猪鼻支原体

摘要： 猪鼻支原体在世界各地的猪群中普遍流行,近年来由猪鼻支原体引发的临床病例愈发常见,威胁养猪业的健康发展。猪鼻支原体也被报道与人类的多种癌症之间存在联系,具有潜在的公共卫生威胁。随着抗生素的长期使用,猪鼻支原体的耐药性问题也逐渐显现,大大降低了抗生素的临床治疗效果。鉴于猪鼻支原体的防控需要,本文对猪鼻支原体的流行特征、发病特点、致病机制、耐药性和防治措施加以综述,以期为猪鼻支原体的基础研究和临床防控提供参考。

摘要： 猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumoniae of swine,MPS)又称猪气喘病,是支原体科猪肺炎支原体(Mycoplasmal hyopneumoniae,Mhp)引起的一种接触性、慢性、呼吸道传染性疾病,其主要表现为猪只咳嗽、生产性能降低。此外,猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)、絮状支原体(Mycoplasma fl occulare,Mfl oc)及猪滑液支原体(Mycoplasma hyosynoviae,Mhyo)也是猪群中常见的支原体科病原。Mhr易引起猪继发性肺炎,Mfl oc可引起猪轻微损伤,Mhyo与猪关节炎息息相关。

摘要： 为研究热不稳定延伸因子(EF-Tu)在猪鼻支原体(Mhr)与宿主互作中的功能,本研究构建了重组质粒pET-EF-Tu并经PCR鉴定正确后,转化BL21(DE3)大肠杆菌后,通过IPTG诱导表达、镍柱亲和层析纯化获得纯化的重组蛋白rEF-Tu。将重组蛋白免疫家兔制备高免血清,采用ELISA方法检测其效价。利用该免疫血清通过western blot和菌落免疫杂交的方法分析EF-Tu在Mhr表面的表达情况,ELISA结果显示制备的多克隆抗体效价达1:200 000以上,且r EF-Tu可表达于Mhr表面;通过间接免疫荧光试验和微孔板黏附试验检测rEF-Tu对猪肾细胞(PK-15)的黏附能力,结果显示rEF-Tu具有黏附能力且该黏附作用具有剂量依赖性;进一步利用微孔板的方法检测r EF-Tu蛋白结合于纤溶酶原和细胞外基质成分的能力,结果表明rEF-Tu蛋白可结合于宿主纤溶酶原以及不同的细胞外基质成分(纤连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白和玻连蛋白)。本研究结果表明EF-Tu可于Mhr表面表达、可黏附宿主细胞,并可结合纤溶酶原和多种细胞外基质成分,在Mhr的感染及致病中可能具有重要功能。

摘要： 猪鼻支原体是猪场感染率极高的一种支原体,可引起多发性浆膜炎、关节炎等症状.目前尚未建立标准的猪鼻支原体发病模型,也缺乏标准强毒株.本研究从某猪场发病猪的关节液中分离得到一株支原体,通过PCR检测、菌落形态观察、菌体形态电镜分析、菌株MLST分型等方法对其进行了鉴定,确认其为猪鼻支原体.为评价菌株致病性,将该分离株接种1月龄自然分娩不吃初乳猪(SF-pCD猪),试验猪在感染后出现关节肿胀、跛行等临床症状,日增重显著低于对照组,并出现部分死亡.剖检结果显示感染组出现胸膜炎、腹膜炎、心包炎及关节炎,肺部组织病理分析显示为间质增宽,无虾肉样病变.从发病猪的扁桃体、肺、心及关节积液中可再次分离到攻毒株.综上,本研究分离获得一株猪鼻支原体,人工感染猪后可出现典型的发病症状,猪鼻支原体发病模型的建立为致病机制及疫苗研究奠定了重要的基础.

摘要： 为建立一种快速同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪鼻支原体(Mhr)的方法,根据GenBank中已登录的PRRSV ORF7基因序列和Mhr P37基因序列,设计2对特异性引物,通过对扩增条件进行优化,建立了能够同时检测PRRSV和Mhr的双重PCR方法.该方法可以同时扩增出PRRSV的234 bp和Mhr的737 bp特异性片段,该方法特异性好,不与其他常见猪病病原体发生交叉反应,对PRRSV和Mhr重组质粒标准品的最低检出量分别为420拷贝/μL和180拷贝/pL.用85份临床病料对本试验双重PCR技术和单项PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100％.表明所建立的双重PCR特异性强,重复性好,敏感性高,为PRRSV和Mhr的快速检测提供了有效的技术支持.

摘要： 猪链球菌病是猪感染链球菌后表现出的一种急性细菌性败血症,在养殖场中比较常见,对猪场危害极大.猪鼻支原体是猪呼吸道分泌物中的常在菌,目前,养殖从业人员尚未对猪鼻支原体引起重视,但是猪鼻支原体感染会对猪场造成较大损失.文章从流行病学特点、临床鉴别诊断和病理鉴别诊断等方面对两种疫病总结出鉴别诊断要点,并对两种病原体的防控提出建议,期望能对猪场的疫病诊治防控工作有一定的指导和建议作用.

摘要： 利用原核表达载体pET-28a(+)构建猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis, Mhr)的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)重组表达菌,研究GAPDH黏附宿主细胞的功能。结果表明:成功构建了表达rMhr-GAPDH的重组工程菌,利用IPTG诱导蛋白表达,镍柱亲和层析纯化,成功获得高纯度的rMhr-GAPDH重组蛋白。用重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,对Mhr液体培养物和固体菌落进行免疫杂交,均可检测到GAPDH,提示其可表达于菌体表面。将rMhr-GAPDH蛋白与人气道上皮细胞NCI-H292共孵育,利用间接免疫荧光试验可检测到黏附在细胞上的重组蛋白,利用微孔板黏附试验进一步证明rMhr-GAPDH蛋白与细胞膜蛋白的结合具有剂量依赖性,并可为其抗体所抑制。该研究构建表达和纯化了Mhr的GAPDH重组蛋白,检测到其在菌体表面的表达,并证明其具有黏附细胞能力,这有助于进一步研究Mhr黏附感染的致病机制。

摘要： 猪鼻支原体表面可变脂蛋白(Vlp)家族在黏附宿主细胞中起重要作用.为研究Vlp家族成员VlpB的黏附细胞功能,包括不同区段的黏附能力,以及其Ⅲ区重复片段的重复次数对黏附能力的影响.本研究利用间接免疫荧光和微孔板黏附试验验证了VlpB的黏附细胞能力.然后根据GenBank中登录的vlpB基因序列,构建了仅含Ⅱ区基因的重组质粒pET-32a(+)/vlpBn,诱导表达后纯化,获得纯度较高的重组蛋白VlpB0;同时化学合成Ⅲ区重复片段PepVlpB并与KLH偶联;进一步合成Ⅲ区重复次数分别为3、6、9、12的一系列vlpB基因,构建pET-VlpB,诱导表达获得相应的重组蛋白VlpB3、VlpB6、VlpB9和VlpB 12.利用微孔板黏附试验定量检测上述重组蛋白和偶联蛋白的细胞黏附能力.结果显示,仅含Ⅱ区的重组蛋白VlpB0及含Ⅲ区重复片段的偶联蛋白KLH-PepVlpB可黏附宿主细胞;比较不同Ⅲ区重复次数的VlpB蛋白的黏附水平,结果显示,随着Ⅲ区重复次数增多,VlpB黏附能力逐渐下降.本研究证实VlpB作为猪鼻支原体的黏附因子之一,其Ⅱ区和Ⅲ区均含有黏附位点,而整体分子的黏附能力随Ⅲ区重复次数增加而降低.本研究结果为猪鼻支原体黏附及致病机制研究提供启示.

摘要： 从临床呼吸道疾病的患猪肺脏分离到一株猪鼻支原体(Mhr),命名为Mhr-DL株.对该菌株16S rna基因序列分析证实,它与GenBank下载的Mhr(AB680688)、猪肺炎支原体(Mhp:NR_074745)和猪滑液支原体(My:KC512403)的同源性分别为99.3％、92.8％和74.0％.取Mhr-DL株培养物(1.8×109CCU/mL)经腹腔和气管途径接种SPF小型巴马猪,临床症状表现为精神沉郁、粪便干燥、食欲不振、结膜炎、体温高达41.6°C;剖检病理表现为肺脏、肝脏、脾脏等器官纤维渗出,淋巴结充血肿胀、胸膜炎、腹膜炎、肺脏呈虾肉样病变.菌株核酸检测发现,肺脏和扁桃体检出率最高;组织病理表现为间质性肺炎,淋巴细胞增生、坏死、崩解,肾毛细血管淤血,小肠固有层大量嗜酸性粒细胞浸润、肠绒毛结构不完整,心脏小血管淤血,脾白髓内淋巴细胞增生.本研究获得的Mhr-DL菌株,为开展Mhr感染引起的疫病防控技术的研究奠定了基础.

摘要： 为了探索猪鼻支原体(Mhr)对仔猪的致病性,本试验从临床呼吸道疾病的患猪肺脏分离到一株Mhr,命名为Mhr-DL株.对该菌株16S rRNA序列分析证实,它与GenBank下载的Mhr(AB680688)、猪肺炎支原体(Mhp:NR_074745)和猪滑液支原体(My:KC512403)的同源性分别为99.3％、92.8％和74.0％.电镜负染观察该菌为多形性,大小为500 nm～600 nm.取Mhr-DL株培养物(1.8×109 ccu/mL)经腹腔和气管途径接种SPF小型巴马猪,临床症状表现为精神沉郁、粪便干燥、食欲不振、结膜炎、体温高达41.6°C;剖检病理表现为肺脏、肝脏、脾脏等器官纤维渗出,淋巴结充血肿胀、胸膜炎、腹膜炎、肺脏呈虾内样病变.菌株核酸检测发现,肺脏和扁桃体检出率最高;组织病理表现为间质性肺炎,淋巴细胞增生、坏死、崩解,肾毛细血管淤血,小肠固有层大量嗜酸性粒细胞浸润、肠绒毛结构不完整,心脏小血管淤血,脾白髓内淋巴细胞增生.本研究获得的Mhr-DL菌株对巴马猪具有显著的致病性,为今后深入开展Mhr的致病机理和防控技术的研究奠定了基础.

摘要： 本研究从辽宁大连地区一猪场中患有呼吸道综合征的病猪肺脏中分离到一株猪支原体，通过对该菌株的16sRNA基因序列分析证实为猪鼻支原体(Mhr)，命名为Mhr-DL株。将该菌株第5代培养物人工接种SPF巴马小型实验猪，对其致病性进行深入研究，指出该菌株的保守基因16sRNA序列测定分析结果与已报道的菌株十分相近，为阐明Mhr的致病性及致病机理奠定基础。

摘要： 应用巢式聚合酶链式反应(Nested PCR)建立了一种检测猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)的方法,试验中以酚-氯仿法制备模板DNA,根据猪鼻支原体P37序列高度保守区设计2对引物,建立Nested PCR诊断方法。在特异性检测试验中,设计的引物不能扩增出猪絮状支原体、猪滑液支原体、猪肺炎支原体、鸡毒支原体、胸膜肺炎放线杆菌、猪瘟病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒及猪呼吸与繁殖综合症病毒等病原体;敏感性试验表明,第一次PCR和第二次PCR的敏感度分别为3.01 mg/L和3.01×10-4mg/L.对41份临床样品肺组织的检测中,普通PCR和巢式PCR的检出率分别为29.3％(12/41)和82.9％(34/41).结果表明巢式PCR方法明显优于常规PCR方法,具有较高的敏感性和实用性,为猪鼻支原体的检测提供了一种新型、可靠的诊断技术。

摘要： 本文重点研究年龄对自身和仔猪猪鼻支原体感染的影响，及发病时期和部位。对不同年龄段的猪实行纵向采样，鼻拭子和组织样本用PCR检测猪鼻支原体，尸检结果表明，年轻母猪猪鼻支原体感染率高于老母猪，心包检出率高于关节。

摘要： 用16S rRNA／p36—PCR和p37—PCR对从六个猪场送宰的60头隐性感染猪中收集的45份鼻拭子、81份气管拭子、59份支气管肺泡灌洗液、53份肺和40份血清(共278份样品)进行猪肺炎支原体和猪鼻支原体检测,结果发现猪肺炎支原体检出率是：鼻拭子0％、气管拭子14.8％、支气管肺泡灌洗液74.6％、肺41.5％和血清0％;猪鼻支原体检出率是：鼻拭拭子77.8％、气管拭子2.5％、支气管肺泡灌洗液6.7％、肺35.9％和血清20％。将8份PCR产物进行测序,其序列与已出版的相关序列有96％—100％的同源性。本研究探明了猪肺炎支原体和猪鼻支原体在隐性感染屠宰猪呼吸道的分布特点。首次对我国猪鼻支原体流行病学进行了调查。

摘要： 临床诊断表明猪呼吸系统疾病是由若干病毒和细菌感染引起的.临床症状如发热、生长缓慢和低饲料转化率会增加经济损失.本研究的目的是报道3个猪场的副猪嗜血感染(H.parasuis)血清学过程,此外还包括PRRSV、PCV2和猪鼻支原体(M.hyorhinis)这些因子对副猪感染过程的影响.本研究表明解释血清学情况的困难，只有当同时考虑临床症状时，才能对血清学的情况做出合理的解释。应当提供每个猪场相关病原的血清学情况。副猪、猪鼻支原体和PCV2可能相互作用，而且PRRSV和PCV2之间相互作用可能性更大。母猪的高抗体值是1周龄仔猪拥有良好被动免疫的基本要求，并且抵抗副猪、PRRSV和PCV2母源性免疫可以通过母猪接种得到改善。

摘要： 过去的五年间,猪肺炎支原体阴性的商品化保育仔猪因猪鼻支原体单独感染或与猪链球菌联合感染引起了较大的临床损失.本文设计一个治疗方案用于减轻与猪鼻支原体感染相关的呼吸道疾病问题.结果表明，注射Draxxin可以显著提高保育仔猪的健康状况。证明猪鼻支原体是主要病原，且对泰拉菌素敏感，而猪链球菌对其不敏感，因此仔猪生产性能的改善与泰拉菌素对猪鼻支原体发挥作用相关。同时也观察到链球菌发病率降低。

摘要： RAPD技术是1990年创立的一种新的DNA遗传标记技术，能够用来检测基因组DNA的多态性，以及进行种株的鉴定和分类。本实验通过RAPD技术研究了猪肺炎支原体和猪鼻支原体基因组DNA遗传结构的差异，建立了鉴定这2个菌株的RAPD方法。

摘要： 本发明属于动物传染病防治技术领域，公开了猪鼻支原体外膜蛋白Mhr_0493在制备猪鼻支原体或其抗体检测试剂盒中的应用。所述的外膜蛋白Mhr_0493的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。抗原蛋白Mhr_0493为申请人首次发现的猪鼻支原体功能未知的外膜蛋白，具有较好的免疫原性，Mhr_0493具有极高的特异性，为猪鼻支原体所特有，可作为猪鼻支原体或其抗体检测的分子靶标。同时，外膜基因Mhr_0493是成本较低的基因资源，基于其在大肠杆菌表达系统中的高效表达，易于纯化和制备。与全菌作为包被抗原的诊断方法相比，极大地提高了检测的特异性、显著降低了生产成本。

摘要： 本发明属于动物传染病防治技术领域，公开了猪鼻支原体外膜蛋白Mhr_0461在制备猪鼻支原体或其抗体检测试剂盒中的应用。所述的外膜蛋白Mhr_0461的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。抗原蛋白Mhr_0461为申请人首次发现的猪鼻支原体功能未知的外膜蛋白，具有较好的免疫原性，Mhr_0461具有极高的特异性，为猪鼻支原体所特有，可作为猪鼻支原体或其抗体检测的分子靶标。同时，外膜基因Mhr_0461是成本较低的基因资源，基于其在大肠杆菌表达系统中的高效表达，易于纯化和制备。与全菌作为包被抗原的诊断方法相比，极大地提高了检测的特异性、显著降低了生产成本。

摘要： 本发明的猪肺炎支原体、猪鼻支原体二联灭活疫苗，其含有优选含量的猪肺炎支原体和猪鼻支原体，及10％(V/V)卡波姆佐剂。本发明还提供了猪肺炎支原体、猪鼻支原体二联灭活疫苗的制备方法，包括生产菌种的制备，制苗用菌液的制备；灭活、浓缩及配苗等步骤。本发明的二联灭活疫苗，特异性强、免疫性好，不仅可以解决针对目前国内养殖场的特异性的猪肺炎支原体引起的感染，而且提供了目前国内外均处于空白的猪鼻支原体疫苗。本发明的二联疫苗简化了疫苗接种的步骤，避免了多次接种的麻烦和容易产生的副作用，节约了疫苗成本，特别适用于预防和治疗国内养殖场等混合感染的病症。与现有单苗相比，扩大了应用范围，增强了免疫效果。

摘要： 本发明公开了一种与猪鼻支原体特异性结合的核酸适体及其应用。该适体特异性强，灵敏度高，能够靶向结合猪鼻支原体、靶向结合猪鼻支原体感染的细胞；作为检测猪鼻支原体感染的试剂、作为检测猪鼻支原体感染细胞的试剂以及作为检测猪鼻支原体感染细胞体内活体成像的试剂。本发明为肿瘤的检测、诊断和治疗提供了新的方法和途径。

摘要： 本发明属于动物传染病防治技术领域，公开了猪鼻支原体外膜蛋白Mhr_0493在制备猪鼻支原体或其抗体检测试剂盒中的应用。所述的外膜蛋白Mhr_0493的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。抗原蛋白Mhr_0493为申请人首次发现的猪鼻支原体功能未知的外膜蛋白，具有较好的免疫原性，Mhr_0493具有极高的特异性，为猪鼻支原体所特有，可作为猪鼻支原体或其抗体检测的分子靶标。同时，外膜基因Mhr_0493是成本较低的基因资源，基于其在大肠杆菌表达系统中的高效表达，易于纯化和制备。与全菌作为包被抗原的诊断方法相比，极大地提高了检测的特异性、显著降低了生产成本。

摘要： 本发明属于动物传染病防治技术领域，公开了猪鼻支原体外膜蛋白Mhr_0461在制备猪鼻支原体或其抗体检测试剂盒中的应用。所述的外膜蛋白Mhr_0461的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。抗原蛋白Mhr_0461为申请人首次发现的猪鼻支原体功能未知的外膜蛋白，具有较好的免疫原性，Mhr_0461具有极高的特异性，为猪鼻支原体所特有，可作为猪鼻支原体或其抗体检测的分子靶标。同时，外膜基因Mhr_0461是成本较低的基因资源，基于其在大肠杆菌表达系统中的高效表达，易于纯化和制备。与全菌作为包被抗原的诊断方法相比，极大地提高了检测的特异性、显著降低了生产成本。

摘要： 本发明属于PCR技术领域，具体涉及一种快速鉴别猪肺炎支原体、鸡滑液支原体、猪鼻支原体的PCR检测试剂盒及其应用。所述PCR检测试剂盒包括：PCR premix缓冲液、超纯水、Marker DL2000、上游引物、下游引物、阴性对照和阳性对照。所述上游引物的序列为：5’‑ACACCATGGGAGCTGGTAAT‑3’；所述下游引物的序列为：5’‑GTTCATCGACTTTCAGACCCAAGGCAT‑3’。本发明所述PCR试剂盒具有检测限低、灵敏度好、特异性强等优点，可以快速检测并鉴别猪肺炎支原体、鸡滑液支原体和猪鼻支原体。

摘要： 本发明的猪肺炎支原体、猪鼻支原体二联灭活疫苗，其含有优选含量的猪肺炎支原体和猪鼻支原体，及10％(V/V)卡波姆佐剂。本发明还提供了猪肺炎支原体、猪鼻支原体二联灭活疫苗的制备方法，包括生产菌种的制备，制苗用菌液的制备；灭活、浓缩及配苗等步骤。本发明的二联灭活疫苗，特异性强、免疫性好，不仅可以解决针对目前国内养殖场的特异性的猪肺炎支原体引起的感染，而且提供了目前国内外均处于空白的猪鼻支原体疫苗。本发明的二联疫苗简化了疫苗接种的步骤，避免了多次接种的麻烦和容易产生的副作用，节约了疫苗成本，特别适用于预防和治疗国内养殖场等混合感染的病症。与现有单苗相比，扩大了应用范围，增强了免疫效果。

摘要： 本发明提供了一种猪鼻支原体培养基及其制备方法，培养基的组分包括MEM维生素溶液500～900ml，PPLO肉汤粉3～10g，水解乳蛋白0～5g，无水葡萄糖0～10g，N‑乙酰神经氨酸0.1～1g，酪蛋白氨基酸水解物2～5g。本发明还提供了一种猪鼻支原体培养基的制备方法，培养基中血清添加量由15％降至5％，并简化了培养基配制流程，可以保证在不影响活菌数得情况下，将猪鼻支原体总蛋白含量提升3～5倍，本发明获得的高纯度猪鼻支原体灭活抗原，可直接用于疫苗制备。

摘要： 本发明公开了一种与猪鼻支原体特异性结合的核酸适体及其应用。该适体特异性强，灵敏度高，能够靶向结合猪鼻支原体、靶向结合猪鼻支原体感染的细胞；作为检测猪鼻支原体感染的试剂、作为检测猪鼻支原体感染细胞的试剂以及作为检测猪鼻支原体感染细胞体内活体成像的试剂。本发明为肿瘤的检测、诊断和治疗提供了新的方法和途径。