核酸适体

摘要： DNA纳米技术在生物传感领域引起人们广泛的研究兴趣,现已构建多种二维和三维DNA功能纳米结构。滚环扩增(RCA)作为一种等温扩增技术,为DNA纳米材料的设计和自组装提供了新途径。该文通过RCA一锅法合成封装有辣根过氧化物酶(HRP)的DNA纳米花(HRP@DNFs),进一步基于双核酸适体识别构建光热生物传感器,用于肝细胞癌(HCCs)中循环肿瘤细胞(CTCs)的高灵敏、高特异性检测。当HRP包封到DNFs后,由于DNFs内部形成高度有序的氢键水环境,使得HRP的催化活性显著增强。为实现HCCs检测,在DNFs中设计了能够特异性识别HepG2 HCCs的核酸适体TLS11a作为信号放大标记物,同时制备了EpCAM核酸适体修饰的磁珠(EpCAM-MBs)作为载体捕捉HepG2细胞。当HepG2存在时,通过双核酸适体特异性识别形成MBs/HepG2/HRP@DNFs三明治结构。磁分离后,向体系中加入3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)和H2O2,HRP@DNFs催化TMB发生氧化。在808 nm激光照射下,氧化态TMB产生强的光热转换效应,从而实现对HepG2细胞的高灵敏、高特异性光热检测。该方法所建立的一锅法自组装DNA纳米花封装酶分子策略在癌症等重大疾病早期诊断中具有极大的应用潜力。

摘要： 癌症严重威胁人类的生命健康,癌症的精准治疗至今仍是亟须解决的重大医学难题。精准分子医学,可从分子水平上诊断和治疗肿瘤,为肿瘤诊疗提供新的策略。作为优异的靶向识别分子和药物递送载体,核酸适体及核酸适体偶联物为肿瘤的精准治疗提供了重要的分子工具,已成为肿瘤靶向治疗的前沿新兴领域。该文综述了核酸适体性质及筛选技术、核酸适体药物偶联物的构建及其在临床肿瘤靶向治疗中的应用,并对核酸适体药物在肿瘤精准分子医学中的发展前景进行展望,以期为新型分子靶向药物的开发及其在临床恶性肿瘤治疗中的应用提供新的思路。

摘要： 为探讨小分子核酸适体快速检测动物产品中腹泻性贝类毒素的可行性,研究基于冈田酸(Okadaic acid,OA)核酸适体,构建了特异性适体辅助识别体系平台。结果显示,当体系中靶标OA被释放后,导致可结合标记酶催化产生不同程度的颜色反应,可以用肉眼进行初步判断;通过波长扫描显示在450 nm波长呈现最大吸收峰,测定其吸光度值,可反映出溶液中的靶标浓度。该体系平台方法具有操作步骤简便、对检测硬件要求低等优点,可用于基层养殖现场快速初筛检测中的使用。

摘要： 高通量(SELEX)技术即指数富集的配体系统进化技术(HT-SELEX),利用该技术可以从DNA随机序列库中(含40核昔酸长DNA片段)筛选出特异性与靶物质高度亲和的核酸适体,是严健教授在瑞典学习期间建立起来的一种用作高通量定量分析DNA-蛋白质相互作用的方法,HT-SELEX技术为全面揭示丁香假单胞菌的调控网络提供了重要的基础。

摘要： 核酸适体作为一种新型分子识别元件,具有可体外合成、易修饰、稳定性好等优势,被认为是抗体的良好替代物。自玉米赤霉烯酮(ZEA)核酸适体被成功筛选以来,基于核酸适体与靶标的高特异性结合,构建了酶联适体间接竞争法检测玉米赤霉烯酮的新方法。ZEA与ZEA适体互补链DNA1竞争性结合酶标板上固定的ZEA适体,未结合的DNA1链被DNA2链捕获并标记辣根过氧化物酶,通过酶联显色反应实现对ZEA的可视化检测。优化了包被亲和素的质量浓度、封闭液、适体及互补链浓度等关键参数,并考察了酶联适体竞争法检测ZEA的灵敏度、特异性和实用性。结果表明:在0.5~100 ng/m L范围内,ZEA的质量浓度与反应体系的吸光度呈良好的线性关系(R2=0.995 9),检出限为0.44 ng/m L。该方法的特异性良好,对玉米和玉米油的检测与酶联免疫试剂盒测定的结果一致,具有简便、经济和高灵敏度的特点。

摘要： 核酸适体作为一种新型分子识别元件,具有可体外合成、易修饰、稳定性好等优势,被认为是抗体的良好替代物.自玉米赤霉烯酮(ZEA)核酸适体被成功筛选以来,基于核酸适体与靶标的高特异性结合,构建了酶联适体间接竞争法检测玉米赤霉烯酮的新方法.ZEA与ZEA适体互补链DNA1竞争性结合酶标板上固定的ZEA适体,未结合的DNA1链被DNA2链捕获并标记辣根过氧化物酶,通过酶联显色反应实现对ZEA的可视化检测.优化了包被亲和素的质量浓度、封闭液、适体及互补链浓度等关键参数,并考察了酶联适体竞争法检测ZEA的灵敏度、特异性和实用性.结果 表明:在0.5～ 100 ng/mL范围内,ZEA的质量浓度与反应体系的吸光度呈良好的线性关系(R2=0.995 9),检出限为0.44 ng/mL.该方法的特异性良好,对玉米和玉米油的检测与酶联免疫试剂盒测定的结果一致,具有简便、经济和高灵敏度的特点.

摘要： 恶性肿瘤作为全球重要的致死疾病,严重威胁人类健康与生命.实现肿瘤的早期发现和诊断,对肿瘤的治疗具有重要意义.核酸适体是采用SELEX技术进行特异性筛选的单链DNA或RNA分子,因具有高亲和力、无免疫原性、无毒性、易于合成和修饰、靶标广泛、分子量小等优势,在肿瘤的诊断和治疗中发挥了重大的作用.本文主要对核酸适体在常见恶性肿瘤的早期诊断和靶向治疗中的作用作一综述.

摘要： 核酸适体是一类特殊的寡核苷酸序列,由于其对目标物表现出优异的亲和性和选择性,在分子医学等领域得到了广泛应用.核酸适体作为重要前沿技术和应用成果,对其进行深入学习和研究,将对培养高素质人才、推动社会发展有着重要影响.在分析化学教学中以核酸适体为载体讨论前沿技术和应用成果对于满足国家和社会需求、培育学生家国意识和社会责任感、提升精神境界等方面有着重要作用,是分析化学教学改革的一项必要手段.本文针对核酸适体相关前沿学术和应用成果在化学教学中的重要思想教育作用进行了简要讨论.

摘要： 膜蛋白在细胞生命活动中发挥着重要作用,研究并调控细胞膜蛋白的结构和功能有助于阐明生命活动的基本规律,为新型药物研发和高效疾病诊治提供研究基础.核酸适体是一类特殊的寡核苷酸序列,因具有特异性识别靶标的能力而被广泛用于生物传感领域.将核酸适体与DNA纳米技术相结合,利用DNA分子可程序化设计、可功能化修饰等优势,发展核酸适体靶向的膜蛋白识别与功能调控方法可为研究膜蛋白相互作用提供有力工具.本文介绍了基于核酸适体靶向识别的DNA纳米技术在膜蛋白识别及细胞功能调控中的研究进展,并对核酸适体靶向的膜蛋白识别及功能调控领域面临的挑战进行了分析,对其应用前景进行了展望.

摘要： 以抗体-抗原免疫识别、核酸碱基互补配对识别以及核酸适体-配体识别这3种分子识别方式分类,综述了近几年基于分子识别的细菌检测研究工作进展,总结了细菌检测相关研究存在的一些挑战,并展望了该领域的发展前景.

摘要： 以核酸适体为探针，通过蔗糖酶对分离出的信号催化放大，制备出了纳米金适体传感器，利用便携式血糖仪作为检测仪器,可以方便、定量检测到多巴胺.采用修饰有巯基的DNA1作为固定元件,以蔗糖酶-DNA2为识别元件.二者通过碱基作用力连接.当加入多巴胺后,多巴胺与DNA1特异性结合,二者结合作用力大于碱基作用力,DNA1与DNA2之间的结构破坏,分离出蔗糖酶-DNA2的量和血糖信号强度呈正相关关系.实验结果表明:最优的实验温度为37°C,酶与蔗糖反应的最佳时间为30min;在多巴胺浓度为0.2-1mmol/L范围内,血糖仪信号强度和多巴胺浓度成线性关系,相关系数为0.9872.初步制备出的纳米适体传感器具有处理样品简单、检测速度快、用样量少等特点.

摘要： 本文建立了一种基于核酸适体-分子信标均相生物传感荧光检测腺苷的新方法.体系由腺苷适体,互补DNA和5′端标记荧光素,3′端标记猝灭剂的DNA发夹分子信号探针等三种DNA链组成.在无腺苷存在时,适体与互补DNA杂交,发夹探针不能被打开,体系的荧光猝灭.当有腺苷存在时,腺苷与适体结合,互补DNA与信号探针杂交,发夹打开,体系的荧光恢复,根据荧光恢复的强度可实现对腺苷的定量检测.方法检测限为500nmol/L.

摘要： 本文以肝癌甲胎蛋白异质体(AFP-L)为研究对象，研制了一种基于蛋白诱导 适体（Aptamer）片段连接技术的灵敏、特异性AFP-L 识别电化学生物传感器。 将AFP-L 核酸适体DNA 序列切成两条，其中一条作为捕获探针，通过5′端修饰的巯基，以Au-S 键固定在金电极表面；另一条作为检测探针，3′端修饰二茂铁 基团（Fc）。利用核酸适体与AFP-L 蛋白的特异性结合作用，连接两条切开的适 体序列在电极表面形成稳定的适配体复合物。目标物AFP-L 不存在时，检测探 针与捕获探针结合很弱，几乎没有电化学信号。当AFP-L 存在时，两条序列的 结合能力增强，在电极表面形成稳定的适配体夹心复合物，使检测探针捕获到电 极上，从而使Fc 基团紧靠电极表面，发生电化学氧化还原反应。通过测定电极 表面Fc的电流信号，实现对目标AFP-L 蛋白的检测。实验结果表明，在最佳条 件下，Fc的峰电流与AFP-L 蛋白在0.4~10 nM的浓度范围内呈良好的线性关系， 检测限达到（S/N=3）0.08 nM。本文以两条切开的适体DNA 探针做为目标分子 识别元件，具有更高的灵敏度和更低的背景电流。同时利用了信号放大的标记技 术，不仅操作简单，而且检测的选择性也得到了提高，有望用于实际样本中AFP-L的检测。鉴于该检测手段具有简洁，快速、灵敏、准确等优点，有也望将其推广 用于各类新型光学传感器的研制。

摘要： 建立了一种基于核酸适体分子高灵敏检测免疫球蛋白E(IgE)的荧光偏振分析法。实验考察了反应温度、孵育时间和缓冲体系等因素的影响。在最佳实验条件下，方法的线性范围为2.0～200.0ng/mL，检出限为0.46 ng/mL。将该方法应用于人血清中IgE含量分析，测定结果满意，有望应用于免疫球蛋白E的临床快速检测。

摘要： 发展了一种基于纳米金和经切割加工的核酸适体的钾离子传感策略。一条DNA链的一端标记荧光素，利用单链DNA和四面体结构DNA在纳米金表面吸附能力的差异和纳米金的超猝灭效应，实现对钾离子的比色和荧光双重检测。本方法简单、特异性好，不需要对纳米金标记或者对寡核苷酸进行双标记，可以检测到3.9μM的钾离子。

摘要： 报道了一种新型的夹心法检测可卡因电化学传感器。该传感器基于可卡因的核酸适体与其特异性结合的性质。可卡因的适体被巧妙地切割成两段寡核苷酸序列,并将其中一段末段修饰巯基通过金硫键组装在金电极表面,而另一段末段修饰荧光素。当可卡因存在时,这两段序列与可卡因特异性结合形成夹心结构,然后再加入抗荧光素标记的辣根过氧化物酶与荧光素特异结合,通过检测辣根过氧化物酶催化底物产生的氧化还原电流进行信号检测。通过该策略,我们对可卡因的检测限可达到10μmol/L以下。

摘要： 通常的生物环境分析过程需要繁琐的样品预处理、修饰和分离等步骤。近年来兴起的基于核酸适体和纳米材料相结合即适体功能化纳米材料的分析传感技术正逐渐成为分析生物大分子、有机小分子和金属离子等靶标物质的有力工具,其检测方法主要是比色法、荧光法和电化法等。本文提出了一种高灵敏度和高选择性的重金属汞离子(Hg2+)的表面增强拉曼散射(SERS)光谱检测1方法.整个过程只需简单功能化微流控芯片1,2混合、检测,几分钟即可得出结果,具有重要的应用潜力。

摘要： 本文研制了一种基于DNA核酸适体(aptamer)的荧光传感器,用于免疫球蛋白E(IgE)的检测。标记德克萨斯红的短链DNA(T—DNA)与部分IgE的aptamer序列互补配对,从而在绑定IgE后体系的荧光信号增强。另外一条标记了dabcyl猝灭基团的短链DNA(Q-DNA)与紧挨T-DNA结合位点的IgE aptamcr序列互补,以降低背景荧光。IgE能够被检测到的线性范围是9.2x10-11到3.7x10-8mol.L-1,检测下限是5.7x10-11mol.L-1。

摘要： 荧光偏振是一种较为简单的检测技术，在特定的环境中，荧光团的荧光偏振值与荧光分子的体积相关，分子体积越大，分子转动越慢，荧光偏振值越大。本研究基于纳米材料和核酸适体的独特性质，建立了一系列信号放大的高灵敏荧光偏振分析新方法：基于核酸适体构型转换触发纳米粒子信号放大的原理，利用三磷酸腺苷(ATP)作为模型分析物，构建了一种检测生物分子的荧光偏振适体传感器；基于AuNPs能够增强荧光偏振的原理，以EcoRI酶为模型分析物，发展了一种超灵敏检测核酸内切酶的荧光偏振生物传感器；基于多壁碳纳米管能够增强荧光偏振的原理，以DNA甲基转移酶为模型分析物，发展了一种超灵敏检测DNA甲基转移酶活性和抑制剂的荧光偏振生物传感器；基于核酸适体-目标自扩展复合物能够增强荧光偏振的原理，以血小板生长因子-BB(PDGF-BB)为模型分析物，发展了一种超灵敏检测PDGF-BB的荧光偏振生物传感器。

摘要： 指数式富集的配体系统进化(SELEX)技术是近年来发展起来的研究核酸结构、功能及进化的一种新的组合化学技术。利用以完整细胞为靶的SELEX技术，可以筛选到大鼠成骨细胞ROS1728的aptamers，此类aptamers对ROS1728有较高特异性和亲和力，对与成骨细胞具有一定同源性的大鼠骨肉瘤细胞没有明显亲和力。

摘要： 本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及核酸适体的保护片段及含有该保护片段的核酸适体。本发明提供了核酸适体的保护片段，并提供了含有该保护片段的核酸适体及其应用。在本发明中，核酸适体(aptamers)的末端经过ATP aptamer连接保护之后可以形成末端保护的核酸适体(MT‑aptamers)，MT‑aptamers可以在目标组织或器官中特异性地提高其生物稳定性，在正常的组织或者器官中可以被代谢掉。本发明通过实验证明，本发明提供的保护片段对多种适体都能起到提高稳定性的作用。

摘要： 本发明公开了一种可识别HCV E1E2蛋白的核酸适体，其为SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：5中任一序列所示的DNA片段，其衍生物为包括核苷酸取代后的RNA核酸适体、骨架改造后的衍生物、改造为肽核酸后的衍生物以及连接上放射性分子后的衍生物。该核酸适体的筛选方法包括：先制备带组氨酸标签的丙型肝炎病毒E1E2蛋白，再制备带组氨酸标签的pET200/D/LacZ蛋白；然后对蛋白进行固定，并设计随机核酸文库；最后进行核酸适体的筛选，筛选过程具体又包括DNA文库预处理、反筛、正筛及反复筛选等步骤，最后获得竞争能力强、序列长度得到优化的核酸适体。本发明的核酸适体及其衍生物可用于制备丙型肝炎病毒E1E2蛋白的检测试剂盒或诊断试剂，还可用于制备抑制丙型肝炎病毒感染肝细胞的试剂。

摘要： 本发明公开了一种可识别HCVNS5A蛋白的核酸适体，其为SEQIDNO：5序列所示的DNA片段，其衍生物为包括核苷酸取代后的RNA核酸适体、骨架改造后的衍生物、改造为肽核酸后的衍生物以及连接上放射性分子后的衍生物。该核酸适体的筛选方法包括：先制备带组氨酸标签的丙型肝炎病毒NS5A蛋白，再制备带组氨酸标签的pET200/D/LacZ蛋白；然后对蛋白进行固定，并设计随机核酸文库；最后进行核酸适体的筛选，筛选过程具体又包括DNA文库预处理、反筛、正筛及反复筛选等步骤，最后获得竞争能力强、序列长度得到优化的核酸适体。本发明的核酸适体及其衍生物可用于制备丙型肝炎病毒NS5A蛋白的检测试剂盒或诊断试剂，还可用于制备抑制丙型肝炎病毒在肝细胞内复制的试剂。

摘要： 本发明公开了一种SARS‑CoV‑2 RBD中和核酸适体的筛选方法及核酸适体，其包括如下序列中的至少一种：SEQ ID NO:1‑SEQ ID NO:15。本发明的核酸适体更容易与RBD蛋白结合并“击垮”RBD蛋白与受体ACE2之间的相互作用，其对SARS‑CoV‑2具有很强的中和效应以及高度的结合亲和力，能够有效地抑制病毒对细胞的侵染。由于本发明的核酸适体特有的生产周期短、生产成本低、免疫原性低等优点，使其在检测、预防和治疗新冠病毒方面很好地节约了时间成本，对于目前新冠病毒的防治具有重要意义，并且在临床上亦有很好的应用前景。

摘要： 本发明属于生物传感器技术领域，特别是指一种核酸适体及调节核酸适体信号强度的方法和应用。利用金属增强荧光效应以及双链DNA捕获银离子更强的优点，设计了一种高灵敏的荧光增强型适体传感器来检测银离子。将含有不同碱基A的核酸适体修饰在纳米金的表面，并加入标记有荧光基团的互补链，构成用于检测银离子浓度的工作溶液。实际实验结果表明当碱基A的长度为8nm，银离子浓度的线性检测范围为694‑6940pmol/L，检出限为694pmol/L。该传感器为检测实际水环境中的银离子浓度提供了应用基础。

摘要： 本发明属于生物传感器技术领域，特别是指一种核酸适体及调节核酸适体信号强度的方法和应用。利用金属增强荧光效应以及双链DNA捕获银离子更强的优点，设计了一种高灵敏的荧光增强型适体传感器来检测银离子。将含有不同碱基A的核酸适体修饰在纳米金的表面，并加入标记有荧光基团的互补链，构成用于检测银离子浓度的工作溶液。实际实验结果表明当碱基A的长度为8nm，银离子浓度的线性检测范围为694‑6940pmol/L，检出限为694pmol/L。该传感器为检测实际水环境中的银离子浓度提供了应用基础。

摘要： 本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及核酸适体的保护片段及含有该保护片段的核酸适体。本发明提供了核酸适体的保护片段，并提供了含有该保护片段的核酸适体及其应用。在本发明中，核酸适体(aptamers)的末端经过ATP aptamer连接保护之后可以形成末端保护的核酸适体(MT‑aptamers)，MT‑aptamers可以在目标组织或器官中特异性地提高其生物稳定性，在正常的组织或者器官中可以被代谢掉。本发明通过实验证明，本发明提供的保护片段对多种适体都能起到提高稳定性的作用。

摘要： 本发明公开了一种可识别HCV NS5A蛋白的核酸适体，其为SEQIDNO：5序列所示的DNA片段，其衍生物为包括核苷酸取代后的RNA核酸适体、骨架改造后的衍生物、改造为肽核酸后的衍生物以及连接上放射性分子后的衍生物。该核酸适体的筛选方法包括：先制备带组氨酸标签的丙型肝炎病毒NS5A蛋白，再制备带组氨酸标签的pET200/D/LacZ蛋白；然后对蛋白进行固定，并设计随机核酸文库；最后进行核酸适体的筛选，筛选过程具体又包括DNA文库预处理、反筛、正筛及反复筛选等步骤，最后获得竞争能力强、序列长度得到优化的核酸适体。本发明的核酸适体及其衍生物可用于制备丙型肝炎病毒NS5A蛋白的检测试剂盒或诊断试剂，还可用于制备抑制丙型肝炎病毒在肝细胞内复制的试剂。

摘要： 本发明公开了一种可识别HCV NS5A蛋白的核酸适体，其为SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：5中任一序列所示的DNA片段，其衍生物为包括核苷酸取代后的RNA核酸适体、骨架改造后的衍生物、改造为肽核酸后的衍生物以及连接上放射性分子后的衍生物。该核酸适体的筛选方法包括：先制备带组氨酸标签的丙型肝炎病毒NS5A蛋白，再制备带组氨酸标签的pET200/D/LacZ蛋白；然后对蛋白进行固定，并设计随机核酸文库；最后进行核酸适体的筛选，筛选过程具体又包括DNA文库预处理、反筛、正筛及反复筛选等步骤，最后获得竞争能力强、序列长度得到优化的核酸适体。本发明的核酸适体及其衍生物可用于制备丙型肝炎病毒NS5A蛋白的检测试剂盒或诊断试剂，还可用于制备抑制丙型肝炎病毒在肝细胞内复制的试剂。

摘要： 本发明公开了一种可识别HCV E1E2蛋白的核酸适体，其为SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：5中任一序列所示的DNA片段，其衍生物为包括核苷酸取代后的RNA核酸适体、骨架改造后的衍生物、改造为肽核酸后的衍生物以及连接上放射性分子后的衍生物。该核酸适体的筛选方法包括：先制备带组氨酸标签的丙型肝炎病毒E1E2蛋白，再制备带组氨酸标签的pET200/D/LacZ蛋白；然后对蛋白进行固定，并设计随机核酸文库；最后进行核酸适体的筛选，筛选过程具体又包括DNA文库预处理、反筛、正筛及反复筛选等步骤，最后获得竞争能力强、序列长度得到优化的核酸适体。本发明的核酸适体及其衍生物可用于制备丙型肝炎病毒E1E2蛋白的检测试剂盒或诊断试剂，还可用于制备抑制丙型肝炎病毒感染肝细胞的试剂。