早孕因子

摘要： 目的:研究早孕因子单克隆抗体(EPF-McAb)对黑色素瘤细胞A-375增殖、凋亡的影响.方法:体外培养黑色素瘤细胞A-375,通过CCK-8实验检测EPF-McAb对A-375细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测EPF-McAb对A-375细胞凋亡的影响;Western Blot检测EPF-McAb对A-375细胞EPF蛋白表达的影响.结果:CCK-8结果显示EPF-McAb可以抑制黑色素瘤细胞A-375的增殖,且随着作用时间延长和药物浓度的增加,对A-375细胞增殖的抑制作用也增强;流式细胞术实验结果显示EPF-McAb可以促进黑色素瘤细胞A-375的凋亡,且调亡率随着药物浓度的增加而升高,0.2、0.4、0.8 mg/mL的EPF单抗作用于A-375细胞24 h后,细胞调亡率分别为:14.68 ％(P＜0.01)、19.81％ (P＜0.01)、23.97％(P＜0.01);Western Blot实验结果显示EPF-McAb可以降低黑色素瘤细胞A-375 EPF蛋白的表达.结论:早孕因子单克隆抗体可以抑制黑色素瘤细胞A-375的增殖,并促进其凋亡.

摘要： 目的:探讨细胞表达的重组早孕因子(CHO-EPF)、大肠杆菌表达的重组早孕因子(BL21-EPF)和天然早孕因子(Native EarlyPregnancy Factor,nEPF)之间的免疫交叉反应,寻找制备EPF抗体比较理想的免疫原.方法:采用CHO-EPF、nEPF作为免疫原分别免疫BALB/c小鼠,制备CHO-EPF多抗和nEPF多抗;结合本实验室储备的BL21-EPF鼠单克隆抗体,运用SDS-PAGE、Westernblotting及ELISA等方法对nEPF、CHO-EPF、BL21-EPF之间的免疫交叉反应进行检测.结果:三种来源的EPF诱导抗体的效价比较无显著性差异.原核表达BL21-EPF与nEPF诱导的抗体中BL21-EPF单抗能识别nEPF中26 ku和52 ku组分,且抗nEPF多抗也能与BL21-EPF中10ku组分反应;真核表达CHO-EPF与nEPF诱导的抗体中CHO-EPF多抗能识别nEPF中10ku和26 ku组分,而nEPF抗体不能与CHO-EPF反应;原核表达BL21-EPF与真核表达CHO-EPF诱导的抗体中CHO-EPF多抗能识别BL21-EPF中10ku片段,而BL21-EPF单抗不能与CHO-EPF反应.结论:真核源性CHO-EPF、原核源性BL21-EPF、人源性nEPF之间存在一定的交叉反应,在抗体制备过程中用rEPF替代nEPF作为免疫原是可行的.%Objective:To explore the effect of EPF from different sources on antibody titers and the cross reaction between antibodies,and to clarify whether rEPF can replace human EPF as immunogen in the preparation of EPF antibody.Methods:Using the antigens which prepared with three kinds of different methods to immunize BALB/c mice.3 kinds of antibodies,anti-CHO-EPF,BL21-EPF and nEPF were produced,determine their titer and the optimal antigen antibody concentration.The immunogenicity of EPF from different sources was evaluated by SDS-PAGE electrophoresis,Western blotting and ELISA.Results:Interaction experiments showed that the antibodies prepared from three kinds of EPF can identify native EPF.CHO-EPF antibodies recognize BL21-EPF and native EPF,but neither BL21-EPF nor native EPF antibodies do not recognize CHO-EPF.No significant difference in the titer of EPF antibody between the three sources.Conclusion:This study shows that eukaryotic EPF,prokaryotic EPF and human EPF have similar structures and slight differences.The antibody titers of EPFs vary from one source to another and there is a certain cross reaction between antibodies.And it is possible to demonstrate that it is feasible to replace nEPF as an immunogen with rEPF during EPF antibody preparation.

摘要： 为了从妊娠4～5个月健康孕牛血清中分离得到纯化的早孕因子(EPF),通过DE-AE-Sepharos F.F离子交换层析,CM-Sepharose F.F离子交换层析,Con A-Sepharose 4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl 6B亲和层析分离纯化技术,从孕牛血清中分离出纯化出EPF.采用玫瑰花环抑制实验(Ea-RIT)对各阶段产物EPF活性进行检测,最终纯化出具有早孕因子活性的HE-2成分.将HE-2经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)出现分子量为53.6KU蛋白质条带.该方法得到分离纯化的EPF,为进一步研制早孕因子单克隆抗体的制备做准备.

摘要： 早孕因子(early pregnancy factor EPF)是一种妊娠蛋白,在动物授精数小时后即可在母体血液中被检测出来,在整个孕期持续存在,动物分娩后消失,远早于对人绒毛膜促性腺素(HCG)的检测,所以称之为早孕因子.EPF具有免疫抑制和生长调节作用,并且能够抑制T淋巴细胞玫瑰花环的形成,因此通常用玫瑰花环抑制试验来检测其活性.早孕因子应用前景较广泛,可用来预测早期胚胎死亡与流产、鉴定胚胎移植效果、监测胎儿的状态以及食道癌诊断等.

摘要： [目的]探讨肉牛妊娠初期血液和尿液中孕酮(P4)、妊娠相关糖蛋白(PAG)、早孕因子(EPF)的变化,为肉牛早期妊娠诊断奠定基础.[方法]采集肉牛配种后第0、1、8、17、21、28、35天的血、尿液,通过ELISA检测血、尿中P4、PAG、EPF 3种激素的浓度.[结果]在配后0～35 d,妊娠与非妊娠母牛血、尿中P4和PAG浓度变化平缓,而EPF差异较明显,3种激素血液中浓度均高于尿液中.其中,妊娠牛血液中EPF浓度在配后第8天显著(P＜0.05)高于非妊娠牛.[结论]血、尿中EPF浓度变化能反映肉牛的妊娠状态.

摘要： 为制备绵羊早孕因子( EPF)单克隆抗体,以纯化的EPF重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,取小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用间接ELISA方法筛选单克隆抗体细胞株,将筛选的细胞株注入小鼠腹腔得到腹水型抗体,用G-sepharose柱亲合层析法对小鼠腹水型抗体进行纯化,应用SDS-PAGE和Western blot分析抗体纯化后的纯度及特异性。结果显示,细胞融合后得到了1株抗绵羊EPF单克隆抗体的细胞株B4 D5,纯化后的腹水型单克隆抗体纯度较高,具有较强的特异性,应用单克隆抗体检测绵羊妊娠准确率为81.3%。表明,制备的绵羊早孕因子单克隆抗体为特异性抗绵羊EPF抗体。%Inorder to preparate anti-sheep early pregnancy factor ( EPF ) monoclonal antibodies and identify their specificities,spleen cells from BALB/c mice immunized four times with purified EPF were fused with homology myeloma cells( SP2/0 ) . The cell strains of monoclonal antibodies were detected by the indirect ELISA method, and ascitic fluid were obtained by injecting cell strains to enterocoelia of mice. Monoclonal antibodies were purified by G-sepharose column affinity chromatography. Purity and spe-cificity of monoclonal antibodies after purification were detected by SDS-PAGE and Western blot. A cell strain of anti-sheep EPF monoclonal antibodies was obtained after the cell fused ( B4 D5 ) . Anti-sheep EPF monoclonal antibodies were obtained with a high purity and strong specificity after purification,and preci-sion rate of pregnancy was 81. 3%. The monoclonal antibodies had a specificity EPF in sheep.

摘要： 为了获取大量具有免疫原性的早孕因子(EPF)重组蛋白,通过PCR技术扩增得到Hela细胞EPF基因片段,与pREST-A连接.将质粒pREST-A-EPF转化大肠埃希菌BL21后IPTG进行诱导表达,采用His标签蛋白纯化试剂盒纯化重组蛋白后,再用SDS-PAGE和Western blot分别鉴定其纯度和特异性.结果表明,EPF cDNA以正确的阅读框架插入表达载体pREST-A,经IPTG诱导后高效表达EPF重组蛋白,Western blot表明其与抗EPF抗体特异性结合.论文构建了EPF的原核表达载体,纯化获得了重组蛋白,为进一步开展EPF蛋白的相关研究和猪早孕诊断试剂盒的开发奠定了基础.

摘要： 本研究旨在表达、纯化奶牛早孕因子重组蛋白及制备多克隆抗体.本试验构建奶牛早孕因子重组蛋白原核表达载体pET32a-EPF,转化至大肠杆菌BL21(DE3)内进行诱导表达,SDS-PAGE切胶纯化的早孕因子重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并用Western blotting和ELISA对重组蛋白及抗体进行检测.结果显示,成功表达并纯化了奶牛早孕因子重组蛋白,重组蛋白分子质量约37 ku,表达量约占菌体总蛋白的48.6％,纯化后目的蛋白纯度可达93％,重组蛋白可与所制备的多克隆抗体结合,ELISA测定的抗体效价为1∶12 800.结果表明,本研究成功表达并纯化了奶牛早孕因子重组蛋白,为研究奶牛早孕诊断奠定基础.

摘要： Early pregnancy factor (EPF) is a pregnancy-associated protein earliest detected in the serum of mammals after fertilization, and has the function of immune suppression and growth regulation. The origin, biological characteristics and mechanism of early pregnancy and the advances in researches of early pregnancy factor are discussed.%早孕因子（EPF）是哺乳动物受精后最早在血清中检测到的妊娠相关蛋白，具有免疫抑制和生长调节作用，本文结合对早孕因子EPF的来源、生物学特性和作用机制，以及其早孕因子的应用研究进展进行了论述。

摘要： 目的 分离纯化围植入期超早孕妇女血清中免疫抑制物质——早孕因子(early pregnancy factor,EPF).方法 挑选取超声波监测的排卵受精后1到8d内的山西太原妇女40名,抽取血液20-40mL,RIT检测EPF活性,对收集的400 mL胚胎植入期妇女血清,经过DEAE Sepharose离子交换层析,Con A Sepharose 4B亲和层析以及Heparin Sepharose CL-6B亲和层析进行了EPF的分离纯化.结果 受精后1-8天内的妇女血中可检测到EPF.EPF可以被纯化为相对分子质量为18000的单一条带.结论 胚胎围植入期超早孕妇女血中EPF蛋白质的分离和纯化,为EPF的研究,尤其是围植入期免疫抑制作用,避免了母亲的免疫系统对半移植物胚胎的排斥的研究提供了理论和应用价值.

摘要： 目的：构建pPICZαA-EPF载体,电转入毕赤酵母GS115细胞中诱导表达rEPF蛋白,筛选能稳定分泌表达rEPF蛋白的毕赤酵母GS115细胞株,获取大量具有较高免疫原性的早孕因子(EPF)重组蛋白.rn 方法：优化EPF基因编码碱基序列,并在其末端融合6×His碱基序列,合成EPF-His基因,构建pPICZαA-EPF载体.将重组表达质粒pPICZαA-EPF转化大肠杆菌DH5αE.coli,提取pPICZαA-EPF质粒,经xhoI/NotI双酶切、测序鉴定.重组质粒经sacI限制性内切酶酶切线性化,并电转化入毕赤酵母GS115细胞,zeocin抗性培养基筛选重组酵母.接种重组酵母于BMGY/BMMY培养基,甲醇诱导分泌表达,筛选能稳定分泌表达的毕赤酵母GS115细胞株,表达产物经SDS-PAGE、Western-blot及Ea-RIT鉴定.rn 结果：成功合成EPF-His基因片段并构建pPICZαA-EPF载体.转化后的毕赤酵母GS115,经诱导后表达EPF重组蛋白;筛选出一株能稳定分泌表达EPF的毕赤酵母GS115细胞株3760-6.SDS-PAGE结果显示表明重组蛋白分子量为18kDa;Western blotting实验显示EPF重组蛋白与抗His标签单克隆抗体有特异性结合,经Ea-RIT结果表明其具有EPF样活性.rn 结论：成功构建了EPF的pPICZαA-EPF表达载体,筛选出能胞外稳定表达rEPF的GS115细胞株,并获得了具有生物学特性的EPF重组蛋白.

摘要： 检测怀孕绒山羊早孕因子的活性、并分离纯化,以检验EPF快速检测法.采集妊娠1～4个月孕羊血清,通过DEAE-52离子交换层析,Con A-Sepharose4B亲和层析和Heparin Sepharose C16B亲和层析分离纯化得到EPF.用E玫瑰花环抑制实验对各阶段产物EPF活性进行检测.结果表明,授精后的绒山羊在22～30h之间能够检测出早孕因子活性,怀孕羊和未怀孕羊血清的E玫瑰花环抑制滴度差异显著(P＜0.05),纯化出的EPF通过E玫瑰花环抑制实验显示具有活性,其分子质量为47.7ku,等电点为6.7.

摘要： 早孕因子(early pregnancy factor,EPF)是存在于妊娠哺乳动物血清中一种具有免疫抑制和生长调节作用的蛋白,与妊娠相关,由受精卵及胚胎组织分泌,是目前所知最早确认妊娠的生物化学标志物之一,是热休克蛋白家族成员伴侣蛋白10(cpn10)的同系物.EPF最早由澳大利亚外科医生Mortont在孕鼠体内发现,随着对EPF研究的深入,发现EPF不仅和哺乳动物的妊娠密切相关,而且也是恶性肿瘤细胞分泌的一种免疫抑制剂,它能抑制T淋巴细胞介导的细胞免疫,防止母体对胚胎乃至胎儿发生免疫排斥反应,另外在烧伤、溃疡及类风湿等伤口愈合中,有着生长因子的作用特点。本文对EPF在生殖、肿瘤、移植、免疫调节、生长调节等方面的临床应用进展进行综述.

摘要： 目的:获取大量具有良好生物活性的早孕因子（EPF）重组变应原。方法：HeLa 细胞中提取总RNA，利用 RNase-free DNaseI处理总RNA，采用RT-PCR的方法扩增EPF基因，将扩增产物和载体pGEX-5X-1进行双酶切后回收,连接载体和目的片段,获得重组质粒.将重组质粒转化大肠杆菌BL21。在大肠杆菌BL21中通过IPTG进行诱导表达,然后用谷胱甘肽-琼脂糖球珠亲和层析纯化得到纯的EPF蛋白。用SDS-PAGE鉴定其纯度，用玫瑰花环抑制试验（RIT）检测生物学活性。结果：以HeLa细胞总RNA为模板，采用RT-PCR的方法有效扩增出EPF基因。EPF基因以正确的阅读框架插入表达载体PGEX-5X-1，经IPTG诱导后高效表达EPF蛋白。RIT显示目的蛋白具有良好的EPF生物学特性。结论：成功构建了EPF的原核表达载体，并纯化了具有生物学特性的重组蛋白，为进一步开展EPF蛋白的相关研究奠定了基础。

摘要： 本实验从妊娠3～4个月健康孕牛血清中分离得到纯化的早孕因子(Early pregnancy factor，EPF)。通过DEAE-Sepharos F. F离了交换层析，CM-Sepharose F. F离子交换层析，Con A-Sepharose 4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl 6B亲和层析蛋白质分离纯化技术，从孕牛血清中分离出纯化的EPF(HE-2)。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对纯化的EPF进行分析;用玫瑰花环抑制实验(RIT)对各阶段产物EPF活性进行检测。纯化出的EPF通过攻瑰花环抑制实验具有活性，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)出现分子量分别为18.3KD、21KD两条区带的蛋白带，纯化的EPF(HE-2)在56°C热处理30min具有稳定的生物活性。最终纯化出分子量为183KD、21KD的早孕因了蛋白，在研究早孕因子单克隆抗体提供条件。

摘要： 早孕因子(early pregnancy factor，EPF)是具有免疫抑制活性和生长调节活性的妊娠相关蛋白，为目前最早确认妊娠的生化指标之一。近年来随着早孕因子检测方法的改进及其生化特性的逐步明确，使得早孕因子在超早孕诊断、流产预测、某些肿瘤的早期诊断和预后判断及自身免疫性疾病的治疗等方面有了广泛的临床应用前景。本文就国内外对早孕因子的最新研究进展做一综述。

摘要： 妊娠早期诊断技术能缩短母牛空怀时间,是提高繁殖效率的手段,关系到养殖场(户)的切身利益.本文从诊断时间、诊断技术难度、诊断真确率、成本等方面比较分析直肠检测、B超妊娠诊断、早孕因子、孕酮和妊娠相关蛋白免疫学诊断技术。

摘要： 【目的】检测怀孕肉牛的早孕因子(Early pregnancyfactor,EPF)活性，并对其进行分离纯化。【方法】采集妊娠1～9个月的肉牛血样，并进行妊娠诊断，通过玫瑰花环抑制实验(RosetteInhibition Test,RIT)检测其EPF活性。对有活性的血样进行层析，分离纯化EPF，对纯化产物进行SDS-PAGE检测，并测定其等电点。【结果】怀孕牛和未怀孕牛血清的玫瑰花环抑制滴度差异显著(P<0．05)，纯化出的EPF具有活性。【结论】通过RIT检测EPF活性可以鉴定肉牛的妊娠状态，肉牛EPF蛋白的分子质量为53．6ku，等电点为6．8。

摘要： 本申请提供一种早孕检测笔壳和早孕检测笔。该早孕检测笔壳包括第一壳体和第二壳体，所述第二壳体划分为沿所述第二壳体的长度方向排列的功能段和手持段，所述第一壳体与所述功能段相对以在所述第一壳体与所述功能段之间形成用于容纳试纸的收纳空间，所述收纳空间具有开口，以用于供位于所述收纳空间内的吸水件经所述开口延伸出所述早孕检测笔壳，所述手持段用于供用户手握，所述手持段与所述第一壳体无交叠。该早孕检测笔壳减少材料用量，更加环保。

摘要： 本申请提供一种滴管、早孕试剂盒和早孕试剂盒套装。该滴管包括吸管段、位于所述吸管段上方的胶囊段、以及位于所述胶囊段上方的卡位段，所述吸管段与所述胶囊段内部相通，所述卡位段的横向尺寸小于所述胶囊段的横向尺寸，所述卡位段和所述胶囊段由弹性材料制成，其中，所述卡位段用于挤入早孕试剂盒的第一缺口和第三缺口，所述胶囊段用于安放在早孕试剂盒的凹陷区域内，所述吸管段的自由端用于安放在早孕试剂盒的第二缺口内。本申请提供的滴管与早孕试剂盒便于实现自动组装，且节省包装材料。

摘要： 本发明涉及动物繁殖免疫学领域，特别是涉及哺乳动物早孕因子的部分肽段，该肽段的氨基酸序列为Phe Arg Asp Gly Asp Ile Leu Gly Lys Tyr Val。该肽段为早孕因子的部分合成肽段。本发明首次合成了哺乳动物早孕因子EPF的部分肽段，通过玫瑰花环抑制试验进行检测，结果发现该肽段能抑制玫瑰花环的形成，通过家兔皮肤移植检测，也表明EPF在免疫抑制上具有生物学活性。本发明的EPF部分肽段为免疫抑制作用的关键肽段，为进一步研究早孕因子EPF及其临床应用奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一种奶牛早孕因子蛋白、表达载体及其在奶牛早孕判断中的应用，其中奶牛早孕因子蛋白，其序列如序列表SEQ：ID NO：1所示。本发明的早孕因子蛋白实现了奶牛早孕的检测，简单易行，准确度高。

摘要： 本发明公开了一种快速检测奶牛早孕因子的检测试纸卡，其包括壳体和试纸条，壳体包括上壳体和下壳体，上壳体和所述下壳体形成容纳所述试纸条的容纳腔；试纸条包括底板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次设置在所述底板上；硝酸纤维素膜上包被有奶牛早孕因子蛋白特异性单抗和兔抗鸡IgG抗体，奶牛早孕因子蛋白特异性单抗，兔抗鸡IgG抗体为检测T线和为质控C线，检测T线和质控C线平行间隔设置；上壳体上设置有正对硝酸纤维素膜设置的观察孔和正对样品垫设置的加样孔。本申请通过观察检测T线和质控C线就可以预测奶牛是否怀孕，检测速度快，灵敏度高。

摘要： 本发明公开了一种抗牛早孕因子单克隆抗体细胞株单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：合成抗体位点序列多肽，并偶联载体蛋白，采用B细胞杂交瘤技术建立一种抗牛早孕因子单克隆抗体细胞株，偶联产物免疫的BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合，经阳性杂交瘤细胞筛选、细胞克隆获得能稳定传代并分泌抗牛早孕单克隆抗体的杂交瘤细胞；用构建的杂交瘤细胞对BALB/C小鼠进行腹腔注射，制备腹水单克隆抗体。本发明提供的抗牛早孕因子单克隆抗体细胞株及抗牛早孕因子单克隆抗体，为牛早期妊娠的快速检测提供服务。

摘要： 本发明的主要目的在于提供一种猪早孕因子胶体金检测试纸卡，快速检测母猪早孕因子，用于母猪早期妊娠的临床诊断。本发明的创新点在于利用基因克隆技术，人工合成具有天然早孕因子活性的猪早孕因子蛋白，在此基础上得到敏感性高、特性好的猪早孕因子单克隆抗体，经过试纸卡组装条件优化得到猪早孕因子胶体金检测试纸卡。该试纸卡具有特异性强、灵敏度高、检测方便快速的优点，在整个检测过程中不需要使用专业仪器设备，多操作人员要求低，而且试纸卡成本低廉，操作方便，能广泛应用于猪早期妊娠的诊断，为了解母猪孕情和对母猪假孕进行诊断奠定了基础。

摘要： 本发明涉及犬早孕因子胶体金检测试纸卡的制备方法和应用，所述检测试纸卡由卡槽和胶体金试纸条组成，胶体金试纸条由支撑薄片、纤维素膜、含有金标抗体的玻璃纤维膜、载样垫和吸水垫组成，所述的纤维素膜设置在支撑薄片的中部，纤维素膜一侧的支撑薄片上依次粘贴有含有金标抗体的玻璃纤维膜和载样垫，纤维素膜另一侧的支撑薄片上粘贴有吸水垫，所述纤维素膜的中部有一条含有犬早孕因子抗体的检测线和一条含有羊抗兔二抗的质控线，该试纸卡具有特异性强、灵敏度高、检测快速的优点，且不需要使用仪器设备，成本低廉，操作方便，能广泛应用于宠物犬爱好者、家犬养殖场和宠物医院对犬早期妊娠的诊断，为了解母犬孕情和对母犬假孕进行诊断奠定了基础。

摘要： 本发明涉及动物繁殖免疫学领域，特别是涉及哺乳动物早孕因子的部分肽段，该肽段的氨基酸序列为Phe Arg Asp Gly Asp Ile Leu Gly Lys Tyr Val。该肽段为早孕因子的部分合成肽段。本发明首次合成了哺乳动物早孕因子EPF的部分肽段，通过玫瑰花环抑制试验进行检测，结果发现该肽段能抑制玫瑰花环的形成，通过家兔皮肤移植检测，也表明EPF在免疫抑制上具有生物学活性。本发明的EPF部分肽段为免疫抑制作用的关键肽段，为进一步研究早孕因子EPF及其临床应用奠定了基础。

摘要： 本实用新型公开了一种猪早孕因子快速胶体金检测卡，包括卡体，卡体的表面设有检测窗孔和加样孔，卡体的底层为支承背板，支承背板中部粘贴有硝酸纤维素膜，加样端吸水膜和吸水端吸水膜分别与硝酸纤维素膜的两端搭接，在加样端吸水膜与硝酸纤维素膜搭接之间夹置粘贴有早孕因子快速胶体金试纸条，硝酸纤维素膜为两段，该两段之间通过玻璃纤维膜搭接。本实用新型的检测卡结构简单、设计合理，特别是硝酸纤维素膜的结构合理，可加快尿液等样本向吸水端流动的速度，提高检测速度和灵敏度。