摘要:
在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞种子库与工作库基础上,对研制生产犬五联和猫三联病毒活疫苗所用7种动物肾细胞系(F-81,CRFK,MDCK,Vero,Vero-2,MA-104,BHK-21)在700余只裸鼠进行了致癌(瘤)试验,并完成染色体变异率、克隆形成率、细胞凝集性与肿瘤形成相关性研究。试验结果证明,水貂肠炎病毒(MEV)S18和L12株为制苗用毒株,L12株为检验用强毒株。建立了MEV组织培养的方法及高效价无血清MEV抗原大批量生产和检验的新工艺。成功研制了安全有效的水貂病毒性肠炎(MVE)细胞培养灭活矿油苗和铝胶苗,并大批量常年生产应用,特制高效苗免疫产生期为3~5d,免疫期与保存期均在9个月以上,免疫保护率高达100%。制定了MEV疫苗制造及检验规程。实验证明F-81和CRFK猫肾细胞系为亚二倍体核型,不具有致癌性,可安全用于疫苗生产。该疫苗既可用于发生疫情时假定健康貂的紧急预防接种,又可接种隐性感染貂和发病水貂。同时,应用敏感细胞系与钝感细胞系交替培育的方法,大幅度提高MEV增殖滴度,获得最佳制苗毒株。筛选出高变异率上皮细胞系移植于裸鼠皮下,在体内环境下快速选育出更高突变率细胞系,进而发育成MRT,确立了异类肿瘤的在体实验转化现象。提出优劣环境交替性生物循环选育作用的理论与技术体系。