猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)

摘要： 【目的】探索泻心汤、三黄虎杖汤、黄连解毒汤和清瘟败毒散4种清热解毒复方中草药体外抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的效果,为临床应用提供参考。【方法】采用传统水煎法对4种复方中草药进行提取,通过二倍稀释法测定中药对大肠杆菌标准菌ATCC 259222和金黄色葡萄球菌标准菌ATCC 25923的体外抑菌活性;在测定复方中草药对Marc-145细胞最大安全浓度的基础上,通过实时荧光定量PCR鉴定复方中草药对PRRSV的抑制作用。【结果】泻心汤对大肠杆菌的体外抑菌活性最好,其最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)均为7.81 mg/mL;三黄虎杖汤和黄连解毒汤次之,其MIC和MBC为31.25~125 mg/mL;清瘟败毒散抑制大肠杆菌效果较差:MIC和MBC均>250 mg/mL,而金黄色葡萄球菌对泻心汤、黄连解毒汤和三黄虎杖汤非常敏感,其MIC和MBC为0.24~0.98 mg/mL。在体外抗PRRSV作用的试验中,泻心汤、三黄虎杖汤、黄连解毒汤和清瘟败毒散对Marc-145细胞最大安全浓度分别为0.49、0.49、3.90和1.95 mg/mL。4种复方中草药对PRRSV的抑制与直接灭活作用较好,黄连解毒汤和清瘟败毒散均在0.98 mg/mL时对PRRSV有阻断作用,泻心汤和三黄虎杖汤在0.24和0.12 mg/mL时对PRRSV有阻断效果。【结论】4种复方中草药中泻心汤的体外抑菌及抗PRRSV的效果最好,其次是三黄虎杖汤、黄连解毒汤和清瘟败毒散,4种清热解毒复方均有一定的抑菌和抗病毒活性,可以为临床应用提供参考依据。

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种小的有包膜病毒,基因组约为15 kb,包含11个已知的开放阅读框(ORF)。病毒基因组的3′近端四分之一编码四种包膜糖蛋白(GP2a、GP3、GP4和GP5)、三种非糖基化跨膜蛋白(E、ORF5a和M)和核衣壳蛋白(N)。本文就PRRSV结构蛋白的功能进行综述,以期为接下来的PRRS预防疾病和开发新药提供帮助。

摘要： 【目的】研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单独和联合脂多糖(LPS)刺激对肺脏募集中性粒细胞(Neu)的影响,以及猪肺微血管内皮细胞(MVECs)在其中的作用。【方法】取约10日龄仔猪的肺脏组织,采用Ⅱ型胶原酶消化和差速贴壁法,分离培养原代MVECs,采用密度梯度离心法分离猪外周血Neu;以PRRSV HN株或PRRSV-LPS刺激Neu和MVECs后,将Neu加入培养MVECs的培养板,孵育1 h,4%多聚甲醛固定,瑞氏染色,观察并计数分析各组黏附的Neu数量;采用免疫细胞化学染色法检测MVECs对P-选择素和E-选择素的表达;采用虎红溶液染色法测定分析P-选择素和E-选择素抗体封闭MVECs时,PRRSV HN株或PRRSV-LPS刺激对Neu黏附于MVECs数量的影响。【结果】分离培养的MVECs呈CD34免疫荧光染色阳性,阳性率约为92%;PRRSV HN株刺激18 h,黏附于MVECs的Neu数量显著增加(P<0.05);PRRSV-LPS联合刺激时,黏附的Neu数量显著多于LPS单独刺激(P<0.05);PRRSV或PRRSV-LPS刺激Neu和MVECs二者时,黏附Neu数量的增加比单独刺激MVECs或Neu更明显;免疫细胞化学染色显示,MVECs强阳性表达P-选择素和E-选择素;用P-选择素和E-选择素抗体封闭MVECs时,PRRSV或PRRSV-LPS刺激诱导的Neu黏附增加呈不同程度下降,E-选择素封闭时具有显著差异(P<0.05)。【结论】PRRSV感染能促进Neu与MVECs黏附,亦能增加后继LPS刺激时黏附的Neu数量,MVECs表达的E-选择素是介导PRRSV致Neu黏附增加的重要分子之一。

摘要： 【目的】监测2021年广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)的分子流行动态,为PRRSV综合防控措施的制定提供参考。【方法】在广东省内不同地区PRRSV检测为阳性的37个规模猪场采集521份患病猪组织样本进行PRRSV检测。对样本进行ORF5基因测序,采用DNAStar分析ORF5核苷酸的同源性及其推导氨基酸的同源性,并用Mega7.0构建基于ORF5基因的系统遗传进化树。【结果】从37个猪场采集的样品PRRSV阳性率为24.4%,猪场阳性率为45.9%。通过测序分析获得17株来自不同猪场的PRRSV ORF5基因序列,遗传进化分析表明所有毒株均属于北美毒株(PRRSV 2),其中有5株属于Lineage 8(JXA1-like和CH-1a-like)谱系,9株属于Lineage 1(NADC30-like和NADC34-like)谱系,3株属于Lineage 3(QYYZ-like)谱系,没有监测到Lineage 5(VR2332-like)谱系的毒株。17株PRRSV毒株的ORF5基因之间核苷酸序列同源性为81.3%~99.5%,推导的氨基酸序列同源性为80.0%~98.3%。【结论】2021年广东省PRRSV流行株以Lineage 1(NADC30-like和NADC34-like)和Lineage 8(JXA1-like和CH-1a-like)谱系为主,占比分别为52.94%和29.41%,Lineage 3(QYYZ-like)谱系降为次要流行株,占比为17.65%。

摘要： 【目的】利用腺病毒AdMax系统表达载体表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein),并研究其免疫原性。【方法】参考GenBank中已公布的PRRSV N基因序列(登录号:KT945017.1),人工合成PRRSV N基因,并将其连接至腺病毒穿梭载体pDC316-mCMV-EGFP,转化大肠杆菌Top10感受态细胞,构建重组穿梭质粒pDC316-N。将重组穿梭质粒pDC316-N与AdMax腺病毒系统的骨架质粒PBHGLOX(delta)E1,3Cre共同转染293A细胞,获得重组腺病毒rAd-N,对获得的重组腺病毒液进行PCR和测序鉴定,用鉴定正确的rAd-N病毒液感染293A细胞,对该重组腺病毒进行扩大培养,检测病毒的TCID50,并用RT-PCR和Western blotting检测重组腺病毒的表达和反应原性。用重组腺病毒免疫小鼠,收集血清用PRRSV抗体检测试剂盒检测其抗体水平,初步评价其对小鼠的免疫效果。【结果】PCR扩增出1条大小为400 bp的PRRSV N基因条带,测序结果正确,表明重组腺病毒构建成功,浓缩后测得其半数组织培养感染剂量(TCID50)为10-10.239。RT-PCR和Western blotting检测结果证实目的基因在基因和蛋白水平上均可得到正确表达,蛋白分子质量约为14 ku。小鼠特异性抗体检测表明,重组腺病毒rAd-N免疫小鼠后可使小鼠快速产生PRRSV特异性抗体,与对照组差异显著(P<0.05),其中重组腺病毒与Gel佐剂配合使用时效果最好,最高可达7.84 U/L。【结论】本研究成功构建表达PRRSV N蛋白的重组腺病毒,其具有良好的免疫原性,为建立针对PRRSV抗体的间接ELISA检测方法和进一步研发PRRSV抗体检测试剂盒奠定基础。

摘要： 为建立检测猪血清中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的间接ELISA方法,分析了PRRSV结构蛋白GP5和M的二级结构抗原指数、抗原性、亲水性、表面可及性以及潜在中和表位等参数,选取GP5的47~61、143~156和186~199位氨基酸,M蛋白的63~70、133~146和156~169位氨基酸作为免疫原,构建带接头序列的GP5/M中和表位融合表达质粒;通过优化大肠杆菌表达和蛋白纯化条件,免疫印迹鉴定GP5/M特异抗原,获得了可溶性的GP5/M中和表位融合蛋白。基于纯化的GP5/M中和表位融合抗原,建立了检测猪血清中PRRSV中和抗体的间接ELISA方法。采用建立的间接ELISA方法对6种其他猪源病原阳性血清进行检测,结果均无交叉反应;敏感性试验显示,将血清中和试验鉴定的PRRSV阳性对照血清稀释到1:12800时仍呈阳性;重复性试验显示,批内重复变异系数为2%~10%,批间重复变异系数小于15%;符合性试验显示,同时用建立的间接ELISA方法和血清中和试验对420份临床血清样品进行检测,结果符合率为95.24%。结果表明,该方法操作简单、耗时短,敏感性、特异性、重复性及符合性均良好,具有较好的应用推广价值。

摘要： 为鉴定与猪感染猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)抗病指示性状相关的分子标记,以大白猪×通城猪高代横交群体为研究对象,选用159头健康仔猪进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)人工感染试验,利用“中芯一号”基因芯片进行全基因组SNP分型,与PRRS抗病指示性状血液淋巴细胞百分比进行关联分析,筛选抗病指示性状相关分子标记。结果显示,猪DDX17和BTG1基因上的3个SNPs位点(rs81257542,rs329240026和rs334594334)与PRRSV感染不同时间点的血液淋巴细胞百分比显著关联(P<0.05)。rs81257542位点的等位基因C、rs334594334位点的等位基因A及DDX17-BTG1的合并基因型CC-AA为优势等位基因和优势基因型,优势等位基因越多的个体,PRRSV感染早期淋巴细胞百分比越高,具有更强的抗病力;本研究通过设计ARMS-PCR引物,建立rs81257542和rs334594334位点的Tetra-primer ARMS-PCR检测方法,仅需一步PCR和电泳即可鉴定个体的基因型。以上结果表明,rs81257542和rs334594334位点可作为PRRSV抗病性状血液淋巴细胞百分比的分子标记,其快速检测方法可实现优势基因型快速筛查。

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病原,可引起怀孕母猪流产和仔猪呼吸疾病。miRNA与转录后翻译水平的基因调控有关,在病毒感染中起着多样且复杂的作用。综述了miR-4262、mir-3215、mir-let-7g、miR-7f-5p、miR-130b、miR-373、miR-10a-5p、miR-24-3p对PRRSV复制的调控作用,为PRRSV的防控研究提供科学参考。

摘要： 【目的】研究纳米银(silver nanoparticles,AgNPs)体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的作用,并初步分析其抗病毒作用机制,为PRRSV的防控提供新思路。【方法】使用0.1875、0.375、0.75、1.5、3、6、12μg/mL AgNPs处理Marc145细胞,采用CCK-8试剂盒评估AgNPs对Marc145细胞毒性,确定其安全浓度。通过显微观察、间接免疫荧光试验、病毒滴度测定、实时荧光定量RT-PCR方法评估AgNPs体外抗PRRSV感染Marc145细胞的效果。通过间接免疫荧光试验和实时荧光定量RT-PCR方法评估AgNPs对PRRSV的直接灭活效果。通过实时荧光定量RT-PCR方法分析AgNPs对不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)PRRSV(0.0001~0.1)黏附和入侵Marc145细胞的影响,以及PRRSV感染Marc145细胞3、6、12、18和24 h后加入AgNPs对Marc145细胞增殖的影响。【结果】AgNPs对Marc145细胞的最大安全浓度为1.5μg/mL,0.375、0.75、1.5μg/mL AgNPs均具有良好的体外抗PRRSV活性,0.375、0.75、1.5μg/mL AgNPs均对PRRSV起一定灭活作用。AgNPs对不同MOI的毒株黏附和入侵Marc145细胞均有一定抑制作用,且不同时间(3、6、12、18、24 h)加入AgNPs对PRRSV增殖均有一定抑制作用。【结论】AgNPs具有良好的体外抗PRRSV活性,体外抗PRRSV的作用机制包括直接灭活以及抑制病毒的黏附、入侵和增殖过程。

摘要： 为研究宿主细胞核糖体蛋白L12(RPL12)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respir-atory syndrome virus,PRRSV)复制中的作用,本研究通过荧光定量PCR和Western-blotting等方法,检测了PRRSV感染对Marc-145细胞中RPL12表达的影响,以及过表达或敲减RPL12对PRRSV复制的影响.结果显示,PRRSV感染可上调Marc-145细胞中RPL12基因的表达.过表达RPL12可促进PRRSV的复制,而敲减RPL12可抑制PRRSV的复制.通过免疫共沉淀和共聚焦显微镜检测,进一步研究发现RPL12蛋白与PRRSV GP2b蛋白存在相互作用,并共定位于细胞质中.本研究首次发现了宿主蛋白RPL12能够促进PRRSV复制,并与PRRSV GP2b蛋白存在相互作用,为进一步研究PRRSV的感染与复制机制以及与宿主的相互作用提供了新的切入点,为抗病毒药物的研发提供了有益的探索.

摘要： 本发明涉及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保护性抗原决定子多肽(PAD多肽)以及编码PAD的核酸。PAD通过PRRSV的GP5蛋白和M蛋白组成的异源二聚体产生，其中GP5的细胞外结构域具有不同的N糖基化状态。PAD及其编码核酸可用于开发抗PAD抗体，有效提供抗PRRSV感染保护作用的疫苗，以及检测PAD特异性疫苗产生的PAD抗体的存在的诊断方法中。本发明还涉及抗PAD抗体的产生方法，用于接种猪以提供抗PRRSV的保护作用的方法，制备所述疫苗的方法，以及治疗猪中的PRRSV感染的方法和检测抗PRRSV的PAD的抗体的方法。

摘要： 本发明涉及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保护性抗原决定子多肽(PAD多肽)以及编码PAD的核酸。PAD通过PRRSV的GP5蛋白和M蛋白组成的异源二聚体产生，其中GP5的细胞外结构域具有不同的N糖基化状态。PAD及其编码核酸可用于开发抗PAD抗体，有效提供抗PRRSV感染保护作用的疫苗，以及检测PAD特异性疫苗产生的PAD抗体的存在的诊断方法中。本发明还涉及抗PAD抗体的产生方法，用于接种猪以提供抗PRRSV的保护作用的方法，制备所述疫苗的方法，以及治疗猪中的PRRSV感染的方法和检测抗PRRSV的PAD的抗体的方法。

摘要： 本发明涉及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保护性抗原决定子多肽(PAD多肽)以及编码PAD的核酸。PAD通过PRRSV的GP5蛋白和M蛋白组成的异源二聚体产生，其中GP5的细胞外结构域具有不同的N糖基化状态。PAD及其编码核酸可用于开发抗PAD抗体，有效提供抗PRRSV感染保护作用的疫苗，以及检测PAD特异性疫苗产生的PAD抗体的存在的诊断方法中。本发明还涉及抗PAD抗体的产生方法，用于接种猪以提供抗PRRSV的保护作用的方法，制备所述疫苗的方法，以及治疗猪中的PRRSV感染的方法和检测抗PRRSV的PAD的抗体的方法。

摘要： 本发明涉及一种快速检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒试剂盒，特别是涉及一种利用多重实时荧光聚合酶链式反应技术同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)。本试剂盒主要包括RT‑PCR反应液、引物探针混合液、RT‑PCR反应酶系、DEPC H

摘要： 本发明属于兽用生物制品技术领域，涉及一种猪繁殖与呼吸障碍综合征嵌合重组的PRRSV DIVA疫苗株cDY56的构建方法和应用。利用基因Ⅱ型经典毒株DY株作为亲本株，用高致病性PRRSV XZ株的ORF5和ORF6基因替换亲本株相应基因，构建嵌合重组PRRSV疫苗株cDY56。本发明的嵌合重组PRRSV毒株cDY56相对于目前商品化的疫苗，在诱导体液免疫和细胞免疫以及降低免疫抑制等方面具有更好的效果，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明提供了猪繁殖与呼吸综合征病毒重组疫苗株PRRSV‑SP及其制备方法与应用。本发明将疫苗株SP的T3448A位点突变，得到重组疫苗株PRRSV‑SP。本发明将一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒湖北分离株HUB2的主要结构蛋白GP5和M的基因ORF5和ORF6放进重组疫苗株PRRSV‑SP相应编码区域进行表达，获得了嵌合毒株vSP‑Hub2。本发明提供的重组疫苗株PRRSV‑SP和嵌合毒株vSP‑Hub2没有明显的致病性，可以作为进一步研究弱毒疫苗及PRRSV毒株变异机制的基础材料，通过感染性克隆系统构建新的弱毒疫苗株的成功，也可用于制备抗PRRSV同源以及异源毒株的新型高效广谱疫苗。

摘要： 本发明涉及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保护性抗原决定子多肽(PAD多肽)以及编码PAD的核酸。PAD通过PRRSV的GP5蛋白和M蛋白组成的异源二聚体产生，其中GP5的细胞外结构域具有不同的N糖基化状态。PAD及其编码核酸可用于开发抗PAD抗体，有效提供抗PRRSV感染保护作用的疫苗，以及检测PAD特异性疫苗产生的PAD抗体的存在的诊断方法中。本发明还涉及抗PAD抗体的产生方法，用于接种猪以提供抗PRRSV的保护作用的方法，制备所述疫苗的方法，以及治疗猪中的PRRSV感染的方法和检测抗PRRSV的PAD的抗体的方法。

摘要： 本发明涉及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保护性抗原决定子多肽(PAD多肽)以及编码PAD的核酸。PAD通过PRRSV的GP5蛋白和M蛋白组成的异源二聚体产生，其中GP5的细胞外结构域具有不同的N糖基化状态。PAD及其编码核酸可用于开发抗PAD抗体，有效提供抗PRRSV感染保护作用的疫苗，以及检测PAD特异性疫苗产生的PAD抗体的存在的诊断方法中。本发明还涉及抗PAD抗体的产生方法，用于接种猪以提供抗PRRSV的保护作用的方法，制备所述疫苗的方法，以及治疗猪中的PRRSV感染的方法和检测抗PRRSV的PAD的抗体的方法。

摘要： 本发明涉及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保护性抗原决定子多肽(PAD多肽)以及编码PAD的核酸。PAD通过PRRSV的GP5蛋白和M蛋白组成的异源二聚体产生，其中GP5的细胞外结构域具有不同的N糖基化状态。PAD及其编码核酸可用于开发抗PAD抗体，有效提供抗PRRSV感染保护作用的疫苗，以及检测PAD特异性疫苗产生的PAD抗体的存在的诊断方法中。本发明还涉及抗PAD抗体的产生方法，用于接种猪以提供抗PRRSV的保护作用的方法，制备所述疫苗的方法，以及治疗猪中的PRRSV感染的方法和检测抗PRRSV的PAD的抗体的方法。

摘要： 本发明涉及一种快速检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒试剂盒，特别是涉及一种利用多重实时荧光聚合酶链式反应技术同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)。本试剂盒主要包括RT?PCR反应液、引物探针混合液、RT?PCR反应酶系、DEPC H