改良CTAB法

摘要： 成熟葡萄果实中富含多酚多糖类物质,对提取组织RNA造成了很大的干扰。研究分别采用3种试剂盒法和改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法,以成熟的葡萄果实为材料,提取总RNA并检验其产量和质量,其中,改良CTAB法是在提取缓冲液中加入了聚乙烯吡咯烷酮、亚精胺、β-巯基乙醇及高浓度的氯化钠。对各组RNA产物进行质量检测,发现3种试剂盒法均没有得到可用的RNA,只有改良的CTAB法能够从新鲜采摘和贮藏的葡萄果实组织中提取出高质量的总RNA,基本无降解和污染,且得率可达到85μg/g以上。进一步研究表明,改良的CTAB法提取得到的RNA可用于后续的RT-PCR、qRT-PCR和CDS扩增试验。改良CTAB法适用于成熟葡萄果实RNA的提取,所得RNA质量良好,满足后续分子试验的需求。

摘要： 为了建立一种不同加工工艺果汁DNA提取方法的通用方法,比较了改良CTAB法、试剂盒法和改良试剂盒法3种方法提取鲜榨果汁、浓缩果汁、非浓缩果汁、含果肉饮料4种类型果汁中DNA。结果表明:3种方法提取的DNA纯度相似,但提取的复原果汁DNA纯度高于2.0,可能是DNA降解造成;质量浓度由高到低分别为改良试剂盒法、改良CTAB法、试剂盒法,改良试剂盒法提取的DNA可以用作后续的一系列PCR反应。通过比较果汁DNA提取的3种方法,针对鲜榨果汁、浓缩果汁、非浓缩果汁、含果肉饮料中DNA,改良试剂盒法可以作为果汁中DNA提取的通用方法。

摘要： [目的]旨在获得兜兰属植物叶片总RNA的高质量提取方法,为后续相关分子生物学研究开展提供一定参考.[方法]以紫纹兜兰、长瓣兜兰和杏黄兜兰3种兜兰属植物叶片为试材,通过1.0％琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计法对4种不同提取方法获得的总RNA进行质量检测,筛选最适方法,并通过RT-PCR进一步验证.[结果]使用商品化RNA试剂盒法提取的兜兰属植物叶片总RNA纯度好,但完整性一般;改良CTAB法提取的兜兰属植物叶片总RNA纯度和完整性虽较好,但提取效率不高;改良Trizol法(Ⅰ)提取的兜兰属植物叶片总RNA虽完整性好,但纯度差,存在多糖、蛋白质等杂质污染;改良Trizol法(Ⅱ)获得的兜兰属植物叶片总RNA纯度和完整性均最好;以改良Trizol法(Ⅱ)获得的总RNA为模板,应用RT-PCR能成功克隆获得3种兜兰属植物rbcL基因252 bp的目的序列.[结论]综合比较以上4种方法,试验改良的Trizol法(Ⅱ)是适合紫纹兜兰、长瓣兜兰和杏黄兜兰3种兜兰属植物高质量总RNA提取的有效方法.

摘要： 为进一步开发利用华北耧斗菜资源并对其开展分子生物学研究,利用改良CTAB法提取华北耧斗菜植株的根、茎、叶、花和种子等5种组织总DNA,通过观察提取过程中各组织的表现和紫外分光光度计检测提取的总DNA,旨在找到最适宜提取总DNA的华北耧斗菜组织材料.结果 表明:华北耧斗菜根、茎、叶、花和种子5种组织总DNA A260/A280比值依次为1.545、1.553、1.785、1.724、1.464,浓度为1 275 ng/μL、1 825 ng/μL、2 500 ng/μL、1 250 ng/μL、2 050 ng/μL.其中叶片总DNA提取效果最好,A260/A280比值接近纯DNA(1.8～2.0),总DNA浓度达到2 500 ng/μL.因此,华北耧斗菜叶片更适宜用改良CTAB法提取其总DNA.

摘要： 使用生工柱式植物总RNA抽提纯化试剂盒、Trnzol法以及改良CTAB 3种方法,提取红肉苹果克孜阿尔玛的果肉、果皮、花瓣、叶片中的总RNA,并对比这3种方法提取RNA的产量、质量以及完整性.结果 表明,由Trnzol方法提取所获得的RNA纯度较低,有降解现象,且有DNA、蛋白质的污染,果肉和果皮RNA的产量也并不理想;而用改良CTAB法和生工试剂盒法提取的RNA较少降解,所得28 S rRNA和18SrRNA条带较为清晰,花瓣和叶片的OD260/280均在2以上,生工试剂盒法提取的RNA产量高,OD260/280和OD260/230比值均在1.8～2.5,条带的完整性好.3种方法比较而言,改良CTAB法和TrNzol法提取的RNA条带的清晰度、产量及质量都低于生工试剂盒法.

摘要： 对豆制品运用改良CTAB法、SDS法提取DNA,能够优化大豆及豆制品的检测。本文选择小黄豆、大豆油、大豆MON 89788、豆腐几种样品,运用改良CTAB法、SDS-PVP法、SDS法、CTAB法、TIANGEN试剂盒法分别提取DNA纯度。结果显示,提取大豆DNA运用改良CTAB法、SDS法提取出质量较好的DNA,纯度较高,豆腐样品中的DNA浓度最低,研究改良CTAB法、SDS法运用下的PCR产物凝胶电泳,得出扩增正常的模板DNA,显示提取的DNA未被污染,纯度较高。改良CTAB法、SDS法可得出DNA条带。对小黄豆、大豆MON 89788、豆腐运用SDS法进行实验能够得到更为清晰的基因组DNA条带,完整性更强。SDS法检测适用性较强,较为便捷,可用于大豆及豆制品的实际检测活动。

摘要： 以冬青科植物枸骨(Ilex cornuta)叶为材料,采取改良CTAB法、改良SDS法、高盐低pH法、PVP法4种方法提取了枸骨叶基因组DNA,并用1.0％琼脂糖凝胶电泳和核酸测定仪检测DNA质量和纯度,对4种方法进行了比较.结果 表明,改良CTAB法提取的构骨叶DNA得率较高,质量较好,是枸骨叶片DNA提取比较适宜的方法.

摘要： 为探索提取新鲜和干燥珠子参根茎基因组DNA的最佳方法,分别采用CTAB法、改良CTAB法、改良SDS法和高盐低pH法分别提取新鲜和干燥的珠子参根茎DNA后,采用紫外分光光度计法、琼脂糖凝胶电泳和ISSR-PCR扩增检测DNA质量.结果表明,采用4种方法均可从珠子参根茎中提取出DNA,但提取效果差别较大.CTAB法提取的新鲜根茎DNA浓度最大为487.52 ng·μL-1,高盐低pH法提取的干燥根茎DNA浓度最低为92.63 ng·μL-;改良CTAB法提取的DNA其A260/280值为1.92和1.76,其他方法提取的DNA其A260/280值均小于1.8.从新鲜根茎提取的DNA浓度高,纯度好,质量优于干燥根茎提取的DNA;对于干燥根茎采用改良CTAB法提取DNA效果最好,提取的DNA可用于后续ISSR-PCR实验.

摘要： 目的：掌握金银花基因组DNA的提取方法，比较RAPD分析前后DNA图谱的变化。方法：采用改良CTAB法提取金银花基因组DNA并进行RAPD分析。结论：金银花基因组DNA扩增后，经琼脂糖凝胶电泳后在紫外凝胶成像系统下观察，扩增前后基因谱带分布有变化。

摘要： 目的：掌握金银花基因组DNA的提取方法，比较RAPD分析前后DNA图谱的变化。方法：采用改良CTAB法提取金银花基因组DNA并进行RAPD分析。结论：金银花基因组DNA扩增后，经琼脂糖凝胶电泳后在紫外凝胶成像系统下观察，扩增前后基因谱带分布有变化。

摘要： 目的：掌握金银花基因组DNA的提取方法，比较RAPD分析前后DNA图谱的变化。方法：采用改良CTAB法提取金银花基因组DNA并进行RAPD分析。结论：金银花基因组DNA扩增后，经琼脂糖凝胶电泳后在紫外凝胶成像系统下观察，扩增前后基因谱带分布有变化。

摘要： 目的：掌握金银花基因组DNA的提取方法，比较RAPD分析前后DNA图谱的变化。方法：采用改良CTAB法提取金银花基因组DNA并进行RAPD分析。结论：金银花基因组DNA扩增后，经琼脂糖凝胶电泳后在紫外凝胶成像系统下观察，扩增前后基因谱带分布有变化。

摘要： 目的：掌握金银花基因组DNA的提取方法，比较RAPD分析前后DNA图谱的变化。方法：采用改良CTAB法提取金银花基因组DNA并进行RAPD分析。结论：金银花基因组DNA扩增后，经琼脂糖凝胶电泳后在紫外凝胶成像系统下观察，扩增前后基因谱带分布有变化。

摘要： 中国李(Prunus salicina)是典型的配子体型自交不亲和性果树，生产上必须配置与主栽李品种S基因型不同的授粉品种才能获得应有的产量和品质。为了鉴定李品种的S基因型，本文以改良CTAB法提取中国李叶片、花柱和花粉的DNA和总RNA，根据李属雌蕊S识别特异决定因子S-RNase基因的保守区C2和RC4设计保守引物，以DNA为模板，选用rTaq酶进行PCR扩增，把经过纯化的产物连接剑pGEM-T Easy载体，进行克隆和测序，测序工作由上海英骏生物技术有限公司完成，以3个序列中2个共有的序列为最终结果。将所获DNA序列在NCBI中进行BLASTn比对，选取序列相似性较高的3个序列，刚分析软件DNAMAN进行序列分析。以中国李叶片、花柱、花粉的RNA为模板，进行RT-PCR，鉴定新基因的器官表达特异性。

摘要： 中国李(Prunus salicina)是典型的配子体型自交不亲和性果树，生产上必须配置与主栽李品种S基因型不同的授粉品种才能获得应有的产量和品质。为了鉴定李品种的S基因型，本文以改良CTAB法提取中国李叶片、花柱和花粉的DNA和总RNA，根据李属雌蕊S识别特异决定因子S-RNase基因的保守区C2和RC4设计保守引物，以DNA为模板，选用rTaq酶进行PCR扩增，把经过纯化的产物连接剑pGEM-T Easy载体，进行克隆和测序，测序工作由上海英骏生物技术有限公司完成，以3个序列中2个共有的序列为最终结果。将所获DNA序列在NCBI中进行BLASTn比对，选取序列相似性较高的3个序列，刚分析软件DNAMAN进行序列分析。以中国李叶片、花柱、花粉的RNA为模板，进行RT-PCR，鉴定新基因的器官表达特异性。

摘要： 中国李(Prunus salicina)是典型的配子体型自交不亲和性果树，生产上必须配置与主栽李品种S基因型不同的授粉品种才能获得应有的产量和品质。为了鉴定李品种的S基因型，本文以改良CTAB法提取中国李叶片、花柱和花粉的DNA和总RNA，根据李属雌蕊S识别特异决定因子S-RNase基因的保守区C2和RC4设计保守引物，以DNA为模板，选用rTaq酶进行PCR扩增，把经过纯化的产物连接剑pGEM-T Easy载体，进行克隆和测序，测序工作由上海英骏生物技术有限公司完成，以3个序列中2个共有的序列为最终结果。将所获DNA序列在NCBI中进行BLASTn比对，选取序列相似性较高的3个序列，刚分析软件DNAMAN进行序列分析。以中国李叶片、花柱、花粉的RNA为模板，进行RT-PCR，鉴定新基因的器官表达特异性。

摘要： 中国李(Prunus salicina)是典型的配子体型自交不亲和性果树，生产上必须配置与主栽李品种S基因型不同的授粉品种才能获得应有的产量和品质。为了鉴定李品种的S基因型，本文以改良CTAB法提取中国李叶片、花柱和花粉的DNA和总RNA，根据李属雌蕊S识别特异决定因子S-RNase基因的保守区C2和RC4设计保守引物，以DNA为模板，选用rTaq酶进行PCR扩增，把经过纯化的产物连接剑pGEM-T Easy载体，进行克隆和测序，测序工作由上海英骏生物技术有限公司完成，以3个序列中2个共有的序列为最终结果。将所获DNA序列在NCBI中进行BLASTn比对，选取序列相似性较高的3个序列，刚分析软件DNAMAN进行序列分析。以中国李叶片、花柱、花粉的RNA为模板，进行RT-PCR，鉴定新基因的器官表达特异性。

摘要： 中国李(Prunus salicina)是典型的配子体型自交不亲和性果树，生产上必须配置与主栽李品种S基因型不同的授粉品种才能获得应有的产量和品质。为了鉴定李品种的S基因型，本文以改良CTAB法提取中国李叶片、花柱和花粉的DNA和总RNA，根据李属雌蕊S识别特异决定因子S-RNase基因的保守区C2和RC4设计保守引物，以DNA为模板，选用rTaq酶进行PCR扩增，把经过纯化的产物连接剑pGEM-T Easy载体，进行克隆和测序，测序工作由上海英骏生物技术有限公司完成，以3个序列中2个共有的序列为最终结果。将所获DNA序列在NCBI中进行BLASTn比对，选取序列相似性较高的3个序列，刚分析软件DNAMAN进行序列分析。以中国李叶片、花柱、花粉的RNA为模板，进行RT-PCR，鉴定新基因的器官表达特异性。

摘要： 一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，属于分子生物技术领域。CTAB法提取DNA的接种选用含菌种的细沙直接接种、和/或用孢子悬液接种后再添加细沙培养、和/或培养的菌丝在提取DNA磨样时添加细沙磨样，至菌丝最终呈现丝滑状超细粉末）时止。上述一种能使CTAB法提取到真菌高质量基因组DNA的方法，可以显著提高提取的DNA的含量，并且对DNA的品质及得率都有显著提高；且该方法操作方便、实验稳定性强、可重复性高、准确快捷，在满足DNA提取质量的同时，又可在磨样环节大大节省劳动强度，即使大量提取DNA样品时一样有较高的磨样速度，极大的缩短了磨样时间与人磨样的疲劳度及提取失败的概率。

摘要： 本发明涉及植物RNA提取技术领域，具体涉及一种改良CTAB法抽提多糖多酚类植物RNA的方法。该方法包括以下步骤：将植物组织样品研磨至粉末状，加入改良后的提取液水浴裂解提取，离心收集上清，加入等体积氯仿混匀后静置，离心收集上清，加入6MLiCl溶液沉淀RNA，离心收集沉淀，加入75％无水乙醇洗涤沉淀后，再加入DNA消化液，水浴溶解RNA，最后再加入DNA酶灭活试剂，室温静置后，离心取上清即得。采用本发明改良后的方法提取的多糖多酚类植物RNA可用于全长转录组文库构建，提取成功率能从64％提高到82％，建库成功率能从92％提高到98％。

摘要： 本发明涉及CTAB法提取植物基因组DNA技术领域，具体是指一种利用改良CTAB法提取铁皮石斛茎基因组DNA的方法，具体包括以下步骤：(1)材料研磨：取200mg铁皮石斛茎置于提前预冷的研钵中研磨成粉末，将研磨后的粉末转移到2.0ml的离心管中；(2)去多糖处理；(3)提取液萃取；(4)DNA抽提；(5)DNA沉淀；(6)DNA沉淀的洗涤和溶解。本发明的有益效果是：以DTT代替有毒试剂β‑巯基乙醇，大大提高了实验的安全性，在CTAB裂解细胞前，先用溶液A进行数次的去多糖处理，能有效地提高后续DNA提取的质量，同时在溶液A中加入Sorbitol，能有效稳定渗透压，并优化细胞裂解液的配方，加入适量的PVP为了多酚的去除，加入SDS为了更好地去除蛋白质，最终使得DNA质量好。

摘要： 本发明属于分子生态学实验领域，具体提供了一种针对濒危半红树植物莲叶桐基因组DNA改良版的CTAB提取方法。濒危半红树植物莲叶桐，因富含多糖多酚，其组织研磨液极其粘稠，提取质量好的核酸极其困难。本发明在传统CTAB法基础上采用改进的裂解液对细胞进行裂解，并通过一定比例的Tris平衡酚‑氯仿‑异戊醇混合液进行抽提。再用改进体积的醋酸钠‑异丙醇进行沉淀DNA、纯化DNA，从而获得高质量的基因组DNA。采用本发明提供的濒危半红树植物莲叶桐核酸提取方法提取的DNA浓度高、纯度高，还不易降解，最重要的是能够有效去除多糖多酚。为后续的PCR扩增、分子标记技术开发、基因组文库构建等分子生物学实验奠定基础。

摘要： 一种利用改良CTAB法提取兜兰基因组DNA的方法，包括以下步骤：（1）兜兰叶片的采集与筛选，（2）超低温粉碎，（3）超声波辅助温育，（4）共振声混合乳浊，（5）DNA的沉淀制备，（6）DNA的精制与储藏。本发明的提取兜兰基因组DNA的方法，获得了理想的兜兰基因组DNA提取方法，为后续以基因组DNA为基础的分子遗传学实验研究奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一种改良CTAB法提取棉花基因组DNA，包括以下步骤：（1）液氮研成粉末，加入CTAB 缓冲液65°C水浴摇动得含有DNA的提取液I；（2）冷却后加入RNase A后进行37°C水浴；（3）加入等体积的溶液A混匀离心得上清液I；（4）继续加入等体积的溶液A混匀离心得上清液II；（5）加入NaAc，然后加入无水乙醇水平摇动形成絮状沉淀；（6）离心，弃上清，洗涤沉弃去无水乙醇，干燥得沉淀DNA；（7）溶解沉淀DNA，保存于‑20°C冰箱中备用。本发明精简了CTAB法提取棉花叶片基因组DNA的步骤程序，大大缩短了实验时间，还降低了DNA提取成本，提高了RNA的消除效果，适合棉花叶片基因组DNA的大批量提取。

摘要： 本发明涉及一种改良CTAB法提取头花蓼DNA，包括如下步骤：取材料，用液氮研成粉末，移入离心管，加入CTAB提取缓冲液，充分摇匀，并进行水浴、离心；取上清液,加入等体积的氯仿、异戊醇，取上清转移至另一离心管中，再次取上清液用氯仿、异戊醇抽提；将上清加入NaAc、异丙醇，轻轻颠倒混匀、离心，弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀、离心,用小枪头吸干乙醇，风干；去除沉淀中的乙醇，用含RNA酶的TE溶解、消化至RNA完全裂解；分别用等体积的苯酚、氯仿、异戊醇，各抽提一次；将上清加入NaAc、冰冷无水乙醇，轻轻混匀、离心，沉淀用70%乙醇溶液洗涤，风干，加TE液溶解，低温保存。本发明采用改良CTAB法提取头花蓼DNA，方法简单、成本低廉，提取的头花蓼DNA纯度更高。

摘要： 本发明公开了一种改良CTAB裂解液在提取板蓝根根系总RNA中的应用，属于分子生物学技术领域。所述改良CTAB裂解液包括100mM Tris‑HCl，pH为8，20mM EDTA，1.4M NaCl，2％W/V的CATB，20％W/V的PVP和0.4％V/V的β‑巯基乙醇。本发明运用改良CTAB裂解液提取板蓝根根系成功地获得的总RNA，有效克服了粘稠状的缺陷，去除了杂质，并且提取成本低、易操作、并能获得高质量的RNA，方便后续的建库、上机以及PCR反应。

摘要： 本发明公开了一种改良CTAB抽提红景天RNA的方法，具体步骤为：取新鲜或者‑80°C冷藏的红景天组织，加入液氮，研磨成粉；加入CTAB提取液，混匀，65°C裂解；得到苯酚、氯仿和异戊醇的混合液，加入等体积的苯酚、氯仿和异戊醇的混合液，涡旋振荡15～30sec，4°C下10,000g离心10min，取上清700ul移入新的1.5ml离心管，再加入等体积的氯仿与异戊醇的混合液，涡旋振荡15～30sec，4°C下10,000g离心10min；取上清1ml移入新的1.5ml离心管，加1/3体积8.0M Licl,颠倒混匀，‑20°C过夜；4°C下10,000g离心30min，弃去上清；采用1ml 70％乙醇洗涤沉淀2‑3次，4°C下10,000g离心10min，弃去上清，然后于室温放置5‑10分钟使其晾干；加入15ul的无核酸酶水溶解即可。本发明具有提取方便、高效、质量好等优点。

摘要： 本实用新型涉及一种CTAB法提取DNA的试剂盒，包括盒体，所述盒体中设有隔板，所述隔板将所述盒体依次分设为工具腔、容纳腔和试剂腔；所述容纳腔内设有与所述盒体滑动连接的抽盒；所述试剂腔所在的盒体一棱边设有与盒体铰接且与试剂腔适配的试剂箱，所述盒体外壁设有便于所述试剂箱转动于盒体外部的开口；所述盒体顶部铰接有顶盖。本实用新型提供了一种CTAB法提取DNA的试剂盒，可优化试剂配制过程，防止实验中倒置的离心管偏倒，实验过程大多数步骤均可在试剂盒上完成，提高了实验效率的同时，保证了试验数据的精确度。