溶血素

摘要： 克隆分析科尔沁牛乳腺炎无乳链球菌溶血素cylE基因片段,为深入研究奶牛乳腺炎无乳链球菌免疫机制及制备新型免疫抗原提供理论依据。根据GenBank已公布牛源无乳链球菌溶血素的基因序列,使用Primer5.0软件设计1对特异性引物,以内蒙古通辽地区乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模板扩增cylE基因片段,并分析其编码序列及免疫活性。克隆得到的cylE基因序列与Genbnak已公布的牛源无乳链球菌cylE基因序列两者核苷酸序列相似性为99.9%,仅有1个核苷酸发生突变(1712C→A)。cylE蛋白的亲水区较广,抗原指数较高的区域丰富,具有良好的抗原性,证明cylE基因具有高度保守性,cylE蛋白具有良好的抗原性,是防治无乳链球菌的理想抗原候选分子之一。

摘要： 目的改进B群链球菌(GBS)液体显色培养基组成,提高GBS液体显色培养基筛选灵敏度。方法选取15株GBS(3株标准菌株,12株临床菌株),9株非GBS的标准菌株,通过单因子优选实验和正交试验分析,选出最优配方。选取GBS 62株,非GBS 20株,分别配制不同浓度检测改良液体培养基的性能。结果在Todd-Hewitt基础肉汤中添加质量浓度为8 g·L^(-1)的庆大霉素、15 g·L^(-1)的萘啶酸、6.5 g·L^(-1)的牛心浸粉、1.25 g·L^(-1)的羟丙基β-环糊精、3.5 g·L^(-1)的盐酸半胱氨酸、1.1 g·L^(-1)的L-鸟氨酸、0.4 g·L^(-1)的鼠李糖、12 mg·L^(-1)的氯化血红素、4 mg·L^(-1)的两性霉素B和体积分数为0.1%的绵羊血清、0.005%的DMF,其中绵羊血清和牛心浸粉、L-鸟氨酸的P值分别为0.013、0.005、0.012;改良液体显色培养基所检测82株临床菌株显示灵敏度为98.3%,特异度为100%。结论改良液体显色培养基检测GBS具有较高的灵敏度及特异度。

摘要： 社区获得性肺炎的发病率(community-acquired pneumonia, CAP)和死亡率居高不下,是全球性健康问题。有相关文献报道CAP患者患心血管事件的风险逐年升高。其中包括心律失常的发生、新发的心力衰竭/急性心肌梗死或心力衰竭/心肌梗死恶化。有研究确定了肺炎链球菌导致心血管事件(cardiovascular events, CVE)的一些机制,这些心血管事件的发生与患者的临床预后及长期死亡率有着密切关系,本研究拟就肺炎球菌CAP患者发生心血管事件的相关进展及治疗进行综述。

摘要： 为了探究天然化合物毛蕊花糖苷(verbascoside, VBS)对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2, SS2)致病性的作用,本研究通过测定最低抑菌浓度、绘制细菌生长曲线及红细胞溶血试验,发现低浓度下的毛蕊花糖苷不影响猪链球菌的正常生长,但对其溶血活性有显著抑制作用;免疫印迹试验表明,毛蕊花糖苷不影响2型猪链球菌分泌溶血素蛋白(suilysin, SLY);通过分子对接预测毛蕊花糖苷可与SLY的2个氨基酸残基(SER-388、GLN-441)形成3条氢键结合从而使毛蕊花糖苷嵌入SLY蛋白的第4结构域,同时体外溶血活性试验进一步证实毛蕊花糖苷可直接抑制SLY介导的溶血活性;最后,小鼠体内试验结果表明,毛蕊花糖苷可明显提高2型猪链球菌感染小鼠的存活率。综上,毛蕊花糖苷在不影响2型猪链球菌生长活性的情况下,可通过抑制溶血素活性来降低2型猪链球菌对小鼠的致病性。

摘要： 目的:通过比较蒲公英酸奶、蒲公英黄酮酸奶和蒲公英黄酮汁对小鼠体液免疫指标的测定,探索蒲公英酸奶对小鼠体液免疫的影响.方法:首先以超声法从蒲公英中提取黄酮,并制备蒲公英黄酮酸奶.选取体重相近小鼠,随机分为四组,每组10只,常规饲养.各组分别每天早、晚各灌胃一次(0.5 mL/只):一组生理盐水(空白对照组)、二组蒲公英酸奶(蒲公英酸奶组)、三组蒲公英黄酮酸奶(蒲公英黄酮酸奶组)、四组蒲公英黄酮汁(蒲公英黄酮汁组),连续灌胃4周.第5周取小鼠进行胸腺、脾脏免疫器官指数测定、溶菌酶试验和小鼠抗体生成细胞水平测定其体液免疫功能.结果:与空白对照组相比,其他三组免疫器官指数均升高(P0.05);与蒲公英黄酮汁组比较,蒲公英酸奶组的溶菌作用显著增强(P<0.05),溶血素含量、溶血空斑数均显著增多(P<0.05).结论:蒲公英酸奶可明显提高小鼠体液免疫功能,且与蒲公英黄酮酸奶效果相当,该结果为蒲公英产品的开发提供了数据支撑.

摘要： cqvip:溶血素作为金黄色葡萄球菌分泌的胞外毒素之一,是造成医院和社区获得性感染重要的致病因子~([1])。根据抗原性不同可分为α、β、γ和δ溶血素四种类型,β溶血素能引起人类皮肤黏膜化脓性感染、慢性骨髓炎~([2])、感染性肺炎,以及动物眼角膜炎~([3])和乳腺炎~([4])等。β溶血素的相关研究目前国内报道相对较少,为了给同行学者研究提供理论参考,本文对金黄色葡萄球菌β溶血素的分子结构、生化特性、致病作用及免疫预防等方面进行综述。

摘要： 为探究杀鲑气单胞菌溶血素和菌毛蛋白能否作为亚单位疫苗候选抗原,本研究针对前期分离的杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种(Aeromonas salmonicida subsp.masoucida,ASM),利用原核表达系统对其进行重组表达,免疫虹鳟后检测其免疫保护效果与诱导的免疫应答特征.Western-blotting结果显示,虹鳟抗灭活ASM血清可与2种重组蛋白发生阳性反应,说明其具有较好的免疫原性.免疫保护实验结果显示,重组溶血素、重组菌毛蛋白及两者混合物免疫对虹鳟的相对免疫保护率(Relative Percentage Survival,RPS)分别为64.6％、37.5％和75.0％;ELISA检测发现,重组溶血素和重组菌毛蛋白单独免疫以及两者混合免疫均能有效诱导虹鳟产生抗各抗原的特异性抗体,在免疫2周后特异性抗体水平均显著高于对照组(P＞0.05),其中混合免疫组虹鳟血清中抗重组溶血素抗体水平显著高于重组溶血素单独免疫组,但其诱导产生的抗重组菌毛蛋白抗体水平与重组菌毛蛋白单独免疫组无显著性差异;荧光定量PCR检测结果显示,3个免疫组中IL-6、IL-8、TCR及CD4基因的表达水平均显著高于PBS对照组,其中重组溶血素与重组菌毛蛋白共免疫组中IL-6、CD4、MHC-Ⅱ及IgM基因表达水平显著高于其他免疫组.研究结果表明,重组溶血素对虹鳟具有较好的免疫保护效果,且提示重组菌毛蛋白具有开发成为佐剂分子的潜在价值,该结果可为杀鲑气单胞菌亚单位疫苗的研制及应用提供了重要参考.

摘要： 试验采用微量稀释法测定黄芩苷对猪链球菌2型参考菌株的体外最小抑菌浓度,以及黄芩苷对猪链球菌生长曲线和溶血素活性的影响.结果显示:黄芩苷对猪链球菌2型参考菌株的最小抑菌浓度大于1280μg?mL-1,抑菌效果较差;黄芩苷在0～64μg?mL-1的浓度范围内对猪链球菌2型参考菌株的生长无抑制作用;黄芩苷添加浓度为32～64μg?mL-1时能够显著抑制培养物上清液中猪链球菌溶血素的溶血活性.

摘要： 为进一步研究哈维氏弧菌溶血素(Vibrio harveyi hemolysin,VHH)的生物学功能,构建了vhh原核表达载体,并利用纯化的重组蛋白制备多克隆抗体,采用DOT-ELISA和Western-blot方法检测抗体的效价及特异性,并通过溶血试验评估抗体对哈维氏弧菌培养物上清溶血活性的影响。结果表明:在构建得到的表达菌株pET28a-vhh-BL21(DE3)中,重组蛋白以包涵体形式大量表达;对该重组蛋白进行纯化并复性后,利用纯化的蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体效价为1∶163840,可特异性识别VHH蛋白,且稀释倍数小于1000时,可显著抑制哈维氏弧菌培养物上清的溶血活性。本研究结果对VHH单抗的制备、哈维氏弧菌检测手段的完善及哈维氏弧菌的疫苗研发具有一定参考作用。

摘要： 猪链球菌2型的溶血素蛋白是一种重要的毒力因子，也是一种胆固醇依赖的细胞溶素。已有的研究发现，SLY在抵抗树突状细胞的补体依赖性调理吞噬杀伤中具有重要作用，并且推测这种作用可能是由于细胞表面的某种补体受体的识别受到抑制而产生的。本研究以补体C3温和C5aR为诱饵从已经构建的猪链球菌2型的全基国组细菌双杂交文库同时筛选到了C3aR结合蛋白和C5aR结合蛋白SLY，并通过Far-western实验证实了猪溶血素能够同时结合C3aR和C5aRo在蛋白质水平上通过趋化实验证实了SLY能够抑制补体C3a和C5a所介导的趋化作用，并用已构建的sly突变菌株在细菌水平上通过趋化实验和吞噬实验证实了SLY能够抑制补体C3a和C5a所介导的趋化作用。这些研究结果初步揭示了SLY介导的猪链球菌免疫逃避的机理。

摘要： 采用硫酸铵盐析提取豚鼠气单胞菌的溶血素,经DEAE-Sephadex A50凝胶层析法纯化,SDS-PAGE电泳获得分子量为32.2KDa的单一多肽溶血素,测定溶血价为25.通过注射感染方式,将倍比稀释的豚鼠气单胞菌溶血素梯度接种南方鲇,对致病性和组织病理损伤情况进行研究.结果表明豚鼠气单胞菌溶血素具有较强的毒力,对南方鲇的半数致死剂量(LD50)为0.29mg蛋白/kg体重.病鱼表现为体表褪色,腹部膨大,肝、脾、肾肿大,肝、脾淤血、出血明显;胃肠道内充有大量粘液,黏膜充血、出血.组织病理学表现为骨骼肌水肿、变性,肌浆红染,部分肌纤维坏死,溶解、断裂;肝细胞变性、坏死,血窦扩张淤血;肾小管上皮细胞变性、坏死,病变严重的整个肾小管的结构完全消失,间质淋巴细胞减少,大量炎性细胞浸润;脾小体数量明显减少;胃肠道黏膜上皮变性、坏死,脱落.

摘要： 采用硫酸铵盐析提取豚鼠气单胞菌的溶血素,经DEAE-Sephadex A50凝胶层析法纯化,SDS-PAGE 电泳获得分子量为32.2KDa 的单一多肽溶血素,测定溶血价为25.通过注射感染方式,将倍比稀释的豚鼠气单胞菌溶血素梯度接种南方鲇,对致病性和组织病理损伤情况进行研究.结果表明豚鼠气单胞菌溶血素具有较强的毒力,对南方鲇的半数致死剂量(LD50)为0.29 mg 蛋白/kg体重.病鱼表现为体表褪色,腹部膨大,肝、脾、肾肿大,肝、脾淤血、出血明显;胃肠道内充有大量粘液,黏膜充血、出血.组织病理学表现为骨骼肌水肿、变性,肌浆红染,部分肌纤维坏死,溶解、断裂;肝细胞变性、坏死,血窦扩张淤血;肾小管上皮细胞变性、坏死,病变严重的整个肾小管的结构完全消失,间质淋巴细胞减少,大量炎性细胞浸润;脾小体数量明显减少;胃肠道黏膜上皮变性、坏死,脱落.

摘要： 为探讨单增李斯特菌非溶血性发生的机制，筛选了43株非溶血性单增李斯特菌，通过观察在添加卵磷脂的培养基中其毒力因子PlcB的表达，间接检测PrfA的活性及功能；并采用基因测序的方法对上述非溶血性菌株的李斯特溶血素LLO及其毒力操控因子PrfA进行了分析。结果发现，在43株非溶血性单增李斯特菌中，39株表现为PrfA功能缺失型；4株表现为LLO功能缺失型。序列分析表明PrfA和LLO功能缺失均由基因突变导致。总其结果看，单增李斯特菌非溶血性的产生是由PrfA和LLO的突变所致，其中PrfA的突变占主要地位。

摘要： 以在宿主菌株BL21(DE3)中成功表达的重组金黄色葡萄球菌 -溶血素蛋白作为研究对象，分析比较通过凝胶过滤层析(Gel Filtration Chromatography)和镍柱亲和层析纯化试剂盒(Ni-NTA Spin Columns)纯化所得到的重组蛋白的蛋白含量和生物特性方面的差异。SDS-PAGE分析检测纯化产物，Bradfbrd法测定蛋白含量，兔红细胞测定半数溶血效价。结果显示这两种方法得到的纯化产物在53 kD处均呈现单一清晰带，达电泳级纯度。与此同时，凝胶过滤对目的蛋白的纯化率为14.04％，蛋白含量为0.337 mg/mL，溶血活性为1519 HU/mg;镍柱亲和层析的纯化率为17.5％，蛋白含量为0.35 mg，mL，溶血活性为1463 Hu/mg。由此可见，凝胶过滤得到的纯化产物在蛋白含量和蛋白活性方面丝毫不亚于镍柱亲和层析纯化试剂盒。

摘要： 目的：分离纯化基因工程重组蛋白金黄色葡萄球菌溶血素并检测其生物学活性，为疫苗研发奠定基础。 方法：对含pET32a+- -HL质粒的BL21(DE3)进行诱导表达，诱导成功之后，将重组菌BL21(DE3)培养物用超声波裂解，并用凝胶过滤层析法对该基因工程蛋白进行分离纯化，用Bradford法兔红细胞分别测定纯化产物的蛋白含量和溶血比活。 结果：纯化产物在SDS-PAGE电泳中53 ku处呈现出单一清晰带，达电泳级纯度。纯化产物含量约为0.1277mg/mL，溶血比活为8192HU/mg。 结论：成功获得了金黄色葡萄球菌~HL，且所获的~HL具有良好的溶血活性。

摘要： 目的：研究多菌森口服液是否能提高小鼠的体液免疫功能.方法：按照《保健食品检验与评价技术规范》2003年版对多菌森口服液进行小鼠抗体生成细胞试验;小鼠血清溶血素试验.结果：多菌森口服液小鼠抗体生成细胞试验和小鼠血清溶血素试验均呈现阳性结果.结论：多菌森口服液能提高小鼠的体液免疫功能.

摘要： 目的:探讨复方中药对小鼠免疫功能的调节作用.方法:以小鼠外周血白细胞、免疫器官脏器指数、血清溶血素为指标进行免疫功能的测定.结果:复方中药具有提高环磷酰胺致免疫功能低下小鼠外周血白细胞、增加免疫器官脏器指数、促进血清溶血素生成的作用.结论:复方中药能增强环磷酰胺致免疫功能低下小鼠非特异性和特异性免疫功能.

摘要： 本研究旨在筛选牛羊坏死杆菌基因工程亚单位疫苗的保护性抗原.试验将坏死杆菌白细胞毒素及溶血素基因作为研究材料,利用大肠杆菌原核表达系统来表达坏死杆菌白细胞毒素及溶血素的重组蛋白,并利用Western blot 技术从中筛选出坏死杆菌白细胞毒素及溶血素蛋白主要的保护性抗原区,最终选择出免疫保护性强的重组蛋白作为预防牛、羊腐蹄病的重组亚单位疫苗候选抗原.结果表明,成功筛选出白细胞毒素(lktA)和溶血素(hly)毒力因子的8 个中和抗原表位区,成为探索牛坏死杆菌高效基因工程亚单位疫苗的候选抗原,为牛坏死杆菌病的有效防治提供理论基础.

摘要： 本文利用小麦蓝矮病植原体16SrDNA基因和延伸因子(EF-TU)tuf基因序鉴定小麦蓝矮病植原体是属于植原体16SrI组，完成了小麦蓝矮植原体的分类，分析了免疫收列膜蛋白(Imp)基因的克隆和分子特性，小麦蓝矮植原体寄主范围的分子鉴定及病原多态性RFLP分析，小麦蓝矮病植原体胸普酸激酶基因(tmk)的分离、原核表达。

摘要： 本发明涉及一种检测试剂，其用于在特异性扩增TRH1和TRH2RNA的扩增程序中检测耐热性溶血素相关溶血素(TRH)基因，该试剂包括具有与来自TRH基因的RNA的特定序列互补的序列的第一引物，以及具有与所述特定序列同源的序列的第二引物。

摘要： 本发明涉及一种检测试剂，其用于在特异性扩增TDH RNA的扩增程序中检测耐热性溶血素(TDH)基因，该试剂包括具有与来自TDH基因中的RNA的特定序列互补的序列的第一引物，以及具有与所述特定序列同源的序列的第二引物。

摘要： 本发明可以简单、快捷、准确地检测、定量确定和鉴别弧菌属病原菌产生的热稳定溶血素蛋白组[指的是TDH(热稳定直接溶血素)，TRH(TDH相关溶血素)和其它类似溶血素蛋白，下文称为TDH相关毒素]的基因。本发明为检测和定量确定实际产TDH相关毒素细菌提供了一种方法，对食品卫生监控具有重要意义。用包含编码TDH和TRH的共有氨基酸序列的基因序列的引物对，全面检测TDH相关毒素基因，由此可以检测和定量确定产TDH相关毒素的细菌。

摘要： 本发明公开了本发明提供了一种用于体外检测血清中金黄色葡萄球菌溶血素的溶血中和活性的α溶血素抗原表位肽，包含氨基酸序列为SEQ ID NO:10的多肽。本发明还提供了其在制备用于体外检测血清中金黄色葡萄球菌溶血素的溶血中和活性的试剂及方法中的用途。本发明提供的α溶血素抗原表位肽可用于快速、直接评价疫苗接种后人体血清内中和Hla毒素溶血活性的水平。

摘要： 本发明涉及一种检测试剂，其用于在特异性扩增TRH1和TRH2 RNA的扩增程序中检测耐热性溶血素相关溶血素(TRH)基因，该试剂包括具有与来自TRH基因的RNA的特定序列互补的序列的第一引物，以及具有与所述特定序列同源的序列的第二引物。

摘要： 本发明公开了一种猪链球菌2型溶血素溶血活性基因突变株及其疫苗制备和应用。该突变株命名为streptococcus suis type 2mSly(P353L)‑SC‑19，其保藏编号为：CCTCC M 2016077。所述突变株中溶血素基因碱基序列上1056bp至1059bp的基因序列为TTA。该突变株结合了基因缺失疫苗和毒力因子免疫保护研究的优点，使菌株既缺失猪链球菌II型溶血素的毒性，又具有溶血素蛋白的免疫源性。该菌株特点仍然表达完整的溶血素蛋白，但是不具有溶血活性，该菌株对细胞的毒性大大降低；菌株的溶血素溶血活性突变后，仍然能激活机体产生溶血素蛋白的抗体，具有很好的保护效应。

摘要： 本发明涉及提供一种可溶性溶血链球菌溶血素O基因、该基因表达的重组蛋白及其制备方法。本发明运用基因工程技术从溶血链球菌基因组中克隆得到截短的SLO基因，连接到表达载体上再转化入宿主细胞表达纯化大量稳定的r－sSLO蛋白，克服了天然提取的各种缺点，有利于以该蛋白为原材料制备各种试剂的标准化。全长SLO蛋白是含571个AA的60KD左右的蛋白，N端有信号肽用于将成熟蛋白引导至细胞外。研究表明包括信号肽的N端77个AA对宿主细胞有毒害作用，其毒害作用大于其后78－571个AA所产生的溶细胞作用。

摘要： 本发明涉及一种检测试剂，其用于在特异性扩增TDH RNA的扩增程序中检测耐热性溶血素(TDH)基因，该试剂包括具有与来自TDH基因中的RNA的特定序列互补的序列的第一引物，以及具有与所述特定序列同源的序列的第二引物。

摘要： 本发明涉及一种链球菌溶血素O融合蛋白。具体地，本发明提供一种链球菌溶血素O融合蛋白，所述的融合蛋白包含链球菌溶血素O、His标签蛋白；和Trx标签蛋白。本发明所述的融合蛋白具有高表达、镍柱亲和层析低成本分离或纯化、纯化后的蛋白稳定性强和具有优异的链球菌溶血素O抗原优势，从而有利于链球菌溶血素O的检测。

摘要： 本发明公开了木犀草素在制备抑制化脓性链球菌溶血素功能活性的药物中的应用。实验表明，木犀草素能以高亲和力结合于SLO蛋白以抑制化脓性链球菌溶血素功能活性，证明了其可能成为一种有效治疗GAS感染的潜在抑制剂。