核酸扩增技术

摘要： 目的:通过分析GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)阳性RNA聚合酶β亚基(rpoB)基因突变的结核病患者中rpoB基因探针的突变分布与频率,阐述利福平耐药决定区的突变特征。方法:连续纳入2019年6月至2020年6月就诊于首都医科大学附属北京胸科医院的Xpert检测阳性且rpoB基因突变的682例结核病患者,其中肺结核618例,肺外结核64例。收集患者临床检测标本,其中痰液465份,支气管肺泡灌洗液153份,脓液37份,胸腔积液19份,便标本7份,脑脊液1份。分析所有Xpert阳性标本中结核分枝杆菌(MTB)的半定量结果及rpoB基因探针的突变分布情况。结果:682份标本中,MTB含量半定量水平为高占6.45%(44/682),中占25.07%(171/682),低占25.51%(174/682),极低占42.96%(293/682)。肺外结核标本中MTB含量半定量极低水平高于肺结核标本[分别为64.06%(41/64)和40.78%(252/618)],差异有统计学意义(χ^(2)=12.83,P<0.001)。标本涂阳率在MTB含量半定量水平为高、中、低和极低水平的标本中分别为84.62%(33/39),64.02%(105/164),27.27%(42/154)和7.84%(20/255)。rpoB基因单探针突变率为92.82%(633/682),双探针突变率为6.89%(47/682),三探针突变率为0.29%(2/682)。单探针突变的标本中,突变率最高的为探针E(74.34%,507/682),其次为探针D(8.80%,60/682);双探针突变的标本中,突变率最高的为探针D+E(4.25%,29/682),其次为探针A+B(1.76%,12/682);2例三探针突变均为探针A+D+E。结论:Xpert阳性rpoB基因突变MTB中以单探针突变为主,在肺结核和肺外结核中最常见的突变探针均为探针E和探针D。

摘要： 目的分析核酸扩增技术在血清病学标志物人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)检测中的应用效果。方法选取2019年1月至2020年12月梅州市中心血站采集的36422名无偿献血者的血液样本,每位献血者均留取两管血液样本,其中一管采用核酸扩增技术检测,另一管采用酶联免疫法,对比两种方法的检测结果,分析其检测符合率。结果经酶联免疫法检测HBV、HCV、HIV阳性率分别为0.33%、0.005%、0.005%,核酸扩增检测HBV、HCV、HIV阳性率分别为0.35%、0.014%、0.011%,两种检测方法比较差异无统计学意义(P>0.05);36422份血液样本经二次重复检查汇集池数量6071个,其中30个汇集池存在反应,后将其拆分单个检测样本,16个汇集池样本拆分17个阳性样本,拆分率为0.047%;17个阳性样本经再次鉴定,HBV、HCV、HIV反应阳性样本数分别为15个、1个、1个。结论核酸扩增技术在血清病学标志物HIV、HBV、HCV检测中有显著效果,符合率与酶联免疫法相当。

摘要： 结核病(TB)是一种由结核分枝杆菌引起的、严重威胁人类健康的重大传染性疾病。涂阴肺结核仍能导致结核病的传播。近几年分子检测技术取得了相当程度的进展,WHO分别于2010年、2017年推出结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(简称“Xpert”)及超敏结核分枝杆菌和利福平耐药基因检测技术(简称“Xpert Ultra”),这两种技术对诊断涂阴肺结核、提高病原学阳性率起着重要的作用。现分别对Xpert及Xpert Ultra进行综述,分析两者对涂阴肺结核的诊断价值及两者的局限性。通过对Xpert及Xpert Ultra两种检查的分析比较,为日后在临床中推广应用提供依据。

摘要： 核酸扩增技术是一种扩增特定DNA片段的技术,是基于分子生物技术检测食源性病源体最常用的方法之一。该技术通过检测特定的靶DNA序列来检测食物中的单一细菌病原体,能够将特定靶标放大十亿倍以上,因此在许多应用中发挥了重要作用,包括检测各种病源体和基因克隆。本文就不同核酸扩增技术检测食源性病原菌的原理和应用进行了分类综述。

摘要： 目的:评价交叉引物恒温扩增(cross-priming amplification,CPA)技术在初诊疑似肺结核患者诊断中的应用价值。方法:选取2020年1月至2021年5月深圳市龙华区慢性病防治中心就诊的初诊疑似肺结核患者2408例作为研究对象。收集患者痰液标本分别采用萋-尼抗酸染色(acid-fast stain,AFS)法、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)液体培养法及CPA技术对治疗前痰液标本进行结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)检测,以MGIT 960液体培养法为参照标准,评价CPA诊断效能。结果:AFS法、MGIT 960液体培养法及CPA技术MTB阳性检出率分别为8.89%(214/2408)、27.99%(674/2408)及15.49%(373/2408),不同方法检测阳性率比较差异有统计学意义(χ^(2)=314.619,P=0.000),其中MGIT 960液体培养法明显高于CPA技术和AFS法,而CPA技术高于AFS法,差异均有统计学意义(χ^(2)=110.572、292.158、49.046,P值均=0.000)。以MGIT 960液体培养结果为参照标准,CPA检测MTB的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及符合率分别为52.37%(353/674)、98.85%(1714/1734)、94.64%(353/373)、84.23%(1714/2035)及85.84%(2067/2408),而AFS法分别为31.45%(212/674)、99.88%(1732/1734)、99.07%(212/214)、78.94%(1732/2194)及80.73%(1944/2408),其中CPA技术的敏感度[52.37%(95%CI:47.21%~59.64%)]明显高于AFS法[31.45%(95%CI:26.87%~35.72%)],差异有统计学意义(χ^(2)=108.290,P=0.000)。CPA技术与MGIT 960液体培养法检测结果一致性较好(Kappa=0.592),而与AFS法一致性较差(Kappa=0.395)。涂阳培阴率为0.08%(2/2408),培养污染率为5.40%(130/2408),而CPA检测无效例数为0。结论:初诊疑似肺结核分枝杆菌感染CPA技术阳性检出率和敏感度明显高于AFS法,且一致性好于AFS法,同时操作简单、快速、经济及无污染,对肺结核早期诊断具有应用价值。

摘要： 目的:评价恒温扩增荧光检测法检测痰样本中结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)的临床应用价值。方法:选择上海市6家结核病定点医院作为研究现场,收集2020年1月至2020年11月各家医院肺科门诊初诊的1848例疑似肺结核患者痰样本,分别进行恒温扩增荧光检测法与传统的痰涂片、BACTEC MGIT 960液体培养(液体培养)及GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测。以液体培养为参照标准,分析比较恒温扩增荧光检测法、痰涂片及GeneXpert的检测效能。结果:在1848例患者痰样本中,恒温扩增荧光检测法、痰涂片、液体培养和GeneXpert检测MTBC的检出率分别为16.7%(309/1848)、14.4%(266/1848)、25.4%(470/1848)和28.7%(530/1848)。以液体培养为参照标准,恒温扩增荧光检测法、痰涂片和GeneXpert检测的敏感度分别为58.94%(277/470)、52.77%(248/470)、80.43%(378/470);特异度分别为97.68%(1346/1378)、98.69%(1360/1378)、88.97%(1226/1378);一致率分别为87.82%(1623/1848)、87.01%(1608/1848)、86.80%(1604/1848),Kappa值分别为0.638、0.600、0.666。4种不同性状痰样本(黏液样痰、唾液样痰、干酪样痰和血样痰)中,除在唾液样痰中液体培养检出率最高[38.8%(59/152)]外,其余3种性状痰样(黏液样痰、干酪样痰和血样痰)均为GeneXpert检出率最高,分别为51.5%(308/598)、66.7%(28/42)和64.0%(16/25)。结论:恒温扩增荧光检测法检测痰样本中MTBC具有良好的检测特异度,该方法和痰涂片及GeneXpert与液体培养检测结果一致性均一般,临床可以根据实验室硬件条件及患者情况选择开展多种方法联合检测,以提高肺结核的病原学诊断率。

摘要： 目的:评价胸腔积液结核分枝杆菌游离核酸检测技术(cell-free Mycobacterium tuberculosis DNA test,CF.TB)在结核性胸膜炎中的诊断价值。方法:选取2016年7月至2018年12月收住于首都医科大学附属北京胸科医院初诊不明原因胸腔积液患者216例。所有患者均在B超引导下进行胸腔穿刺术或置管术留取胸腔积液,并同时进行胸腔积液CF.TB、SAT-PCR、GeneXpert MTB/RIF及腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)检测和血结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测。以临床复合标准(composite reference standard,CRS)为参考标准,评价胸腔积液CF.TB、SAT-PCR、GeneXpert MTB/RIF、ADA及血T-SPOT.TB检测诊断结核性胸膜炎的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。评价胸腔积液CF.TB方法单独或与ADA联合检测对结核性胸膜炎早期诊断的价值。结果:216例患者中,165例患者临床确诊为结核性胸膜炎,51例患者确诊为其他病因胸腔积液。以CRS为参考标准,CF.TB、SAT-PCR、GeneXpert MTB/RIF、ADA及T-SPOT.TB方法对结核性胸膜炎诊断的敏感度分别为70.30%(116/165)、7.88%(13/165)、12.12%(20/165)、67.27%(111/165)和87.27%(144/165),特异度分别为100.00%(51/51)、100.00%(51/51)、100.00%(51/51)、92.16%(47/51)和62.75%(32/51),阳性预测值分别为100.00%(116/116)、100.00%(13/13)、100.00%(20/20)、96.52%(111/115)和88.34%(144/163),阴性预测值分别为51.00%(51/100)、25.12%(51/203)、26.02%(51/196)、46.53%(47/101)和60.38%(32/53)。CF.TB检测胸腔积液MTB的敏感度(70.30%)明显高于SAT-PCR(7.88%)、GeneXpert MTB/RIF(12.12%)和ADA(67.27%)(χ^(2)=1.350、1.153、1.025,P值均=0.000),差异均有统计学意义;而且CF.TB与ADA联合检测(88.48%,146/165)可明显提高CF.TB(70.30%,116/165)诊断结核性胸膜炎患者的敏感度,差异有统计学意义(χ^(2)=16.670,P=0.000)。结论:胸腔积液CF.TB检测技术对结核性胸膜炎诊断的敏感度优于SAT-PCR及GeneXpert MTB/RIF技术,特异度优于ADA及T-SPOT.TB方法,而且CF.TB与ADA联合检测可明显提高其在结核性胸膜炎中的诊断价值,建议CF.TB技术可作为结核性胸膜炎的辅助诊断。

摘要： 目的探讨环介导等温扩增技术(LAMP),即呼吸道病原菌核酸联合检测(13联)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)伴下呼吸道感染病原菌检测的临床应用价值。方法选取梅州市人民医院2018年1月至2020年12月住院病人临床诊断为COPD伴急性下呼吸道感染的病例397例,其中有入住普通病房的病例195例,需要呼吸机辅助通气而入住重症监护室的病例202例,每例病人均留取痰液/支气管肺泡灌洗液/支气管吸出物送检LAMP(13联)检测和病原菌培养,比较入住不同病房治疗的COPD伴下呼吸道感染病原菌经LAMP(13联)检测出的病原菌分布特点,计算LAMP(13联)检测的灵敏度和特异度,以及统计分析LAMP(13联)检测与传统培养方法检测结果的一致性,探讨LAMP(13联)方法对COPD伴下呼吸道感染的临床应用价值。结果LAMP检测方法对普通病房、重症监护室的COPD伴下呼吸道感染病原菌的检测阳性率分别为45.13%、47.03%,均比传统培养方法高(P<0.05);根据LAMP检测结果,入住普通病房的COPD病人感染病原菌排在前三名为流感嗜血杆菌34例(17.44%)、耐甲氧西林葡萄球菌25例(12.82%)、铜绿假单胞菌13例(6.67%)、肺炎链球菌13例(6.67%);入住重症监护室的COPD病人感染病原菌排在前三名的为耐甲氧西林葡萄球菌43例(21.29%)、流感嗜血杆菌14例(6.93%)、肺炎链球菌13例(6.44%);LAMP对普通病房和ICU病房的COPD病人感染病原菌检测的灵敏度分别为78.95%、85.29%,特异度分别为58.52%、60.71%;与传统培养方法比较,铜绿假单胞菌的Kappa值最高,为0.87。结论LAMP对普通病房及重症监护室的COPD伴下呼吸道感染病原菌的检测均具有敏感、快速、经济有效的特点,能为临床治疗选用有效抗生素提供证据,对COPD伴下呼吸道感染的临床治疗具有重要意义。

摘要： 目的 评估分枝杆菌核酸PCR-荧光探针检测(MTB-NTM PCR)、RNA恒温扩增实时荧光检测(TB-SAT)和多色巢式荧光定量PCR(Xpert MTB/RIF)对肺外结核(EPTB)诊断的价值.方法 对119例肺外病灶组织样本同步行传统的抗酸染色和罗氏培养及上述3种分子诊断技术检测结核分枝杆菌(MTB),依临床诊断将患者分为试验组88例,对照组31例,比较5种方法诊断EPTB的效能.结果 3种分子诊断技术检测MTB的阳性率分别为48.74％(58/119)、38.66％(46/119)和57.98％(69/119),均高于抗酸染色+罗氏培养的25.21％ (30/119),且差异有统计学意义(p＜0.05).以临床诊断为金标准,比较5种方法检测结果对试验组和对照组的一致性,Kappa值分别为0.05、0.17、0.50、0.36和0.65;比较临床诊断效能,5种方法的灵敏性和特异性分别为11.36％(10/88)、96.77％(30/31),30.68％(27/88)、96.77％ (30/31),65.91％ (58/88)、100％ (31/31),52.27％ (46/88)、100％(31/31),78.41％(69/88)、100％(31/31).结论 3种分子诊断技术对肺外病灶组织样本MTB检测的灵敏性、特异性明显高于传统检测方法,其中Xpert MTB/RIF的检测灵敏性最高,并与临床诊断有高度的一致性.分子诊断技术的应用有助于提高EPTB的病原学诊断率.

摘要： 目的 评价利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(GeneXpert)联合结核感染T淋巴细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)诊断结核性脑膜炎(TBM)的价值.方法 回顾性分析2017年3月至2019年12月沈阳市胸科医院70例TBM患者(TBM组)和30例非TBM患者(非TBM组)的临床资料.患者均行GeneXpert和T-SPOT.TB检测.以脑脊液MGIT960液体培养结果作为金标准,评估GeneXpert和T-SPOT.TB诊断TBM的情况.结果 TBM组GeneXpert、T-SPOT.TB、两种方法并联及两种方法串联的阳性率均明显高于非TBM组[27.14％(19/70)比0、72.86％(51/70)比46.67％(14/30)、78.57％(55/70)比46.67％(14/30)和21.43％(15/70)比0],差异有统计学意义(P＜0.01或＜0.05).两种方法并联诊断TBM的灵敏度最高为78.57％,准确度达71.00％;而两种方法串联诊断TBM的特异度为100.00％,误诊率为0.结论 GeneXpert和T-SPOT.TB两种方法并联诊断TBM的灵敏度最高,两种方法串联及GeneXpert单独检测的特异度均高达100.00％,两种方法串联可降低TBM的误诊率,并联可降低漏诊率.

摘要： 本文综述了各种用核酸扩增技术(NAT)测定病毒量的方法,其最主要的定量检测方法是支链DNA(bDNA)信号放大、反转录聚合链式反应(RT-PCR)、定量竞争聚合链式反应(QC-PCR)和核酸序列扩增(NASBA),对测定过程中各种因素进行了分析,提出了相应的应对措施.核酸扩增技术的定性测定方法确认参数为特异性、检测限和耐用性.为确保检验质量,必须对试验材料进行验证,必须设立对照组,必须对实验者进行认定,对实验室进行外部的质量评估.

摘要： 本文简介了上海市血液筛检的现状及核酸扩增技术(NAT)在上海血液筛检中的应用,并对NAT筛检方法在中国的应用得出了几点启示.

摘要： 环介导等温扩增技术是一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传统PCR方法相比，LAMP不需要热循环，只需等温扩增，且由于LAMP反应中产生大量的副产物-白色焦磷酸镁沉淀，扩增产物可不经过电泳，通过肉眼观察或浊度计即可判定结果，还可通过荧光染色判定结果。因此LAMP是一种不需要热循环仪、肉眼即可判定结果的高度特异和敏感的DNA扩增方法，适合于野外现场或常规实验室进行病原微生物的快速检测。近年LAMP技术在病原微生物检测，胚胎性别鉴定，转基因食品检测等方面已有广泛应用，本文论述了在病原微生物检测方面的研究进展。

摘要： 核酸扩增技术能直接检测病原体，将血液感染病毒的“窗口期”缩短，降低血源性病毒的传播，现已成为发达国家的血液筛查病毒的必要手段。目前自动化扩增和检测技术在上一世纪90年代已经完成并发展成熟，而样本制备提取核酸是NAT的重要关键的一步，在大批量进行血液筛查时手工核酸提取技术要求高、操作繁杂、耗时及结果重现性差，已不适合现代化血液检测的需要。为探讨在国内血液筛查应用全自动核酸提取技术，笔者与瑞士Ruche公司合作，在国内首次开展全自动核酸提取技术评价研究并应用于HCV/HIV-IRNA的日常检测工作。

摘要： 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值. 方法：采集2014年11月-2016年5月医院收治的疑诊为肺结核并且痰涂片至少3次阴性的1155例患者灌洗液标本,剔除295例未明确诊断病例,肺结核确诊患者672例纳入肺结核组,其他肺部疾病188例(包括43例非结核分枝杆菌疾病)纳入对照组,以临床诊断为金标准,计算SAT-TB与FQ-PCR联合检测的各类评价指标,并与单一SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养(Bactec MGIT960)、抗酸杆菌染色进行比较,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行分析比较. 结果：以临床诊断为“金标准”,分别以AFS、MIGT960、SAT-TB、FQ-PCR、SAT-TB与FQ-PCR联合检测平行试验(单阳)、系列试验(双阳)为检验变量时,ROC曲线下面积(AUC)依次为0.507、0.501、0.670、0.660、0.734、0.658,准确性依次为29.45％、33.64％、58.67％、58.32％、67.40％、49.82％,SAT-TB和FQ-PCR单独检测或者联合检测其诊断价值均有统计学意义(P＜0.001);对痰涂阴性肺结核病诊断价值比较,平行试验＞SAT-TB＞FQ-PCR＞系列试验＞涂片＞MIGT960. 结论：与细菌学检测方法比较,SAT-TB与FQ-PCR联合检测痰涂阴性肺结核病诊断具有快速、敏感、鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)等优势,缩短了确诊时间,提高准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供一种有效辅助手段,值得临床推广应用.

摘要： 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值. 方法：采集2014年11月-2016年5月医院收治的疑诊为肺结核并且痰涂片至少3次阴性的1155例患者灌洗液标本,剔除295例未明确诊断病例,肺结核确诊患者672例纳入肺结核组,其他肺部疾病188例(包括43例非结核分枝杆菌疾病)纳入对照组,以临床诊断为金标准,计算SAT-TB与FQ-PCR联合检测的各类评价指标,并与单一SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养(Bactec MGIT960)、抗酸杆菌染色进行比较,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行分析比较. 结果：以临床诊断为“金标准”,分别以AFS、MIGT960、SAT-TB、FQ-PCR、SAT-TB与FQ-PCR联合检测平行试验(单阳)、系列试验(双阳)为检验变量时,ROC曲线下面积(AUC)依次为0.507、0.501、0.670、0.660、0.734、0.658,准确性依次为29.45％、33.64％、58.67％、58.32％、67.40％、49.82％,SAT-TB和FQ-PCR单独检测或者联合检测其诊断价值均有统计学意义(P＜0.001);对痰涂阴性肺结核病诊断价值比较,平行试验＞SAT-TB＞FQ-PCR＞系列试验＞涂片＞MIGT960. 结论：与细菌学检测方法比较,SAT-TB与FQ-PCR联合检测痰涂阴性肺结核病诊断具有快速、敏感、鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)等优势,缩短了确诊时间,提高准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供一种有效辅助手段,值得临床推广应用.

摘要： 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值. 方法：采集2014年11月-2016年5月医院收治的疑诊为肺结核并且痰涂片至少3次阴性的1155例患者灌洗液标本,剔除295例未明确诊断病例,肺结核确诊患者672例纳入肺结核组,其他肺部疾病188例(包括43例非结核分枝杆菌疾病)纳入对照组,以临床诊断为金标准,计算SAT-TB与FQ-PCR联合检测的各类评价指标,并与单一SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养(Bactec MGIT960)、抗酸杆菌染色进行比较,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行分析比较. 结果：以临床诊断为“金标准”,分别以AFS、MIGT960、SAT-TB、FQ-PCR、SAT-TB与FQ-PCR联合检测平行试验(单阳)、系列试验(双阳)为检验变量时,ROC曲线下面积(AUC)依次为0.507、0.501、0.670、0.660、0.734、0.658,准确性依次为29.45％、33.64％、58.67％、58.32％、67.40％、49.82％,SAT-TB和FQ-PCR单独检测或者联合检测其诊断价值均有统计学意义(P＜0.001);对痰涂阴性肺结核病诊断价值比较,平行试验＞SAT-TB＞FQ-PCR＞系列试验＞涂片＞MIGT960. 结论：与细菌学检测方法比较,SAT-TB与FQ-PCR联合检测痰涂阴性肺结核病诊断具有快速、敏感、鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)等优势,缩短了确诊时间,提高准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供一种有效辅助手段,值得临床推广应用.

摘要： 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值. 方法：采集2014年11月-2016年5月医院收治的疑诊为肺结核并且痰涂片至少3次阴性的1155例患者灌洗液标本,剔除295例未明确诊断病例,肺结核确诊患者672例纳入肺结核组,其他肺部疾病188例(包括43例非结核分枝杆菌疾病)纳入对照组,以临床诊断为金标准,计算SAT-TB与FQ-PCR联合检测的各类评价指标,并与单一SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养(Bactec MGIT960)、抗酸杆菌染色进行比较,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行分析比较. 结果：以临床诊断为“金标准”,分别以AFS、MIGT960、SAT-TB、FQ-PCR、SAT-TB与FQ-PCR联合检测平行试验(单阳)、系列试验(双阳)为检验变量时,ROC曲线下面积(AUC)依次为0.507、0.501、0.670、0.660、0.734、0.658,准确性依次为29.45％、33.64％、58.67％、58.32％、67.40％、49.82％,SAT-TB和FQ-PCR单独检测或者联合检测其诊断价值均有统计学意义(P＜0.001);对痰涂阴性肺结核病诊断价值比较,平行试验＞SAT-TB＞FQ-PCR＞系列试验＞涂片＞MIGT960. 结论：与细菌学检测方法比较,SAT-TB与FQ-PCR联合检测痰涂阴性肺结核病诊断具有快速、敏感、鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)等优势,缩短了确诊时间,提高准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供一种有效辅助手段,值得临床推广应用.

摘要： 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值. 方法：采集2014年11月-2016年5月医院收治的疑诊为肺结核并且痰涂片至少3次阴性的1155例患者灌洗液标本,剔除295例未明确诊断病例,肺结核确诊患者672例纳入肺结核组,其他肺部疾病188例(包括43例非结核分枝杆菌疾病)纳入对照组,以临床诊断为金标准,计算SAT-TB与FQ-PCR联合检测的各类评价指标,并与单一SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养(Bactec MGIT960)、抗酸杆菌染色进行比较,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行分析比较. 结果：以临床诊断为“金标准”,分别以AFS、MIGT960、SAT-TB、FQ-PCR、SAT-TB与FQ-PCR联合检测平行试验(单阳)、系列试验(双阳)为检验变量时,ROC曲线下面积(AUC)依次为0.507、0.501、0.670、0.660、0.734、0.658,准确性依次为29.45％、33.64％、58.67％、58.32％、67.40％、49.82％,SAT-TB和FQ-PCR单独检测或者联合检测其诊断价值均有统计学意义(P＜0.001);对痰涂阴性肺结核病诊断价值比较,平行试验＞SAT-TB＞FQ-PCR＞系列试验＞涂片＞MIGT960. 结论：与细菌学检测方法比较,SAT-TB与FQ-PCR联合检测痰涂阴性肺结核病诊断具有快速、敏感、鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)等优势,缩短了确诊时间,提高准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供一种有效辅助手段,值得临床推广应用.

摘要： 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值. 方法：采集2014年11月-2016年5月医院收治的疑诊为肺结核并且痰涂片至少3次阴性的1155例患者灌洗液标本,剔除295例未明确诊断病例,肺结核确诊患者672例纳入肺结核组,其他肺部疾病188例(包括43例非结核分枝杆菌疾病)纳入对照组,以临床诊断为金标准,计算SAT-TB与FQ-PCR联合检测的各类评价指标,并与单一SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养(Bactec MGIT960)、抗酸杆菌染色进行比较,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行分析比较. 结果：以临床诊断为“金标准”,分别以AFS、MIGT960、SAT-TB、FQ-PCR、SAT-TB与FQ-PCR联合检测平行试验(单阳)、系列试验(双阳)为检验变量时,ROC曲线下面积(AUC)依次为0.507、0.501、0.670、0.660、0.734、0.658,准确性依次为29.45％、33.64％、58.67％、58.32％、67.40％、49.82％,SAT-TB和FQ-PCR单独检测或者联合检测其诊断价值均有统计学意义(P＜0.001);对痰涂阴性肺结核病诊断价值比较,平行试验＞SAT-TB＞FQ-PCR＞系列试验＞涂片＞MIGT960. 结论：与细菌学检测方法比较,SAT-TB与FQ-PCR联合检测痰涂阴性肺结核病诊断具有快速、敏感、鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)等优势,缩短了确诊时间,提高准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供一种有效辅助手段,值得临床推广应用.

摘要： 本发明提供了一种往复流动型核酸扩增装置，包括：能够形成变性温度区和延伸/退火温度区的加热器；能够检测样品溶液在两个温度区之间的移动的荧光检测器；允许所述样品溶液在两个所述温度区之间移动的一对液体输送机构，并且当液体输送停止时，所述液体输送机构设置为对大气压开放；核酸扩增用芯片可以放置在其上的基板；以及通过接收来自所述荧光检测器的与所述样品溶液的移动有关的电信号来控制各液体输送机构的驱动的控制机构；该装置能够通过测量每次热循环的荧光强度而进行实时PCR。

摘要： 核酸扩增器件(1)具备：导入部(120)，含有靶核酸的反应溶液被导入到该导入部(120)；核酸扩增反应部(110)，存在温度不同的至少两个以上的温度区域，并且对被导入到导入部(120)的反应溶液中含有的靶核酸进行扩增；以及流路(100)，被设置成往返或周期性地经过至少两个以上的温度区域，并且该流路(100)具有利用毛细管力来输送所述反应溶液的毛细管力运输机构。

摘要： 本发明提供了一种往复流动型核酸扩增装置，包括：能够形成变性温度区和延伸/退火温度区的加热器；能够检测样品溶液在两个温度区之间的移动的荧光检测器；允许所述样品溶液在两个所述温度区之间移动的一对液体输送机构，并且当液体输送停止时，所述液体输送机构设置为对大气压开放；核酸扩增用芯片可以放置在其上的基板；以及通过接收来自所述荧光检测器的与所述样品溶液的移动有关的电信号来控制各液体输送机构的驱动的控制机构；该装置能够通过测量每次热循环的荧光强度而进行实时PCR。

摘要： 本发明提供核酸扩增方法、核酸提取用设备、核酸扩增反应用筒以及核酸扩增反应用试剂盒。该核酸扩增方法包括在含有核酸的试样中混合含有促溶物质的吸附液和微粒，使上述核酸吸附于上述微粒的吸附工序；用第1清洗液清洗吸附有上述核酸的微粒的清洗工序；使吸附于上述微粒的核酸溶出到溶出液中的溶出工序；以及对上述溶出液中的核酸进行核酸扩增反应的核酸扩增工序，其中，上述吸附液含有醇，第1清洗液为酸性，该核酸提取用设备、核酸扩增反应用筒和核酸扩增反应用试剂盒能够实施该方法。

摘要： 本发明提供核酸扩增方法、核酸提取用设备、核酸扩增反应用盒、以及核酸扩增反应用套件。提供一种包括向含有核酸的试样混合吸附液以及微粒并使上述核酸吸附于上述微粒的吸附工序、利用第一清洗液对吸附了上述核酸的微粒进行清洗的清洗工序、对吸附了上述核酸的微粒施加超声波并使吸附于上述微粒的核酸溶出于溶出液中的溶出工序、以及对上述溶出液中的核酸进行核酸扩增反应的核酸扩增工序的核酸扩增方法、能够实现该方法的核酸提取用设备、核酸扩增反应用盒、以及核酸扩增反应用套件。

摘要： 本发明提供了一种往复流动型核酸扩增装置，包括：能够形成变性温度区和延伸/退火温度区的加热器；能够检测样品溶液在两个温度区之间的移动的荧光检测器；允许所述样品溶液在两个所述温度区之间移动的一对液体输送机构，并且当液体输送停止时，所述液体输送机构设置为对大气压开放；核酸扩增用芯片可以放置在其上的基板；以及通过接收来自所述荧光检测器的与所述样品溶液的移动有关的电信号来控制各液体输送机构的驱动的控制机构；该装置能够通过测量每次热循环的荧光强度而进行实时PCR。

摘要： 本发明提供了一种往复流动型核酸扩增装置，包括：能够形成变性温度区和延伸/退火温度区的加热器；能够检测样品溶液在两个温度区之间的移动的荧光检测器；允许所述样品溶液在两个所述温度区之间移动的一对液体输送机构，并且当液体输送停止时，所述液体输送机构设置为对大气压开放；核酸扩增用芯片可以放置在其上的基板；以及通过接收来自所述荧光检测器的与所述样品溶液的移动有关的电信号来控制各液体输送机构的驱动的控制机构；该装置能够通过测量每次热循环的荧光强度而进行实时PCR。

摘要： 本发明提供一种即使使PCR高速化，也能够高灵敏度地检测核酸的扩增的核酸扩增反应方法。核酸扩增反应方法包括向包含核酸的扩增所使用的核酸扩增反应试剂的反应液施加用于使上述核酸扩增的热循环的工序，在上述热循环中，退火反应以及伸长反应用的加热时间为1秒以上10秒以下，上述核酸扩增反应试剂包含正向引物、反向引物、聚合酶以及荧光标志探针，上述正向引物的浓度为0.4μM以上3.2μM以下，上述反向引物的浓度为0.4μM以上3.2μM以下，上述聚合酶的浓度为0.5U以上4U以下，上述荧光标志探针的浓度为0.15μM以上1.2μM以下。

摘要： 核酸扩增器件(1)具备：导入部(120)，含有靶核酸的反应溶液被导入到该导入部(120)；核酸扩增反应部(110)，存在温度不同的至少两个以上的温度区域，并且对被导入到导入部(120)的反应溶液中含有的靶核酸进行扩增；以及流路(100)，被设置成往返或周期性地经过至少两个以上的温度区域，并且该流路(100)具有利用毛细管力来输送所述反应溶液的毛细管力运输机构。

摘要： 本发明提供核酸扩增反应用容器、核酸扩增反应用筒及核酸扩增反应用筒试剂盒。该核酸扩增反应用容器包含冷冻干燥的核酸扩增反应试剂、油以及收容上述核酸扩增反应试剂和上述油的容器，且上述核酸扩增反应试剂被保持在上述油中，并且，使用该核酸扩增反应用容器构成核酸扩增反应用筒和核酸扩增反应用筒试剂盒。