插入突变

摘要： 近年来,靶向治疗已成为晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的标准治疗方案,但这种治疗方法对于那些具有表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)外显子20插入(ex20ins)突变的肿瘤患者效果非常有限.该插入突变是EGFR第三大常见突变,它缩小了药物结合口袋,赋予肿瘤对常用的EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKI)的内在抗性,致使第一代和第二代EGFR TKI的功效有限.迄今为止,尚未有获得批准的针对NSCLC EGFR外显子20插入突变的靶向治疗的药物.在这种情况下,研究新一代的EGFRTKI或采用双特异性抗体作为新的治疗策略,可能会为这些患者建立新的治疗标准.本文将总结迄今为止报道的所有有关外显子20插入对EGFR结构和其对EGFR抑制剂敏感性的影响,以及外显子20插入的NSCLC患者的治疗策略,希望为临床治疗提供参考.

摘要： 近年来,随着驱动基因的不断发现和相应靶向药物的上市,开启了非小细胞肺癌(NSCLC)精准治疗的新纪元,尤其是人表皮生长因子受体(EGFR)基因常见突变及间变性淋巴瘤激酶重排的NSCLC患者,相应靶向药的问世给其生存期带来了质的飞跃.然而,部分罕见基因突变,如EGFR和人表皮生长因子受体2(HER2)20号外显子插入突变仍是肺癌治疗中最为棘手的问题,临床前研究及临床试验的不断更新,为此突变患者带来新的治疗希望,现就近年来EGFR/HER220号外显子插入突变靶向治疗的研究进展作一综述.

摘要： 美国FDA于2021年5月21日批准强生集团旗下杨森药业公司(Janssen Pharmaceutical Companies of Johnson&Johnson)的Rybrevant(amivantamab-vmjw)用于治疗成人非小细胞肺癌,适用于携带EGFR外显子20插入突变(epidermal growth factor receptor[EGFR]exon 20 insertion mutations)的患者。这是FDA批准的首种用于治疗非小细胞肺癌的靶向药物。FDA同时批准了一种名为Guardant360 CDx的检测试剂(由Guardant Health Inc.公司研制生产)用于配套检测患者是否携带EGFR外显子20插入突变。

摘要： 甘蓝型油菜品系XY881和XY883是湘油15辐照诱变后连续自交筛选的2个种子含油量、光合效率和弱光敏感性等有明显差别的子代品系.分别从XY881和XY883中克隆了芸薹素唑抗性因子1(brassinazole-resistant 1,BnaBZR1)和光敏色素互作因子4(phytochrome interacting factor 4,BnaPIF4)基因并进行了序列结构、表达和功能分析.结果表明,XY883的BnaBZR1和BnaPIF4基因存在结构变异,引起表达和调控模式的差异.XY883中BnaBZR1的启动子具有124 bp的富含A/T的插入序列,且XY883具有比XY881高的BnaBZR1表达,并且在弱光和2,4-表油菜素内酯(2,4-BL)诱导下具有较少的表达变化.XY883中BnaPIF4的5'-UTR区域存在可变剪接,形成长度分别为424 bp(U01)、239 bp(U02)和332 bp(U03)的3种5'-UTR,在弱光和2,4-BL诱导下,XY883中3种可变剪接的BnaPIF4转录产物的变化不一致.将BnaPIF4的3个5'-UTR与CDS分别组合转化拟南芥后其表达在转录水平无明显差异,但蛋白翻译存在明显差异,表明BnaPIF4的5'-UTR变异影响其翻译过程.转BnaPIF4基因拟南芥出现株高增加、叶片狭长且光合作用下降的表型,共转化BnaBZR1能减弱BnaPIF4造成的光合作用下降;转BnaPIF4和BnaBZR1基因对油菜的影响与拟南芥相似,但表型不如拟南芥明显,表明BnaPIF4是油菜光合作用的负调控因子,而BnaBZR1可对BnaPIF4的光合负调控产生拮抗;这与XY881和XY883中两基因表达调控模式及其光合表型相吻合.

摘要： 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor EGFR)基因的20外显子插入突变(exon 20 insertion mutation,Ex20ins mutation)是最早被发现的非小细胞肺癌驱动基因激活突变之一。但由于突变导致其独特的蛋白变异结构,大多数20插入突变(除了A763_Y764insFQEA)对第一代和第二代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)治疗应答差。因此,为EGFR Ex20ins突变患者找到更有效的治疗方法迫在眉睫。本文将对EGFR Ex20ins突变靶向治疗的相关研究进展进行总结,以期为临床治疗的选择提供依据。

摘要： 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor EGFR)基因的20外显子插入突变(exon 20 insertion mutation,Ex20ins mutation)是最早被发现的非小细胞肺癌驱动基因激活突变之一.但由于突变导致其独特的蛋白变异结构,大多数20插入突变(除了A763_Y764insFQEA)对第一代和第二代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)治疗应答差.因此,为EGFR Ex20ins突变患者找到更有效的治疗方法 迫在眉睫.本文将对EGFR Ex20ins突变靶向治疗的相关研究进展进行总结,以期为临床治疗的选择提供依据.

摘要： 目的:为BCR-ABL35INS突变型慢性粒细胞白血病(CML)患者合理选用酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗提供参考.方法:以"BCR-ABL插入突变""ABL135ins突变""BCR-ABL c.1423_1424ins35""ABL1 p.C475Tyrfs11""BCR-ABL insertional mutation""ABL135ins mutation"等为关键词,在中国知网、万方数据知识服务平台、Medline、COSMIC数据库等中进行检索,检索时限为2007-2018年,就BCR-ABL35INS突变型CML患者的基本资料、治疗情况(治疗方案、患者依从性及停药情况)、治疗效果(分子生物学缓解情况及疾病进展情况)以及安全性数据(不良反应)等进行汇总与分析.结果:共纳入相关文献9篇,涉及BCR-ABL35INS突变型CML患者70例,均为国外病例.其中,男、女性患者分别有39、31例,中位年龄为49.2岁,从确诊CML至检测到BCR-ABL35INS突变的中位时间为19个月.检测到基因突变后,采用伊马替尼(起始剂量400 mg,口服,每日1次)治疗的共39例次,有5例患者(12.9％)获得分子生物学缓解;15例(38.5％)有分子生物学应答但疾病进展;有8例(20.5％)无应答.采用达沙替尼(100 mg,每日1次或分2次口服)治疗的共17例次,有8例(47.1％)获得分子生物学缓解.采用尼洛替尼(400 mg,分2次口服)治疗的共21例次,有3例(14.3％)获得分子生物学缓解;2例有分子生物学应答但疾病进展.上述患者因不良反应而停药的分别有7、3、7例,分别占17.9％、17.6％、33.3％,均为美国国立癌症研究所常见不良事件评价标准3～4级,且以血液系统毒性反应为主.结论:BCR-ABL35INS突变型CML患者应用伊马替尼治疗的分子生物学缓解率较低,但可能对达沙替尼更为敏感.在治疗过程中,应加强对血液系统等相关指标的监测,以保证患者用药的安全性和有效性.

摘要： 植物功能基因组学的研究中，插入突变己成为研究基因克隆和功能分析的一个有效遗传工具。本文介绍了T-DNA插入突变的原理，详细论述了T-DNA标签在大规模植物功能分析中的应用，还介绍了利用T-DNA插入克隆基因的方法，同时指出了T-DNA插入突变的优缺点及其发展方向。

摘要： 目的 了解中国汉族人群DC-SIGN/DC-SIGNR基因颈区重复序列的遗传多态性分布,获得相应位点的汉族人群的遗传学数据.方法 应用PCR技术、琼脂糖凝胶电泳结合测序对DC-SIGN/DC-SIGNR基因的颈区重复序列分型,χ2检验不同种族间等位基因及基因型频率的差异,并计算DC-SIGNR的多态信息含量(PIC).结果 DC-SIGN多态性低,颈区绝大多数为7-重复,该等位基因频率为0.9808,但亦检出少量的4-、5-、6-、8-等缺失或插入变异,而美国白人只含有8-、6-变异;DC-SIGNR存在高度多态性,PIC=0.5312,存在4-、5-、6-、7-、8-、9-等位基因,检出16种基因型.6/5、7/4、7/5、7/6、7/7、9/5、9/7、9/9基因型和5-、6-、7-、9-等位基因频率在中国汉族人群和美国白种人群中的分布构成极显著差异(P＜0.01),与美国白人比较,中国汉族人群似乎存在更多的插入突变.结论 中国汉人的DC-SIGN/DC-SIGNR基因型分布和基因频率与美国白人相比存在显著差异,并有其独特的群体遗传学特征.

摘要： 基因敲除是研究基因功能的重要方法，本文介绍了基因敲除的技术路线以及应用Split Marker重组技术构建基因敲除载体，综述了应用基因敲除技术在近几年的研究进展。

摘要： 基因敲除是研究基因功能的重要方法，本文介绍了基因敲除的技术路线以及应用Split Marker重组技术构建基因敲除载体，综述了应用基因敲除技术在近几年的研究进展。

摘要： 基因敲除是研究基因功能的重要方法，本文介绍了基因敲除的技术路线以及应用Split Marker重组技术构建基因敲除载体，综述了应用基因敲除技术在近几年的研究进展。

摘要： 基因敲除是研究基因功能的重要方法，本文介绍了基因敲除的技术路线以及应用Split Marker重组技术构建基因敲除载体，综述了应用基因敲除技术在近几年的研究进展。

摘要： 基因敲除是研究基因功能的重要方法，本文介绍了基因敲除的技术路线以及应用Split Marker重组技术构建基因敲除载体，综述了应用基因敲除技术在近几年的研究进展。

摘要： 本发明公开一种谷氨酸棒状杆菌的插入序列元件删除突变菌株的构建其应用，涉及微生物工程领域。所述的谷氨酸棒状杆菌插入序列元件删除突变菌株是谷氨酸棒状杆菌菌株ATCC13032敲除部分或全部插入序列元件后的菌株。所获得的插入序列删除突变株，DNA电转化效率和外源蛋白表达稳定性显著高于野生型菌株ATCC13032的能力。本发明所构建谷氨酸棒状杆菌插入序列删除突变菌株，可以用于谷氨酸棒状杆菌表达系统的宿主菌，用于重组制备外源蛋白(酶)，也为谷氨酸棒状杆菌工程菌的改造提供了一种新的方法。

摘要： 菰黑粉菌T‑DNA突变体库的构建和插入位点分析方法，属于基因工程技术领域。本发明以构建的菰黑粉菌自融合菌株TSP为出发菌株，以含有遗传霉素抗性基因的质粒为载体，通过ATMT构建菰黑粉菌T‑DNA突变体库，并对构建得到的建菰黑粉菌T‑DNA进行基因组重测序，分析其T‑DNA插入位点。本发明为后续菰黑粉菌二型态转换的调控机理研究奠定基础。

摘要： 本发明公开了一种快速低丰度检测插入和缺失突变的方法。它步骤一：制备双标记荧光探针；步骤二：制备核酸酶；步骤三：设计所需的突变链，野生链，gRNA；步骤四：配置野生链和突变链的双链DNA液体；步骤五：配制混合反应液；步骤六：将步骤四中的液体配制成双链的野生链和突变链；步骤七：配制待检反应体系：步骤八：检测荧光曲线；步骤九：野生链稀释突变链；步骤十：配制待检反应体系；步骤十一：检测荧光曲线；步骤十二：设计RPA反应的引物；步骤十三：稀释合成的链粉末；步骤十四：配置RPA反应体系；步骤十五：配制50ul的待检反应体系；步骤十六：检测荧光曲线。本发明具有成本低，检测速度快，灵敏度高的优点。

摘要： 本发明提供了一种基于FBN1基因c.5688‑5689插入突变的马凡综合征检测试剂盒，属于分子生物检测技术领域。本发明通过对马凡综合征家族成员的全血DNA进行碱基序列分析，在家族患病成员中检测到了FBN1基因的c.5688‑5689insG碱基插入变异(p.Arg1897Glufs)，家系中的未患病成员均未检测到该变异。通过检测受试者是否携带FBN1基因c.5688‑5689插入突变，可以检测该变异的携带者，有助于马凡综合征的分子诊断和家系遗传分析，同时可以研究基因突变与临床表型之间的关系，为其将来可能需要的产前诊断提供依据，同时为马凡综合征的药物研发提供新的靶点。

摘要： 本发明属于分子生物学和基因工程技术领域，涉及一种ACE插入突变型探针。该ACE插入突变型探针特异性地识别第16内含子发生插入突变的ACE基因；所述ACE插入突变型探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述SEQ ID NO:3为5'‑CCAAACTTCACAGTCTCT‑3'。本发明提供的ACE插入突变型探针，能够特异性地识别第16内含子发生插入突变的ACE基因，可用于检测或筛查ACE基因是否发生第16内含子发生插入突变。

摘要： 本发明公开了一种用于小鼠胚胎干细胞的基因插入突变系统及其突变方法和应用。本发明构建了含有筛选标记基因的内源基因突变载体和可诱导突变载体进行基因组整合的转座酶表达载体，利用电转染方法，将两种载体共同导入小鼠胚胎干细胞中，再通过诱导转座酶表达、细胞抗性筛选、细胞克隆鉴定和整合位点分析，构建小鼠胚胎干细胞内源基因的有效突变方法，获得携带单一突变基因和具备全能分化能力的细胞克隆。本发明突变载体可随机插入小鼠胚胎干细胞的基因组中，干扰该内源基因的转录表达。本发明突变方法可对小鼠胚胎干细胞基因组进行大规模插入突变，获得携带单一突变基因和具备全能分化能力的细胞克隆库，用于小鼠突变体的研制和基因功能研究。

摘要： 本发明提供了一种基于FBN1基因c.5688‑5689插入突变的马凡综合征检测试剂盒，属于分子生物检测技术领域。本发明通过对马凡综合征家族成员的全血DNA进行碱基序列分析，在家族患病成员中检测到了FBN1基因的c.5688‑5689insG碱基插入变异(p.Arg1897Glufs)，家系中的未患病成员均未检测到该变异。通过检测受试者是否携带FBN1基因c.5688‑5689插入突变，可以检测该变异的携带者，有助于马凡综合征的分子诊断和家系遗传分析，同时可以研究基因突变与临床表型之间的关系，为其将来可能需要的产前诊断提供依据，同时为马凡综合征的药物研发提供新的靶点。

摘要： 本发明提供了水牛ASIP基因插入突变及其分子鉴定方法和应用。本发明以中国水牛为资源群体，利用全基因组测序、转录组测序、RACE扩增以及Nanopore三代测序等技术手段，通过基因定位、致因突变挖掘，发现ASIP基因上游LINE‑1转座子插入2825bp序列导致水牛白毛色性状，本发明设计了2对特异性引物对实现了对该突变的检测，并能快速准确对水牛白毛色基因进行基因分型，可以在个体牛犊出生即可检测基因型，加快育种进程，节省饲养成本，在水牛种质资源的保护和遗传改良中具有良好应用前景。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种用于构建AAV血清型随机插入的突变库及其试剂盒和方法。所述突变库是通过AAV血清型随机插入构建的。所述试剂盒包括：Cap克隆载体、含有筛选基因的转座子、转座酶、去除筛选基因的特异性核酸内切酶以及含AAV Rep编码基因序列和两端ITR编码基因序列的载体。本发明解决了现有技术中新AAV血清型获得效率低、靶向性低的问题，建立了一种操作相对简单、成功率高、且时间周期较短的随机插入突变方法，具有重要的意义。

摘要： 本发明提供一种DHFR基因内含子19bp插入突变的检测方法，依据DHFR基因内含子19bp设计PCR引物组合以及特异检测荧光探针，对待测样品进行实时荧光定量PCR，从而对DHFR基因内含子19bp插入突变的类型进行分型。本发明还提出所述PCR引物组合以及特异检测荧光探针在制备用于检测DHFR基因内含子19bp插入突变中的应用。本发明还提出用于检测DHFR基因内含子19bp插入突变的试剂盒。