摘要:
目的研究栀子苷(GEN)对结直肠癌(CRC)细胞增殖和凋亡的影响,探讨其潜在作用机制。方法使用MTT测定不同浓度(0~200μM)GEN对不同CRC细胞的抗增殖作用,筛选后续实验细胞及药物浓度。SW-480细胞经GEN处理后,流式细胞术检测细胞凋亡及周期,采用蛋白质印迹法检测凋亡和周期相关蛋白和Akt/MDM2/p53蛋白表达。建立稳定的AKT基因敲低细胞,MTT测定细胞增殖,免疫荧光法检测MDM2/p53表达。结果 GEN作用24h和48h后,CRC细胞增殖受到抑制,呈时间和剂量依赖性(P均<0.05),而在该浓度范围内对正常细胞无显著毒性。与0μM GEN处理组比较,GEN(50、100、150μM)处理48h后,凋亡细胞百分率[(22.19±0.55)%、(48.57±0.57)%、(52.45±1.29)%比(10.44±0.48)%]、凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2蛋白表达[(1.31±0.05)、(3.36±0.07)、(5.34±0.13)比(1.02±0.06),P均<0.05]显著增加,细胞周期阻滞于G2-M期[(17.81±0.76)%、(19.65±0.89)%比(13.48±0.3)%,P均<0.05],细胞周期蛋白cyclin B1表达[(0.77±0.08)、(0.42±0.11)比(1.07±0.08),P均<0.05]下降,且呈剂量依赖性(P<0.05)。此外,GEN下调Akt[(0.84±0.04)、(0.67±0.04)、(0.59±0.09)比(1.00±0.02),P均<0.05]和MDM2蛋白[(0.64±0.06)、(0.45±0.08)、(0.27±0.06)比(1.01±0.02),P均<0.05]表达,并激活p53蛋白表达[(1.28±0.04)、(1.48±0.06)、(1.81±0.10)比(1.02±0.03)],而Akt敲低后细胞OD值在48h[(0.24±0.04)比(0.47±0.03)]和72h[(0.28±0.02)比(0.63±0.04),P均<0.05]下降,GEN处理无法进一步抑制sh RNA-AKT1/2细胞增殖能力,Akt敲低后MDM2被抑制,而p53被激活。结论 GEN抑制CRC细胞增殖和诱导G2/M期阻滞和凋亡,其作用机制可能通过AKT/MDM2/p53途径实现。