工假象。我们应用HPF-FS研究了植物病毒侵染寄主细胞的超微结构，发现了一些在化学处理制备样品巾未能观察到的结构细节，这些结构可能更真实地反映了病毒与寄主的相互作用关系。本文报道番茄斑萎病毒(TSWV)侵染普通烟的超微结构变化。

摘要： 番茄斑萎病毒(Tomato spoted wilt virns,TSWV)属布尼亚病毒科(Bunyaviridae),番茄斑萎病毒属(Tospovirus)侵染900多种植物,是世界范围内分布的重要植物病毒原.烟草受TSWV侵染为害,引起黄化坏死斑点、斑块,造成严重的经济损失.但我国大陆对Tospovirus研究较少,在花生上分离鉴定了该属的3种病毒.自2001年开始,我们对TSWV侵染烤烟不同品种的细胞病理开展了研究.

摘要： 番茄斑萎病毒Tospovirus属引起多种农作物和花卉的严重病害。本文应用生物信息学软件DNAstar、DNAman对Tospovirus属所有成员的RNA-S中的外壳蛋白(NC)和非结构蛋白(NSs)的编码核酸和氨基酸序列进行了较为系统的分析:同源性树状图、进化树图以及一致性(Identity)的值,同源性的值以及进化树的值。同时应用网络软件NPSA和SMART进行了该蛋白质氨基酸组成和蛋白质拓扑结构的预测,发现ssRNA-S链中的NC的特异性非常高。为将来应用RT-PCR或IC-RT-PCR技术鉴定番茄斑萎病毒种的引物设计及致病机制研究提供依据。

摘要： 一种番茄斑萎属病毒核酸标准物质的制备方法。本发明所涉及的病毒核酸标准物质由如下步骤制得：选择基因保守区为扩增靶标区；设计引物并合成；序列扩增；构建表达载体；体外转录；浓度测定并稀释；分装；检测定量。利用本发明制备的标准物质具有稳定性，无生物传染性，适应范围广等特性，可利用反转录PCR以及荧光定量PCR在番茄斑萎属病毒的检测标准物质。

摘要： 一种番茄斑萎属病毒的的蛋白标准物质及其应用，所述蛋白标准物质由如下步骤制得：先获得用于番茄斑萎属病毒的全基因序列，根据序列比较，再获取包含外壳蛋白基因和复制酶基因的融合蛋白表达载体，即XXX‑CR载体；然后将获得外壳蛋白基因和复制酶基因的真核表达载体转入293细胞株中，培养表达，采用冷冻低温冻融，离心，纯化后，获得表达产物分子；接着进行DNaseⅠ消化、纯化后，定量后获得外壳蛋白与复制酶基因的融合表达蛋白标准物质。本发明物质具有稳定性，无生物传染性，耐核糖核酸酶等特性，在番茄斑萎属病毒的蛋白检测中作为标准物质。

摘要： 本发明公开了一种番茄斑萎病毒属病毒即辣椒黄花环斑病毒基因序列（包括RNA或DNA分子）及其应用。所述的病毒基因序列的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，能够编码病毒的核壳体蛋白（N）及非结构蛋白（NSs）；或所述的病毒基因序列的碱基序列如SEQ ID NO：2所示，能够编码病毒的运动蛋白（NSm）和糖蛋白（Gn或Gc）；或所述的病毒基因序列的碱基序列如SEQ ID NO：3所示，能够编码病毒的复制酶（RdRp）。应用为所述的病毒基因序列在制备检测辣椒黄花环斑病毒的检测试剂盒中的应用和所述的病毒基因序列在制备预防和/或治疗由辣椒黄花斑病毒引起的病害药物或试剂中的应用。

摘要： 本发明涉及一种利用番茄斑萎病毒NSm基因进行抗病基因筛选的方法，属于植物基因克隆技术领域。本发明的NSm基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。通过构建NSm基因的植物表达载体，转化农杆菌，通过和候选抗病基因共浸润本氏烟，观察本氏烟叶片是否产生过敏性坏死的性状，进而对候选抗病基因进行鉴定。该方法能迅速、高通量的进行抗病基因的鉴定，表明基于该基因开发的植物抗病基因筛选的方法具有十分重要的应用价值。

摘要： 本发明公开了一种番茄单粒种子携带番茄斑萎病毒TSWV的RT‑PCR检测方法及其应用。包括如下步骤：(1)种子样品前处理：将单粒番茄种子放入离心管，放入钢珠，液氮速冻后使用全自动组织研磨仪进行批量研磨处理；(2)RNA提取；(3)RT‑PCR检测。本发明针对番茄单粒种子携带TSWV病毒的RT‑PCR检测的方法，检测结果真实可靠，可以精确计算番茄种子的带毒率，为番茄种子携带TSWV病毒的快速检测及科学防控提供技术支持。

摘要： 本发明公开了一种番茄斑萎病毒属病毒即辣椒黄花环斑病毒基因序列（包括RNA或DNA分子）及其应用。所述的病毒基因序列的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，能够编码病毒的核壳体蛋白（N）及非结构蛋白（NSs）；或所述的病毒基因序列的碱基序列如SEQ ID NO：2所示，能够编码病毒的运动蛋白（NSm）和糖蛋白（Gn或Gc）；或所述的病毒基因序列的碱基序列如SEQ ID NO：3所示，能够编码病毒的复制酶（RdRp）。应用为所述的病毒基因序列在制备检测辣椒黄花环斑病毒的检测试剂盒中的应用和所述的病毒基因序列在制备预防和/或治疗由辣椒黄花斑病毒引起的病害药物或试剂中的应用。

摘要： 本发明“万寿菊在防控TSWV或番茄斑萎病毒病方面的用途”属于植物疫病防控技术领域。本发明提供万寿菊在防控TSWV或番茄斑萎病毒病方面的用途，并基于该新用途提供一种防控TSWV或烟草番茄斑萎病毒病的方法。所述一种防控TSWV或烟草番茄斑萎病毒病的方法包括：将万寿菊和烟草一起种植。本发明通过大量田间试验证实万寿菊与烟草协同种植地块相比烟草常规种植地块在TSWV或番茄斑萎病毒病毒病发病率或病情指数上均有显著的降低。

摘要： 本发明提供了一种用于检测植物番茄斑萎病毒的crDNA、crRNA、试剂盒和方法，所述crDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述crRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述试剂盒含有所述crDNA或者所述的crRNA、以及Cas13a蛋白和荧光探针。所述方法包括：提取待测的植物样品总RNA，后通过逆转录获得cDNA；以所述cDNA为模板扩增获得DNA扩增产物；将所述的扩增产物、crRNA、Cas13a蛋白和荧光探针和无酶水构成的检测反应体系进行检测。本发明具有成本低、可多次重复检测、方法简单、检测速度快、灵敏(最低检测极限达到10拷贝/uL)、特异形的特点。

摘要： 本发明要解决的问题是提供一种具有阻碍番茄斑萎病毒即TSWV感染的性质、抑制感染后的TSWV的增殖的性质、和/或抑制TSWV的感染症状的表达的性质的具有TSWV抗性的茄科植物、茄科植物细胞、以及茄科植物的制作方法。本发明提供一种具有番茄斑萎病毒抗性的茄科植物，其中，从由受体样激酶RLK基因及其同源基因构成的组中选择的至少一种基因具有突变，通过该突变，使得具有突变的基因的表达受到抑制，或者使得具有突变的基因所编码的蛋白质对于番茄斑萎病毒是非功能性的。

摘要： 本发明公开了一种抗番茄斑萎病毒辣椒植株的筛选方法，包括获得供试材料抗TSWV的表型数据；获取抗TSWV的关键QTL位点和抗TSWV的关键SNP位点；对筛选出的候选基因进行克隆及定量表达分析；在辣椒抗TSWV全基因组关联分析和连锁分析的基础上，寻找到的多态位点与抗TSWV强弱的关系，并针对显著关联位点/QTL位点开发基于PCR的分子标记；基于确定的分子标记，选育抗番茄斑萎病毒的骨干自交系，最后利用三系法选育抗番茄斑萎病毒的杂交品种。采用本发明所述的筛选方法，可为辣椒抗病分子育种提供理论和材料支持，并为辣椒新品种选育提供更有效的手段，从而筛选出符合制备优质干辣椒的特色杂交组合，进行推广应用，具有非常显著的经济效益和社会效益。