时间分辨荧光免疫分析法

摘要： 时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)是一种结合了酶标记免疫分析和放射免疫分析的新型超微量免疫标记分析方法,具有无放射性、无背景光干扰、灵敏度高、稳定性好、线性范围宽、操作简便、分析速度快等优点,已被广泛应用于临床医学检验、食品快速检测等领域。该研究就TRFIA的研究进展及在临床医学领域的应用作一综述。

摘要： 目的 评价国产Auto TRFIA-4型自动荧光免疫分析仪与试剂盒检测妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)的性能,并建立参考区间.方法 国产Auto TRFIA-4型自动荧光免疫分析仪与试剂盒组成待评价系统.依据PAPP-A检测试剂盒医药行业标准,对待评价系统检测PAPP-A的检测限、线性和精密度进行评价;并采用方法学比对试验检测了66例孕早期不同孕周的孕母血清样本,进行准确度评价.参考C28-A2文件,待评价系统检测了2524例孕早期不同孕周的孕母血清样本,进行PAPP-A参考区间的建立.结果 待评价系统检测PAPP-A的空白限为0.50 mIU/L,检测限优于25.00 mIU/L,线性在9.00～2530.00 mIU/L内的相关系数(r)达0.9998,批内变异系数(CV)小于3％,批间CV小于4％.待评价系统与对比系统检测血清样本结果的线性回归方程为Y=0.9373X+271.15,r=0.9966(tr=96.68,P﹤0.05),且两系统检测的PAPP-A浓度结果差异无统计学意义(t=1.10,P﹥0.05).在9～9+6,10～10+6,11～11+6,12～12+6和13～13+6孕周的PAPP-A中位数分别为977,1550,2536,3683和5393 mIU/L.结论 待评价系统检测PAPP-A满足PAPP-A检测试剂盒医药行业标准的要求,建立的PAPP-A参考区间以供临床参考.

摘要： 目的 评价梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和金免疫标记法检测梅毒特异性抗体的性能.方法 收集在我科进行梅毒特异性抗体检测且TRFIA筛选为阳性的标本,用TPPA、TRFIA、ELISA和金免疫标记法测定,以TPPA为确认方法,比较其它3种方法检测梅毒特异性抗体的灵敏度、特异性和符合率等;分析TRFIA检测的不同S/CO值区间标本,3种方法与PPA检测结果的符合率.结果以TPPA为标准,TRFIA、ELISA和金免疫标记法检测梅毒特异性抗体的灵敏度分别为100％、99.07％和95.14％,特异性分别为99.43％、99.97％和99.92％,符合率分别为99.44％、99.95％和99.81％;当TRFIA检测的S/CO值在1～＜10区间时,TRFIA、ELISA和金免疫标记法与TPPA检测结果符合率分别为24.82％、94.32％和77.31％;当TRFIA检测的S/CO值＞10时,TRFIA、ELISA和金免疫标记法与TPPA检测结果基本一致.结论 实验室可先用TRFIA、ELISA等灵敏度高的方法进行梅毒特异性抗体筛查,再用ELISA、TPPA等特异性好的方法对筛查结果进行确认,以提高检测结果的准确性.

摘要： 目的 探讨孕前女性甲状腺功能筛查新模式的可行性.方法 选择2019年1～4月在江苏省宜兴市妇幼保健院婚检中心进行免费孕前优生检查的女性1026例,其中促甲状腺素(TSH)在0.1～2.5 mU/L区间共719例,采用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb).采用罗氏电化学发光法验证TRFIA检测结果,观察TRFIA检测与罗氏电化学发光法的符合率.结果 719例患者中,TRFIA多筛查出TPOAb阳性36例,占比5.01％;TgAb阳性31例,占比4.31％.36例TPOAb阳性患者中,18例经课题经费验证,12例经门诊自费复诊验证,6例拒绝复查;31例TgAb阳性患者中,15例经课题经费验证,13例经门诊自费复诊验证,3例拒绝复查.课题经费及门诊复诊验证结果均显示,TRFIA检测甲状腺抗体阳性率与罗氏电化学发光法符合率较高,TPOAb阳性符合率分别为94.44％及91.67％,TgAb阳性符合率分别为93.33％及84.62％.结论 TRFIA的准确率较高,该技术运用于孕前女性甲状腺功能筛查的新模式有利于早期发现TPOAb、TgAb,促进优生优育.

摘要： 杀菌剂在农业领域的长期滥用,造成了其在农产品中的残留超标,而长期摄入这种超标食品会对人体健康造成很大危害,因此需要对农产品中的杀菌剂残留进行分析检测.本文总结了这类杀菌剂半抗原的设计与合成过程,综述了检测杀菌剂残留的ELSA、胶体金免疫层析法、时间分辨荧光免疫分析法和免疫传感器,并对检测技术的存在问题及发展趋势进行了讨论.

摘要： 目的建立一种乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs)中和验证方法并初步应用。方法采用双抗原夹心时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)原理建立了抗-HBs中和验证方法,固相包被乙型肝炎病毒表面抗原[HBsAg(ad/ay)]作为捕获抗原,N1-(P-异硫氰基苄基)-二乙三胺四乙酸铕钠标记HBsAg(ad/ay)作为检测抗原,采用HBsAg阳性混合样本作为中和HBsAg。自建的抗-HBs中和验证方法采用检测国家参考品、国家标准品和血清盘样本进行性能评估。丰华公司抗-HBs TRFIA试剂与Abbott公司抗-HBs化学发光微粒子免疫法(CMIA)试剂平行对比检测了171例临床样本,对2种试剂抗-HBs不符合样本以及同时阳性样本,采用自建抗-HBs中和验证方法进行中和实验。结果自建抗-HBs中和验证方法的固相包被HBsAg(ad/ay)的工作浓度为5.0μg/mL,标记物母液工作稀释比例为1∶1500,中和HBsAg的工作稀释比例为1∶1000。自建中和验证方法检测20份国家阴性参考品均为无反应性;检测国家精密度参考品的CV为4.10%(n=10);最低检出量不高于10.00 IU/L;检测国家标准品9.40~160.00 IU/L,实测值与理论值的相对偏倚在-4.08%~4.36%内,线性相关系数能达0.99以上。检测20份血清盘阴性样本均为无反应性;检测20份血清盘阳性样本均有反应性;检测血清盘灵敏度样本L1~L5,L1为有反应性;检测血清盘精密度样本的CV为5.56%(n=10)。抗-HBs TRFIA试剂与CMIA试剂对比检测了171例临床样本,其中9份样本CMIA试剂阴性而TRFIA试剂阳性的样本,有5份CMIA试剂抗-HBs在8.00~10.00 IU/L间,中和验证实验为有反应性;3份CMIA试剂阳性而TRFIA试剂阴性的样本中,中和验证实验为有反应性。69份TRFIA试剂与CMIA试剂抗-HBs同时阳性样本,中和验证实验均为有反应性。结论自建抗-HBs中和验证方法性能良好。建议各临床实验室尽量不要采用不同的检测系统同时进行抗-HBs定量检测并进行直接比较。

摘要： 目的 以瞬时受体电位通道5(TRPC5)作为乳腺癌肿瘤耐药标志物,建立乳腺癌耐药体外诊断方法.方法 采用时间分辨荧光技术建立TRPC5时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),以TRPC5-血蓝蛋白(KLH)为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗TRPC5抗体;黏蛋白(MUC1)抗体包被免疫磁珠处理样本;TRPC5多肽包被96孔板为固相抗原,与游离TRPC5共同竞争有限的抗TRPC5抗体;用Eu3+-羊抗兔抗体进行示踪.结果TRPC5 TRFIA的敏感性为1 ng/mL,精确度测量范围为5～500 ng/mL,各孔计数值变异系数(CV)为5.5％,平均回收率为94.6％,运用TRFIA检测,3个效应点检测值ED80、ED50、ED20分别为(4.68±0.13)、(321.66±2.77)和(714.42±4.07)ng/mL,经过临床样本检测发现化疗耐药患者的样本检测结果与化疗耐受尚可患者相比,差异有统计学意义(P<0.0001).结论TRPC5 TRFIA可对乳腺癌化疗耐药及化疗尚可患者进行区分,具有临床应用意义,值得进一步研究.%ObjectiveTransient receptor potential channel 5(TRPC5) can be as a marker of breast cancer drug resistance. To establish a method for the diagnosis of breast cancerin vitro drug resistance.MethodsTime-resolved fluoroimmunoassay(TRFIA)was established for TRPC5. Anti-TRPC5 antibody was prepared by immunizing New Zealand white rabbits with TRPC5-keyhole limpet hemocyanin(KLH) as an immunogen. Mucin 1(MUC1) antibody coated immunomagnetic beads to process samples. TRPC5 peptides, coated with 96-well plates as solid-phase antigens, competed with free TRPC5 antigen. Eu3+-goat anti-rabbit antibody wasused as a tracer.ResultsThe sensitivity was 1 ng/mL for TRPC5 TRFIA. The range was 5-500 ng/mL. The coefficient of variation(CV)was 5.5％. The mean recovery rate was 94.6％. The ED80,ED50 and ED20 of TRFIA were(4.68±0.13),(321.66±2.77) and (714.42±4.07)ng/mL,respectively. There was statistical significance for the results of chemotherapy-resistant patients and chemotherapy-tolerant patients(P<0.0001).ConclusionsTRPC5 TRFIA has a certain degree of differentiation between breast cancer chemotherapy resistance or not. It has clinical significance and is worth further study.

摘要： 目的:比较酶联免疫吸附试验法(ELISA)和时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测梅毒特异性抗体.方法:对256例梅毒高危患者血清,分别用两种方法进行检测,得出阴阳性者和阴阳性率,比较它们的灵敏度、特异性.结果: TP-ELISA阳性59例,占总受检总数23.0％,TP-TRFIA阳性75例,占总受检总数29.3％.结论:TRFIA法测梅毒抗体的阳性率高于ELISA法,TRFIA的灵敏度比ELISA较高,特异性也相对较高.且全自动仪器操作简便,适合大批量血液筛查检测.

摘要： 采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速的高灵敏度的盐酸克伦特罗(CLB)全自动检测方法。以CLB—OVA包被96微孔板作为固相抗原,与游离CLB竞争限量的以Eu3+标记的抗CLB单克隆抗体,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测CLB.该方法的灵敏度为0.03 ng/mL,批内和批间变异系数分别为2.0％和8.9％,平均回收率为105.8％,与沙丁胺醇、莱克多巴胺的交叉反应率分别为0.96％和0.77％,方法特异性良好.结果表明,TRFIA检测CLB的方法灵敏度高,特异性强,稳定性好,具有良好的应用前景.

摘要： 采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速的高灵敏度的盐酸克伦特罗(CLB)全自动检测方法。以CLB—OVA包被96微孔板作为固相抗原,与游离CLB竞争限量的以Eu3+标记的抗CLB单克隆抗体,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测CLB.该方法的灵敏度为0.03 ng/mL,批内和批间变异系数分别为2.0％和8.9％,平均回收率为105.8％,与沙丁胺醇、莱克多巴胺的交叉反应率分别为0.96％和0.77％,方法特异性良好.结果表明,TRFIA检测CLB的方法灵敏度高,特异性强,稳定性好,具有良好的应用前景.

摘要： 采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速的高灵敏度的盐酸克伦特罗(CLB)全自动检测方法。以CLB—OVA包被96微孔板作为固相抗原,与游离CLB竞争限量的以Eu3+标记的抗CLB单克隆抗体,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测CLB.该方法的灵敏度为0.03 ng/mL,批内和批间变异系数分别为2.0％和8.9％,平均回收率为105.8％,与沙丁胺醇、莱克多巴胺的交叉反应率分别为0.96％和0.77％,方法特异性良好.结果表明,TRFIA检测CLB的方法灵敏度高,特异性强,稳定性好,具有良好的应用前景.

摘要： 采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速的高灵敏度的盐酸克伦特罗(CLB)全自动检测方法。以CLB—OVA包被96微孔板作为固相抗原,与游离CLB竞争限量的以Eu3+标记的抗CLB单克隆抗体,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测CLB.该方法的灵敏度为0.03 ng/mL,批内和批间变异系数分别为2.0％和8.9％,平均回收率为105.8％,与沙丁胺醇、莱克多巴胺的交叉反应率分别为0.96％和0.77％,方法特异性良好.结果表明,TRFIA检测CLB的方法灵敏度高,特异性强,稳定性好,具有良好的应用前景.

摘要： 本发明公开了一种糖类抗原19-9时间分辨免疫荧光分析法及试剂盒，该分析法包括：①固相抗体制备；②镧系元素离子标记抗体制备；③在步骤①制得的具有固相抗体的固相材料中，加入糖类抗原19-9标准品或待测样品，以及反应缓冲液，经孵育、洗涤固相材料后，加入稀释的标记抗体，再次孵育后进行荧光检测；本发明还提供相应的试剂盒。本发明具有较高的灵敏度、特异性、稳定性，而且检测时间短，检测CA19-9国家质控品符合率高的特点。

摘要： 本发明公开了人类免疫缺陷病毒HIV(1+2型)抗体检测双抗原夹心时间分辨免疫荧光分析法及试剂盒，其选用重组你作为包被抗原，用碳酸钠缓冲溶液稀释至1-10ug/mL作为包被液；配对HIV重组抗原用镧系元素离子标记作为标记抗原；实验时用反应缓冲液按1∶21稀释使用；在包被抗体的反应板上，每孔依次加入100uL的HIV阴阳性对照或待测样品、以及稀释的标记抗原，孵育后进行荧光检测。本发明还提供相应的试剂盒。本发明具有较高的灵敏度、特异性及稳定性；且分析系统高度自动化，可提高临床检验结果的速度，可大幅度降低人为误差和增加检出结果的可靠性。

摘要： 本发明公开了一种血清sH2a含量的时间分辨免疫荧光分析法，是在包被抗sH2a单克隆抗体的固相材料中，加入sH2a标准品或待测血清样品，孵育，洗涤，再加入镧系元素离子标记的能够与前述抗sH2a单克隆抗体配对的抗sH2a单克隆抗体，孵育，洗涤，再加入解离增强液，震荡，测定荧光强度，根据sH2a标准品测定结果绘制标准曲线，根据标准曲线计算待测血清样品中的sH2a含量；本发明同时公开了一种血清sH2a含量的时间分辨免疫荧光分析法检测试剂盒；本发明检测方法和试剂盒具有线性范围宽、零本底、稳定性好、灵敏度高、特异性强、准确度高、检测时间短等优点，可用于肝病患者血清sH2a含量检测，便于临床肝病的辅助诊断。

摘要： 本发明公开了一种用于β-HCG检测的时间分辨免疫荧光分析法及试剂盒，其选用抗β-HCG单克隆抗体作为包被抗体，用碳酸钠缓冲溶液稀释至1－10ug/ml作为包被液；配对抗β-HCG单克隆抗体用镧系元素离子标记作为标记抗体；实验时用反应缓冲液按1∶20稀释使用；在包被抗体的反应板上，每孔依次加入25ul的β-HCG的标准品或待测样品、以及稀释的标记抗体，孵育后进行荧光检测。本发明还提供相应的试剂盒。本发明具有较高的灵敏度、特异性及稳定性；且分析系统高度自动化，可提高临床检验结果的速度，可大幅度降低人为误差和增加检出结果的可靠性。

摘要： 本发明公开了丙型肝炎病毒核心抗原时间分辨免疫荧光分析法及检测试剂盒。本发明通过分析丙型肝炎病毒核心抗原序列而得到四珠单克隆抗体,使用其中的抗HCV-cAg单克隆抗体I、II作为包被抗体，抗HCV-cAg单克隆抗体III、IV作为铕标记抗体，用双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析法制备HCV-cAg诊断试剂盒。检测试剂盒包括盒体，设在盒体内的包被板和设在盒体内试剂及不干胶封片和使用说明书。其中所述的包被板各孔包被有包被抗体I、II;所述试剂包括:抗HCV-cAg单克隆抗体III、IV铕标记抗体、HCV核心抗原标准品、反应缓冲液、25X浓缩洗涤液、增强液。本发明具有较高的灵敏度、特异性及稳定性;且分析系统高度自动化，可提高临床检验结果的速度，可大幅度降低人为误差和增加检出结果的可靠性。

摘要： 本发明公开的是一种基于磁微粒时间分辨荧光免疫分析法的ST2检测方法方法包括包被ST2抗体的磁微粒的制备，铕标记的ST2抗体的制备，将待测样本、铕标记抗体、抗体偶联的磁微粒混合孵育，反应后在磁力作用下洗涤，除去未结合物，之后加入增强液对铕进行解离增强，采用时间分辨荧光分析仪测定荧光值，本发明可以快速检测待测样本中ST2的含量，具有特异性强、灵敏度高、重复性好等特点，可用于临床对脓毒症的辅助诊断，具有较好的应用前景。

摘要： 本发明公开的是一种基于磁微粒时间分辨荧光免疫分析法的胰石蛋白检测方法，属于免疫检测分析技术和纳米生物技术领域检测方法包括包被PSP抗体的磁微粒的制备，铕标记的PSP抗体的制备，将待测样本、铕标记抗体、抗体偶联的磁微粒混合孵育，反应后在磁力作用下洗涤，除去未结合物，之后加入增强液对铕进行解离增强，采用时间分辨荧光分析仪测定荧光值，本发明可以快速检测待测样本中PSP的含量，具有特异性强、灵敏度高、重复性好等特点，可用于临床对脓毒症的辅助诊断，具有较好的应用前景。

摘要： 本发明公开的是一种基于时间分辨荧光免疫分析法的PLA2R‑CTLD678抗体检测方法,包括包被PLA2R‑CTLD678抗原的聚丙烯孔板的制备，Eu3+标记的PLA2R‑CTLD678检测二抗IgG4的制备,将抗原偶联的聚丙烯孔板、待测样本、Eu3+标记的PLA2R‑CTLD678检测二抗IgG4依次混合孵育，反应后在Tris‑HCl洗液作用下洗涤，除去未结合物，之后加入增强液对Eu3+进行解离增强，采用时间分辨荧光分析仪测定荧光值,本发明可以快速检测待测样本中PLA2R‑CTLD678抗体的含量，具有特异性强、灵敏度高、重复性好等特点，具有较好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种测定紫杉醇含量的时间分辨荧光免疫分析法，以兔抗鼠IgG包被96孔酶标反应板，与样品中的紫杉醇竞争结合抗紫杉醇的单抗，用稀土离子Eu

摘要： 本发明公开了一种测定柴胡皂苷a(SSa)含量的时间分辨荧光免疫分析法及试剂盒，属于含量测定的化学方法技术领域。本方法以兔抗鼠IgG包被96孔酶标反应板，与样品或标准品中的SSa竞争结合一定量的抗SSa的单抗；用稀土离子Eu