牙周膜成纤维细胞

摘要： 目的探讨力生长因子(mechano⁃growth factor,MGF)对牙周膜干细胞增殖、分化的影响及其作用的分子机制。方法采用免疫磁珠法分选人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs),流式细胞仪检测表面标志物,并观察分选细胞的克隆形成能力及多向分化能力;CCK8法检测不同浓度MGF功能肽段(MGF⁃Ct24E肽)作用下PDLSCs的增殖活性;Western blot检测MGF⁃Ct24E肽作用下PDLSCs中的增殖细胞核抗原(pro⁃liferating cell nuclear antigen,PCNA)、碱性螺旋环螺旋转录因子Scleraxis、Ⅰ型胶原ɑ1(collagen type I alpha 1,COL1A1)、成骨细胞特异性转录因子Osterix、Yes相关蛋白(Yes⁃associated protein,YAP)、磷酸化YAP(phosphory⁃lation yes⁃associated protein,P⁃YAP)蛋白表达量;免疫荧光观察YAP的表达情况;siRNA干扰YAP表达后,观察PDLSCs中MGF⁃Ct24E作用下PCNA、Scleraxis和COL1A1的表达。结果免疫磁珠分选的PDLSCs高表达干细胞表面标志物CD29、CD90、CD105,低表达造血细胞表面标志物CD34、CD45;细胞具有较强的克隆形成能力,成骨诱导茜素红染色后可见红色钙结节,成脂诱导油红O染色后可见红色脂滴;50 ng/mL和100 ng/mL MGF⁃Ct24E肽作用24 h后,PDLSCs的增殖活性增强(P<0.05);细胞中PCNA、Scleraxis和COL1A1蛋白表达上调,而Osterix蛋白表达量下调(P<0.05);50 ng/mL MGF⁃Ct24E肽作用24 h后,YAP蛋白357位点磷酸化水平增强(P<0.05),免疫荧光染色观察发现,YAP蛋白在胞核聚集;MGF⁃Ct24E肽作用下,siRNA抑制YAP表达后,细胞中PCNA、Scler⁃axis蛋白表达量下调(P<0.05)。结论MGF通过激活YAP促进PDLSCs增殖及成纤维分化。

摘要： 目的 探讨粪肠球菌培养上清液诱导人牙周膜细胞(human periodontal ligament cell,hPDLC)的炎症反应及其在压力状态下的表达变化.方法 噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同体积分数[0％(对照组)、1％、2％、5％、10％和20％]的粪肠球菌上清液对hPDLC增殖活性的影响,采用流式细胞术检测粪肠球菌上清液刺激24 h后hPDLC表面Toll样受体2(Toll-like receptor2,TLR-2)表达的改变;依据MTT及流式细胞术结果,将hPDLC分为不含粪肠球菌上清液的非诱导组与含5％粪肠球菌上清液的诱导组,每组均分别加载0、49及196 Pa的静压力,非诱导组和诱导组均以未加力(0 Pa)状态为对照.24 h后观察hPDLC的形态变化,通过反转录PCR (reverse transcription-PCR,RT-PCR)和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测hPDLC肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白介素-1β (interleukin-1β,IL-1β)的mRNA和蛋白表达水平.结果 MTT法结果显示,培养48 h时,与对照组相比体积分数≥5％的粪肠球菌上清液能显著降低hPDLC的增殖活性(P＜0.05).流式细胞术结果显示,粪肠球菌上清液刺激hPDLC 24 h后其表面TLR-2阳性细胞率随上清液体积分数的增加而增加,0％、1％、2％、5％、10％和20％体积分数的上清液TLR-2阳性细胞率分别为(2.12±0.07)％、(2.41±0.32)％、(2.65±0.27)％、(4.76±0.46)％、(9.91±0.92)％、(12.01±1.35)％,体积分数≥5％时与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR结果显示,非诱导组施加49 Pa压力时,hPDLC IL-1β和TNF-α mRNA表达与对照组相比差异均无统计学意义(P＞0.05),施加196 Pa压力时,hPDLC IL-1β和TNF-α mRNA表达与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);而诱导组施加49和196 Pa压力时,hPDLC IL-1β和TNF-α mRNA表达均显著升高,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).ELISA结果与PCR结果趋势一致.结论 高浓度的粪肠球菌上清液能抑制hPDLC的增殖活性;粪肠球菌上清液可以促进hPDLC表面TLR-2的表达;过度的机械压力可引起hPDLC细胞的炎症反应,导致hPDLC对压力不耐受,引起炎症反应加重.

摘要： 目的 探讨二甲双胍对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导牙周膜成纤维细胞(PDLCs)凋亡及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子κB(NF-κB)通路的影响.方法 体外培养人PDLCs细胞,分别加入0、100、200、300μg/mL的AGEs培养24、48、72 h,采用CCK-8法检测不同浓度、不同时间点的细胞增殖情况,筛选AGEs的最佳作用浓度和作用时间,分别为300μg/mL和48 h.收集细胞,设对照组、AGEs组及2、4、8 mmol/L二甲双胍组,对照组仅加入培养基,AGEs组加入终浓度为300μg/mL的AGEs,2、4、8 mmol/L二甲双胍组加入终浓度为300μg/mL的AGEs及终浓度分别为2、4、8 mmol/L的二甲双胍,培养48 h.采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,ELISA法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以及细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blotting法检测细胞p38 MAPK/NF-κB通路相关蛋白p-p38 MAPK、NF-κB的相对表达量.结果 与对照组相比,AGEs组细胞OD值降低,细胞凋亡率升高(P均<0.05);与AGEs组相比,2、4、8 mmol/L二甲双胍组细胞OD值升高,细胞凋亡率降低(P均<0.05),且二甲双胍高浓度组细胞OD值高于、细胞凋亡率低于低浓度组(P均<0.05).与对照组相比,AGEs组细胞中SOD水平降低,MDA水平升高(P均<0.05);与AGEs组相比,2、4、8 mmol/L二甲双胍组细胞中SOD水平升高,MDA水平降低(P均<0.05),且二甲双胍高浓度组SOD高于、MDA低于低浓度组(P均<0.05).与对照组相比,AGEs组细胞上清液中IL-6、TNF-α水平升高(P均<0.05);与AGEs组相比,2、4、8 mmol/L二甲双胍组细胞上清液中IL-6、TNF-α水平降低(P均<0.05),且二甲双胍高浓度组IL-6、TNF-α水平低于低浓度组(P均<0.05).与对照组相比,AGEs组细胞p-p38 MAPK、NF-κB p65蛋白表达升高(P均<0.05);与AGEs组相比,2、4、8 mmol/L二甲双胍组细胞p-p38 MAPK、NF-κB p65蛋白表达降低(P均<0.05),且二甲双胍高浓度组p-p38 MAPK、NF-κB p65蛋白表达低于低浓度组(P均<0.05).结论 二甲双胍对AGEs诱导的氧化应激反应、p38 MAPK/NF-κB通路激活、炎症反应均具有抑制作用,可减少细胞凋亡并促进细胞增殖.

摘要： 牙周组织再生修复是牙周病治疗的热点和难点,而牙周膜细胞的增殖、分化、迁移、黏附及与其胞外基质蛋白之间互相调节的动态关系,是牙周组织形态改建、功能维持和组织修复的基础.本文对雌激素调控下牙周膜细胞修复重建牙周组织的机制作一综述,为外源性雌激素替代治疗牙周炎和促进牙周组织修复重建的后续研究提供依据.在一定浓度的雌激素调控下,牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)、骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向牙周膜细胞的增殖、分化能力增强,同时PDLSCs、BMSCs、牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPLFs)、成骨细胞、成牙骨质细胞合成并往胞外基质中分泌胶原蛋白I型(collagen I,COLI)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨涎蛋白(bone sialopro-tein,BSP)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)增多,与胞外基质中的纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、牙骨质附着蛋白(cementum attachment protein,CAP)等互相链接、结合形成多种链合物并相互调节,促进牙周膜细胞生长、迁移、黏附和纤维化,使牙周膜胶原纤维骨架修复并与新生牙骨质和固有牙槽骨重新黏附.

摘要： 目的 观察在不同浓度脂多糖(LPS)作用下,大蒜素对人牙周膜成纤维细胞(hPDLCs)炎症因子及MMP-1表达的影响.方法 建立hPDLCs有限细胞系,将梯度浓度LPS作用于第5代hPDLCs?48?h,观察组培养液加入6?μg/ml大蒜素作用48?h,对照组加入等量培养液.采用ELISA法检测各组培养液中IL-1β、TNF-α、MMP-1的分泌量.结果 对照组随着LPS浓度的增高,TNF-α、IL-1β及MMP-1的表达呈增高趋势(P0.05);在1?μg/ml、10?μg/ml?LPS作用下,6?μg/ml大蒜素组与未添加大蒜素组比较,TNF-α、IL-1β及MMP-1均有下降(P<0.05);10?μg/ml?LPS作用下6?μg/ml大蒜素对IL-1β、TNF-α、MMP-1分泌抑制率高于1?μg/ml?LPS作用下6?μg/ml大蒜素对三者的分泌抑制率.结论 大蒜素可显著降低LPS诱导hPDLCs分泌炎症因子及MMP-1的作用,对中重度牙周炎可能具有更好的抗炎及抗基质降解作用.

摘要： 牙周组织再生修复是牙周病治疗的热点和难点,而牙周膜细胞的增殖、分化、迁移、黏附及与其胞外基质蛋白之间互相调节的动态关系,是牙周组织形态改建、功能维持和组织修复的基础。本文对雌激素调控下牙周膜细胞修复重建牙周组织的机制作一综述,为外源性雌激素替代治疗牙周炎和促进牙周组织修复重建的后续研究提供依据。在一定浓度的雌激素调控下,牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)、骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向牙周膜细胞的增殖、分化能力增强,同时PDLSCs、BMSCs、牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPLFs)、成骨细胞、成牙骨质细胞合成并往胞外基质中分泌胶原蛋白I型(collagen I,COLI)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)增多,与胞外基质中的纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、牙骨质附着蛋白(cementum attachment protein,CAP)等互相链接、结合形成多种链合物并相互调节,促进牙周膜细胞生长、迁移、黏附和纤维化,使牙周膜胶原纤维骨架修复并与新生牙骨质和固有牙槽骨重新黏附。

摘要： 目的 探讨辛伐他汀对伴2型糖尿病(T2DM)牙周病患者牙周膜成纤维细胞(PDLF)增殖分化的影响.方法 采用体外酶消化联合组织块法分离培养伴T2DM牙周病患者PDLF.在培养液中加入不同浓度的辛伐他汀,分为对照组(0 mol/L)和4个实验组(药物浓度分别为10-8 mol/L、10-7 mol/L、10-6 mol/L、10-5 mol/L),检测各组PDLF增殖能力和ALP活性.结果 10-7 mol/L的辛伐他汀能促进PDLF增殖和ALP活性,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 10-7 mol/L辛伐他汀能够促进伴T2DM牙周病患者PDLF的增殖分化,激发PDLF被高糖抑制的生物学活性,促进牙周组织的愈合修复.

摘要： 目的:探讨二甲双胍对高糖诱导的牙周膜成纤维细胞(PDLF)凋亡及对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路的影响。方法:体外培养人PDLF细胞,设置NG组(5 mmol/L D-葡萄糖)、HG组(30 mmol/L D-葡萄糖)、NG+Met组(5 mmol/L D-葡萄糖+2 mmol/L二甲双胍)、HG+Met组(30 mmol/L D-葡萄糖+2 mmol/L二甲双胍)和HG+Met+Mil组(30 mmol/L D-葡萄糖+2 mmol/L二甲双胍+50 nmol/L Miltefosine),培养48 h。采用CCK-8法检测PDLF细胞增殖情况;采用流式细胞仪检测PDLF细胞凋亡情况和细胞周期分布情况;采用Western blot法检测PDLF细胞中p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达情况。结果:与NG组相比,HG组、HG+Met组、HG+Met+Mil组PDLF细胞A值、S、G2/M期细胞比例、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05),凋亡率、G0/G1期PDLF细胞比例显著升高(P<0.05);与HG组相比,NG+Met组、HG+Met组、HG+Met+Mil组PDLF细胞A值、S、G2/M期细胞比例、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平显著升高(P<0.05),凋亡率、G0/G1期PDLF细胞比例显著降低(P<0.05);与NG+Met组相比,HG+Met组、HG+Met+Mil组PDLF细胞A值、S、G2/M期细胞比例、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05),凋亡率、G0/G1期PDLF细胞比例显著升高(P<0.05);与HG+Met组相比,HG+Met+Mil组PDLF细胞A值、S、G2/M期细胞比例、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05),凋亡率、G0/G1期PDLF细胞比例显著升高(P<0.05)。结论:二甲双胍可抵抗高糖诱导的PDLF凋亡,可能是通过激活PI3K/AKT通路实现的。

摘要： 目的:检测不同浓度TNF-α对牙周膜成纤维细胞ephrinB2/EphB4表达量的影响。方法:收集因正畸需要拔除的健康牙齿,培养原代牙周膜成纤维细胞;用不同浓度TNF-α分别刺激24 h,48 h后检测牙周膜细胞ephrinB2/EphB4 mRNA及蛋白表达量。结果:24 h组ephrinB2与EphB4 mRNA浓度均降低,差异有统计学意义(P<0.05);48 h低浓度组对ephrinB2 mRNA表达量无影响,0.1μg/L使EphB4 mRNA表达量增加,高浓度组使ephrinB2/EphB4 mRNA表达量下降;24 h组,TNF-α浓度为0.1~1μg/L时,ephrinB2/EphB4蛋白表达量无明显变化,TNF-α浓度为10~1000μg/L时ephrinB2/EphB4蛋白表达量下降;48 h组,0.1μg/L TNF-α作用后使EphB4蛋白表达量上升,ephrinB2蛋白表达量无明显变化,1μg/L作用后,ephrinB2/EphB4蛋白表达量均无明显变化,10~1000μg/L刺激后ephrinB2/EphB4蛋白表达量均下降。结论:24 h时TNF-α使ephrinB2/EphB4 mRNA与蛋白表达量均降低,但在48 h时,低浓度作用下EphB4表达量上升,是否可以为低浓度炎症状态下骨改建的研究提供参考。

摘要： 恒牙牙根吸收是一种病理性导致牙本质、牙骨质缺损的临床现象，以正畸引起的炎症性外吸收和再植牙引起的替代性外吸收临床最为常见。根吸收通常不可逆，可引起牙齿松动甚至脱落，危害口腔健康和美观。对于牙根吸收，目前尚无有效的预防手段和治疗方法。分泌型蛋白OPG通过调节OPG/RANKL/RANK信号通路，在破骨细胞分化成熟中发挥重要作用，并作为牙根吸收重要保护分子。在牙根吸收微环境中,OPG在牙周膜成纤维细胞中高表达，但是其分泌方式及作用机制尚不清楚。外泌体作为细胞交流及有效生物分子的载体，可包裹分泌性蛋白，高效递送至靶细胞。本研究集中于牙周膜成纤维细胞以外泌体形式分泌OPG及其对破骨细胞分化、牙根吸收的作用机制研究。

摘要： 目的：探讨胰岛素对于高糖条件下人牙周膜成纤维细胞中肿瘤坏死因子-α、白介素1β、骨钙素、白介素-6表达水平的影响. 方法：采用健康人群因正畸拔除的前磨牙体外培养人牙周膜成纤维细胞,然后采用5.5、25、45mmol/L高糖环境和终浓度为10-6mol/L的胰岛素(INS)不同干预模式,分别作用于体外培养人牙周膜成纤维细胞.用ELISA检测不同干预条件下人牙周膜成纤维细肿瘤坏死因子-α、白介素1β、白介素-6、骨钙素的表达水平. 结论：高糖环境可显著上调肿瘤坏死因子-α、白介素1β、白介素-6、骨钙素的表达.胰岛素可显著抑制的人牙周膜成纤维细胞中肿瘤坏死因子-α、白介素1β、白介素-6、骨钙素的表达.

摘要： 目的：研究动态张应力刺激下体外培养的人牙周膜成纤维细胞(PDLF)转录因子c-fos和c-jun mRNA的变化以及黏着斑激酶(FAK)对c-fos和c-jun mRNA表达的影响,为进一步探索人PDLF中力学信号转导途径提供依据.方法：刮取牙根中1/3牙周膜组织,采用I型胶原酶消化结合组织块贴附法进行PDLF原代培养并传代.用四点弯曲加载装置对体外培养的第六代PDLF分别施加动态张应力,以加入FAK抗体作为抗体组,不加入FAK抗体作为对照组,采用实时荧光定量PCR法研究动态张应力下FAK对人PDLF转录因子c-los和c-jun mRNA表达的影响.对实时荧光定量PCR所得数据取常用对数后行单因素方差分析.结果：抗体组加力0、0.5、l、2、4h后c-fos mRNA表达量分别为(1.64±0.20)、(1.67±0.28)、(1.57 ±0.18)、(1.44±0.26)、(1.33±0.29) lg拷贝数/μg;c-jun mRNA表达量分别为(1.56 ±0.67)、(1.60±0.21)、(1.46±0.31)、(1.4l±0.13)、(1.38±0.14) lg拷贝数/μg.c-los和c-jun mRNA表达量在加力后上调,0.5h达到峰值,0.5h后出现持续性下调.抗体组细胞c-fos和c-jun mRNA表达变化规律与对照组相似,但同一时段抗体组较相应对照组高,lh后差异有统计学意义(P＜0.05).结论：转录因子c-fos和c-jun可能在牙周膜对机械力刺激的反应中发挥作用,FAK可能是人PDLF中力学信号转导途径的重要分子.

摘要： 一种人成纤维细胞无血清培养基，包括基础培养基和无血清培养上清浓缩液，还包括如下组分及其浓度：维生素组合物为5‑100ng/mL，葡多酚为50‑200μg/mL，重组人表皮细胞生长因子为1～50ng/mL，重组人碱性成纤维细胞生长因子为50～200ng/mL，重组人转化生长因子β1为1～50ng/mL，重组血小板衍生生长因子‑C为1～10ng/mL，重组人胰岛素样生长因子‑1浓度为1～10ng/mL，β‑巯基乙醇为50～200μM，人血白蛋白浓度为1～100μg/mL，谷胱甘肽浓度为1‑100μg/mL，黄芪多糖为1‑50μg/mL，透明质酸0.1‑5μg/mL，碳酸氢钠为1.0‑3.7g/L。利用无血清培养基替代传统含动物血清的培养基来培养人成纤维细胞，避免了动物源性成分污染以及异种蛋白引起人体免疫反应等不安全因素。

摘要： 本发明公开了一种使用电磁射线治疗各种皮肤病的方法。尤其优选窄带、多色电磁射线发射器，该发射器的主发射波长对应于被对准治疗的哺乳动物组织的峰值吸收波长。还公开了一种局部成分，用于对被对准的组织进行预处理以改变该组织的峰值吸收波长。

摘要： 本发明公开了一种使用电磁射线治疗各种皮肤病的方法。尤其优选窄带、多色电磁射线发射器，该发射器的主发射波长对应于被对准治疗的哺乳动物组织的峰值吸收波长。还公开了一种局部成分，用于对被对准的组织进行预处理以改变该组织的峰值吸收波长。

摘要： 提供以新的作用机制为指标的成纤维细胞I型胶原产生促进剂的筛选方法。通过以神经激活作为指标，能够进行成纤维细胞I型胶原产生促进剂的筛选。

摘要： 本发明涉及对成纤维细胞激活蛋白(FAP)具有特异性的能够与犬、小鼠、和人FAP交叉反应的抗体、结合多肽、和scFv。

摘要： 本发明提供了一种成纤维细胞转化培养基及其应用、成纤维细胞的制备方法，涉及生物技术的技术领域。该成纤维细胞转化培养基中含有血小板活性因子(PRP)，用于诱导脐带间充质干细胞向成纤维细胞转化，可以使脐带间充质干细胞更好的向成纤维细胞转化，缓解了现有技术中存在的外源成纤维细胞获取困难的技术问题。

摘要： 提供制备CD106阳性和/或CD90阳性成纤维细胞的方法。此外，提供G‑CSF阳性成纤维细胞群。一种制备CD106阳性和/或CD90阳性成纤维细胞的方法，所述方法包括在选自于由TNF‑α和IL‑4组成的组中的一种以上的存在下培养成纤维细胞以使CD106阳性和/或CD90阳性成纤维细胞增加的步骤。

摘要： 本发明涉及一种成纤维细胞的培养基及利用其培养成纤维细胞的方法，包括基础培养基、NH

摘要： 能促进人牙周膜成纤维细胞成骨分化的银纳米粒子的方法，其特征在于：具体为：常规分离培养原代人牙周膜成纤维细胞，通过免疫细胞化学染色细胞角蛋白和波形丝蛋白进行细胞鉴定；在口腔正畸治疗过程中，施加适当的机械力作用于牙齿，首先引起牙周膜组织的改建，进而发生牙槽骨改建，最终使牙齿发生位移而达到矫治的目的。AgNPs可以促进哺乳动物骨髓间充质干细胞的成骨分化。另外，AgNPs促进成纤维细胞分化为肌纤维母细胞，从而促进伤口收缩愈合。本发明的优点：采用体外细胞实验来研究AgNPs对hPDLFs成骨分化的影响以及具体的分子机制，提高牙槽骨改建的效率，进而加速正畸牙齿移动，缩短矫治疗程。

摘要： 能促进人牙周膜成纤维细胞成骨分化的银纳米粒子的方法，其特征在于：具体为：常规分离培养原代人牙周膜成纤维细胞，通过免疫细胞化学染色细胞角蛋白和波形丝蛋白进行细胞鉴定；在口腔正畸治疗过程中，施加适当的机械力作用于牙齿，首先引起牙周膜组织的改建，进而发生牙槽骨改建，最终使牙齿发生位移而达到矫治的目的。AgNPs可以促进哺乳动物骨髓间充质干细胞的成骨分化。另外，AgNPs促进成纤维细胞分化为肌纤维母细胞，从而促进伤口收缩愈合。本发明的优点：采用体外细胞实验来研究AgNPs对hPDLFs成骨分化的影响以及具体的分子机制，提高牙槽骨改建的效率，进而加速正畸牙齿移动，缩短矫治疗程。