支气管上皮细胞

摘要： 慢性气道炎症性疾病是多种细胞因子引起的慢性呼吸系统疾病,支气管上皮细胞在维持气道微环境稳态中起重要作用,支气管上皮细胞损伤与感染性疾病的发生密切相关[1-2]。牡荆素是一种天然黄酮类化合物,可通过抗神经凋亡、调节炎症因子对神经系统起保护作用[3]。牡荆素还可通过减少心肌细胞凋亡,降低炎症因子水平保护心肌炎症细胞免受CVB3病毒诱导的损伤[4]。但牡荆素对支气管上皮细胞凋亡和炎症反应的影响及机制尚不清楚。

摘要： 中国COPD病人每年约发生0.5~3.5次急性加重,老年病人急性加重的频次更高[1]。在COPD急性加重期(AECOPD),由于炎症、气体陷闭、通气血流比例失调等原因,呼吸负荷与呼吸肌功能的平衡被打破,机体会出现呼吸中枢驱动水平增高,但效能下降[2]。瘦素,是一种脂肪细胞分泌的调节脂代谢的Ⅰ型细胞因子[3],研究发现其也可由支气管上皮细胞、Ⅱ型肺泡上皮细胞和肺内皮细胞合成[4]。

摘要： 目的研究miR-3177-3p通过TLR4对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的支气管上皮细胞凋亡的影响。方法支气管上皮细胞16HBE分成Control组、CSE组(CSE处理)、CSE+miR-NC组(转染mimics control,CSE处理)、CSE+miR-3177-3p组(转染miR-3177-3p mimics,CSE处理),Realtime PCR方法检测miR-3177-3p的表达,利用流式细胞术测定细胞凋亡情况,采用Western blot方法测定Bax、Bcl-2、TLR4蛋白水平,采用硫代巴比妥酸法测定MDA含量,采用黄嘌呤氧化法检测SOD水平,采用比色法检测GSH-Px水平。在支气管上皮细胞16HBE中转染miR-3177-3p mimics、pcDNA-TLR4,用CSE处理,利用上述方法检测细胞凋亡和Bax、Bcl-2、TLR4蛋白水平以及MDA、SOD、GSH-Px水平。结果与Control组比较,CSE组支气管上皮细胞中miR-3177-3p表达水平降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax、TLR4蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,MDA水平升高,SOD、GSH-Px水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与CSE+miR-NC组比较,CSE+miR-3177-3p组支气管上皮细胞中miR-3177-3p表达水平升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax、TLR4蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高,MDA水平降低,SOD、GSH-Px水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。pcDNA-TLR4逆转上调miR-3177-3p对CSE诱导的支气管上皮细胞凋亡和Bax、Bcl-2、TLR4蛋白水平以及MDA、SOD、GSH-Px水平影响。结论上调miR-3177-3p通过TLR4抑制CSE诱导的支气管上皮细胞凋亡。

摘要： 目的:探究miR-125b对过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子的作用和机制。方法:支气管上皮细胞分为Control组、Model组(尘螨抗原提取物处理)、miR-NC组(转染mimics control,尘螨抗原提取物处理)、miR-125b组(转染miR-125b mimics,尘螨抗原提取物处理)、miR-125b+PMA组(转染miR-125b mimics,尘螨抗原提取物和NF-κB信号激活剂PMA处理)。qRT-PCR分析miR-125b表达,流式细胞术分析细胞凋亡,ELISA分析细胞培养液上清中IL-6、IL-29水平,Western blot分析Bax、Bcl-2、p65蛋白表达。结果:与Control组相比,Model组支气管上皮细胞中miR-125b水平降低,细胞凋亡率升高,细胞分泌IL-6、IL-29增多,细胞中Bax、p65蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。与miR-NC组相比,miR-125b组支气管上皮细胞中miR-125b水平升高,细胞凋亡率降低,细胞分泌IL-6、IL-29减少,细胞中Bax、p65蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高。与miR-125b组相比,miR-125b+PMA组支气管上皮细胞凋亡率升高,细胞分泌IL-6、IL-29增多,细胞中Bax、p65蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:miR-125b抑制过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。

摘要： 目的探讨成纤维生长因子10(FGF10)对细颗粒物(PM)诱导支气管上皮细胞表达环氧合酶2/前列腺素E_(2)(COX2/PGE_(2))的作用及其分子机制。方法雄性C57BL/6小鼠给予0.5 mg/kg FGF10腹腔注射和4.0 mg/kg PM气道滴注,构建动物模型,设置空白组、FGF10组、PM组和PM+FGF10组。获取各组肺组织并进行病理分级评分,采用Western blot法检测各组肺组织中COX2的相对表达量,采用免疫荧光法检测支气管上皮中COX2的相对表达量,采用ELISA法检测肺泡灌洗液中PGE_(2)的分泌水平。先给予5 mmol/L ERK1/2抑制剂(U0126)/PI3K抑制剂(LY294002)干预,然后10μg/L FGF10干预,最后200 mg/L PM刺激支气管上皮细胞BEAS-2B,构建细胞模型,设置空白组、PM组、PM+FGF10组、PM+FGF10+LY294002组和PM+FGF10+U0126组。采用ELISA法检测各组细胞PGE_(2)分泌水平,采用Western blot法检测各组细胞COX2的表达水平。同时进行细胞计数、线粒体功能和乳酸脱氢酶分泌分析等细胞功能检测。结果动物模型中,气道滴注PM诱导C57BL/6小鼠支气管病理形态学的改变,伴随肺泡灌洗液中PGE_(2)分泌增多(P0.05)。FGF10干预下,PM诱导支气管炎症和COX2/PGE_(2)表达被逆转(P<0.05)。细胞模型中,PM诱导支气管上皮细胞COX2/PGE_(2)表达水平升高(P<0.05),FGF10干预下,COX2/PGE_(2)的表达均降低(P<0.05),BEAS-2B细胞计数、线粒体功能和乳酸脱氢酶分泌等细胞功能改变(P<0.05)。就分子机制而言,LY294002和U0126逆转了FGF10对PM诱导COX2/PGE_(2)表达的调控作用(P<0.05)。结论FGF10可以调控PM对支气管上皮细胞COX2/PGE_(2)的诱导表达,其分子机制涉及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路。

摘要： 目的探讨人白细胞抗原-G(HLA-G)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人支气管上皮细胞16HBE炎症损伤的影响。方法体外培养16HBE细胞,采用RSV感染16HBE细胞。实验分为4组:对照组、感染组、转染组、感染+转染组,用qRT-PCR和Western blot检测各组16HBE细胞中HLA-G的表达水平,噻唑蓝(MTT)试验检测细胞活力,流式细胞术分析16HBE细胞凋亡情况,Western blot分析凋亡相关蛋白活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved caspase)-3和cleaved caspase-9,ELISA分析白细胞介素(IL)-4、IL-10和γ干扰素(IFN-γ)等细胞因子的含量。结果与对照组相比,感染组和转染组16HBE细胞中HLA-G、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表达、凋亡率及IL-4、IL-10和IFN-γ的含量均明显升高(P<0.05),细胞活力明显降低(P<0.05);与感染组和转染组相比,感染+转染组16HBE细胞中HLA-G、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表达、凋亡率及IL-4、IL-10和IFN-γ的含量均明显降低(P<0.05),细胞活力明显升高(P<0.05)。结论抑制HLA-G能够减轻RSV感染的16HBE细胞炎症损伤。

摘要： 目的探究G蛋白偶联受体家族C组5型(GPRC5A)对脂多糖(LPS)诱导的人支气管上皮16HBE细胞多种生物学特性的影响,并探讨其分子机制。方法利用LPS建立16HBE细胞损伤模型,将细胞分为4组:Control组、LPS组、LPS+pcDNA组和LPS+pcDNA-GPRC5A组。利用患者样本和基因表达组学数据库数据分析支气管哮喘(BA)患者和健康受试者气道组织中的GPRC5A的表达情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测GPRC5A、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的mRNA表达水平;采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡;Western-Blot检测GPRC5A、气道黏蛋白5AC(MUC5AC)、NF-κB p65和NF-κB抑制因子α(IκBα)蛋白的表达水平。结果成功构建LPS诱导的16HBE细胞损伤模型;与健康受试者组织和Control组细胞比较,GPRC5A在EBCs组织和LPS组的16HBE细胞中下调(P<0.05);而与LPS组和LPS+pcDNA组比较,LPS+pcDNA-GPRC5A组的细胞凋亡率、炎症因子TNF-α和IL-6、气道黏蛋白MUC5AC、NF-κB p65和IκBα的表达均显著下降,而细胞活力升高(P<0.05)。结论GPRC5A可能通过NF-κB通路抑制LPS诱导的16HBE细胞凋亡、炎症反应和气道黏蛋白的分泌,促进细胞的活力,发挥阻碍损伤的作用。

摘要： 目的:探讨阿尔泰金莲花总黄酮对呼吸道合胞病毒(RSV)感染支气管上皮细胞凋亡和炎症反应的影响及分子机制。方法:将人支气管上皮细胞16-HBE分为NC组、RSV组、RSV+低、中、高剂量组、RSV+miR-23b-3p组、RSV+miR-NC组、anti-miR-23b-3p+RSV+高剂量组和anti-miR-NC+RSV+高剂量组。细胞计数(CCK-8)试剂检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Westernblot法检测蛋白表达情况,ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1α水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-23b-3p表达水平。结果:RSV感染的16-HBE细胞活性、CyclinD1表达水平降低,凋亡率、CleavedCaspase-3、Bax表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1α水平升高,miR-23b-3p表达水平降低(P<0.01)。不同剂量阿尔泰金莲花总黄酮处理后,16-HBE细胞活性、CyclinD1表达水平升高,凋亡率、CleavedCaspase-3、Bax表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1α水平降低,miR-23b-3p表达水平升高(P<0.01)。过表达miR-23b-3p后,细胞活性、CyclinD1表达水平升高,凋亡率、CleavedCaspase-3、Bax表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1α水平降低(P<0.01)。抑制miR-23b-3p表达可以逆转阿尔泰金莲花总黄酮对RSV感染的16-HBE细胞活性,凋亡和炎症因子水平的影响。结论:阿尔泰金莲花总黄酮可能通过上调miR-23b-3p表达抑制RSV感染的支气管上皮细胞凋亡和炎症反应。

摘要： 目的探讨细颗粒物(PM)诱导气道炎症中支气管上皮细胞内质网应激(ERS)现象和氧化应激的调控机制。方法雄性C57BL/6小鼠用4 mg/kg PM连续气道滴注2 d,构建动物模型。获取空白组和PM组小鼠肺组织进行病理分级评分;采用Western blot法检测肺组织葡萄糖调节蛋白前体78(GRP78)和CCAAT增强子结合蛋白(CHOP)的相对表达量,采用免疫组化法检测GRP78和CHOP的累计光密度值,采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定肺组织中丙二醛(MDA)质量摩尔浓度。获取肺泡灌洗液,ELISA法检测IL-6、IL-8和前列腺素E(PGE)的分泌水平。用100、200、400 mg/L PM和2.5 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)、200 mg/L PM与支气管上皮细胞BEAS-2B共培养,构建细胞模型。检测各组细胞活性氧(ROS)变化。Western blot法检测NAC干预下的BEAS-2B中GRP78和CHOP表达变化,ELISA法检测炎症介质分泌水平。结果气道滴注PM诱导C57BL/6小鼠支气管病理形态学改变,肺组织GRP78、CHOP表达升高(P<0.05),肺组织MDA质量摩尔浓度升高(P<0.05),伴随肺泡灌洗液中IL-6、IL-8和PGE分泌增多(P<0.05)。细胞模型中,PM作用下各组细胞ROS表达水平均升高(均P<0.05)。NAC干预后细胞ROS表达水平降低(P<0.05),CHOP/GRP78相对表达量降低(P<0.05),IL-6、IL-8和PGE分泌水平降低(P<0.05)。结论PM诱导的支气管上皮细胞炎症中存在内质网应激现象,其调控机制为氧化应激。

摘要： 目的探讨第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)在呼吸道合胞病毒(RSV)感染支气管上皮细胞炎症反应的机制研究。方法通过体外培养支气管上皮细胞16HBE,将细胞分为4组:Control组、RSV组、RSV+vector组和RSV+PTEN组。采用qRT-PCR检测PTEN mRNA表达;采用Western印迹检测PTEN、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤基因(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达;采用MTT检测细胞活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6。结果RSV感染支气管上皮细胞16HBE后,PTEN mRNA及蛋白表达、细胞活力、PCNA、Bcl-2、SOD活性和GSH-Px明显低于Control组;细胞凋亡率、Bax、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6明显高于Control组(均P<0.05)。RSV+PTEN组的PTEN mRNA及蛋白表达、细胞活力、PCNA、Bcl-2、SOD活性和GSH-Px明显高于RSV+vector组;细胞凋亡率、Bax、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6明显低于RSV+vector组。结论过表达PTEN可以明显抑制RSV感染支气管上皮细胞16HBE凋亡、氧化应激和炎症反应,促进细胞增殖。

摘要： 目的：通过CA16感染支气管上皮细胞中诱导细胞自噬相关因素的表达，探讨藿朴夏苓熏洗汤在CA16防治中的价值.方法：将16HBE接种于6孔板,设置细胞组别为治疗组和对照组,先将含有银翘藿朴汤的治疗组用此中药液进行预处理4h,随后开始将病毒接种至治疗组和对照组的培养基中,此后对照组不进行加入任何药液的处理,再进行收样,观察并记录结果.结论：应用中药后的治疗组可以避免病毒参与免疫逃逸,进而激发免疫反应.

摘要： 目的：研究蠲饮泄肺方对脂多糖(LPS)诱导的气道粘蛋白MUC5AC表达的调控并探讨可能的机制. 方法：体外培养人支气管上皮细胞16HBE,根据脂多糖刺激时长将细胞分为0、0.5、1、6、12及24h组,确定后续实验作用时长.用CCK8法检测不同浓度蠲饮泄肺方对16HBE细胞和LPS刺激后细胞增殖的能力,选择最适药物浓度.实验分为对照组、高粘液表达组(LPS)及蠲饮泄肺方干预组(蠲饮泄肺方+LPS),采用Western blot方法检测MUC5AC、细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)蛋白的表达. 结果：脂多糖诱导MUC5AC蛋白高表达,0、0.5、1、6、12及24h组的MUC5AC的相对表达量呈增多趋势,而SOCS1蛋白则呈反向表达,6h组MUC5AC和SOCS1蛋白水平均处于中间值,故后续实验LPS的最佳作用时间选择6h.CCK-8的实验结果显示当培养基中蠲饮泄肺方溶液的浓度高时对16HBE有抑制生长的作用,当浓度为0.005％时蠲饮泄肺方溶液对LPS刺激后的细胞治疗效果最好,后续实验药物作用浓度选择0.005％,作用时间48h.LPS能刺激16HBE细胞表达MUC5AC,抑制SOCS1的表达(P＜0.05);蠲饮泄肺方能抑制LPS诱导的MUC5AC表达,促进LPS作用后SOCS1的表达(P＜0.05). 结论：蠲饮泄肺方能抑制脂多糖诱导的气道粘蛋白MUC5AC表达,作用机制可能与SOCS1有关.

摘要： 本研究以支气管上皮细胞Bears-2B为模型,研究了PM2.5诱导呼吸系统支气管上皮细胞损伤的分子机制.本研究揭示了ATR/CHK1/p53/DRAM/autophagy/STAT3/VEGF炎性信号传递反应介导PM2.5诱导支气管上皮细胞发生炎性损伤效应的分子机制。研究结果首次揭示了细胞自噬在调控PM2.5诱导呼吸系统炎性应激损伤效应中的关键作用；首次为PM2.5可能引发DNA损伤反应提供了直接证据；并证实了p53在链接PM2.5诱导基因毒应激损伤和炎性应激损伤反应交联中的关键作用；同时也为靶向以上信号途径的PM2.5致呼吸系统损伤防控策略研究提供了重要线索。

摘要： 目的:探索烟草烟雾凝集物(cigarette smoke condensate,CSC)对永生化人支气管上皮细胞(immortalized human bronchial epithelial,BEAS-2B)的线粒体损伤机制. 方法:用不同浓度CSC对BEAS-2B细胞进行染毒24小时,通过细胞形态学观察和流式细胞术检测各组细胞形态变化、细胞凋亡率,.运用ELISA、RT-PCR、Western Blot技术检测各组细胞的线粒体膜电位以及凋亡相关基因、蛋白的表达. 结果:与对照组相比,CSC染毒组细胞形态明显改变,ROS水平升高(P<0.05),SOD活力水平降低(P<0.05),凋亡率上升(P<0.05),线粒体膜电位降低,Bcl-2表达下调,Bax表达上调,Cyt-C表达上调,caspase-3表达上调. 结论:CSC诱导BEAS-2B细胞产生氧化损伤,导致细胞活力降低、细胞形态改变,线粒体在氧化应激状态下膜通透性增强,Bax表达上调、Bcl-2表达下调,引起细胞色素C的释放和caspase-3激活,最终引起线粒体介导的凋亡途径的恶性循环.

摘要： ORMDL3与儿童哮喘密切相关,目前研究表明ORMDL3参与哮喘气道重塑的发生,本研究目的是观察ORMDL3在哮喘气道重塑过程中表达,探讨ORMDL3的过表达对支气管上皮细胞的影响,进一步阐明哮喘发病机制,为哮喘治疗开发新型药物提供依据.通过临床试验，结果表明：ORMDL3与哮喘气道重塑呈正相关，ORMDL3的过表达可使支气管上皮细胞出现EMT的改变。也就是说，ORMDL3可能是导致哮喘支气管EMT的原因之一。

摘要： 目的：探讨阳和平喘颗粒对细菌脂多糖(LPS)诱导的人支气管上皮细胞(16HBE)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和黏蛋白5AC(MUC5AC)表达的影响及作用机制. 方法：应用浓度为1、10、100和1000μg/L的LPS干预16HBE细胞24h,Rea1-time PCR检测其对TNF-α和MUC5AC mRNA表达的影响;选取浓度为100μg/L的LPS干预16HBE细胞3、6、12、24和48h,Real-time PCR检测其对TNF-α和MUC5AC mRNA表达的影响;应用浓度为500mg/L的阳和平喘颗粒预处理16HBE细胞1、2和4h,100μg/L的LPS继续干预24h,Real-time PCR和ELISA分别检测TNF-α和MUC5AC mRNA及蛋白水平的表达变化;LPS单独及分别联合阳和平喘颗粒干预16HBE细胞,Western blot检测表皮生长因子受体(EGFR)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的变化. 结果：与对照组相比,10、100和1000μg/L的LPS均可显著上调TNF-α和MUC5AC mRNA的表达(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01),并于24h达到高峰;与LPS组相比,阳和平喘颗粒预处理16HBE细胞1、2和4h均能降低LPS诱导的TNF-α和MUC5AC mRNA及蛋白水平的表达(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01),且预处理2h效果最明显;阳和平喘颗粒可抑制LPS诱导的EGFR和p38MAPK的磷酸化. 结论：阳和平喘颗粒可通过抑制LPS诱导的EGFR和p38MAPK磷酸化而下调TNF-α和MUC5AC的表达.

摘要： 目的：检测经长期氡暴露而发生恶性转化的人的永生化支气管上皮细胞(BEAS-2B)中甲基化转移酶(DNMT)基因的动态变化,从表观遗传学层面探索氡致肺癌的作用机制.rn 方法：应用流式细胞仪分析法,软琼脂集落形成及裸鼠成瘤实验鉴定长期氡暴露过程中BEAS-2B细胞的恶性转化程度,以QPCR方法检测DNMT1、DNMT3A的mRNA表达量.rn 结果：与对照组细胞相比,染氡30代传代至40代的细胞软琼脂克隆形成率已升高至27.27±1.10％(P＜0.05),转化细胞在裸鼠体内成瘤率达到30％(P＜0.05),呈低分化癌;QPCR结果显示各染氡组传至40代细胞DNMT1mRNA表达量均低于对照组,DNMT3AmRNA表达量均高于对照组.rn 结论：建立并确认了体外染氡诱发BEAS-2B细胞恶性转化模型,且细胞恶性程度随染氡代数和传代代数的增加呈现剂量效应关系,细胞出现移植成瘤.本试验条件下,DNMTs表达的改变导致细胞增殖失控,打破内环境平衡,这可能是在表观遗传学中,长期氡暴露致BEAS-2B细胞恶性转化的机制之一.

摘要： 目的：分析甲基丙烯酸环氧丙酯(Glycidyl Methacrylate,GMA)致人支气管上皮(16HBE)细胞恶性转化不同时期甲基转移酶样基因(Methyltransferase like9,METTL9;P53Activated Protein1,PAP1)甲基化状态及其表达情况,探讨其在GMA诱导16HBE细胞恶性转化过程中METTL9基因甲基化状态的改变及其意义.rn 方法：收获GMA染毒第10代(前期)、20代(中期)、30代(后期)16HBE细胞,应用甲基化芯片检测METTL9/PAP1基因在GMA诱导16HBE细胞恶性转化不同时期的甲基化状态,采用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence Quantitative PCR,qPCR)法检测该基因在恶性转化不同时期的表达量,并与同期DMSO溶剂对照组细胞比较.rn 结果：甲基化芯片结果显示,GMA染毒组16HBE细胞在第10、20代METTL9/PAP1基因均发生甲基化,对照组均未发生甲基化.qPCR结果显示,与同期溶剂对照组相比,GMA染毒组16HBE细胞在第10代METTL9/PAP1基因表达量均下调,在第20代上调;经甲基化转移酶抑制剂(5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-cdr))处理后,该基因与同代龄GMA组细胞相比,10代表达量水平上升(P＜0.01),20代表达水平下降,差异有统计学意义(P＜0.01).rn 结论：METTL9/PAP1基因可作为GMA诱导16HBE细胞发生恶性转化的一个特异分子标志.

摘要： 目的：探讨泛素连接酶RING2对苯并[a]芘(Benzo(a)pyrene,BaP)染毒人支气管上皮(human bronchial epithelial,16HBE)细胞细胞周期和P53蛋白表达的影响.rn 方法：以16HBE未处理组为阴性对照组,二甲基亚砜(DMSO)组为溶剂对照组,MOCK组为序列对照组.在使用RNA干扰技术降低泛素连接酶RING2基因表达前后,分别进行不同浓度BaP(1、2、4、8、16、32μmol/L)染毒24h;16μmol/L BaP染毒不同时间(1、2、4、8、12、24h)实验.用流式细胞术检测干扰前后两组细胞细胞周期分布情况,用Western-blot法检测干扰前后两组细胞P53蛋白表达水平.rn 结果：1.流式细胞术检测结果显示：与阴性对照组比较,16HBE细胞染毒后各浓度和各时点组S期细胞所占的比例均增加(P＜0.05),而16HBE(SiRNA-RING2)各浓度和各时点组S期细胞所占的比例均下降(P＜0.05).经协方差分析,分组因素(是否进行RNAi)和染毒浓度都对S期细胞比例有影响,P值均为小于0.001,16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(17.09％)比16HBE细胞组(31.55％)明显降低(P＜0.001).分组因素(是否进行RNAi)和染毒时间都对S期细胞比例有影响,P值均为小于0.001,16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(13.07％)比16HBE细胞组(28.04％)明显下降(P＜0.001).2.Western-blot结果显示：与阴性对照组比较,16HBE细胞染毒后各浓度和各时点组P53的表达水平均增加(P＜0.05),而16HBE(SiRNA-RING2)细胞除16μmol/L染毒8h组外,其余各组P53的表达水平均降低(P＜0.05).经协方差分析,分组因素(是否进行RNAi)和染毒浓度都对P53的表达水平有影响,P值分别为0.026和0.028.16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(0.989)比16HBE细胞组(1.375)明显下降(P＜0.01);分组因素(是否进行RNAi)和染毒时间都对P53的表达水平有影响,P值分别为0.007和0.035.16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(0.857)比16HBE细胞组(1.541)明显下降(P＜0.01).rn 结论：RING2参与的组蛋白泛素化修饰可能通过影响P53表达和细胞周期S期的变化来发挥对DNA损伤修复的调控.

摘要： 通过不同浓度香烟浓集物(CSC)刺激人支气管上皮细胞(16HBE) 24,48小时后,荧光定量PCR法及蛋白免疫印迹法分别检测TRPA1 mRNA及蛋白的表达量，用Fura-2-AM标记法测量细胞内钙离子法测量细胞的基础钙及外源性细胞钙内流，来了解香烟浓集物对人支气管上皮细胞TRPA1表达以及对转染人TRPA1的HEK293 (TRPA1-HEK293)细胞内钙离子浓度的影响，发现香烟浓集物能够激活支气管上皮细胞(16HBE)引起TRPA1 mRNA表达增加，并可能通过激活膜上受体操纵性钙通道TRPA1使细胞内钙离子浓度增加，这可能为香烟浓集物引起咳嗽敏感性增高的潜在原因。

摘要： 本发明提供了一种犬原代细支气管上皮细胞及其在制备永生化细胞中的应用，属于生物技术领域。所述犬原代细支气管上皮细胞，取至45日龄的清洁级雄性比格犬。分离犬气管组织，剪碎后加入胶原酶及胰酶消化，得到完整的细支气管组织后培养所获细胞进一步通过间接免疫荧光试验检测角蛋白18表达，证实成功获得犬原代细支气管上皮细胞。构建含端粒酶基因（hTERT）的真核表达载体pEGFP‑hTERT，转染犬原代细支气管上皮细胞后，hTERT基因高表达，细支气管上皮细胞能够稳定传代培养至少20代。本发明制备的犬永生化细支气管上皮细胞，为研究犬流感病毒等犬类病原的感染机制提供了重要的生物材料。

摘要： 本发明提供了一种针对COPD患者的原代支气管上皮细胞的分离培养方法，所述细胞分类命名COPD患者原代支气管上皮细胞DHBE‑001，保藏编号为CCTCC NO：18169。该方法为，获取组织去除多余的结缔组织，解剖呼吸道，切成片段、清洗，将组织在离心管中消化并摇晃过夜；结束消化后将组织倒入组织培养皿中，加入胎牛血清至终浓度为10%，终止消化；用PBS缓冲液冲洗后收集到离心管中离心；加入组织消化液Ⅱ后静置直到看到组织块分离；加入FBS将溶液离心，弃上清，加入DMEM/F12培养基重悬后进行细胞计数；将离心沉淀的细胞置于含有BEGM培养基的培养皿中培养完成分离；本方法的细胞分离率高，纯度高，活力好，分离成功的原代支气管上皮细胞在体外培养5‑10代以内均能保持良好的细胞形态及活力。

摘要： 本发明提供了一株新的人支气管上皮细胞株HBE‑TT。该细胞株保藏在中国典型培养物保藏中心(武汉)，保藏编号为CCTCC NO:C201560。经鉴定，HBE‑TT细胞株纯度良好，无杂细胞污染，并且区别于现有的其它所有细胞株。此外，该永生化细胞保留了原代支气管上皮细胞的典型特征，无支原体污染，并且未呈现恶性转化特征，提示HBE‑TT细胞在体外传代培养过程中可以保持性状稳定。HBE‑TT细胞有望成为深入探讨环境有害因素暴露所导致的肺部疾病发生发展的分子机制和药理学研究的有力工具，对探究环境有害因素对人体肺脏的健康损害效应、风险评估、以及新药开发有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种小鼠气管‑支气管上皮细胞的分离方法，属于基础医学技术领域。本发明公开的一种小鼠气管‑支气管上皮细胞的分离方法，包括气管分离、PBS溶液清洗和酶消化；本发明方法大大缩短了分离气管‑支气管上皮细胞所需的时间，可以及时对分离的细胞进行检测分析，最大限度的避免了细胞分离过程以及细胞培养过程对细胞产生的外加影响，更好地反映出细胞的真实状态；本发明方法大大提高了分离到的气管‑支气管上皮细胞数量，使急性分离小鼠支气管上皮细胞用于流式细胞仪检测成为可能。

摘要： 本发明提供了一种犬原代细支气管上皮细胞及其在制备永生化细胞中的应用，属于生物技术领域。所述犬原代细支气管上皮细胞，取至45日龄的清洁级雄性比格犬。分离犬气管组织，剪碎后加入胶原酶及胰酶消化，得到完整的细支气管组织后培养所获细胞进一步通过间接免疫荧光试验检测角蛋白18表达，证实成功获得犬原代细支气管上皮细胞。构建含端粒酶基因（hTERT）的真核表达载体pEGFP-hTERT，转染犬原代细支气管上皮细胞后，hTERT基因高表达，细支气管上皮细胞能够稳定传代培养至少20代。本发明制备的犬永生化细支气管上皮细胞，为研究犬流感病毒等犬类病原的感染机制提供了重要的生物材料。

摘要： 本发明提供了一种针对COPD患者的原代支气管上皮细胞的分离培养方法，所述细胞分类命名COPD患者原代支气管上皮细胞DHBE‑001，保藏编号为CCTCC NO：18169。该方法为，获取组织去除多余的结缔组织，解剖呼吸道，切成片段、清洗，将组织在离心管中消化并摇晃过夜；结束消化后将组织倒入组织培养皿中，加入胎牛血清至终浓度为10%，终止消化；用PBS缓冲液冲洗后收集到离心管中离心；加入组织消化液Ⅱ后静置直到看到组织块分离；加入FBS将溶液离心，弃上清，加入DMEM/F12培养基重悬后进行细胞计数；将离心沉淀的细胞置于含有BEGM培养基的培养皿中培养完成分离；本方法的细胞分离率高，纯度高，活力好，分离成功的原代支气管上皮细胞在体外培养5‑10代以内均能保持良好的细胞形态及活力。

摘要： 本发明公开白藜芦醇在制备治疗人支气管上皮细胞损伤药物中的应用。所述的白藜芦醇在保护二价镍离子诱导的人支气管上皮细胞存活率具有显著作用，可通过调控活性氧簇的生成，来达到抑制二价镍离子诱导的细胞损伤。本发明为白藜芦醇在重金属诱导人支气管上皮细胞损伤防治中的应用提供了新的思路。

摘要： 本发明提供猪支气管上皮细胞系、制备方法及其应用，属于生物技术领域。猪支气管上皮细胞系hTERT‑PBEC，保藏编号为CCTCC NO：C201749。该细胞系hTERT‑PBEC的制备方法，包括构建携带绿色荧光蛋白基因和人端粒酶逆转录酶基因的真核表达载体pEGFP‑hTERT；利用Lipofectamin 3000将真核表达载体pEGFP‑hTERT转染猪原代支气管上皮细胞，通过G418筛选得到猪支气管上皮细胞系hTERT‑PBEC。本发明通过巧妙的方法，显著提高了筛选效率，得到的猪支气管上皮细胞系，能够稳定传代至60代以上，且保留有原代细胞的特性，能够应用于研究猪呼吸道病原感染致病机理中。

摘要： 人支气管上皮细胞分化培养方法，包括如下步骤：将人原代支气管上皮细胞在普通细胞培养板上培养后，用胰蛋白酶‑EDTA消化液消化细胞孔；离心处理，首次加入BEGM培养基，混匀，再离心，加入BEGM培养基，吹打均匀；接种到培养板上，顶部加含BEGM培养基，基底部加含BEGM培养基，培养，细胞贴壁以后，顶部和基底部再次加入BEBM培养基，并分别添加500nM维甲酸，培养45‑50小时，然后吸出培养基；只向培养细胞的基底部添加加有100nM维甲酸的培养基。本发明同时提供了人支气管上皮细胞的鉴定方法。本发明体外培养得到人支气管细胞存活率高、减少混杂细胞干扰。

摘要： 本发明公开了原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶联合在支气管上皮细胞异质性增生检测中的应用及试剂盒，属于液体活检病理学检测技术领域。本发明首次将原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物应用到支气管上皮细胞异质性增生检测领域中，令人惊喜的发现，相较于单独地以原血红素或β‑葡萄糖醛酸苷酶作为标志物进行检测，将原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物进行检测的敏感度、特异度以及约登指数均明显提高，因此，以原血红素和β‑葡萄糖醛酸苷酶作为联合标志物有助于提高对由支气管上皮细胞异质性增生引起的肺癌的诊断结果的准确性。