流加培养

摘要： 为了提高富硒产朊假丝酵母的性能,本文在摇瓶培养和分批培养的基础上,考察了不同pH控制方式对流加培养条件下富硒产朊假丝酵母细胞生长、谷胱甘肽(GSH)合成和有机硒转化的影响,结果发现:在12h将pH从3.5切换至5.5(pH 3.5→5.5)的两阶段pH控制方式最有利于富硒产朊假丝酵母胞内GSH和有机硒含量的提高.在pH3.5→5.5条件下,富硒产朊假丝酵母胞内GSH含量、有机硒含量和有机硒转化率分别达到最大值13.09 mg/g、1.88 mg/g和94.69％.通过对酵母胞内GSH合成关键酶活性、氧化还原酶活性和能量代谢物质ATP水平进行测定,发现pH3.5→5.5两阶段pH控制方式提高了富硒酵母胞内过氧化氢酶活性,降低了丙二醛含量,为酵母进行有机硒富集与转化以及GSH合成与积累提供了合适的氧化还原环境,并最终提高了富硒酵母的性能.

摘要： The aim of the present study was to investigate the effect of nitrate pulse feeding on the cell growth and cell composition of Desmodesmus sp.F51.Under nitrate pulse-feeding cultivation,the protein content of cells of Desmodesmus sp.FS1 decreased from (560 ± 16) mg/g to (456 ± 17) mg/g,while the contents of carbohydrate and lipid increased from (209 ± 13) mg/g to (310 ± 12) mg/g and (98 ± 3) mg/g to (120 ± 4) mg/g,respectively.By investigating the changes in carotenoid,lipid and carbohydrate compositions,it appeared that nitrate pulse feeding could promote β-carotene biosynthesis and enhance the bioconversion of α-carotene to lutein.Lutein accumulation was positively associated with polyunsaturated fatty acid formation.Desmodesmus sp.F51 tended to accumulate carbohydrate as an energy storage product after 3 days of cultivation under nitrate pulse-feeding conditions,and the major accumulated monosaccharide was glucose (75.7 ±1.4)％.Therefore,the nitrate-pulse feeding strategy is a highly promising approach to simultaneously produce lutein and carbohydrate in Desmodesmus sp.F51.%考察脉冲式添加氮源培养对耐温微藻Desmodesmus sp.F51细胞生长和细胞组成的影响.结果表明,在脉冲式添加氮源培养过程中,藻株FSI的蛋白质含量由(560±16) mg/g降低至(456±17) mg/g,而碳水化合物和油脂含量则分别由(209±13) mg/g和(98±3) mg/g提高至(310±12) mg/g和(120±4) mg/g.另外,对色素和油脂的具体组成变化进行分析,发现脉冲式添加氮源培养可增强β-胡萝卜素的生物合成,以及促进α-胡萝卜素生物转化为叶黄素,同时还可发现叶黄素积累与多不饱和脂肪酸含量变化呈正相关性.而在碳水化合物的具体组成分析中,发现碳水化合物为藻株F51主要的储能物质,当脉冲式添加氮源培养时间为3d时,其葡萄糖占总碳水化合物的质量分数可明显提高至(75.7±1.4)％.采用脉冲式添加氮源培养策略可明显同时促进藻株F51叶黄素和碳水化合物的生产.

摘要： 为了获得一株发酵性能优良的高核酸酵母,以产朊假丝酵母(Candida utilis)CL1501为出发菌株,采用紫外-亚硝基胍复合诱变,筛选获得一株高核酸含量的突变株CL15013,经测定其核酸含量占菌体干质量的16.8％,高于出发菌47.8％.对比研究其流加及分批培养工艺,流加培养细胞收获量为16.9 g/L,比分批培养提高94.3％;正交试验设计优化流加培养条件后,CL15013的收获量达21.3 g/L,比分批培养提高144.8％,具有良好的生产应用潜力.%Candida utilis CL1501 was mutagenized with a combination of UV irradiation and nitrosoguanidine treatment.An excellent mutant with high ability to produce nucleic acid,named as CL15013,was obtained.Its nucleic acid content was 16.8％ on a dry cell weight basis,which was 47.8％ higher than that of CL1501.The dry biomass yield of the mutant was 16.9 g/L in fed-batch culture,which was 94.3％ higher than that from batch culture.Under optimized fed-batch culture conditions obtained by orthogonal array design,the biomass yield was up to 21.3 g/L,which was 144.8％ higher than that from batch cultivation.These results indicated that mutant CL15013 has a great application potential in industrial production.

摘要： 大肠杆菌表达系统是目前表达外源蛋白的首选,利用该表达系统表达重组蛋白有许多优越性,但表达的外源蛋白容易被宿主蛋白酶攻击或未能正确折叠形成包涵体,其表达受到了限制.综述了国内外利用大肠杆菌表达外源蛋白过程中采用的一些优化策略,主要包括表达稀有密码子、应用融合标签,改变表达菌株、降低包涵体形成、单一蛋白技术、自诱导、流加培养以及高密度细胞培养等,以期探索外源蛋白表达的最优策略.%Escherichia coli expression system has become the first choice of expression of exogenous protein,the expression system for recombinant protein presents many advantages,and however,sometimes expressed exogenous protein is easily attacked by host protease or cannot form insoluble inclusion bodies because of incorrect folding,thus by which the expression is limited.This paper summarizes some optimization strategies used in the process of the expression of exogenous proteins in E.coli,mainly including the expression of rare codons,application of fusion tags,change of E.coli strains for expression,and reducing the formation of inclusion bodies,a single protein production system,auto-induction,fed-batch cultivation,high cell-density culture,etc.,which aims at exploring the optimal strategy for the expression of exogenous protein.

摘要： 通过对长双歧杆菌的紫外诱变,选育出耐氧菌株,命名为L80.以L80为实验菌株,通过单因素实验、响应曲面分析和流加补料培养,确定最优培养基方案.高密度培养优化后的方案是(以质量分数计):大豆蛋白胨4.03％,酵母浸粉2.02％,葡萄糖0.95％,水苏糖1.59％.发酵罐最佳流加方式为:pH6.5,糖浓度保持在6.0～8.0 g/L.最终活菌数达到(1.21±0.03)×1010 cfu/mL.

摘要： 为了优化耐高糖酵母发酵工艺,基于培养温度、摇床转速、装液量、初始pH、菌体接种量五个因素的单因素实验的结果,之后对装液量、初始pH、菌体接种量进行响应面优化实验.结果表明,最佳工艺条件为:培养温度30°C,摇床转速200 r/min,装液量8.4％,pH4.7,接种量7.4％,在此条件下,酵母细胞干重提高了55.72％.同时,利用5.0 L机械搅拌罐以溶氧反馈流加、恒速流加、间歇流加三种糖蜜补充方式进行酵母细胞培养,绘制生长曲线,发现以溶氧反馈流加方式补充糖蜜更有利于酵母繁殖,最大酵母湿重达到143.95 g/L,达到了耐高糖面包酵母高密度发酵的实验水平,确定了酵母最佳的流加补料方式.

摘要： 研究了一种新型培养方法——控pH流加培养法,可有效促进雨生红球藻生长并提高虾青素产量.测定雨生红球藻生长期间对营养盐的需求量,依据对数生长期藻液pH与硝酸盐和磷酸盐的含量的线性关系,确定流加液组成及流加方法.流加液的组成为7.88 g/L的KNO3,1.83 g/L的KH2PO4和24.0 g/L的CH3COONa,监测对数生长期藻液pH变化情况,通过添加流加液将藻液的pH值持续控制在7.5 ～8.0内,雨生红球藻的细胞干重可达(1.42±0.04)g/L,虾青素产量可达(60.23±1.81) mg/L.

摘要： 在50 L和500 L机械搅拌生物反应器中进行流加混合碳源-番茄汁培养红发夫酵母产虾青素.其中,50 L反应器获得生物量32.19 g/L,虾青素产量24.17mg/L;500 L反应器获得生物量36.17 g/L,糖转化率达到42％,虾青素产量达到31.19mg/L.

摘要： 在50 L和500 L机械搅拌生物反应器中进行流加混合碳源-番茄汁培养红发夫酵母产虾青素。其中,50 L反应器获得生物量32.19 g/L,虾青素产量24.17 mg/L;500 L反应器获得生物量36.17 g/L,糖转化率达到42%,虾青素产量达到31.19 mg/L。

摘要： 在前期建立的流加培养工艺的基础上，考察培养过程中的pH值对流加培养过程的影响，明确了过程控制参数pH值与产品关键质量属性（critical quality attributes，CQAs）间的联系，建立了产物质量属性和过程操作属性间的关系，并确认pH值为抗体融合蛋白生产工艺中的关键控制参数。结果表明，流加培养过程随着培养pH值的提高，抗体融合蛋白的生物学活性呈一定程度的下降趋势，但唾液酸含量却呈明显的上升趋势；此外，在pH值6．9和pH值7．0的条件下培养过程中的最大细胞密度、活力、蛋白表达量均优于其他条件，确定6．95±0．05为过程的控制pH值。将此培养工艺放到大200 L中试生产规模，结果与2 L反应器的结果基本一致。

摘要： 本文建立了包括菌体浓度X、底物浓度S、体积V为状态变量的酵母流加发酵过程的非结构动力学模型;基于该模型,提出了一种克服被估变量的累积误差的进一步预估方法,用以估计的不可在线测量的菌体浓度、底物浓度等生化状态变量,并根据预估结果,进行流加操作.该方法应用于酵母流加培养,发酵最终产率比传统工艺更大,同时糖价消耗相对减少.

摘要： 本文通过对面包酵母进行诱变育种并结合温度冲击实验,筛选出具有较强抗冻性能的酵母菌株FTBY5.在30L发酵实验中采用甘蔗糖蜜为原料,进行高密度酵母流加培养,最终酵母对糖得率40％～45％、鲜酵母收获量为100～120g/L、海藻糖含量18％～22％、含氮量为6.8％～7.0％、发酵活力大于1000mL.

摘要： 研制开发了乙醇浓度监测仪，并对其在酵母生产中的应用情况进行了考察，结果表明，采用乙醇浓度反馈流加培养方式，细胞产率和发酵活力可分别达到０．４１６ｇ／ｇ和９８０～１１００ｍｌ，显示出良好的应用前景。

摘要： 一种氨氮流加‑间歇式运行的氨氧化细菌菌群筛选和富集培养方法，属于水处理技术领域。以含有氨氧化细菌的活性污泥为接种污泥，利用细菌发酵罐，通过氨氮流加‑间歇式运行方法实现氨氧化细菌菌群的筛选和富集培养。利用游离氨和游离亚硝酸抑制亚硝酸盐氧化细菌，采用高溶解氧有助于提高氨氮氧化速率。采用此方法可以在短期内实现氨氧化细菌菌群的筛选和富集培养。本发明所获得的氨氧化细菌菌群在总细菌中占有数量优势，可以实现高氨氮氧化速率和高亚硝酸盐积累率。

摘要： 一种间歇式、氨氮流加‑间歇式运行交替的硝化细菌菌群筛选和富集培养方法，属于水处理技术领域。以含有硝化细菌的活性污泥为接种污泥，利用细菌发酵罐，通过间歇式、氨氮流加‑间歇式运行交替方法实现硝化细菌菌群的筛选和富集培养。利用间歇式运行逐渐提高初始氨氮负荷以提高氨氮氧化速率，氨氮流加‑间歇式运行以维持氨氮氧化速率和实现低亚硝酸盐积累率。采用此方法可以在短期内实现硝化细菌菌群的筛选和富集培养。本发明所获得的硝化细菌菌群在总细菌中占有数量优势，可以实现高氨氮氧化速率和高亚硝酸盐氧化速率。

摘要： 本发明公开了一种流加式两层细胞共培养器官芯片，包括芯片槽、多孔膜、套层和顶盖，芯片槽包括下层细胞培养区和三个均匀分布的阻流栅栏，芯片槽的外部分布安装有上层培养液进口、上层试剂进口、下层培养液进口、下层试剂进口、上层出口和下层出口，套层的正面包括上层细胞培养区和三个均匀分布的U形阻流栅栏，套层的背面设有套层间隙和三个固定栅栏。本发明具备非接触式的两层细胞共培养能力，特别是通过多孔膜的设计实现上下两层培养体系的细胞非接触式信息交流，可以实时在线检测细胞生长情况和药物毒性或药理活性，具有简单、便携、经济、高效和准确的特点，能推广到多种器官和组织的相互作用关系及药物筛选和毒性评价。

摘要： 一种破囊壶菌高产DHA的单一葡萄糖碳源流加发酵培养基及其流加方法，培养方法主要包括破囊壶菌发酵培养基制备和流加葡萄糖的制备，菌种活化，种子液制备，发酵罐发酵培养，生物量干重、总油脂以及DHA产量的测定。本发明提供的发酵培养基及流加方法简单、方便操作，生产成本低，DHA产量高，有利于进一步放大生产，直至工业化生产，社会及经济效益巨大。

摘要： 本发明属于微生物发酵，特别是指一种采用流加通气培养制备岩藻黄素发酵液的方法。方法包括种子液的制备、在通气发酵过程中通过流加营养组分培养的方式制备岩藻黄素发酵液等工艺步骤；本发明解决了现有技术存在的异养培养制备的平滑菱形藻发酵液中发酵细胞密度和岩藻黄素产率低的技术难题。具有所制备的平滑菱形藻发酵液中细胞密度及岩藻黄素产率高、可以稳定实现连续工业化生产、能够从培养基的源头控制重金属、多氯联苯等海洋常见污染物、较大型海藻来源的岩藻黄素更安全等优点。

摘要： 本实用新型提供了一种微生物培养、流加接种两用锥形瓶，包括：锥形瓶，包括锥形瓶身和带螺纹柱状瓶口，可用于进行微生物培养；接种瓶盖，可拆卸地设置于所述瓶口上；可通过连接结构固定于所述瓶口上，并与所述锥形瓶形成一体结构；接种管，设置于所述接种瓶盖上，穿过所述接种瓶盖，一端位于所述瓶身内，另一端连接流加接种设备进行流加接种；和导气结构，设置于所述接种瓶盖上，穿过所述接种瓶盖，用以维持所述锥形瓶内气压，其上设置有除菌滤膜，可以过滤除菌。本实用新型提供的微生物培养、流加接种两用锥形瓶具备着微生物培养和流加接种两种功能，且能减少接种过程中存在的杂菌污染可能性，适用于任意微生物的培养以及发酵接种领域中。

摘要： 本发明公开了一种BHK21悬浮细胞高密度流加培养方法及其在口蹄疫病毒增殖中的应用。本发明根据BHK21细胞在ZN‑MEM基础培养基中生长及代谢水平，提出了一种BHK21细胞专用的流加浓缩培养液，包括氨基酸、葡萄糖、维生素和其它添加物成份。同时，在BHK21细胞批式培养基础上，设计了一套个性化流加策略，经规模化培养应用，进一步优化生物反应器关键控制参数，确定了BHK21细胞的流加培养方法。该方法有效消除了底物和产物的抑制和毒害作用，促进了细胞的生长和代谢，提高了细胞的培养效能。采用本发明方法获得的BHK21细胞，对口蹄疫病毒的感染性增加，病毒的有效抗原含量得到显著提升，提高了口蹄疫病毒的生产效率，从而为高品质疫苗的生产奠定了基础，具有显著的经济效益。

摘要： 一种通过间歇性灌流联合分批流加培养模式进行的细胞培养方法，包括分批流加培养并在中后期交替进行一期或多期灌流以提高产品产量和质量。

摘要： 本发明属于微生物发酵技术领域，公开了一种利用流加培养液发酵生产精氨酸的工艺，在发酵罐培养过程中，通过流加硫酸铵水溶液或/和葡萄糖水溶液补料生产精氨酸，培养至55h结束。本发明工艺操作简单，可控程度高，降低劳动强度的同时，使精氨酸发酵产酸效率得到显著提高。

摘要： 本发明属于微生物发酵技术领域，公开了一种利用流加培养液发酵生产色氨酸的方法，在发酵罐培养过程中，通过流加磷酸氢二钾溶液或硫酸铵溶液或精氨酸水溶液补料生产色氨酸，培养至40h结束。本发明在不增加任何额外设备和人力投入的情况下，延长了发酵周期，降低了劳动强度,使色氨酸的产量得到显著提高。