早期妊娠诊断

摘要： B超实时扫描为诊断妊娠母马提供了有效工具。在生产实践中,B超可提高早期妊娠诊断的精确性。其诊断原理是,以高频声波对母马子宫角探查,然后将回波放大以后实时图像显示在屏幕上。在此次对比中,将B超应用到母马发情鉴定、母马妊娠诊断和母马空怀再配中。

摘要： 奶牛配种后,及时且准确了解奶牛的妊娠状况至关重要。奶牛早期妊娠诊断可显著缩短平均育种间隔,提高奶牛养殖效率。随着早期妊娠诊断技术不断发展,检测牛妊娠相关糖蛋白(PAG)逐渐被人们重视,尤其是酶联免疫吸附试验(ELISA)得到更多的开发与利用。目前国外已有PAG ELISA牛妊娠检测试剂盒用于检测怀孕早期PAGs,该方法快速、准确、灵敏,而国内现存的试纸条准确率低。本文综述了传统的奶牛早期妊娠诊断方法和PAG ELISA方法的发展现状,对ELISA检测方法在动物繁殖领域的应用进行展望。

摘要： 为建立一种简便、经济、无创的应用于绵羊早期妊娠诊断的快速检测技术,以绵羊妊娠相关糖蛋白7(Ovine pregnancy-associated glycoproteins-7,ovPAG7)核酸适配体为分子识别探针,建立一种间接竞争酶联适配体(Indirect competitive enzyme-linked aptamer assay,ic-ELAA)检测ovPAG7的新方法,并对ovPAG7包被质量浓度、包被缓冲液、封闭条件、适配体浓度、链霉亲和素-辣根过氧化物酶(SA-HRP)稀释比例等检测条件进行优化,将建立的方法应用于人工授精后28 d的中国美利奴羊血清检测,检测结果与妊娠相关糖蛋白-酶联免疫吸附测定(PAG-ELISA)商业化试剂盒和B超检测法进行比较。结果显示,在ovPAG7包被质量浓度为2.0μg/ml、包被缓冲液为50 mmol/L碳酸盐缓冲液(pH 9.6)、1.0%牛血清蛋白质封闭2 h、适配体浓度为40 nmol/L、SA-HRP稀释比例为1∶40000(体积比)、室温下竞争反应时间为40 min等优化条件下,ovPAG7在缓冲液体系和血清体系中质量浓度的线性范围均为0.1~50.0 ng/ml(R^(2)>0.994),半数抑制质量浓度(IC_(50))分别为1.40 ng/ml和2.11 ng/ml,检测限分别为0.11 ng/ml和0.19 ng/ml。ovPAG7在空白样品中加标回收率为96.4%~106.8%,相对标准偏差小于6.0%。妊娠诊断结果显示,ic-ELAA法的诊断敏感性、特异性和准确率分别为96.0%、83.3%和91.2%,与B超检测结果一致性较高(Kappa值=0.810)。

摘要： 免疫分析测定妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoproteins,PAGs)是目前常用的家畜早 期妊娠检测方法,但是抗体作为识别分子存在制备周期长、成本高等缺点.为丰富奶牛(Bostaurus)早期妊娠诊断技术,降低检测成本,本研究以牛(bovine)妊娠相关糖蛋白(bPAG)的核酸适配体为识别分子,基于双适配体夹心原理,建立了一种bPAG的可视化检测方法,并对适配体浓度、适配体-辣根过氧化物酶浓度、封闭剂浓度、反应时间、包被缓冲液等条件进行了优化.结果显示,在优化条件下,bPAG9在0.5～100 ng/mL浓度范围内呈良好线性(R=0.998),检测限为0.22 ng/mL,目测可视化检测限0.5 ng/mL.采用3个梯度浓度(1,10,100ng/mL)的bPAG9做空白样品添加实验,平均加标回收率为93.2％～105.8％,相对标准偏差为3.51％～7.13％.将建立的方法应用于人工授精30d后的奶牛血清检测,并采用超声波检测法进行对比验证,本方法妊娠诊断准确率达到91.7％.本研究为奶牛早期妊娠诊断提供一种简便、经济、可靠的快速检测新技术.

摘要： 随着规模化、集约化养牛产业的飞速发展,急需更加准确、高效和方便的早期妊娠诊断方法,以缩短母牛产犊间隔,减少空怀期母牛饲养成本,提高养殖效益。目前养牛行业使用的早期妊娠诊断方法主要包括直肠触诊、超声波诊断以及通过检测妊娠相关生物标志物的免疫学诊断等。然而,这些早期妊娠诊断方法都存在一定的弊端,很难满足当前养牛行业的需求。本文阐述了几种早期妊娠诊断方法的优缺点,力求找出母牛最合适的早期妊娠诊断方法,以利于妊娠早期母牛的精细化管理和母牛繁殖效率的提高。

摘要： [目的]解决天然牛妊娠相关糖蛋白(bPAG)不易分离纯化的问题,获得高效异源表达且具有良好免疫反应性的bPAG6,为国产bPAG检测产品的研发提供技术支持。[方法]根据宿主细胞对密码子的偏好性,利用MaxCodon^TM在不改变氨基酸序列的前提下,对bPAG6基因密码子进行优化,采用全基因合成技术扩增优化后的bPAG6基因,构建proEM-bPA G6重组载体,并转染至HEK293细胞中进行高效表达;然后通过SDS-PAGE电泳、Western blotting和ELISA检测重组蛋白的表达效果及免疫反应性,并利用在线生物信息学分析软件对重组蛋白的结构及功能进行预测。[结果]优化后bPAG6基因的密码子适用指数(CAI)由0.80提高到0.96,G+C含量由49.4%提高到58.8%,其蛋白编码区(CDS)长度为1137 bp,共编码379个氨基酸残基。将全基因合成技术扩增获得的bPAG6基因插入proEM载体构建proEM-bPA G6重组载体,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定可获得2条与预期结果相符的片段[proEM载体(4369 bp)和bPAG6基因(1176 bp)],测序结果也显示其碱基序列与优化后的bPAG6基因完全一致。proEM-bPA G6重组载体转染HEK293细胞表达获得的重组蛋白bPAG6分子量约46 kD。重组蛋白bPAG6可被抗bPAG6抗体识别,即具有良好的免疫反应性。重组蛋白bPAG6信号肽由N端的前15个氨基酸残基组成;存在5个N-糖基化位点,其N-糖基化修饰主要位于57Asn、73Asn、102Asn、124Asn和181Asn位点处;重组蛋白bPAG6为分泌性蛋白,无跨膜螺旋区,其二级结构由无规则卷曲(42.74%)、延伸链(31.93%)、α-螺旋(19.26%)和β-转角(6.07%)组成。[结论]通过基因优化及真核表达获得的重组蛋白bPAG6具有良好免疫反应性,可作为抗原应用于牛早期妊娠快速诊断产品的研发。

摘要： [目的]解决天然牛妊娠相关糖蛋白(bPAG)不易分离纯化的问题,获得高效异源表达且具有良好免疫反应性的bPAG6,为国产bPAG检测产品的研发提供技术支持.[方法]根据宿主细胞对密码子的偏好性,利用MaxCodonTM在不改变氨基酸序列的前提下,对bPAG6基因密码子进行优化,采用全基因合成技术扩增优化后的bPAG6基因,构建proEM-bPAG6重组载体,并转染至HEK293细胞中进行高效表达;然后通过SDS-PAGE电泳、Western blotting和ELISA检测重组蛋白的表达效果及免疫反应性,并利用在线生物信息学分析软件对重组蛋白的结构及功能进行预测.[结果]优化后bPAG6基因的密码子适用指数(CAI)由0.80提高到0.96,G+C含量由49.4％提高到58.8％,其蛋白编码区(CDS)长度为1137 bp,共编码379个氨基酸残基.将全基因合成技术扩增获得的bPAG6基因插入proEM载体构建proEM-bPAG6重组载体,经EcoR I和Hind III双酶切鉴定可获得2条与预期结果相符的片段[proEM载体(4369 bp)和bPAG6基因(1176 bp)],测序结果也显示其碱基序列与优化后的bPAG6基因完全一致.proEM-bPAG6重组载体转染HEK293细胞表达获得的重组蛋白bPAG6分子量约46 kD.重组蛋白bPAG6可被抗bPAG6抗体识别,即具有良好的免疫反应性.重组蛋白bPAG6信号肽由N端的前15个氨基酸残基组成;存在5个N-糖基化位点,其N-糖基化修饰主要位于57Asn、73Asn、102Asn、124Asn和181Asn位点处;重组蛋白bPAG6为分泌性蛋白,无跨膜螺旋区,其二级结构由无规则卷曲(42.74％)、延伸链(31.93％)、α-螺旋(19.26％)和β-转角(6.07％)组成.[结论]通过基因优化及真核表达获得的重组蛋白bPAG6具有良好免疫反应性,可作为抗原应用于牛早期妊娠快速诊断产品的研发.

摘要： 直肠B超在卵泡监测、早期妊娠诊断、卵巢及子宫疾病诊断等方面有独特优势,且具有快速、直观、准确、无损伤等特点。随着山羊养殖业规模化、集约化程度的不断提高以及同期发情、人工授精等技术的推广应用,借助B超诊断技术进行早期妊娠诊断,有利于山羊的科学饲养管理,提高繁殖率。目前,直肠B超在一些大家畜上的早期妊娠诊断已有报道,但其尚未应用于湖北黑头山羊。试验结合同期发情和人工授精技术,利用直肠B超监测湖北黑头山羊卵泡发育并进行早期妊娠诊断,旨在摸索出一套湖北黑头山羊发情和早孕的诊断方法,为湖北黑头山羊的快速扩繁和规模化养殖提供参考。

摘要： 高效准确的早期妊娠诊断,可以缩短母牛的产犊间隔,从而达到提高母牛繁殖效率的目的.家畜早期妊娠诊断方法的研究具有悠久的历史,从原始的外部观察法到目前应用最广泛且最直接的直肠检查法,再到后期发展起来的超声波检查法以及近年来研究比较多的易于商业化的间接检测法.本文对在生产中具有实际应用效果且具有一定发展前景的早期妊娠诊断技术应用现状进行了综述.

摘要： 粪便中孕酮含量是判断母猪卵巢机能状态的重要指标,本文建立了粪样孕酮酶免法对母猪进行早孕诊断.由结果可知,配种后母猪粪便中孕酮的含量超过150 ng/g粪样时,就可确认其妊娠;小于150 ng/g时,可确认其空怀.本试验检测了配种后第21～25天共164头母猪,早孕诊断的准确率为95.9％ (138/146),空怀诊断的准确率为72％ (13/18).母猪粪便孕酮酶免疫法进行早期妊娠诊断有较高的临床适用性,对提高母猪繁殖率和猪场经济效益具有重要意义.

摘要： 母猪的早期妊娠诊断是母猪繁殖管理上的一项重要内容，也是长期以来养猪业亟待解决的问题。母猪配种后是否妊娠应及早进行诊断，以便尽早检出空怀母猪，及时补配，防止空怀。这对于保胎、缩短胎次间隔、减少饲料浪费率、及时淘汰低繁殖力或不育母猪、提高繁殖力和经济效益具有重要意义。本文针对利用A型超声诊断仪对母猪进行早期妊娠诊断作了详细研究，效果较为理想。

摘要： 本申请涉及检测技术领域，尤其涉及一组用于妊娠期糖尿病早期诊断的标记物及其应用，所述标记物为包括植物鞘胺醇、十二碳三烯酸、4‑乙基苯甲醛、N‑乙酰‑L‑肌肽、次黄嘌呤、吲哚‑3‑丙烯酸的至少一种。上述六种标记物在早期妊娠期糖尿病患者中血液中的表达水平与健康者相比有显著差异。本申请采用ROC分析进一步评估了上述标记物在妊娠期糖尿病患者的诊断效果的准确性，具有很好的临床应用价值。

摘要： 本发明公开了血清外泌体RNA在制备妊娠糖尿病性巨大儿筛查或早期诊断试剂中的应用。检测血清外泌体来源的mRNA GDF3和lncRNA AC006064.4的试剂在制备妊娠糖尿病性巨大儿高危孕妇筛查或早期诊断试剂中的应用。本发明利用血清外泌体来源的mRNA GDF3和lncRNA AC006064.4表达水平，结合孕妇年龄、空腹血糖和2h血糖，对妊娠糖尿病性巨大儿早期诊断的特异性可达1.00，灵敏度达到0.55。因此，上述两个指标的试剂能用于妊娠糖尿病性巨大儿辅助早期诊断，为临床医生准确预测巨大儿发生风险，及时采取更具个体化的防治方案提供支持，从而最大限度的减少不良妊娠结局。

摘要： 本发明属于检测试剂盒技术领域，涉及一种牦牛早期快速妊娠诊断的血液检测试剂盒，包括试纸条、上壳体和下壳体，试纸条包括底板，底板上从左到右依次设置有样品垫、红细胞滤膜、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸，硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，检测线为孕酮单克隆抗体，质控线为羊抗鼠IgG。本发明的试剂盒通过检测牦牛血液样本快速判断牦牛早期妊娠，结果准确，灵敏度高。

摘要： 本发明公开了一种妊娠糖尿病性巨大儿高危孕妇筛查或早期诊断试剂盒。一种妊娠糖尿病性巨大儿高危孕妇筛查或早期诊断试剂盒，其特征在于包含检测血清外泌体来源的LncRNA AC015961.2的试剂。本发明利用血清外泌体来源的LncRNA AC015961.2对妊娠糖尿病性巨大儿早期诊断的特异性可达87.5％，灵敏度达到75.0％。检测妊娠糖尿病孕妇血清外泌体中LncRNA AC015961.2的表达水平，能用于妊娠糖尿病性巨大儿辅助早期诊断，为临床医生准确预测巨大儿发生风险，及时采取更具个体化的防治方案提供支持，从而最大限度的减少不良妊娠结局。

摘要： 本发明属于妊娠糖尿病诊断标志物分子的技术领域，具体涉及:一种用于早期诊断妊娠糖尿病的miRNA分子标志物及其应用。所述miRNA分子标志物包括miRNA‑372标志物、miRNA‑22标志物的一种或两种组合；所述miRNA‑372标志物的核苷酸序列如序列表SEQID NO.1所示；所述miRNA‑22标志物的核苷酸序列如序列表SEQ IDNO.2所示；所述miRNA分子标志物用于早期诊断妊娠糖尿病，用于制备早期诊断妊娠糖尿病的试剂盒。

摘要： 本发明公开了一种蛋白生物标志物为CHI3L1蛋白，其序列号为2101；PSMB4蛋白，其序列号为2102；LGALS3BP蛋白，其序列号为2103。上述蛋白生物标志物应用于绵羊早期妊娠诊断。一种绵羊早期妊娠检测的方法，其特征在于：具体步骤如下：①、采集血样：采集配种后14天的绵羊外周血；②、血样处理：对①步骤的血样进行分离血清或血浆处理：③、试剂盒检测：选用ELISA试剂盒对②步骤处理后的血样进行检测，检测CHI3L1蛋白、PSMB4蛋白及LGALS3BP蛋白的含量。

摘要： 本发明公开了一种用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物，其特征在于：蛋白生物标志物为下列蛋白标志物之一：FLNC蛋白，其序列号为2101；ADIPOQ蛋白，其序列号为2102；HP蛋白，其序列号为2103；TERF2蛋白，其序列号为2104；母猪早期妊娠检测的方法，其特征在于：具体步骤如下：①、采集血样：采集配种后15天的母猪外周血；②、血样处理：对①步骤的血样进行分离血清或血浆处理：③、试剂盒检测：选用ELISA试剂盒对②步骤处理后的血样进行检测。

摘要： 本发明公开了一种用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物，其特征在于：蛋白生物标志物为下列蛋白标志物之一：FLNC蛋白，其序列号为1；ADIPOQ蛋白，其序列号为2；HP蛋白，其序列号为3；TERF2蛋白，其序列号为4；母猪早期妊娠诊断方法，其特征在于：具体步骤如下：①、采集血样：采集配种后15天的母猪外周血；②、血样处理：对①步骤的血样进行分离血清或血浆处理：③、试剂盒检测：选用ELISA试剂盒对②步骤处理后的血样进行检测。

摘要： 本发明公开了一种蛋白生物标志物为CHI3L1蛋白，其序列号为1；PSMB4蛋白，其序列号为2；LGALS3BP蛋白，其序列号为3。上述蛋白生物标志物应用于绵羊早期妊娠诊断。一种绵羊早期妊娠诊断方法，其特征在于：具体步骤如下：①、采集血样：采集配种后14天的绵羊外周血；②、血样处理：对①步骤的血样进行分离血清或血浆处理：③、试剂盒检测：选用ELISA试剂盒对②步骤处理后的血样进行检测，检测CHI3L1蛋白、PSMB4蛋白及LGALS3BP蛋白的含量。

摘要： 本发明公开了一种用于奶牛早期妊娠诊断的C1q胶体金试纸条制作方法，包括以下步骤：S1、制备胶体金，将氯金酸水溶液100mL加热至沸腾，加入0.1mol/L柠檬酸三钠水溶液1.5mL，加热至透明红色，制得胶体金颗粒大小30nm；S2、制备金标抗体溶液，取适量红色胶体金溶液于离心管中，加K2CO3溶液，加入后搅拌均匀；S3、向调整好pH的胶体金溶液中逐滴加入C1q抗体以胶体金标记。本发明检测奶牛早期妊娠，不仅可以检测胎儿是否存在，同时还可以了解胎儿是否发育正常，另外具有操作简单、检测时间短、结果清晰、可通过肉眼判定结果、无需复杂操作技巧和特殊设备、灵敏度高、无污染且携带方便等优点。