东亚钳蝎

摘要： 从东亚钳蝎蝎毒中分离鉴定出新型的Na~+通道毒素,采用Sephadex-G-50分子筛、高效液相色谱、多肽指纹图谱及氨基酸测序等技术从野生东亚钳蝎毒液中分离鉴定了一种长链多肽毒素BmK M2,其相对分子质量为7 235.5,由64个氨基酸组成,包含4对二硫键。序列比对显示,BmK M2的序列与已发现的Na~+通道毒素BmK M1、BmK M3、BmK M9等具有较高的序列和结构相似性,是一种潜在的新型Na~+通道调节剂。全细胞膜片钳实验结果显示,BmK M2可显著增强电压门控Na~+通道Nav1.7的激活,延迟Nav1.7的稳态失活及关闭状态失活,但对Nav1.8无活性。实验结果表明BmK M2可作为一种新型的Na~+通道探针,用于Nav1.7结构功能研究以及靶向药物的开发。

摘要： 目的研究东亚钳蝎Buthus martensii Karsch转录组信息特征。方法以山东省临沂地区特色东亚钳蝎为研究对象,利用二代高通量测序平台Illumina HiSeq 4000150PE分别对东亚钳蝎的前腹部、后腹部、毒液腺进行转录组测序。利用测定的转录组数据将毒液腺基因分别与前腹部和后腹部基因集进行比较,然后取两两比较之后的交集进行分析,筛选差异基因集进行GO和KO分析。结果GO功能分类共有60个大项,含有23个生物学途径,13个细胞组分和24个分子功能。富集最显著的前20个KEGG通路中与毒素密切相关的为钙离子信号通路、磷脂酶信号通路。结论通过无参转录组测序,构建了东亚钳蝎转录组序列数据库,为今后东亚钳蝎功能基因的挖掘提供了序列基础并为代谢产物的生物合成提供了数据支撑,为传统中药在临床应用乃至精准医学方面提供了新的思路。

摘要： 目的 研究东亚钳蝎Buthus martensii Karsch转录组信息特征.方法 以山东省临沂地区特色东亚钳蝎为研究对象,利用二代高通量测序平台Illumina HiSeq 4000150PE分别对东亚钳蝎的前腹部、后腹部、毒液腺进行转录组测序.利用测定的转录组数据将毒液腺基因分别与前腹部和后腹部基因集进行比较,然后取两两比较之后的交集进行分析,筛选差异基因集进行GO和KO分析.结果 GO功能分类共有60个大项,含有23个生物学途径,13个细胞组分和24个分子功能.富集最显著的前20个KEGG通路中与毒素密切相关的为钙离子信号通路、磷脂酶信号通路.结论 通过无参转录组测序,构建了东亚钳蝎转录组序列数据库,为今后东亚钳蝎功能基因的挖掘提供了序列基础并为代谢产物的生物合成提供了数据支撑,为传统中药在临床应用乃至精准医学方面提供了新的思路.

摘要： 东亚钳蝎具有较高的药用价值,近年来人工养殖日趋升温,根据养殖经验,探索总结了适合安宁河谷平原东亚钳蝎玻璃瓶养殖、塑料盆养殖、养殖池养殖、室内蝎垛养殖、塑料大棚养殖、仿野生生态养殖等6种养殖方式,以期为东亚钳蝎人工养殖和助力该地区精准扶贫提供参考.

摘要： 利用野生东亚钳蝎毒腺构建cDNA文库,并通过序列比对确定了一条全新的Na^+通道长链毒素BmkNaTx12并克隆出其全长cDNA序列。序列比对显示BmkNaTx12的序列与墨西哥毒蝎的β-毒素Cn12具有较高的结构相似性,通过同源模型构建并选取打分最高的模型得到BmkNaTx12的预测结构,经分子动力学优化发现蛋白结构在300 ns趋于稳定,而蛋白20、35、52个氨基酸处的波动很可能由于这些氨基酸所处位置在loop区域导致。进一步构建了BmkNaTx12-Fc融合蛋白重组表达系统,通过Western blot技术确定重组蛋白最佳表达时间,并在HEK293细胞中成功表达出BmkNaTx12-Fc融合蛋白。经蛋白A亲和色谱纯化后获得的重组融合蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳及高效液相鉴定后纯度高达95%。此外,全细胞膜片钳实验结果显示:BmkNaTx12-Fc在1μmol/L浓度下能增大20%Nav1.7峰电流。研究结果为后续的生物学功能研究奠定了理论基础。

摘要： The research, applications and cognition of animal derived drugs were reviewed n recent decades. From this we can appreciate the development of application of animal derived drugs by physicians of past papers. Based on textual research of past papers, the therapeutic effects were excavated and the clinical application was extended. The mechanism of animal derived drugs from multi-channel, multi-angle, multi-target was explored by making the best of the modern biological technology. The application of animal derived drugs would make new progress and play a more outstanding role in treatment of fungal infections diseases.%回顾了近几十年来对动物源类药物治疗真菌感染类疾病的研究和应用，从中可以领略动物源类抗真菌药物的发展轨迹，预期通过研究历史回顾，发掘药效作用，扩大临床应用，并充分利用现代生物技术，多角度、多途径、多靶点探寻虫类药的作用机制，动物源类抗真菌药的应用会取得新的进展，将在人类疾病的防治中发挥更大的作用。

摘要： 以大肠杆菌、枯草杆菌及金黄色葡萄球菌3种细菌为指示菌,采用抑菌圈法通过体外抑菌观察,探讨了陕北产蝎毒液的体外抑菌效应,并与蝎体液诱导物和喹诺酮类抗菌药进行了比较.结果显示,蝎毒液对革兰氏阴性指示菌大肠杆菌的抑制效果不明显,对革兰氏阳性指示菌枯草杆菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑制,最大抑菌圈分别可达1.05+0.18 cm和0.87±0.09 cm,而经大肠杆菌诱导后的蝎体液对3种菌都有明显的抑制效果.这些结果表明,蝎毒液具有一定的选择性抗菌效应,大肠杆菌诱导后的蝎体液也有抗菌效应,但选择性较弱.

摘要： 东亚钳蝎是一种药用价值和食用价值都很高的经济性动物,在我国已有1 100多年的入药历史,随着野生蝎子被列为国家保护动物,收购使用野生蝎子被列为违法行为,蝎子资源短缺,因此人工养殖东亚钳蝎已是大势所趋,辽西地区作为以农业为主要经济产业的地区,发展特种养殖,提升地方经济是一条有效的途径.文章针对辽西地区养殖东亚钳蝎的前景和养殖中的技术难点予以分析.

摘要： 采用单因子和正交试验对毕赤酵母重组菌产生东亚钳蝎毒素BmK AngM1的发酵过程进行优化,确定了最佳发酵条件:1.2%甲醇,0.6%酪蛋白水解物,初始pH6.0,3×接种量。在此培养条件下,BmK AngM1在毕赤酵母重组菌中的表达量可超过500mg/L,比对照提高了两倍以上.本研究为大规模发酵制备BmK AngM1奠定了基础,更好地满足了BmK AngM1的理论研究及新药开发的需要.

摘要： 目的:东亚钳蝎作为传统中药,镇痛功效显著.我们对东亚钳蝎蝎毒进行分离纯化和镇痛活性追踪,获得单组分镇痛活性多肽.对其进行结构解析,基因克隆,并应用原核表达技术进行功能表达.为镇痛的分子生物学机制研究和效果的进一步评价提供了足够样品.方法 利用现代分离纯化技术,从蝎毒中分离纯化出单组分镇痛活性多肽SAPⅢ;利用巢式PCR技术从蝎尾cDNA中克隆出SAPⅢ的基因;将其重组到本室构建的可溶性表达载体pSYPU上,在原核宿主BL21(DE3)中进行可溶性表达;通过一步亲合层析,从菌体总蛋白中纯化出重组SAPⅢ.用小鼠醋酸扭体法和小鼠热板法考查SAPⅢ的镇痛活性.结果 经过镇痛活性跟踪的5步层析过程,纯化出单组分镇痛活性多肽SAPⅢ;Edman降解法得到其N-端17个氨基酸序列,据此克隆出基因,重组并进行可溶性表达,表达产物占菌体总蛋白的25％以上.通过一步亲和层析,目的 蛋白纯度达到85％,每升菌体发酵液可得到4.0 mg产物.在小鼠醋酸扭体法和小鼠热板法实验中,给药剂量为5.0 mg/Kg时,疼痛抑制率达到60％.结论 我们发现并成功制备了镇痛活性肽SAPⅢ,为活性多肽的寻找和制备提供了一条思路.

摘要： 应用立体定位,核团内注射与电解损毁核团技术及微电极细胞外记录的方法,以猫丘脑后核内脏大神经诱发单位放电为内脏痛指标,观察向尾状核、中脑导水管周围灰质及杏仁内侧核内注入东亚钳蝎毒及在电解损毁3个核团前后PO内脏大神经诱发单位放电的变化.在损毁诸核之前刺激内脏大神经引起单位诱发放电.损毁诸核之后诱发放电减弱或消失,这与辽宁产东亚钳蝎毒注入诸核团中的作用相一致,表明蝎毒的作用部位与上述核团有关.

摘要： 东亚钳蝎（Buthus martensii Karsch, BmK）抗神经兴奋活性肽（anti-neuroexcitation peptide II precursor, ANEPII）是作用于钠离子通道的一种重要长链蝎毒。本文通过同源模 建的方法运用Modeller9v1软件构建BmK ANEPII 三维结构模型，运用Sybyl6.91软件包对初始模型进行分子力学和动力学优化，用Procheck对模建结构进行合理性验证，最终获得最优的同源模建三维结构。与同源性较高的蝎长链镇痛活性肽进行一级结构及空间结构比对，初步预测活性位点及活性区。位点主要包括：4对二硫键、保守的芳香族氨基酸及Site C 区。为进一步研究BmK ANEPII结与镇痛活性之间的关系提供理论支持。

摘要： 目的：建立蝎毒镇痛活性肽BmK AngM1在毕赤酵母中的高水平表达系统。方法：根据BmK AngM1的cDNA序列,结合毕赤酵母的密码子偏爱性,合成BmK AngM1基因。将BmK AngM1基因克隆到表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母,甲醇诱导表达。通过Ni2+螯和层析和HPLC建立重组蛋白rBmK AngM1的纯化方法。通过小鼠扭体镇痛实验模型对rBmK AngM1进行药理活性评价。采用单因子和正交试验对毕赤酵母重组菌产生rBmK AngM1的发酵过程进行优化,确定最佳发酵条件,并将重组菌从摇瓶培养放大到15 L发酵罐培养。结果：rBmK AngM1具有显著的镇痛活性。通过发酵罐培养,rBmKAngM1在毕赤酵母中的表达量可达2.5g·L-1。结论：本研究为大规模发酵制备BmK AngM1奠定了基础,可更好地满足BmK AngM1的理论研究及新药开发的需要。

摘要： 目的：建立蝎毒镇痛活性肽BmK AngM1在毕赤酵母中的高水平表达系统。方法：根据BmK AngM1的cDNA序列,结合毕赤酵母的密码子偏爱性,合成BmK AngM1基因。将BmK AngM1基因克隆到表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母,甲醇诱导表达。通过Ni2+螯和层析和HPLC建立重组蛋白rBmK AngM1的纯化方法。通过小鼠扭体镇痛实验模型对rBmK AngM1进行药理活性评价。采用单因子和正交试验对毕赤酵母重组菌产生rBmK AngM1的发酵过程进行优化,确定最佳发酵条件,并将重组菌从摇瓶培养放大到15 L发酵罐培养。结果：rBmK AngM1具有显著的镇痛活性。通过发酵罐培养,rBmKAngM1在毕赤酵母中的表达量可达2.5g·L-1。结论：本研究为大规模发酵制备BmK AngM1奠定了基础,可更好地满足BmK AngM1的理论研究及新药开发的需要。

摘要： 目的：建立蝎毒镇痛活性肽BmK AngM1在毕赤酵母中的高水平表达系统。方法：根据BmK AngM1的cDNA序列,结合毕赤酵母的密码子偏爱性,合成BmK AngM1基因。将BmK AngM1基因克隆到表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母,甲醇诱导表达。通过Ni2+螯和层析和HPLC建立重组蛋白rBmK AngM1的纯化方法。通过小鼠扭体镇痛实验模型对rBmK AngM1进行药理活性评价。采用单因子和正交试验对毕赤酵母重组菌产生rBmK AngM1的发酵过程进行优化,确定最佳发酵条件,并将重组菌从摇瓶培养放大到15 L发酵罐培养。结果：rBmK AngM1具有显著的镇痛活性。通过发酵罐培养,rBmKAngM1在毕赤酵母中的表达量可达2.5g·L-1。结论：本研究为大规模发酵制备BmK AngM1奠定了基础,可更好地满足BmK AngM1的理论研究及新药开发的需要。

摘要： 目的：建立蝎毒镇痛活性肽BmK AngM1在毕赤酵母中的高水平表达系统。方法：根据BmK AngM1的cDNA序列,结合毕赤酵母的密码子偏爱性,合成BmK AngM1基因。将BmK AngM1基因克隆到表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母,甲醇诱导表达。通过Ni2+螯和层析和HPLC建立重组蛋白rBmK AngM1的纯化方法。通过小鼠扭体镇痛实验模型对rBmK AngM1进行药理活性评价。采用单因子和正交试验对毕赤酵母重组菌产生rBmK AngM1的发酵过程进行优化,确定最佳发酵条件,并将重组菌从摇瓶培养放大到15 L发酵罐培养。结果：rBmK AngM1具有显著的镇痛活性。通过发酵罐培养,rBmKAngM1在毕赤酵母中的表达量可达2.5g·L-1。结论：本研究为大规模发酵制备BmK AngM1奠定了基础,可更好地满足BmK AngM1的理论研究及新药开发的需要。

摘要： 目的：建立蝎毒镇痛活性肽BmK AngM1在毕赤酵母中的高水平表达系统。方法：根据BmK AngM1的cDNA序列,结合毕赤酵母的密码子偏爱性,合成BmK AngM1基因。将BmK AngM1基因克隆到表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母,甲醇诱导表达。通过Ni2+螯和层析和HPLC建立重组蛋白rBmK AngM1的纯化方法。通过小鼠扭体镇痛实验模型对rBmK AngM1进行药理活性评价。采用单因子和正交试验对毕赤酵母重组菌产生rBmK AngM1的发酵过程进行优化,确定最佳发酵条件,并将重组菌从摇瓶培养放大到15 L发酵罐培养。结果：rBmK AngM1具有显著的镇痛活性。通过发酵罐培养,rBmKAngM1在毕赤酵母中的表达量可达2.5g·L-1。结论：本研究为大规模发酵制备BmK AngM1奠定了基础,可更好地满足BmK AngM1的理论研究及新药开发的需要。

摘要： 本课题组从蝎毒中经离子交换凝胶柱梯度洗脱得到蝎毒抗癌多肽(APBMV),药理实验研究结果表明,其对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用.为研究一种灵敏、可靠、实用的检测法,作为蝎毒抗癌多肽(APBMV)的含量测定方法,本文采用胶束毛细管电泳法(MECC),运行缓冲液为75mmol/LSDS,50mmol/LNaH2PO4为在加入0.2％peo3000,运行电压10ky,柱温25°C,检测波长210nm,进样8kv,6s.测定蝎毒抗癌多肽(APBMV),方法稳定,简便,有实用价值.

摘要： 本发明公开了重组东亚钳蝎毒素多肽Makatoxin‑3及其突变体的制备方法，以及这些多肽的用途。本发明首次构建了MBP‑Makatoxin‑3及其突变体融合蛋白表达系统，在pMBP系统中可溶性表达得到大大提高，并得到有高度生物学活性的重组东亚钳蝎毒素多肽Makatoxin‑3及其突变体，利用该技术生产的重组东亚钳蝎毒素多肽Makatoxin‑3具有广泛的生物学活性，对小鼠的多种疼痛模型具有很好的镇痛效果，使用该种Makatoxin‑3突变体能够有效克服天然Makatoxin‑3的致痛作用，并保留其镇痛活性，对于开发基于蝎毒多肽的新型镇痛药物具有重要的指导意义。

摘要： 本发明涉及一种抗中国东亚钳蝎蝎毒F(ab’)2抗体制备及其使用方法，本发明的抗体与山西产BMK蝎毒在2:1(M:M)时可保护小鼠100％存活；与辽宁产BMK蝎毒在0.5:1(M:M)时可保护小鼠100％存活；与山东和河南产BMK蝎毒在1:1(M:M)时可保护小鼠100％存活；免疫扩散测定结果表明与各地产蝎毒质量比在0.4:1时出现清晰免疫沉淀线；本发明以东亚钳蝎蝎毒免疫马获得免疫血浆，经盐析制备IgG再酶解、离子交换柱纯化后得到高纯度的F(ab′)2活性片段。

摘要： 本发明公开了一种养殖东亚钳蝎的人工复合饲料，按照重量百分比，包括肉泥30%，麸皮25%，食糖1-42%，牛奶1-42%，青菜泥1-42%和复合维生素1-2.5%，以上组分质量百分比之和为100%。本发明养殖东亚钳蝎的人工复合饲料，富含多种营养成分，与黄粉虫搭配饲养东亚钳蝎，幼蝎和青年蝎体重增加，死亡率下降，母蝎产仔量显著增加，而且病害大大降低。

摘要： 一种养殖东亚钳蝎装置，包括养蝎厂房和紧靠养蝎厂房外设置的温棚，温棚内设有调控室，养蝎厂房内设有多个分层分盘式蝎房，分层分盘式蝎房包括收集区和设置在收集区上面的养殖区，收集区包括底座和设置在底座上的收集斗，养殖区包括周围设有木质围板的投食板，投食板上面设有木质壁，木质壁内设有竖立的蛋托，木质壁底部分别设有出入通道和残渣清除口。本发明养殖东亚钳蝎装置利用温棚来调节养蝎厂房的气候，温棚中种植的植物为养蝎厂房提供适宜的生态环境；温棚中可种植经济作物，充分利用能源，降低养蝎成本；分层分盘式蝎房整体为木质结构，通过在木质壁内设置多层蛋托，增加了东亚钳蝎的活动区域，提高了养蝎效率。

摘要： 本发明公开从东亚钳蝎蝎毒中分离的新结构多肽，并对其G-蛋白偶联受体(GPCR)活性进行测定。应用RPLC-HILIC二维液相色谱联用方法从该毒素中纯化分离出一个由8个氨基酸组成的多肽BmK-YA，质谱法测得该肽的序列为Tyr-Gly-Gly-Tyr-Met-Asn-Pro-Ala-amide，分子量为870.3088Da，并用钙离子测定法测定了该多肽的GPCR活性。根据其序列组成，对此活性多肽进行了结构改造，合成了另一活性多肽Phe4-BmK-YA，序列为Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Asn-Pro-Ala-amide。

摘要： 本发明公开了重组东亚钳蝎毒素多肽Makatoxin‑3及其突变体的制备方法，以及这些多肽的用途。本发明首次构建了MBP‑Makatoxin‑3及其突变体融合蛋白表达系统，在pMBP系统中可溶性表达得到大大提高，并得到有高度生物学活性的重组东亚钳蝎毒素多肽Makatoxin‑3及其突变体，利用该技术生产的重组东亚钳蝎毒素多肽Makatoxin‑3具有广泛的生物学活性，对小鼠的多种疼痛模型具有很好的镇痛效果，使用该种Makatoxin‑3突变体能够有效克服天然Makatoxin‑3的致痛作用，并保留其镇痛活性，对于开发基于蝎毒多肽的新型镇痛药物具有重要的指导意义。

摘要： 本发明涉及一种抗中国东亚钳蝎蝎毒F(ab’)2抗体制备及其使用方法，本发明的抗体与山西产BMK蝎毒在2:1(M:M)时可保护小鼠100％存活；与辽宁产BMK蝎毒在0.5:1(M:M)时可保护小鼠100％存活；与山东和河南产BMK蝎毒在1:1(M:M)时可保护小鼠100％存活；免疫扩散测定结果表明与各地产蝎毒质量比在0.4:1时出现清晰免疫沉淀线；本发明以东亚钳蝎蝎毒免疫马获得免疫血浆，经盐析制备IgG再酶解、离子交换柱纯化后得到高纯度的F(ab′)2活性片段。

摘要： 一种养殖东亚钳蝎装置，包括养蝎厂房和紧靠养蝎厂房外设置的温棚，温棚内设有调控室，养蝎厂房内设有多个分层分盘式蝎房，分层分盘式蝎房包括收集区和设置在收集区上面的养殖区，收集区包括底座和设置在底座上的收集斗，养殖区包括周围设有木质围板的投食板，投食板上面设有木质壁，木质壁内设有竖立的蛋托，木质壁底部分别设有出入通道和残渣清除口。本发明养殖东亚钳蝎装置利用温棚来调节养蝎厂房的气候，温棚中种植的植物为养蝎厂房提供适宜的生态环境；温棚中可种植经济作物，充分利用能源，降低养蝎成本；分层分盘式蝎房整体为木质结构，通过在木质壁内设置多层蛋托，增加了东亚钳蝎的活动区域，提高了养蝎效率。

摘要： 本发明公开了一种养殖东亚钳蝎的人工复合饲料，按照重量百分比，包括肉泥30%，麸皮25%，食糖1-42%，牛奶1-42%，青菜泥1-42%和复合维生素1-2.5%，以上组分质量百分比之和为100%。本发明养殖东亚钳蝎的人工复合饲料，富含多种营养成分，与黄粉虫搭配饲养东亚钳蝎，幼蝎和青年蝎体重增加，死亡率下降，母蝎产仔量显著增加，而且病害大大降低。

摘要： 本发明公布从东亚钳蝎蝎毒中分离的新结构多肽，并对其G-蛋白偶联受体(GPCR)活性进行测定。应用RPLC-HILIC二维液相色谱联用方法从该毒素中纯化分离出一个由8个氨基酸组成的多肽BmK-YA，质谱法测得该肽的序列为Tyr-Gly-Gly-Tyr-Met-Asn-Pro-Ala-amide，分子量为870.3088Da，并用钙离子测定法测定了该多肽的GPCR活性。根据其序列组成，对此活性多肽进行了结构改造，合成了另一活性多肽Phe4-BmK-YA，序列为Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Asn-Pro-Ala-amide。