毒力试验

摘要： 为获得一株可开发兽药或饲料添加剂的嗜酸乳杆菌菌株,试验采用仔猪新鲜粪便,从菌落形态、菌体显微形态、革兰氏染色着手,分离、纯化菌种。通过生理生化特性和16SrDNA基因序列分析鉴定菌种。采用K-B法,测定菌株对抗生素的敏感性;并对该菌株的毒力进行了测试。结果显示分离鉴定确认的嗜酸乳杆菌,命名为La-0231菌株。其对30种抗生素的敏感性测定结果,对22种抗生素敏感,对5种抗生素中度敏感,对3种抗生素不敏感。毒力试验测试结果说明,其培养物对雄性和雌性小鼠体重无影响;以0.02mL/g体重剂量活菌培养物(原液和浓缩液),给小鼠灌胃,未见受试小鼠有毒性反应或死亡情况。嗜酸乳杆菌La-0231菌株对动物安全,是一株有待开发利用的猪源嗜酸乳杆菌。

摘要： 为了扩大油桐尺蛾核型多角体病毒(Buzura suppressaria nucleopolyhedrovirus,BsNPV)宿主域和实现规模化生产,将其与家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)共同侵染油桐尺蛾幼虫,虫体死亡后收集并纯化获得的病毒(P1)再侵染家蚕,待家蚕死亡后收集并纯化获得的病毒(P2)再侵染油桐尺蛾幼虫,虫体死亡后收集并纯化获得病毒(P3),以此获得能感染油桐尺蛾和家蚕的自然重组病毒新株系,并对该株病毒进行超微结构鉴定和毒力测定(LT50).结果表明,第1代(P1)和第3代(P3)重组病毒的超微形态和大小接近于亲本BsNPV,第2代(P2)重组病毒则与亲本BmNPV更接近,其大小介于亲本BmNPV与P1、P3之间.P3侵染油桐尺蛾幼虫的LT50比亲本BsNPV提前1.79 d.因此,本试验获得的重组病毒对油桐尺蛾的杀虫活性增强.

摘要： 昆明市某公园,1头亚洲象出现排便次数减少、粪便带有鲜血、四肢发抖、体温升高、触腹部坚实等症状.为找准大象病因,本实验采集该大象粪便,在云南省动物疫病预防控制中心进行试验,通过细菌分离培养、革兰氏染色镜检、选择鉴别培养基进行鉴别培养、生化试验和PCR扩增及产物测序等方法对其粪便细菌进行分离鉴定,实验结果表明:粪便中有大肠杆菌O83∶H1、大肠杆菌O104∶H4和产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)等多种条件致病菌;并对其不太常见的产酸克雷伯菌进行药敏试验,该细菌对氧氟沙星、头孢曲松、头孢赛肟钠、环丙沙星、卡那霉素、磺胺异亚唑等极度敏感;对阿莫西林、多粘菌素B等高度敏感;对万古霉素等中度敏感;对甲氧嘧啶耐药.产酸克雷伯菌的动物回归试验研究结果表明:接种过菌液的小鼠表现出腹泻和食欲下降等临床症状,严重的发生死亡,解剖症状主要是肝脏部分坏死、肠道充血肿胀、肺脏有出血点,证明其对小鼠易感且具有较强的致病性,产酸克雷伯菌最小致死量(MLD)为2.5×1012 cfu/mL;半数致死量为5×1013 cfu/mL.本次研究旨在加强对产酸克雷伯菌生理生化特性及致病性的了解,为临床诊断提供可靠的依据和有效的治疗方法.

摘要： 昆明市某公园,1头亚洲象出现排便次数减少、粪便带有鲜血、四肢发抖、体温升高、触腹部坚实等症状。为找准大象病因,本实验采集该大象粪便,在云南省动物疫病预防控制中心进行试验,通过细菌分离培养、革兰氏染色镜检、选择鉴别培养基进行鉴别培养、生化试验和PCR扩增及产物测序等方法对其粪便细菌进行分离鉴定,实验结果表明:粪便中有大肠杆菌O83∶H1、大肠杆菌O104∶H4和产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)等多种条件致病菌;并对其不太常见的产酸克雷伯菌进行药敏试验,该细菌对氧氟沙星、头孢曲松、头孢赛肟钠、环丙沙星、卡那霉素、磺胺异亚唑等极度敏感;对阿莫西林、多粘菌素B等高度敏感;对万古霉素等中度敏感;对甲氧嘧啶耐药。产酸克雷伯菌的动物回归试验研究结果表明:接种过菌液的小鼠表现出腹泻和食欲下降等临床症状,严重的发生死亡,解剖症状主要是肝脏部分坏死、肠道充血肿胀、肺脏有出血点,证明其对小鼠易感且具有较强的致病性,产酸克雷伯菌最小致死量(MLD)为2.5×10 12 cfu/mL;半数致死量为5×10 13 cfu/mL。本次研究旨在加强对产酸克雷伯菌生理生化特性及致病性的了解,为临床诊断提供可靠的依据和有效的治疗方法。

摘要： 为筛选能用于猪流行性腹泻病毒(PEDV)疫苗研发的流行毒株,收集PEDV阳性病料,以Vero细胞进行病毒分离试验,并对分离毒株进行外源病毒检测、病毒培养特性研究、仔猪毒力试验及免疫效力试验等.9份PEDV阳性病料共分离到3株病毒,分别命名为PEDV-SC12、PEDV-JS12、PEDV-JX12.其中PEDV-SC12株存在支原体污染;PEDV-JS12株与PEDV-JX12株均能被PEDV特异性阳性血清中和;PEDV-JS12株能在Vero细胞上增殖并产生细胞病变,但适应细胞45代以后病毒培养效价仍然偏低;PEDV-JX12滴度能维持在106.0TCID50/mL以上.PEDV-JX12株毒力试验显示,该分离株能够通过人工感染复制出腹泻病例,并能从发病动物体内检测到感染的病毒.免疫攻毒保护试验显示,以PEDV-JX12株制备的灭活疫苗免疫母猪,对所产仔猪攻毒后免疫组6.25％(1/16)发病,对照组100％(8/8)发病.说明PEDV-JX12株能够适应细胞培养,免疫接种母猪能给仔猪提供有效保护,可以用于PEDV流行毒株的疫苗研发.%In order to isolate one porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) epidemic strain for vaccine research,the samples infected with PEDV were collected from different provinces of China,viruses were isolated from Vero cells,and went through SN test,RT-PCR and the characteristics of virus culture.3 strains of virus were isolated from 9 PEDV positive samples,named as PEDV-SC12,PEDV-JS12,and PEDV-JX12.The PEDV-SC12 strain was contaminated with mycoplasma.Both PEDV-JS12 and PEDV-JX12 strains can be neutralized by PEDV positive serum,but after being cultured for 45 generations,PEDV-JS12's titer is much lower than PEDV-JX12's.The virulence of PEDV-JX12 was tested by challenging piglets,and diarrhea can be observed in the infected piglets.Sows immunized with PEDV-JX12 inactivated vaccine,1/16 can be observed with diarrhea in the immune group,while 8/8 in the control group.The isolated PEDV-JX12 strain can be used as epidemic strain for PEDV vaccine research.

摘要： 小鼠是研究新孢子虫的动物模型.通过小鼠毒力试验,检测3株新孢子虫(Nc-1,Nc-LIV和Nc-BJ)对BALB/c小鼠的致病力差异;同时研究了低剂量Nc-LIV株(1×106)感染后,新孢子虫在小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑和后肢肌肉中的分布情况及其在血清中抗体的动态变化规律.结果显示,Nc-LIV对BALB/c小鼠的毒力最强,Nc-BJ其次,Nc-1最弱.小鼠血清中新孢子虫抗体在感染后4d出现至第32天达到峰值.感染后第8天在脑组织中可检测到新孢子虫特异性基因Nc-5,在第32天达到峰值后下降;其他组织中则分布很少.通过观察新孢子虫Nc-LIV在小鼠体内各器官组织动态分布的规律,为进一步建立小鼠感染新孢子虫的动物模型,研究新孢子虫病奠定了基础.

摘要： 采用生长速率法,对毛竹菱斑病的5种病原真菌进行了室内毒力试验,结果显示,福美双和农抗120对该病的病原菌无明显抑制效果,多菌灵和甲基立枯灵对尖孢镰刀菌、甘蔗节菱孢菌、赤霉病菌和炭角菌属菌均有较好的抑制效果,而噁霉灵对链格孢菌具有中等强度的抑制效果.

摘要： 近年来,砀山酥梨受到严重的黑点病为害,生产上经济损失惨重.为了准确鉴定该致病菌的种类,从不同形态特征的病斑上分离培养获得纯化菌种,运用传统的真菌形态学和致病性鉴定方法,初步确定其为炭疽菌属(Colletotrichum sp.)胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides).采用24种杀菌剂对炭疽病病原菌进行药剂毒力试验,结果表明,戊唑醇430g/L悬浮剂4000倍液、丙环唑250g/L浮油1 000倍液、喹啉铜33.5％悬浮剂2000倍液、溴菌腈25％浮油3 000倍液、苯醚甲环唑10％散粒剂7000倍液、咪鲜胺锰盐50％粉剂1 200倍液、代森锰锌70％粉剂1200倍液等对菌丝生长的抑制效果较强;代森锰锌70％粉剂、丙环唑250g/L浮油、33.5％喹啉铜悬浮剂、溴菌腈25％浮油、代森联70％水分散粒剂、氯溴异氰尿酸50％水溶性粉剂、福美双、甲基托布津50％粉剂对梨炭疽病孢子的萌发具有很强的抑制作用.

摘要： 在昆明市云南民族村的一只亚洲象出现排便次数减少并且粪便带有鲜血;四肢发抖;体温升高;触腹部坚实等症状.对该大象的粪便采样后,在云南省动物疫病预防控制控中心进行试验,通过细菌分离培养、革兰氏染色镜检、选择鉴别培养基进行鉴别培养、生化试验和PCR扩增及产物测序等方法,鉴定出粪便中存在有大肠杆菌O83∶H1、大肠杆菌O104∶H4和产酸克雷伯菌(K.oxytoca),并对其中具有致病性的产酸克雷伯菌进行药敏试验,发现其对氧氟沙星、头孢曲松、头孢赛肟钠、环丙沙星、卡那霉素、磺胺异亚唑等极度敏感;对阿莫西林、多粘菌素B等高度敏感;对万古霉素等中度敏感;对甲氧嘧啶耐药.对产酸克雷伯菌的致病性试验研究发现,接种过菌液的小鼠表现出不同程度的临床症状和死亡现象,说明它对小鼠易感且具有较强的致病性,毒力试验结果表明,产酸克雷伯菌最小致死量(MLD)为2.5×1012cfu/ml;半数致死量为5×1013cfu/ml.本次研究意在加强对产酸克雷伯菌的了解,也为临床诊断提供可靠的依据和有效的治疗方法.

摘要： 为探讨0.005％溴敌隆饵剂与0.005％溴鼠灵饵剂对大白鼠的适口性和毒力,将遗传背景和来源相同的大白鼠分为溴敌隆药物组和溴鼠灵药物组,溴敌隆药物组给予溴敌隆毒饵和基饵,供大白鼠选择取食;溴鼠灵药物组则给予溴鼠灵毒饵和基饵,供大白鼠选择取食.试验过程中逐日测定毒饵和基饵的消耗量,并观察大白鼠活动与死亡情况.结果发现:溴敌隆药物组首日毒饵消耗量明显多于溴鼠灵药物组,0.005％溴敌隆饵剂摄食系数1.79,0.005％溴鼠灵饵剂摄食系数0.66.溴敌隆药物组第2天大白鼠开始死亡,第4、5天达到死亡高峰期,至第5天所有受试大白鼠全部死亡.溴鼠灵药物组第2天大白鼠开始死亡,每天死亡0～2只,其中第7天无死亡记录,第6、8天均死亡2只,其他时间死亡1只,至第10天,所有受试大白鼠全部死亡.这些结果表明,0.005％溴敌隆饵剂对大白鼠的适口性和毒力都优于0.005％溴鼠灵饵剂.

摘要： 新生仔猪红痢(大肠杆菌病)和黄痢(产气荚膜梭菌病)是新生仔猪最常见的两种肠道传染病，主要引起出生后1周内的新生仔猪腹泻，由于发病急、死亡快，给养猪业造成很大的经济损失。本研究对猪大肠杆菌和C型产气荚膜梭菌的毒力开展了研究，由于疫苗的效力检验中涉及用家兔替代本动物做效力检验，因此也进行了C型产气荚膜梭菌毒素对家兔的毒力试验。研究结果表明，150×108CFU的大肠杆菌K88、K99、987P菌株均可引起仔猪100%发病。C型产气荚膜梭菌可引发仔猪红痢，该型菌的主要致病毒素是α和β外毒素，对仔猪具有非常强的致死性，在C型产气荚膜梭菌感染治病的过程中，外毒素其中非常关键的作用。C型产气荚膜梭菌毒素引起初生仔猪100%死亡的剂量是75个小鼠MLD,80个小鼠MLD可引起家兔100%死亡。

摘要： 为进一步研究引起蛋鸡产蛋下降的病原菌致病机理，从患有输卵管炎的蛋鸡输卵管中分离到一株革兰氏阳性球菌，通过培养形态观察和生化试验进行初步鉴定，采用PCR扩增其16S rRNA基因序列并测序，测序结果与GenBank中登录的已知序列进行比对分析，发现该菌与猪葡萄球菌(Staphylococcushyicus)在进化关系上的距离最近，同源性达到99.5％以上，表明该分离株是一株猪葡萄球菌。通过小鼠毒力试验和蛋鸡回归试验对该分离株的致病力进行了初步研究。

摘要： 为了研究开发新型布鲁氏菌安全、具有诊断标记的基因缺失疫苗，本文利用非标记的基因同源重组技术对羊布鲁氏菌wecA基因进行删除，获得羊布鲁氏菌缺失菌株BDwecA。通过吖啶黄凝集试验和结晶紫染色试验鉴定该基因缺失菌株BDwecA为粗糙型菌株;进一步小鼠体内毒力试验发现相对于母本菌株16M，BDwecA在小鼠体内的存活时间明显缩短、毒力较低;而与现行疫苗株M5相比，则在小鼠接种后4-8周内增殖能力稍强，第8周后则明显低于M5，第16周则降低到检测限以下，但BDwecA接种小鼠不同时间的血清样品检测结果显示，该突变菌株不产生针对LPS的抗体，能够与自然野生型菌株感染进行鉴别。进一步小鼠体内免疫保护试验表明BDwecA在第12周、16周和20周三次攻毒试验中的免疫保护作用明显低于现有疫苗M5。从本研究结果可以看出，羊布鲁氏菌缺失菌株BDwecA毒力下降，具有粗糙型表型，在小鼠体内的免疫保护力较差，需要进一步通过本动物评价其作为疫苗候选菌株的可能性。

摘要： 采用滤纸接触法于室内测定了6种农药对异色瓢虫幼虫和成虫的毒力。6种药剂的效果差别显著,按毒力由大到小依次为虫螨灵＞世绿＞吡虫啉＞爱禾＞绿园＞辟蚜雾。其中辟蚜雾和绿园对异色瓢虫毒性小,选择性高,而爱禾和吡虫啉对异色瓢虫也有一定的选择性,这4种农药均可在蚜虫防治中发挥有效作用。

摘要： 牛支原体是一种主要引起任何月龄肉牛和奶牛呼吸系统疾病和关节炎的重要病原,给世界各国的肉牛和奶牛养殖业造成了巨大的经济损失.目前尚无有效的方法能够预防该病.本实验室前期通过体外传代成功已获得牛支原体外致弱株P150和P180.本研究通过动物试验对其进行保护效力评价,通过临床症状的观察,抗体和细胞因子检测,确定两者都对牛支原体有较好的保护效力,且P150更适合作为牛支原体弱毒疫苗候选株.

摘要： 牛支原体是一种主要引起任何月龄肉牛和奶牛呼吸系统疾病和关节炎的重要病原,给世界各国的肉牛和奶牛养殖业造成了巨大的经济损失.目前尚无有效的方法能够预防该病.本实验室前期通过体外传代成功已获得牛支原体外致弱株P150和P180.本研究通过动物试验对其进行保护效力评价,通过临床症状的观察,抗体和细胞因子检测,确定两者都对牛支原体有较好的保护效力,且P150更适合作为牛支原体弱毒疫苗候选株.

摘要： 牛支原体是一种主要引起任何月龄肉牛和奶牛呼吸系统疾病和关节炎的重要病原,给世界各国的肉牛和奶牛养殖业造成了巨大的经济损失.目前尚无有效的方法能够预防该病.本实验室前期通过体外传代成功已获得牛支原体外致弱株P150和P180.本研究通过动物试验对其进行保护效力评价,通过临床症状的观察,抗体和细胞因子检测,确定两者都对牛支原体有较好的保护效力,且P150更适合作为牛支原体弱毒疫苗候选株.

摘要： 本发明公开了一种与布鲁氏菌毒力相关的基因及其在布鲁氏菌毒力评价以及制备弱毒布鲁氏菌中的应用。本发明利用同源重组的方法，以卡那霉素基因替换布鲁氏菌M28核糖体基因L31，构建了布鲁氏菌L31基因缺失株M28ΔL31。利用巨噬细胞RAW264.7和Babl/c小鼠模型评价了布鲁氏菌L31基因对布鲁氏菌M28毒力的影响。结果显示：L31基因缺失后并不会对M28的生长产生影响，但能显著下调强毒株M28在鼠巨噬细胞系RAW264.7和小鼠脾脏内复制生存的能力，M28ΔL31中将L31基因回补后其毒力能够恢复到野生株水平，证实该基因是布鲁氏菌M28的毒力相关基因。本发明的提出预示该毒力基因可能用于布鲁氏菌新疫苗的研发，具有潜在的应用价值。

摘要： 本发明公开了五种单剂农药对桃粉蚜毒力测定及取食刺吸电位记录试验方法，具体包括以下步骤：步骤一：对不同的药剂对成虫桃粉蚜的室内毒力进行测定；步骤二：进行复配药剂增效配比；步骤三：利用刺吸电位仪进行数据记录。该发明的技术效果为采用的化学药剂为吡虫啉、高效氯氟氰菊酯、噻虫嗪、氟啶虫酰胺、氟啶虫胺腈五种单剂和其1：1、1：5、5：1、1：10、10：1的复配，从而得出药剂对桃粉蚜的防治效果最佳和通过借助刺吸式电位仪(EPG)，进行数据记录分析，从而得到桃粉蚜的取食规律以及不同药剂的混配对其影响大小。

摘要： 本发明涉及一种用于检测蜜蜂病原体毒力的装置及利用该装置检测病原体毒力的方法与应用，属于蜜蜂养殖技术领域。本发明提供的一种用于检测蜜蜂病原体毒力的装置，包括顶板1、侧板2、隔板3、背板4、前板5、底板6、饲喂孔7以及腔体8。本发明的装置可以评估接触方式对蜜蜂病毒毒力以及传播速度的影响。为后期蜜蜂病毒的检测提供依据。

摘要： 本发明公开了一种与布氏杆菌毒力相关的基因及其在布氏杆菌毒力评价及制备弱毒布氏杆菌中的应用。本发明首先利用蛋白结构域及3D结构预测鉴定到一种与布氏杆菌毒力相关的基因——abcS基因。利用RecA同源重组的方法，以卡那霉素抗性基因作为筛选标记替换abcS基因，构建了布氏杆菌abcS基因缺失株M28ΔabcS。荧光定量PCR试验表明，M28ΔabcS突变株中毒力因子四型分泌系统的表达严重下降。利用Balb/c小鼠持留感染模型评价了布氏杆菌abcS基因对布氏杆菌M28毒力的影响。结果显示：abcS基因缺失显著降低感染时脾脏的肿胀，同时严重影响细菌在小鼠脾脏内复制存活的能力，证实该基因是布氏杆菌M28的毒力相关基因。本发明的提出为布氏杆菌疫苗和药品的研发，提供了新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种与布鲁氏菌毒力相关的基因及其在布鲁氏菌毒力评价以及制备弱毒布鲁氏菌中的应用。本发明利用同源重组的方法，以卡那霉素基因替换布鲁氏菌M28核糖体基因L31，构建了布鲁氏菌L31基因缺失株M28ΔL31。利用巨噬细胞RAW264.7和Babl/c小鼠模型评价了布鲁氏菌L31基因对布鲁氏菌M28毒力的影响。结果显示：L31基因缺失后并不会对M28的生长产生影响，但能显著下调强毒株M28在鼠巨噬细胞系RAW264.7和小鼠脾脏内复制生存的能力，M28ΔL31中将L31基因回补后其毒力能够恢复到野生株水平，证实该基因是布鲁氏菌M28的毒力相关基因。本发明的提出预示该毒力基因可能用于布鲁氏菌新疫苗的研发，具有潜在的应用价值。

摘要： 本发明涉及基因工程领域，旨在提供一种基于新毒力基因改造的减毒单增李斯特菌构建方法及应用。该减毒单核细胞增多性李斯特菌是以单増李斯特菌野生株为背景，经敲除毒力相关基因Lmo0734后获得。本发明提供了含有该减毒单核细胞增多性李斯特菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明的单増李斯特菌的减毒株可用于活疫苗治疗载体或免疫佐剂；将Lmo0734基因从基因簇中敲除使该细菌毒力大大降低，在达到规定安全级别的同时，仍保留了非常好的免疫原性。由于是在李斯特菌基因组上对毒力相关基因进行改造，不含抗性质粒等生物标记，符合生物安全性。

摘要： 本发明提供一种高毒力蝗绿僵菌工程菌株及其构建方法，所述工程菌为蝗绿僵菌CQMa102敲除编码主要变应原Asp f2类蛋白的MaAL基因的工程菌株，MaAL为新发现的毒力基因，所敲除的MaAL基因被该基因的上游同源臂、标记基因以及其下游同源臂组成的重组基因所代替。经蝗虫点滴生测试验结果表明半致死时间较野生菌株（WT）提前1.53天，缩短了24.75%，且所述高毒力蝗绿僵菌工程菌株产孢量较野生型菌株提高了44%，有效降低了该菌株的生产成本。对进一步挖掘昆虫病原真菌侵染致病的分子机理以及增强菌株可用性十分重要，同时提供了一种新型的杀虫菌剂。

摘要： 本实用新型公开了一种用于杀虫剂毒力测定实验叶片保鲜装置，包括保鲜盒，保鲜盒内通过隔断分隔成多个保鲜室，每个保鲜室的一侧均设置有对应的营养液箱，保鲜室靠近对应的营养液箱的侧壁上均卡设有阻隔筒，且阻隔筒远离保鲜室的一端设置于营养液箱内，每个保鲜室的前后侧壁上部内侧均对称设置有凸台，前侧壁的凸台的上侧开设有横向通槽，透气网盖从横向通槽内插入保鲜室内，且端部横置于后侧壁上的凸台上，另一端至少部分设置于保鲜室外。本用于杀虫剂毒力测定实验叶片保鲜装置，可用于昆虫毒杀的对比试验，以及做营养液的保鲜性能的对比试验，功能性强，且实验过程中方便操作和观察。

摘要： 本发明提供了一种检测猴体神经毒力试验的方法，步骤如下：取给药后的猴体，在给药后第3天、第6天和/或第9天，分别对猴脑的横断位、矢状位及冠状位进行磁共振扫描，阅读图像，即可。本发明检测方法可以准确判断猴体神经毒力试验中，药物是否准确的注射到相应的颅脑位置，能够在试验早期发现药物注射的准确性，便于后期试验，节约成本。

摘要： 本实用新型公开了一种农药室内毒力试验配药装置，所述配药装置包括配药瓶、放置盘、配药架，配药瓶与放置盘、配药架可组合分离；所述配药瓶包括药瓶、搅拌装置，搅拌装置设置于药瓶内部，所述药瓶还具有一个与之匹配的药瓶盖；所述放置盘包括药盘、盘轴，盘轴位于药盘的中心，并在顶端设有移动柄；所述配药架包括卡盘、支撑轴、分液底座，所述分液底座下方设置分液盘，分液盘与分液底座可拆卸连接。本实用新型结构简单，操作便捷，提高了配药效率，避免了药液污染，提高了试验操作人员的安全。