上皮间质转化(EMT)

摘要： 近几年来,我国因癌症死亡的人数接连不断上涨。现已是我国各种死因中的首位[1]。癌症如此令人束手无策的原因之一就是癌细胞的侵袭和迁移。在大部分癌病的初始阶段,病灶往往只局限于一个部位。随着病程的进展,癌细胞会不断地向患者全身部位进行侵袭和迁移,对身体的各个重要器官进行侵犯,导致患者的身体状况迅速恶化。关于恶性肿瘤细胞侵袭和迁移的机制,向来是研究的热点。近年来,上皮-间质转化(EMT)对恶性肿瘤细胞侵袭和迁移的作用,渐渐引起了科研人员的注意。

摘要： 特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种慢性致死性疾病,其发病机制尚未完全阐明。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是分化的肺泡上皮细胞失去上皮特征同时获得间充质细胞形态以及迁移性的生物学过程。阻断TGF-β-Smad、Wnt/β-catenin、Hippo等介导的信号转导,有利于抑制EMT,进而有助于抑制IPF进展。本文总结了EMT相关信号转导通路在IPF中的研究进展,为临床使用靶向EMT的药物诊疗肺纤维化患者提供一定的参考和依据。

摘要： 目的探讨ZEB1基因在甲状腺乳头状癌诊断中的意义及对细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法选取90例甲状腺乳头状癌患者作为甲状腺乳头状癌组,另外选取同期进行体检的健康者90例作为正常对照组。实时荧光定量PCR(qPCR)检测2组血清ZEB1基因表达情况,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ZEB1基因表达对甲状腺乳头状癌的诊断价值。培养甲状腺乳头状癌细胞TPC-1,作为Con组;将siRNA-Con、siRNA-ZEB1转染进入TPC-1,作为siRNA-Con组和siRNA-ZEB1组。Transwell检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙粘蛋白(N-cadherin)、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达情况。结果与正常对照组相比,甲状腺乳头状癌组ZEB1基因水平表达显著升高(P0.05)。血清ZEB1基因表达对甲状腺乳头状癌的诊断价值,灵敏度为90.20%,特异度为93.88%,AUC曲线下面积为0.945,P<0.0001。与Con、siRNA-Con组相比,siRNA-ZEB1组ZEB1 mRNA表达水平以及细胞迁移数、细胞侵袭数显著降低(P<0.05)。与Con、siRNA-Con组相比,siRNA-ZEB1组ZEB1 mRNA表达水平以及N-cadherin蛋白表达明显下调(P<0.05),E-cadherin蛋白表达明显上调(P<0.05)。与Con、siRNA-Con组相比,siRNA-ZEB1组ERK1/2蛋白、p-ERK1/2蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论ZEB1基因表达对甲状腺乳头状癌具有较高的诊断价值,抑制ZEB1基因能通过MAPK信号通路降低细胞迁移、侵袭能力,抑制上皮间质转化。

摘要： 目的探究lncRNA OIP5-AS1/miR-217/USP7分子轴对肝癌细胞EMT和侵袭迁移的调控作用。方法选取正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞系(MHCC97H,Hep3B,HepG2和HCCLM3),实时荧光定量PCR法检测正常肝细胞和肝癌细胞系中lncRNA OIP5-AS1的表达水平,Transwell实验检测肝癌细胞在下调lncRNA OIP5-AS1的表达后其侵袭和迁移能力的变化,蛋白质印迹实验检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-cadherin,N-cadherin和Vimentin的表达情况。通过生物信息学方法和双荧光素酶报告基因实验预测并验证lncRNA OIP5-AS1、miR-217和USP7的靶向关系,蛋白质印迹和Transwell实验检测LncRNA OIP5-AS1/miR-217/USP7分子轴对肝癌细胞EMT和侵袭迁移能力的影响。结果lncRNA OIP5-AS1在肝癌细胞系中均明显高表达(P<0.05或P<0.01)。下调肝癌细胞中lncRNA OIP5-AS1的表达可明显抑制肝癌细胞EMT及侵袭迁移(P<0.05);lncRNA OIP5-AS1靶向结合miR-217,且USP7是miR-217的靶基因(P<0.05);进一步研究证实,IncRNA OIP5-AS1通过miR-217上调USP7的表达水平,从而促进肝癌细胞的EMT和侵袭迁移(P<0.05或P<0.01)。结论IncRNA OIP5-AS1通过靶向miR-217/USP7分子轴促进肝癌细胞的EMT和侵袭迁移。

摘要： 目的本研究旨在分析丝裂原活化蛋白激酶13(MAPK13)在胆管癌组织及细胞中的表达水平并探讨其在胆管癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)中的作用。方法通过微阵列分析筛选胆管癌组织中差异表达的mRNA,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白印迹及免疫组化染色验证MAPK13在肿瘤组织和细胞中的表达情况。进一步通过细胞转染构建MAPK13敲低(si-MAPK13)后,通过细胞活力实验检测胆管癌细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭性。最后,通过裸鼠成瘤实验检测MAPK13对体内成瘤及相关蛋白表达的影响。结果本研究通过微阵列分析发现MAPK13在肿瘤组织中的表达存在显著差异,进一步通过qRT-PCR、蛋白印迹和免疫组化染色分析发现,与癌旁组织比较,MAPK13在mRNA和蛋白质水平的表达情况在肿瘤组织及细胞中均显著升高且差异具有统计学意义(t=27.92,6.90;均P<0.01)。进一步细胞活力检测表明,抑制MAPK13的表达后细胞增殖数量明显减少(F=32.13,P<0.01)。Transwell实验则显示细胞迁移和侵袭显著降低(F=52.88,38.14;均P<0.05)。与对照组比较,si-MAPK13组中E钙黏蛋白(E-cadherin)的表达较高,而N钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达较低,差异均具有统计学意义(F=77.00,78.73,25.9;均P<0.01)。最后裸鼠成瘤实验表明,当MAPK13的表达受到抑制后,肿瘤的体积和重量均显著低于对照组(F=8.99,73.81;均P<0.01)。结论本研究表明,MAPK13可能通过促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭以及EMT进程,进而调控胆管癌进程。

摘要： 目的:探讨嵌合内含子(chimeric intron)对人非小细胞肺癌PC-9细胞株上皮间质转化(EMT)的影响和作用.方法:以psiCHECK-2质粒为基本框架,插入嵌合内含子构建出psiCHECK-2-Intron双荧光素酶报告基因重组质粒载体,再将psiCHECK-2-Intron和psiCHECK-2分别转染至PC-9细胞中,通过双荧光素酶活性快速检测该重组质粒载体在真核细胞中的表达情况,然后分别应用细胞划痕实验和Matrigel侵袭实验观察PC-9细胞迁移和侵袭能力的变化,再通过qRT-PCR以及Western-Blot-ting检测EMT相关分子标志物:N-钙黏蛋白(N-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)以及转录因子Snail表达水平的改变.结果:与对照组相比,Intron组PC-9细胞的侵袭能力明显降低(P<0.001),N-cad-herin、β-catenin和Snail等相关分子标志物的表达量明显下调(P<0.001).结论:嵌合内含子能够抑制非小细胞肺癌PC-9细胞株的EMT转化,其作用机制可能与N-cadherin、β-catenin和Snail表达量下调有关.

摘要： 目的:探究miR-506通过调控MCL-1对耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化(epi-thelial mesenchymal transformation,EMT)及侵袭转移的影响和作用机制.方法:收集2017年12月至2018年12月我院肿瘤科收治的经PET-CT结合组织病理活检及药敏试验确诊为耐阿立替尼的74例非小细胞肺癌患者的癌及癌旁组织以及人非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,分别采用细胞转染、免疫组化染色(IHC)、qRT-PCR和Western Blot法检测上述临床组织和细胞样本中miR-506、MCL-1、BAX/Bcl-2凋亡信号途径及EMT标志蛋白表达水平;此外,采用Transwell细胞实验观察miR-506过表达和MCL-1敲减对A549细胞迁移和侵袭能力的影响.结果:免疫组化(IHC)结果显示肺癌患者癌组织中浸润性坏死性病理损伤较癌旁组织明显加重,且癌组织中MCL-1的阳性表达率为94.64％,明显高于癌旁组织的23.27％(P<0.05).qRT-PCR和Western Blot结果显示,肺癌组织中miR-506、BAX和E-cadherin的表达明显低于癌旁组织,而MCL-1、Bcl-2和N-cadherin的表达显著高于癌旁组织(P<0.05).细胞实验结果表明miR-506过表达和MCL-1敲减能够明显上调BAX和E-cadherin的表达,同时抑制Bcl-2和N-cadherin的表达(P<0.05);此外,miR-506过表达和MCL-1敲减均能显著抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05).结论:miR-506可能通过抑制BAX/Bcl-2/MCL-1凋亡途径发挥抑制耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞EMT及诱导细胞凋亡作用,有望为临床抗肺癌转移及凋亡抑制靶向治疗提供新分子和靶点.

摘要： 目的 研究miR-760靶向FOXC2调控肝癌细胞HCC-9204迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的分子机制.方法 qRT-PCR测定miR-760在肝癌细胞和正常肝细胞中的表达水平.将miR-760 mimics转染到肝癌细胞HCC-9204中,MTT测定增殖,Transwell小室测定侵袭和迁移,Western印迹测定EMT标志蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达水平.在线靶基因预测软件预测miR-760的靶基因可能为叉头框(FOX)C2,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系.将miR-760 mimics、pcDNA3.1-FOXC2共转染至肝癌细胞HCC-9204中,检测细胞增殖、侵袭和迁移变化.结果 miR-760在肝癌细胞中表达水平低于正常肝细胞.转染miR-760 mimics后的肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,E-cadherin蛋白水平升高,vim-entin蛋白水平降低.miR-760靶向负调控FOXC2表达.pcDNA3.1-FOXC2能够逆转miR-760 mimics对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和EMT的抑制作用.结论 miR-760靶向FOXC2抑制肝癌细胞HCC-9204迁移、侵袭和EMT.

摘要： 目的 研究来那度胺对人肝癌细胞LM3细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 采用不同浓度的来那度胺(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理人肝癌细胞LM3,通过检测对LM3细胞活性变化和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达量变化筛选最适实验药物浓度.通过划痕实验以及Transwell侵袭实验检测来那度胺对LM3细胞迁移率及侵袭数量的影响.采用蛋白印迹法(Western blotting)检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白标志物E-cadherin、Vimentin、Snail、VEGF的表达情况.结果 确定40μmol/L来那度胺为最佳浓度.40μmol/L来那度胺处理LM3细胞48 h后迁移率为(40.75±4.17)％,侵袭数为(43.67±9.03),与对照组[迁移率(66.80±3.49)％,侵袭数(135.77±13.67)]比较具有统计学差异(P<0.05).在VEGF作用下LM3细胞发生EMT,迁移率(84.66±5.09)％和侵袭数(229.73±15.16)明显增加(均P<0.05);同时VEGF表达量也升高(P<0.05).而来那度胺作用于VEGF预处理细胞后,VEGF表达量下降(P<0.05),EMT受到抑制,随之迁移率(57.69±4.63)％和侵袭数(108.63±13.27)降低(P<0.05).结论 本研究表明,来那度胺可能通过抑制VEGF蛋白表达从而抑制人肝癌细胞LM3的迁移和侵袭.

摘要： 目的 探讨Sestrin 2在胰腺癌上皮-间质转化(EMT)过程中的作用.方法 对胰腺癌细胞PANC-1和CFPAC-1进行Sestrin 2表达干预,通过划痕试验、Transwell试验、RT-PCR、Western blotting和动物实验检测不同Sestrin 2表达水平下胰腺癌EMT过程的变化.同时,分析Sestrin 2在人体中的表达情况.结果 在Transwell试验和划痕试验中,高表达Sestrin 2胰腺癌细胞组的迁移能力和侵袭能力显著降低(P<0.05);在动物负瘤实验中,高表达Sestrin 2胰腺癌细胞组所生长的肿瘤更小(P<0.05);在RT-PCR和Western blotting实验中,高表达Sestrin 2胰腺癌细胞组的E-钙黏蛋白表达水平增加(P<0.05),N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平下降(P<0.05).同时,Sestrin 2在人体胰腺癌中呈低表达;随着Sestrin 2表达水平的提高,mTOR信号通路中的关键分子p60-s6k表达水平明显降低(P<0.05).结论 Sestrin 2可抑制胰腺癌EMT过程,并可能通过mTOR信号通路发挥作用.

摘要： 本发明涉及诊断上皮向间充质转化(EMT)(例如间皮向间充质转化(MMT))，尤其腹膜的EMT（其经常在腹膜透析时发生）的领域。本发明提供基于标记的方法和试剂盒，所述标记包括至少一种细胞外基质蛋白，例如胶原蛋白13、胶原蛋白6和/或角蛋白34；至少一种参与细胞外基质的建立和/或重建的蛋白，例如基质金属蛋白酶1；至少一种参与细胞‑细胞和/或细胞‑基质接触的蛋白，例如钙粘着蛋白13或血小板反应蛋白1；至少一种生长因子，例如VEGF；以及任选的至少一种BMP拮抗剂，例如Gremlin 1。

摘要： 本发明包括发现细胞表面波形蛋白作为从癌症患者的血液检测和分离间质和上皮‑间质转化的循环肿瘤细胞的新颖生物标志物。此外，提供一种对循环肿瘤细胞上的细胞表面波形蛋白的检测具有特异性的抗体以及所述抗体检测、计数和分离CTC的用途。

摘要： 本发明提供了一种抑制人羊膜上皮细胞上皮间质转化的方法。具体地，本发明提供了一种在体外抑制人羊膜上皮细胞上皮间质转化(EMT)的方法，包括步骤：(i)在存在式I化合物的培养体系中，培养人羊膜上皮细胞。本发明所筛选到的方法中，所述化合物在抑制人羊膜上皮细胞上皮间质转化方面的具有显著效果，并且其对细胞的细胞活性和增殖能力没有影响，对细胞毒副作用较小；并且，本发明从基因表达水平和蛋白表达水平验证了式I化合物对于人羊膜上皮细胞有维持上皮表型、干细胞特性和抑制间质细胞特性的作用。

摘要： 本发明涉及诊断上皮向间充质转化(EMT)(例如间皮向间充质转化(MMT))，尤其腹膜的EMT（其经常在腹膜透析时发生）的领域。本发明提供基于标记的方法和试剂盒，所述标记包括至少一种细胞外基质蛋白，例如胶原蛋白13、胶原蛋白6和/或角蛋白34；至少一种参与细胞外基质的建立和/或重建的蛋白，例如基质金属蛋白酶1；至少一种参与细胞‑细胞和/或细胞‑基质接触的蛋白，例如钙粘着蛋白13或血小板反应蛋白1；至少一种生长因子，例如VEGF；以及任选的至少一种BMP拮抗剂，例如Gremlin 1。

摘要： 本发明包括发现细胞表面波形蛋白作为从癌症患者的血液检测和分离间质和上皮-间质转化的循环肿瘤细胞的新颖生物标志物。此外，提供一种对循环肿瘤细胞上的细胞表面波形蛋白的检测具有特异性的抗体以及所述抗体检测、计数和分离CTC的用途。

摘要： 本发明提供了一种抑制人羊膜上皮细胞上皮间质转化的方法。具体地，本发明提供了一种在体外抑制人羊膜上皮细胞上皮间质转化(EMT)的方法，包括步骤：(i)在存在式I化合物的培养体系中，培养人羊膜上皮细胞。本发明所筛选到的方法中，所述化合物在抑制人羊膜上皮细胞上皮间质转化方面的具有显著效果，并且其对细胞的细胞活性和增殖能力没有影响，对细胞毒副作用较小；并且，本发明从基因表达水平和蛋白表达水平验证了式I化合物对于人羊膜上皮细胞有维持上皮表型、干细胞特性和抑制间质细胞特性的作用。

摘要： 本发明属于医药技术领域，公开了一种诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针，其特征在于：所述的筛选探针为在适配体SYL3C的5’端修饰在适配体SYL3C的3’端修饰6‑羧基荧光素，形成的探针。本发明探针通过识别上皮间质转化过程中下调的生物标志物上皮黏附分子，依据给药后细胞活力归一化荧光强度信号下降筛选上皮间质转化阳性药物。此外，将阻断上皮间质转化的化疗增敏剂与上皮间质转化诱导剂TGF‑β联合给药，依据给药后细胞活力归一化荧光强度信号恢复情况筛选化疗增敏剂。

摘要： 本实用新型涉及一种间质型与间质上皮转化型循环肿瘤细胞检测试剂盒，该方案包括盒体、试剂座、保护盖板及盒盖；所述盒体内设有用于对试剂座进行保护支撑的柔性支撑层，盒体左右两内壁上分别设有一弹性夹持板，盒体前后两内壁上均设有冷盒；所述试剂座上设有多个用于放置试剂和样品的放置槽；所述保护盖板上设有对应放置槽的避让槽，且保护盖板前后两端分别设有一固定孔，盒体上设有与固定孔配合将保护盖板与盒体锁定的第一锁定件；所述盒体与盒盖可拆卸连接，该实用新型具有防跌性能好，可有效保护盒体内的试剂等不会掉出盒体外。

摘要： 本实用新型涉及一种间质型与间质上皮转化型循环肿瘤细胞伴随诊断试剂盒，该方案包括盒体、试剂座、保护封盖、盒盖及蓄冷盒；所述盒体内底面设有保温保护层，且所述保温保护层上设有定位框，所述定位框上设有用于安放蓄冷盒的安装槽和用于安装试剂座的定位槽，且所述盒体外设有半导体制冷片，所述半导体制冷片的冷端通过换热块和换热管分别与蓄冷盒抵接，半导体制热端设于盒体外且表面设有散热器，盒体外壁上设有与半导体制冷片电连接的电源盒；所述盒体与盒盖表面均覆盖有保温隔热层，该诊断盒具有可持续制冷，相比当用蓄冷盒的方式，冷藏时间更长，且通过对盒体与盒盖进行保温处理，保温效果好。

摘要： 本申请涉及检测器具领域，特别是涉及上皮型与上皮间质转化型循环肿瘤细胞检测试剂盒，其设计组合合理、既可直接用于常温环境的保存与运输，又可对于低温保藏试剂进行冷链运输储存，确保了试剂盒中的试剂耗材组合有效性，同时方便对药品试剂名称进行查看，提高使用效果；包括盒体、盒盖、隔板、试管架、吸水盘、网板、冰袋组和固定座，盒盖设在盒体顶部，盒体顶部设有安置槽，隔板固定在安置槽内侧壁上，吸水盘放置在安置槽内底壁上，网板分设在隔板底部两侧，冰袋组分放在网板与安置槽侧壁之间，试管架抽拉固定在两侧网板之间，固定座位于隔板上方，固定座顶部设有材料放置槽和若干药品放置槽，并在每个药品放置槽旁侧均设有名牌块。