c-kit

摘要： 目的:本文旨在探讨中药活性成分葫芦素B(cucurbitacin B,CuB)抑制急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的作用及机制。方法:Western blot、QPCR检测蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)在AML细胞中的表达水平;CCK-8及台盼蓝拒染法检测CuB对AML细胞增殖的抑制作用;DAPI染色和流式细胞术检测CuB对kasumi-1细胞凋亡的影响;Western blot检测CuB对kasumi-1细胞中CIP2A表达及凋亡蛋白表达的影响;QPCR检测CuB对CIP2A基因转录的影响;PP2A活性试剂盒检测CuB对Kasumi-1细胞中PP2A活性的影响;Western blot检测C-KIT及其下游信号分子的变化;CuB与PP2A抑制剂冈田酸(Okadaic acid,OA)共处理细胞检测CuB抑制C-KIT是否与PP2A活性的再激活有关。结果:CIP2A在t(8;21)AML中高表达并与AML预后不良显著相关。CuB可以显著抑制kasumi-1细胞增殖并诱导其发生caspase依赖性的细胞凋亡,该作用机制可能与CIP2A/PP2A/C-KIT信号通路有关。结论:CuB通过抑制AML细胞中CIP2A的表达并重激活PP2A,使C-KIT及其下游信号失活,进而抑制AML细胞增殖并诱导其凋亡。

摘要： 探究益生菌组合物(鼠李糖乳杆菌LR-168、嗜酸乳杆菌LA-99和动物双歧杆菌BB-115)对慢传输型便秘的作用及机制。将50只6周龄雄性BABL/c小鼠随机分为空白组(生理盐水)、模型组(洛哌丁胺)、阳性对照组(洛哌丁胺+动物双歧杆菌BB-12:5×10^(8) CFU)、低剂量组(洛哌丁胺+益生菌组合物:5×10^(8) CFU)和高剂量组(洛哌丁胺+益生菌组合物:5×10^(9) CFU),灌胃21 d后处死,对小鼠生理生化指标进行测定。与模型组相比,益生菌组合物低、高剂量组显著提高小肠推进率、黑便粒数和黑便质量,显著降低首粒黑便时间;此外,灌菌处理后,血清和结肠组织的兴奋性神经递质(P物质、胃动素和胃泌素)分泌上升,抑制性神经递质(血管活性肽、生长抑素和内皮素-1)分泌下降;各组间的血清细胞因子水平无统计学差异;结肠组织的AQP3和c-kit基因转录量在益生菌干预后显著提高。益生菌组合物具有缓解慢传输型便秘的作用,这可能是通过影响胃肠调节肽分泌,以及AQP3和c-kit基因转录的水平来实现的。

摘要： 目的研究润通莱蜜栓对慢传输型便秘(STC)小鼠的治疗作用。方法将小白鼠(50只)分为空白对照组,模型对照组,阳性对照组,低、高剂量组,以盐酸洛哌丁胺胶囊(1.5 mg/kg)经口灌胃建立STC便秘模型。待造模成功后,枸橼酸莫沙必利片(2.5 mg/kg)灌胃给药组作为阳性对照组;低、高剂量组给予润通莱蜜栓稀释液0.05 ml/10 g、0.10 ml/10 g经口灌胃治疗,2次/d,共7 d。通过比较小鼠炭末推进率、观察结肠病理结构、检测各组小鼠结肠内酪氨酸肌酶受体(c-kit)蛋白的表达量。结果与模型组相比,润通莱蜜栓高低剂量组能够提高小鼠小肠的炭末推进率、恢复结肠形态结构及提高结肠内c-kit蛋白的表达量,并且效果优于阳性对照组。结论润通莱蜜栓对STC小鼠具有较好的治疗作用。

摘要： 目的观察电针“天枢”“大肠俞”对慢传输型便秘(STC)大鼠结肠组织乙酰胆碱转移酶(ChAT)、干细胞因子(SCF)和酪氨酸激酶受体c-Kit表达的影响,探讨电针治疗STC的作用机制。方法将40只SPF级SD大鼠随机分为空白组、盐水组、模型组和电针组,每组10只。模型组和电针组连续21 d灌胃复方地芬诺酯混悬液建立STC模型。造模成功后,电针组电针双侧“天枢”“大肠俞”,每日1次,连续14 d,其余各组固定相同时间,不干预。测定大鼠胃排空率和小肠推进率,免疫荧光检测大鼠结肠组织ChAT和c-Kit表达,Western blot检测结肠组织SCF、c-Kit蛋白表达,RT-PCR检测结肠组织SCF、c-Kit mRNA表达。结果与空白组比较,盐水组大鼠胃排空率、小肠推进率及结肠组织ChAT、SCF、c-Kit表达差异无统计学意义(P>0.05);与空白组比较,模型组大鼠胃排空率、小肠推进率显著降低(P<0.01),结肠组织ChAT和c-Kit表达显著降低,SCF、c-Kit蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠胃排空率、小肠推进率显著升高(P<0.01),结肠组织ChAT、c-Kit表达显著升高,SCF、c-Kit蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.01)。结论电针“天枢”“大肠俞”能改善STC大鼠胃肠道传输功能,其机制可能与促进ChAT表达/激活SCF/c-Kit通路有关。

摘要： 目的:探讨猴头健胃灵片促进功能性消化不良(FD)大鼠胃排空的可能机制。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、猴头健胃灵组,每组10只。模型组和猴头健胃灵组采用夹尾刺激法制备FD大鼠模型。猴头健胃灵组予以猴头健胃灵片水溶液灌胃,空白组、模型组予以等体积纯水灌胃,7 d后检测大鼠胃排空率;张力换能器检测大鼠离体胃动力;酶联免疫吸附试验法检测大鼠血浆中脑肠肽胃动素(MTL)和胆囊收缩素(CCK)含量;免疫组织化学检测大鼠胃c-kit的表达水平。结果:1)与空白组比较,模型组体质量明显减轻(P<0.001),胃排空率、离体肌条动力指数显著降低(P<0.05);与模型组比较,猴头健胃灵组大鼠体质量显著增加(P<0.001),胃排空率、离体肌条动力指数明显升高(P<0.01);2)模型组大鼠血浆中脑肠肽MTL及CCK含量显著低于空白组(P<0.05),而猴头健胃灵组大鼠血浆中脑肠肽MTL及CCK水平显著高于模型组(P<0.05);3)猴头健胃灵组大鼠胃组织中c-kit表达与空白组和模型组大鼠比较均有所上调。结论:猴头健胃灵片能升高FD模型大鼠血浆中脑肠肽MTL和CCK的水平、上调胃组织中c-kit的表达水平,从而促进胃动力,这可能是其治疗FD的机制之一。

摘要： 目的 观察舒肝解郁胶囊联合莫沙必利对功能性消化不良大鼠胃黏膜CRF、C-KIT表达的影响.方法 建立功能性消化不良(FD)大鼠模型,30只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、舒肝解郁+莫沙必利组,每组10只,灌胃2周.灌胃结束后处死大鼠,记录大鼠体质量变化、胃残留率,免疫组化及Western blot检测胃组织CRF、C-KIT的表达.结果 与空白组比较,模型组体质量下降、胃残留率增加,胃组织CRF表达升高,C-KIT表达降低(P＜0.05);与模型组比较,舒肝解郁+莫沙必利组体质量增加、胃残留率下降,胃组织CRF表达降低,C-KIT表达增加(P＜0.05).结论 夹尾法及不规律饲养法可成功制备FD大鼠模型;舒肝解郁胶囊联合莫沙必利片可改善FD大鼠病症,其机制可能与下调胃CRF、上调胃C-KIT的表达相关.

摘要： 目的 探讨C-Kit、父系表达基因10(PEG10)在原发性肝癌(PLC)患者中的表达及与临床特征和预后的关系.方法 收集PLC患者的PLC组织90例及癌旁正常组织90例,采用免疫组织化学染色法检测C-Kit和PEG10的表达情况.比较PLC组织和癌旁正常组织中C-Kit和PEG10蛋白的表达情况,比较不同临床特征PLC患者PLC组织中C-Kit和PEG10蛋白的表达情况.采用Logistic回归模型分析PLC患者预后的影响因素.结果 PLC组织中C-Kit和PEG10蛋白的高表达率均明显高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01).临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、低分化、甲胎蛋白(AFP)水平﹥200 ng/ml的PLC患者PLC组织中C-Kit和PEG10蛋白高表达率分别明显高于临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、AFP水平≤200 ng/ml的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01).随访3年,90例PLC患者的3年生存率为51.11％(46/90).单因素分析结果显示,临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、低分化、预后评分﹤7分、C-Kit蛋白高表达、PEG10蛋白高表达、AFP水平﹥200 ng/ml的PLC患者的3年生存率分别明显低于临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、预后评分≥7分、C-Kit蛋白低表达、PEG10蛋白低表达、AFP水平≤200 ng/ml的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01).多因素Logistic回归分析结果显示,临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、低分化、预后评分﹤7分、C-Kit蛋白高表达和PEG10蛋白高表达均是PLC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05).结论 C-Kit和PEG10在PLC组织中高表达,其表达情况与患者的临床特征及预后有关,C-Kit和PEG10蛋白有可能作为理想的PLC预后标志物.

摘要： 目的 分析胃肠间质瘤(GIST)中c-kit、血小板源性生长因子受体A(PDGFRA)基因突变类型、特点及其与GIST临床病理学特征的关系.方法 收集288例GIST患者的临床病理资料和肿瘤组织标本,应用聚合酶链式反应扩增-直接测序法检测c-kit(外显子9、11、13、17)与PDGFRA基因(外显子12、18)的突变状态,分析其突变类型、突变位点与临床病理学特征的关系.结果 288例GIST患者中,原发性突变型244例(84.72％),继发性耐药突变型10例(3.47％),野生型34例(11.81％).244例原发性突变型GIST患者中,c-kit基因突变231例(外显子9、11、13、17突变分别为25、189、7、10例),PDGFRA基因突变13例(外显子12、18突变分别为3、10例).189例c-kit基因外显子11突变中,缺失突变111例(58.73％)、点突变65例(34.39％)、重复突变3例(1.59％)、插入突变4例(2.12％)、混合突变6例(3.17％);外显子11突变热点区域为557～ 560位密码子.突变位点与肿瘤原发部位、肿瘤大小、核分裂象计数有关(P＜0.05);突变类型与患者年龄、肿瘤原发部位、肿瘤大小、核分裂像计数、改良美国国立卫生研究院(NIH)危险分级有关(P＜0.05).Logistic回归分析显示,大于60岁、缺失突变、c-kit外显子11突变的GIST患者,其改良NIH危险分级风险分别增高2.060(95％ CI为1.066～3.980)、3.264(95％ CI为1.628～6.545)、3.819(95％ CI为1.585～9.205)倍.结论 GIST中c-kit和PDGFRA基因突变率高且突变类型位点多样,与GIST患者临床病理及预后密切相关,可为GIST全程化管理提供参考.

摘要： BACKGROUND Constipation is one of the chronic gastrointestinal functional diseases.It seriously affects the quality of life.Cistanche deserticola(C.deserticola)can treat constipation obviously,but its mechanism has not been clarified.We supposed that mechanism of it improved the intestinal motility by stimulating interstitial Cajal cells(ICC).Activation of the C-kit receptor on the surface of ICC is closely related to ICC function,and the stem cell factor(SCF)/C-kit signaling pathways plays an important role on it.To investigate the mechanism of how C.deserticola treats constipation,this study aimed to establish a constipation model in rats and explore the role of SCF/C-kit signaling pathway in the treatment.AIM To explore the SCF/C-kit signaling pathways in the role of C.deserticola for treatment of constipation by a constipation rat model.METHODS Forty-eight 8-mo-old Sprague–Dawley rats were divided into 4 groups by random weight method:Normal group(n=12),model group(n=12),C.deserticola group(n=12)and blocker group(n=12).The normal group received normal saline by gavage;the model group received loperamide by gavage;the blocker group received loperamide and C.deserticola by gavage,and STI571 was injected by intraperitoneally.During treatment,the weight,fecal granules and fecal quality were recorded every 10 d.On day 20 after model induction,the colon tissues of each group were removed.Hematoxylin and eosin staining was used to observe pathological changes.Expression levels of SCF,C-kit and Aquaporin genes were detected by immunohistochemistry,western blotting,and real-time-quantitative polymerase chain reaction.The colonic epithelial mitochondria and goblet cells were observed by transmission electron microscopy.RESULTS Compared with the normal group,as treatment progressed,the weight of rats in the model and blocker groups decreased significantly,the stool weight decreased,and the stool quality was dry(P<0.05).C.deserticola reversed the decrease in body weight and stool weight and improved stool quality.Histopathological analysis indicated that the colonic mucosal epithelium in the model group was incomplete,and the arrangement of the glands was irregular or damaged.Treatment with C.deserticola improved the integrity and continuity of the epithelial cells and regular arrangement of the glands.The blocking agents inhibited the effects of C.deserticola Immunohistochemistry and real-timequantitative polymerase chain reaction showed that expression of SCF and C-kit protein or genes in the colonic tissue of the model group was decreased(P<0.05),while treatment with C.deserticola increased protein or gene expression(P<0.05).Western blotting showed that expression of aquaporin APQ3 was increased,while the expression of Cx43 decreased in the model group.Treatment with C.deserticola inhibited expression of APQ3 and promoted expression of Cx43.Transmission electron microscopy showed that the mitochondria of the colonic epithelium in the model group were swollen and arranged disorderly,and microvilli were sparse.The condition was better in the C.deserticola group.Mice treated with STI571 blocker confirmed that blocking the SCF/C-kit pathway inhibited the improvement of constipation by C.deserticola.CONCLUSION C.deserticola improved defecation in rats with constipation,and the SCF/C-kit signaling pathway,which is a key link of ICC function,played an important role of the treatment.

摘要： 本文以再障患儿、正常足月新生儿、正常儿童作为研究对象，通过ELISA法检测再障患儿血浆正常足月新生儿脐血血浆可溶性。c-kit受体(sCD117)及5CF水平，并与正常儿童进行比较;提取再障患儿骨髓中单个核细胞，应用免疫细胞化学、核酸分子原位杂交及RT一PCR技术，测定再生障碍性贫血患儿与正常儿童c-kit蛋白及mRNA的表达水平，探讨c-kit及SCF在儿童再障发病机制中的作用。

摘要： 本文以再障患儿、正常足月新生儿、正常儿童作为研究对象，通过ELISA法检测再障患儿血浆正常足月新生儿脐血血浆可溶性。c-kit受体(sCD117)及5CF水平，并与正常儿童进行比较;提取再障患儿骨髓中单个核细胞，应用免疫细胞化学、核酸分子原位杂交及RT一PCR技术，测定再生障碍性贫血患儿与正常儿童c-kit蛋白及mRNA的表达水平，探讨c-kit及SCF在儿童再障发病机制中的作用。

摘要： 本文以再障患儿、正常足月新生儿、正常儿童作为研究对象，通过ELISA法检测再障患儿血浆正常足月新生儿脐血血浆可溶性。c-kit受体(sCD117)及5CF水平，并与正常儿童进行比较;提取再障患儿骨髓中单个核细胞，应用免疫细胞化学、核酸分子原位杂交及RT一PCR技术，测定再生障碍性贫血患儿与正常儿童c-kit蛋白及mRNA的表达水平，探讨c-kit及SCF在儿童再障发病机制中的作用。

摘要： 本发明公开了用于检测人类CKIT基因7种突变的探针、引物及试剂盒，其中CM1～CM7的7组引物和探针，每组中突变上游引物能与CKIT基因保守序列结合，突变下游ARMS引物能与其相应的突变序列特异性结合，扩增突变序列；检测探针能够与扩增片段结合，阻断探针能与突变位点对应的野生型序列特异性结合，抑制野生型非特异性扩增。本发明采用特异性突变引物和探针阻断技术，可准确检测CKIT基因7种突变类型；建立的实时荧光PCR扩增反应体系的试剂盒方便对CKIT基因突变的快速检测，操作简单，结果易读；检测方法灵敏度高，50拷贝突变能稳定检出；特异性好，20ng野生型基因组DNA无非特异性扩增，检测能力高达1％。

摘要： 本发明公开了用于检测人类CKIT基因7种突变的探针、引物及试剂盒，其中CM1～CM7的7组引物和探针，每组中突变上游引物能与CKIT基因保守序列结合，突变下游ARMS引物能与其相应的突变序列特异性结合，扩增突变序列；检测探针能够与扩增片段结合，阻断探针能与突变位点对应的野生型序列特异性结合，抑制野生型非特异性扩增。本发明采用特异性突变引物和探针阻断技术，可准确检测CKIT基因7种突变类型；建立的实时荧光PCR扩增反应体系的试剂盒方便对CKIT基因突变的快速检测，操作简单，结果易读；检测方法灵敏度高，50拷贝突变能稳定检出；特异性好，20ng野生型基因组DNA无非特异性扩增，检测能力高达1％。