杆菌肽

摘要： 建立动物(猪、鸡、鸭)可食性组织(肌肉、肝脏、肾脏、脂肪)和禽蛋(鸡蛋、鸭蛋)中杆菌肽的高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法。使用0.1%甲酸水溶液提取样品中的杆菌肽,三氯乙酸乙腈沉淀蛋白,正己烷除脂,混合阳离子型固相萃取柱净化后,进HPLC-MS/MS检测。待测物使用C_(18)色谱柱分离,以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱(乙腈:0~0.5 min 15%,5.0~5.5 min 85%,5.6~6.5 min 15%);质谱采用电喷雾离子源(ESI),正离子扫描,多反应监测(MRM)模式进行检测,外标法定量。结果显示:在50~1000 ng/g的添加范围内,各组织中杆菌肽添加浓度与目标峰面积的线性关系良好,相关系数均大于0.999。猪、鸡、鸭的可食性组织及禽蛋在50、100、500、750 ng/g的添加浓度下,平均回收率分别为71.3%~80.1%、71.6%~80.7%、71.5%~84.7%和66.2%~80.9%,批内、批间变异系数均小于15%。试验建立的动物可食性组织和禽蛋中杆菌肽残留的HPLC-MS/MS检测方法满足动物可食性组织中杆菌肽残留限量的检测要求。

摘要： 根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定,经审查,批准华派生物工程集团有限公司等16家单位申报的非洲猪癌病毒荧光PCR检测试剂盒等3种兽药产品注册,并发布产品工艺规程、质量标准、说明书和标签、杆菌肽残留检测方法标准(试行)。自发布之日起执行。

摘要： 地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)DW2生长和杆菌肽合成代谢在能量及前体利用方面存在竞争关系,为了提高杆菌肽的合成效率,在20 L发酵罐水平研究了ccpN基因敲除对杆菌肽合成与细胞生长的调控效应。结果显示:菌株DW2ΔccpN杆菌肽峰值效价(1337 U/mL)比菌株DW2峰值效价(1024 U/mL)提高30.6%。但是,其峰值生物量(3.39×10^(10) CFU/mL)仅为菌株DW2峰值生物量(5.56×10^(10) CFU/mL)的61%。另外,DW2ΔccpN胞外氨基酸浓度在36 h时、溢流有机酸总量在22~27 h时分别比DW2提高43.8%和24.7%~37.6%。同时,细胞对数期能量代谢(citZ、icd、zwf、cydA)、氨基酸转运(relA、brnQ、vpr、yvbW)以及丙酮酸转化(pycA、pckA、pyk)和hprK等13个基因的转录组表达(TPM值)也上调2.0~18.4倍,说明菌株DW2ΔccpN的溢流代谢增强,为对数后期提供了更多的碳源和能源分子;细胞严谨响应增强使CodY的调控活性下降,降低了细胞的生长速率,提高了氨基酸转运能力,增加了ATP和NADPH的供应,最终提高了杆菌肽的合成效率,为杆菌肽发酵生产提供了重要参考。

摘要： 建立兔可食性组织中杆菌肽残留标志物的HPLC-MS/MS检测方法.兔可食性组织(肌肉、脂肪、肝脏和肾脏)中杆菌肽残留用0.5％三氟乙酸水提取,10％三氯乙酸乙腈沉淀蛋白,正己烷除脂,HLB 150 mg固相萃取柱净化,以0.1％甲酸水和乙腈(0～0.5 min 15％乙腈,7.5～8.0 min 85％乙腈,8.1～10.0 min 15％乙腈)为流动相进行梯度洗脱.采用电喷雾离子源(ESI),正离子扫描,多反应检测(MRM)模式测定杆菌肽含量.杆菌肽在50～1000 ng/g的添加浓度范围内,浓度与响应值之间线性关系良好,相关系数大于0.99,本方法的检测限为30 ng/g,定量限为50 ng/g.杆菌肽平均添加回收率在74.7％ ～83.8％,批内批间变异系数均小于10％.实验建立的兔可食性组织中杆菌肽残留量的HPLC-MS/MS检测方法可满足兔可食性组织中杆菌肽残留量的检测要求.

摘要： 杆菌肽是一种主要由芽胞杆菌产生的广谱性抗生素,目前作为兽药广泛应用于畜禽养殖领域.前体氨基酸供应不足可能是限制微生物发酵高产杆菌肽的重要因素.文中以杆菌肽工业生产菌株——地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis DW2为出发菌株,研究L-半胱氨酸供给模块强化对杆菌肽合成的影响.首先,构建了L-半胱氨酸合成酶基因cysK强化表达菌株,杆菌肽效价相比于对照菌株提高了9.47％.接着,为提高L-半胱氨酸合成前体供给,对L-丝氨酸乙酰转移酶基因cysE和硫代硫酸盐/硫酸盐胞内转运蛋白基因cysP进行强化,杆菌肽产量分别提高了7.23％和8.52％.随后,结果表明转运蛋白TcyP负责从胞外向胞内转运胱氨酸,强化表达TcyP后胞内L-半胱氨酸浓度和杆菌肽效价分别提高了29.19％和7.79％.通过组合代谢工程育种,在整合表达了基因cysK基础上,利用强启动子PbacA分别替换基因cysP、cysE和tcyP原始启动子,得到工程菌株CYS4 (DW2∷cysK-PbacA(cysP)-PbacA(cysE)-PbacA(tcyP)),杆菌肽效价达到910.02 U/mL,相比于出发菌株DW2 (747.71 U/mL)提高了21.10％.最后,通过3L发酵罐小试实验,进一步证实了强化L-半胱氨酸有利于杆菌肽合成.研究表明,强化胞内L-半胱氨酸供给水平是提高地衣芽胞杆菌中杆菌肽产量的有效策略,为杆菌肽工业生产提供了一株具有良好应用前景的菌株.

摘要： 本研究旨在为监管部门制定动物源细菌耐药风险管理措施提供理论依据.利用2014年国民体质监测数据、第五次中国总膳食研究数据和欧洲药品管理局官方网站数据,采用抗菌药物风险评估模型,对中国居民经动物性食品摄入杆菌肽的耐药性风险进行点评估.用估算每日摄入量作为杆菌肽膳食暴露量,用危害指数(HQ)进行风险特征描述,反映杆菌肽耐药对人体健康损害的风险等级.结果 表明,危害识别得杆菌肽经口毒性极低,但肠球菌、产气荚膜梭菌等致病菌已对杆菌肽产生耐药性,耐药基因可转移至人体肠道菌群.经危害特征描述可知,杆菌肽毒理学每日允许摄入量(ADI)为0.055 mg/(kg·BW),微生物学ADI为3.9 μg/(kg·BW).暴露评估发现,中国居民中2～7岁人群杆菌肽的膳食暴露量最高,女性通过摄入乳类的杆菌肽膳食暴露量高于男性.2～7岁人群中,杆菌肽的膳食暴露量以乳类贡献最大,8岁以上人群杆菌肽的膳食暴露量以肉类贡献最大.风险特征描述发现,中国居民中通过摄入肉、蛋、乳等动物性食品的杆菌肽耐药性风险,2～7岁人群HQ分别为男性1.4901、女性1.4121;其他年龄人群均＜1.不确定性分析发现,结果不确定性源自缺乏动物性食品杆菌肽残留量监测数据、权威数据发布的滞后性、未考虑水产品等因素.综上动物性食品中药物饲料添加剂杆菌肽耐药性风险,2～7岁人群为高风险,其他年龄段人群为中等风险.针对杆菌肽的耐药性风险,必要时修订动物性食品中杆菌肽的最大残留限量,同时加强对进口动物性食品的杆菌肽耐药性风险管理.

摘要： 建立了小龙虾中去甲万古霉素、杆菌肽的高效液相色谱-串联质谱测定方法.样品经0.04 g/mL三氯乙酸乙腈沉淀蛋白,0.1％(v/v)酸化甲醇水溶液(4:6,V/V)提取,正己烷去脂,经C18(100 mm×2.1 mm,粒径1.9μm)柱分离,0.1％(v/v)甲酸水溶液-0.1％(v/v)甲酸乙腈溶液为流动相梯度洗脱,用电喷雾离子源正离子模式采集,多反应监测模式下检测,外标法定量.结果表明,去甲万古霉素在50～1000μg/L,杆菌肽在10～1000μg/L范围内呈良好线性关系,相关系数(r2)均>0.995,方法检出限分别为3.0μg/kg和0.6μg/kg,定量下限分别为10μg/kg和2.0μg/kg,在低、中、高3个水平添加下,去甲万古霉素的平均回收率为80.8％～96.7％,杆菌肽的平均回收率为99.5％～114％,RSD分别为2.2％～4.3％和1.1％～6.9％.该方法简便、快速,重现性好,可用于小龙虾中去甲万古霉素、杆菌肽的快速筛查.

摘要： 杆菌肽是一种主要由芽胞杆菌产生的广谱性环肽类抗生素,目前广泛应用于兽药领域.能量代谢在微生物高效合成目的代谢产物中具有重要作用.文中以杆菌肽工业生产菌株地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis DW2为出发菌株,首先构建了呼吸链分支途径细胞色素bd泛醇氧化酶基因cydB缺失菌株,发现cydB缺失后杆菌肽效价和胞内ATP浓度相比于对照菌株分别提高了10.97％和22.96％.接着,证实了强化表达另外一条呼吸链分支途径——细胞色素aa3氧化酶基因qoxA能够提高杆菌肽合成水平,其杆菌肽效价和胞内ATP浓度相比于对照菌株分别提高了18.27％和34.00％.强化ADP合成供给也是促进胞内ATP积累的有效策略,结果表明强化表达腺苷激酶DcK和腺苷酸激酶AdK均可以提高杆菌肽效价和胞内ATP浓度,其中强化表达DcK效果较好,其杆菌肽效价相比对照提高16.78％.最后,通过组合代谢工程育种,在基因cydB缺失菌DW2△cydB基础上整合表达了qoxA和dck,得到工程菌株DW2-CQD (DW2△cydB∷qoxA∷dck),发酵结果表明,DW2-CQD杆菌肽效价达到954.25 U/mL,相比于对照菌株提高了21.66％,单位菌体杆菌肽效价为2.11 U/CFU,相比对照提高了11.05％.此外,DW2-CQD胞内ATP浓度为39.54 nmol/L,相比于对照提高了49.32％.结果 证实能量代谢工程是提高杆菌肽发酵水平的有效策略,提供了一株具有工业化应用前景的杆菌肽生产菌株.

摘要： 该项目位于南平市-浦城县-福建省南平市浦城县工业园区浦潭工业园,由绿康生化股份有限公司投资,建设年产活性1200吨杆菌肽预混剂和1200吨兽药原料药项目等系列产品生产线(含厂房、设备仪器及相关污水处理配套工程等)。本项目中能耗种类:年综合能源消费总量,电力折合标煤9987.2吨;供热,折合标煤7313.7吨。

摘要： 本文采用乳化聚合法制备杆菌肽聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒;以包封率为评价指标,采用L9(34)正交试验设计法,以药物量与氰基丙烯酸正丁酯量的比例、泊洛沙姆188与右旋糖酐-70总量、pH值为考察因素,优化杆菌肽聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备工艺,并对纳米粒进行质量评价;纳米粒最佳制备工艺为:药物量与氰基丙烯酸正丁酯量的比例为1∶10(mg:μL)、泊洛沙姆188 与右旋糖酐-70总量为30mg、pH值为2.按优化工艺制备的杆菌肽聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒平均粒径为149.7nm,平均包封率为85.75％,Zeta电位为-19.49mV。

摘要： 分子印迹聚合物(Molecularly Imprinted Polymer,MIP)是一种人工合成的新型功能高分子材料,它对合成它的模板分子具有特异的识别性能。分子印迹聚合物已经广泛应用在色谱分析分离、固相萃取、膜分离、生物传感器、模拟酶等方面,但很多应用还只局限于小分子物质,多肽等生物大分子成功应用的报道较少。杆菌肽是整肠生菌生产的多肽抗生素,常被用于饲料添加剂,但目前欧盟已禁止其作为饲料添加剂使用,如果将杆菌肽印迹聚合物作为高效液相色谱及固相萃取等的固定相,可能会对微量或痕量杆菌肽的检测具有重要意义。本文以杆菌肽印迹聚合物作为高效液相色谱的固定相,成功实现了杆菌肽和其类似物短杆菌肽的分离。

摘要： 应用毛细管电泳技术监测了杆菌肽发酵过程中游离氨基酸含量的动态变化,以此为基础分析了菌体的部分代谢流方向和规律,即在高浓度有机氮源的发酵培养基中,菌体代谢的EMP途径中从3-PG向PEP转化过程的抑制被解除,这种变化有利于提高杆菌肽的发酵效价.此外添加适量外源Lys,可能会促进发酵前期菌体细胞的TCA循环通量,从而提高发酵效价。

摘要： 目的:研究酶抑制剂对胰岛素在大肠和小肠吸收的影响;阐述胰岛素与酶抑制剂合用时在肠道各段代谢和吸收的作用机制.方法:采用原位肠袢法测定胰岛素肠道吸收后的降血糖效应;进行肠道冲洗实验研究胰岛素体内代谢的影响因素:比较甘氨胆酸钠、杆菌肽、抑氨肽酶素B、胱蛋白、亮肽素等酶抑制剂与胰岛素合用后在肠道内不同位置的降血糖效应.结果:胰岛素单用于小肠或大肠袢时,冲洗肠道前后均无明显的降血糖效应;当与酶抑制剂合用时,冲洗肠道前,小肠处无降血糖效应,大肠段产生明显的降血糖作用;冲洗肠道后,小肠处和大肠处均产生较明显的降血糖效应.但小肠处的效应仍较大肠处低;酶抑制剂效应与其种类,应用浓度和作用区段内蛋白水解酶的活性有关;亮肽素、甘氨胆酸钠、杆菌肽的降血糖作用最为显著,其次为抑氨肽酶素B,胱蛋白的降血糖作用最弱;其中甘氨胆酸钠和杆菌肽还具有渗透促进作用.结论:合用酶抑制剂能改善胰岛素在大肠处的吸收.

摘要： 莫匹罗星自1985年上市以来在全世界得到了广泛应用,但随之也带来了不断上升的耐药性问题.本文就莫匹罗星的药理作用机理,不良反应,耐药性的种类,临床发生情况以及可以采取的应对措施进行了总结.

摘要： 莫匹罗星自1985年上市以来在全世界得到了广泛应用,但随之也带来了不断上升的耐药性问题.本文就莫匹罗星的药理作用机理,不良反应,耐药性的种类,临床发生情况以及可以采取的应对措施进行了总结.

摘要： 莫匹罗星自1985年上市以来在全世界得到了广泛应用,但随之也带来了不断上升的耐药性问题.本文就莫匹罗星的药理作用机理,不良反应,耐药性的种类,临床发生情况以及可以采取的应对措施进行了总结.

摘要： 莫匹罗星自1985年上市以来在全世界得到了广泛应用,但随之也带来了不断上升的耐药性问题.本文就莫匹罗星的药理作用机理,不良反应,耐药性的种类,临床发生情况以及可以采取的应对措施进行了总结.

摘要： 莫匹罗星自1985年上市以来在全世界得到了广泛应用,但随之也带来了不断上升的耐药性问题.本文就莫匹罗星的药理作用机理,不良反应,耐药性的种类,临床发生情况以及可以采取的应对措施进行了总结.

摘要： 本发明涉及2-氨基-3-甲基-己-5-烯酸，其在用于制备肽(例如杆菌肽)中的应用及其制备方法。

摘要： 本发明提供用于产杆菌肽的外源引入edd基因地衣芽孢杆菌及应用，所述外源引入edd基因地衣芽孢杆菌为：采用现有的外源基因导入宿主细胞的方法将外源的edd基因通过过表达质粒导入地衣芽胞杆菌中得到的重组菌株；将该重组菌株用于发酵生产杆菌肽，能够达到提高杆菌肽发酵产量的目的。

摘要： 本发明公开了一株大肠杆菌ZNYT2，所述大肠杆菌ZNYT2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位简称：CGMCC，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2016年8月23日，保藏编号为：CGMCC NO.12902，分类命名：大肠埃希氏菌。本发明通过优选诱变菌株发酵、双效浓缩、脱色、层析分离、超滤、冻干等工艺，使肠杆菌肽纯品的生产能力大幅度提升，生产成本降低，对肠杆菌肽在畜牧行业领域的应用、推广成为可能。

摘要： 本发明提供一种高产杆菌肽的地衣芽孢杆菌菌株和制备方法及其应用，本发明通过基因工程的方法通过在地衣芽胞杆菌DW2基因组DNA序列中插入ilvB基因，得到地衣芽孢杆菌DW2‑ilvB，相对于地衣芽胞杆菌DW2来说，该菌株在杆菌肽发酵过程中发酵液中杆菌肽的产量提高了11%以上。

摘要： 本发明提供一种地衣芽孢杆菌DW2ΔphoP在杆菌肽生产中的应用，本发明通过基因工程的方法在地衣芽孢杆菌DW2的基因组内成功敲除碳代谢转录因子PhoP的基因—phoP，为提高杆菌肽产量提供了一种新策略。与地衣芽孢杆菌DW2相比，通过本发明构建得到的地衣芽孢杆菌DW2ΔphoP的杆菌肽产量提高了15％以上。

摘要： 本发明涉及一种同时检测鸡蛋中杆菌肽A和杆菌肽B残留量的方法，该方法包括鸡蛋空白样品提取，空白样品溶液净化，作鸡蛋基质匹配标准曲线；待测样品提取、净化，待测样品净化液进行液相色谱‑串联质谱测定；本发明通过液相色谱‑串联质谱法同时把杆菌肽A和杆菌肽B一次测定出来，方法简便快速、分离效果好，测定精度高，结果重现性好，易于观察，专属性强，色谱峰峰形良好，节省时间、试剂，可以进行准确而快速的测定。具有抗干扰能力强，检测限低，灵敏度高的特点。

摘要： 本发明公开了一种利用杆菌肽发酵液制备杆菌肽锌的方法，包括以下步骤：1)将待处理的杆菌肽发酵液加入硫酸锌溶液调节pH值至6.8‑7.2；2)对发酵液采用陶瓷膜过滤，得陶瓷膜浓缩液和陶瓷膜过滤液；3)陶瓷膜过滤液采用稀酸调节pH值为3.2～4.5；4)将调节pH值后的陶瓷膜过滤液采用纳滤膜进行过滤，得纳滤膜过滤液和纳滤膜浓缩液；5)将纳滤膜过滤液进行反渗透浓缩处理，得反渗透浓缩液和反渗透过滤液；6)将所述陶瓷膜浓缩液、纳滤膜浓缩液、反渗透浓缩液混合均匀后，进行喷雾干燥，得杆菌肽锌粉剂。本发明的制备方法大大的节约了能源，全过程无废水排放，实现了清洁生产。

摘要： 本发明涉及2-氨基-3-甲基-己-5-烯酸，其在用于制备肽(例如杆菌肽)中的应用及其制备方法。

摘要： 本发明公开了利用里氏木霉与地衣芽孢杆菌一体化生物加工制备杆菌肽的方法，包括纤维素分解和产杆菌肽两个阶段。在产杆菌肽阶段，由于这两株菌的生长周期与生长条件各不相同，通常难以兼容。因此本发明采用一体化生物加工的工艺，通过调整温度、pH、培养基成分、转速等发酵条件同时满足两者的生长需求，有效解决了里氏木霉与地衣芽孢杆菌进行共发酵时难以相互兼容的关键问题，提高了豆渣中纤维素和蛋白质的利用效率。本发明方法与其他发酵方法相比，明显地缩短发酵周期；在培养基成分方面，充分利用豆渣为粗原料降低生产成本，减少豆制品加工的环境污染。

摘要： 本发明公开了一种提高地衣芽孢杆菌产杆菌肽的方法，属于微生物技术领域。本发明从饲料样品中筛选获得高产杆菌肽的地衣芽孢杆菌ATH，通过基因工程的方法在地衣芽孢杆菌ATH内表达枯草芽孢杆菌来源的乙酰辅酶A合成酶Bsacs基因，增加胞内杆菌肽组成氨基酸的供给，提高杆菌肽效价。将得到的重组地衣芽孢杆菌接种至含豆粕粉的发酵培养基中发酵培养42h后，得到的杆菌肽效价为1928IU/mL，比出发菌株ATH杆菌肽效价提高了46.16％，同时杆菌肽A的含量为1081IU/mL，与出发菌株相比，提高了37.2％。整个发酵过程产杆菌肽效率高，原料成本低，且方法简单，易于操作。