拟松材线虫

摘要： 【目的】研究与交配行为相关的拟松材线虫G蛋白α亚基Bmu-gpa-1基因的表达特性及生物学功能,为拟松材线虫的种内交配繁殖分子机制研究提供依据。【方法】根据拟松材线虫基因组数据设计引物克隆Bmu-gpa-1基因。对Bmu-gpa-1进行序列分析、系统发育分析和蛋白结构预测等生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术和原位杂交技术探究Bmu-gpa-1基因在拟松材线虫各个龄期的表达水平和表达部位,明确其时空动态表达特性。利用RNA干扰技术探究该基因在拟松材线虫交配繁殖行为中的作用,并通过实时荧光定量PCR技术检测RNA干扰的效率。【结果】Bmu-gpa-1基因全长为1780 bp,CDS全长为1065 bp,编码354个氨基酸。进化分析表示该基因与秀丽隐杆线虫gpa-1基因隶属于同一G蛋白α亚基家族。荧光定量PCR结果及转录组结果均表明Bmu-gpa-1基因在拟松材线虫各个发育阶段均有表达,2龄期和3龄期表达水平较高,胚胎期次之,4龄期和成虫期表达水平较低且基因表达水平具有雌、雄虫差异性,即雄虫的基因表达水平显著高于雌虫。原位杂交结果表明,Bmu-gpa-1基因在拟松材线虫体内广泛表达,胚胎发育初期呈散点状表达,胚胎发育后期过渡到全胚胎表达,2龄期全身表达,3龄期和4龄期进一步集中在肠道和性腺处表达,成虫期则出现雌、雄虫差异性表达,即在雌虫的阴户、雄虫的交合刺和尾部表达。交配试验结果显示,沉默Bmu-gpa-1基因后,拟松材线虫雄虫与正常雌虫的交配次数显著增加,交配时长显著缩短,繁殖能力显著下降,而雌虫被干扰后在交配繁殖行为上则无明显异常,推测该基因可以负向调控拟松材线虫雄虫的交配行为,但对雌虫影响较弱。【结论】拟松材线虫Bmu-gpa-1基因是G蛋白α亚基家族中的一员,基因表达水平及表达部位皆具有雌、雄虫差异性。沉默该基因可以改变雄虫的交配行为,雄虫表现出交配次数增加、交配时长减短和交配后雌虫产卵数减少等交配质量下降特征,但对雌虫影响较弱,这说明Bmu-gpa-1基因对拟松材线虫雄虫的交配繁殖行为具有明显的调控功能。

摘要： 拟松材线虫与松材线虫的亲缘关系极为接近,是松材线虫病病原鉴定的主要干扰物种.为了排除松材线虫病病原鉴定过程中拟松材线虫的干扰,采用TaqMan实时荧光PCR技术,以核糖体DNA内转录间隔区(ITS)为模板设计拟松材线虫特异性引物和TaqMan探针,开展拟松材线虫分子检测和鉴定技术研究.结果表明:拟松材线虫ITS2区域存在较多的碱基差异,以此为模板设计的拟松材线虫引物和TaqMan探针组合具有较强的特异性;该组合灵敏性高,能够实现对拟松材线虫单条线虫甚至单个卵的分子检测和鉴定.结合现有的松材线虫分子鉴定技术,可以为进一步构建松材线虫双重检测技术体系奠定基础,为林业和海关检疫提供可靠的技术支撑.

摘要： 徂徕山林场地处鲁中山区的中心位置,具有重要的生态价值.近年徂徕山林场出现了松树的枯死现象,影响了徂徕山松林生态系统的健康和景观.为探究徂徕山松树死亡的原因,分析松树死亡是否与松材线虫病有关系,本研究调查了徂徕山10个林区,采集了969个样品,从线虫形态学、分子序列测定方面进行了鉴定和分析.研究显示,在徂徕山衰弱、病死木中未发现松材线虫,但是发现了大量的拟松材线虫(Bursaphelenchus mucronatus).

摘要： [目的]从日本五针松(Pinus parvi flora)栽培圃地调查松褐天牛(Monochumus alternatus),并取样镜检松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus),揭示日本五针松感染松材线虫病的可能性和扩散风险,为开展检疫提供理论依据.[方法]在日本五针松圃地采集枯死或濒死的日本五针松植株,采用分离镜检法检测枯死或濒死日本五针松木质部的线虫种类;剖木检查天牛危害,观察留在日本五针松松枝上的补充营养伤口,同时鉴定天牛幼虫特征,解剖检验羽化的天牛成虫携带LⅣ状态.[结果]在枯死或濒死6株日本五针松枝条样本中有3株样本分离到松材线虫或拟松材线虫,检出率为50％,其中1个样本检出纯松材线虫,1个样本检出纯拟松材线虫,1个样本为松材线虫和拟松材线虫混合寄生,检出率各为33％.侵入枝干的天牛幼虫为松褐天牛幼虫,该幼虫能在日本五针松上顺利羽化为成虫,并携带松材线虫LⅣ型耐久型幼虫.[结论]日本五针松能被携带松材线虫的松褐天牛危害并感染松材线虫病,应加强检疫管理,杜绝通过人为调运苗木扩散传播松材线虫病.%[Objective] This study researched longhorn beetles and nematode from Japanese five-needle pine (Pinus parviflora) garden to reveal the possibility and spread risk of this pine trees infected by pine wood nematode (Bursaphelenchus xylophilus) and provide theoretical support for quarantine.[Method] The wood and twig samples of dead or dying five-needle pine trees were collected from nursery.The woods for inspection of longhorn larvae were split and the longhorn beetle feeding scars on the twigs were examined.Some wood samples were carried to lab by isolating and identifying the nematode and then the longhorn larvae in the wood were further identified under dissect-microscope.Other wood samples were kept on a box till the larvae developed into adults and then the adults were captured and dissected under microscope to check whether nematodes were carried.[Result] About 33％ of the samples were infected by B.xylophilus;and 33 ％00 by B.mucronatus.The larvae were identified as M.alternatus,and the adults after emerging were further identified as the beetle M.alternatus,which carried nematodes LⅣ of B.xylophilus.[Conclusion] The Japanese five-needle pine trees could be infested by pine wood nematode B.xylophilus and associated with the vector beetle M.alternatus.The pine trees must be quarantined strictly to avoid dispersal of the pine wilt disease.

摘要： By comparing intra-species variation of 14 xylophilus group species and the variation of the female tail shape of B.xylophilus, it is proved that morphological character is reliable to identify B.xylophilus in most situations after it is identified as genus Bursaphelenchus:1. Typical large bow-like spicules about 20-30 μm;2.Long female vulval flap about 7-11 μm;3.Subcylindrical female tail with broad round-ed terminus, without mucro, or sometimes with a short mucro less than 2μm.Tail shape variation of dauer and propagating juveniles of B.xy-lophilus is also described.%通过对14种松材线虫组线虫种内变异、松材线虫雌虫尾尖突随环境变化的比较分析,总结出松材线虫的形态鉴定特征,即对于大多数松材线虫群体,形态学方法可准确判定松材线虫,在判断其为伞滑刃属后,掌握以下3点:①雄虫典型的较大弓状交合刺(直线长20~30μm);②雌虫较长的阴门盖(长7~11μm);③雌虫尾亚圆柱形,末端宽圆,无尾尖突(偶尔群体内个别有微小的尾尖突,但不超过2μm).最后对松材线虫持久型和繁殖型幼虫尾尖突变化进行了描述.

摘要： 松材线虫Bursaphelenchus xylophilus和拟松材线虫B.mucronatus是伞滑刃属内两个独立的种,均可引起松材线虫病.松材线虫与拟松材线虫能否进行种间杂交在学术界一直存在争议.采用4个虫株在实验室条件下开展了杂交试验及杂交后代繁殖力研究.结果表明:实验室条件下松材线虫和拟松材线虫可成功杂交,他们之间未发展出严格的生殖隔离,二者极可能来源于同一祖先.

摘要： 松材线虫作为外来入侵种,逐步取代拟松材线虫占据生态位.初步研究表明这可能与两种线虫的繁殖能力差异关系密切.本研究采取了两种方法,即离体条件竞争试验和体内竞争试验比较二者繁殖力.结果表明,松材线虫的繁殖水平明显高于拟松材线虫.松材线虫和拟松材线虫混合物长时间培养后,松材线虫逐步竞争淘汰拟松材线虫.除此以外,离体培养和体内竞争结果均表明,竞争条件下松材线虫的繁殖力高于非竞争条件.

摘要： 介绍了拟松材线虫的近年来的发展进程以及其相关研究成果,详细的对拟松材线虫的致病机理进行了有关描述,并对有效的防治措施进行详细的介绍,重点地提出许多防治措施.并且指明了探寻科学可持续状态下拟松材线虫致病作用的研究成果及之后研究方向.

摘要： 松树萎蔫病是由松材线虫引起的松属树种上的一种毁灭性的病害,对松材线虫致病机理的研究具有理论和实践意义.本实验利用松材线虫和拟松材线虫致病性的差异,通过PAGE电泳对两者的分泌-排泄物和分泌物亚细胞颗粒蛋白组分进行了比较.结果表明:松材线虫和拟松材线虫种内和种间各株系的蛋白图谱均有差异;五个株系有相同的蛋白带;松材线虫有特有的蛋白带,其中37kD和25kD的蛋白在松材线虫中的含量都较突出,一种来自食道腺,一种来自非口针分泌的分泌-排泄物,两者在线虫的致病性中可能有重要功能.

摘要： 我国林业入侵种每年严重发生与危害的面积约150万hm2，造成的经济、社会和生态损失达560亿元。其中松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)被列为我国第一大林业外来有害生物，造成的松材线虫病是林业上危害最重的森林病害。

摘要： 我国林业入侵种每年严重发生与危害的面积约150万hm2，造成的经济、社会和生态损失达560亿元。其中松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)被列为我国第一大林业外来有害生物，造成的松材线虫病是林业上危害最重的森林病害。

摘要： 我国林业入侵种每年严重发生与危害的面积约150万hm2，造成的经济、社会和生态损失达560亿元。其中松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)被列为我国第一大林业外来有害生物，造成的松材线虫病是林业上危害最重的森林病害。

摘要： 我国林业入侵种每年严重发生与危害的面积约150万hm2，造成的经济、社会和生态损失达560亿元。其中松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)被列为我国第一大林业外来有害生物，造成的松材线虫病是林业上危害最重的森林病害。

摘要： 本发明提供一种不从来自松属等树木的木片分离松材线虫而提取松材线虫的DNA并检出的方法。该方法包括：从收集的含有松材线虫的木片提取松材线虫的DNA的方法；由与松材线虫的DNA的特定区域进行退火的引物组成的LAMP引物组；和使用该引物组，利用LAMP法进行DNA的扩增而检出的从木片中检出松材线虫的方法。

摘要： 本发明涉及包含阿拉酸式苯‑S‑甲基作为有效成分的松材线虫病防治用组合物及利用其的松材线虫防治方法，在体外确认了本发明的阿拉酸式苯‑S‑甲基的防治效果起因于诱导抗性。通常，由于诱导抗性以少量有效并作为在植物体内表达基因的机制显示药效，因此对人体无害且不诱发环境污染。因此，能够开发松材线虫病的环保药剂，能够提高开发利用其的新概念松材线虫病防治剂的可能性。并且，在将现有的为了防治松材线虫病而使用的杀线虫制剂的树干注入方法转换为诱导抗性制剂的土壤浇灌或叶面喷洒方法的情况下，具有能够以低廉费用进行有效防治并扩大松材线虫病防治剂的喷洒适用范围的优点。

摘要： 本发明适用于线虫病防治领域，本发明提供了一种利用美国松材线虫体表细菌防治松材线虫病的方法。该方法包括：把美国细菌悬浮液喷洒到林间，5月份喷雾一次，连续2年，共2次喷雾；在两三年内美国细菌替代松材线虫体表的致病菌，以控制我国林间松材线虫病的流行。本发明利用松材线虫体表细菌生态位的替换，利用从美国松材线虫体壁上分离和筛选的细菌菌株进行生物防治。该方法是把生防细菌喷洒到林间，因为该细菌具有致病力低，繁殖和替代能力强等特点，可快速替代我国松林内松材线虫体表的强致病细菌，使松材线虫失去致病能力，从而达到控制松材线虫病流行的目的。该方法具有简单易行，易于推广应用，成本较低，效果好，作用彻底等优点。

摘要： 本发明涉及一种松材线虫杀虫剂及其在松材线虫病防治中的应用。目前还没有一种结构稳定，使用方便，防治效果显著的松材线虫杀虫剂及其在松材线虫病防治中的应用。本发明松材线虫杀虫剂的特点在于：它由重量份数为1-3份的香榧酯、10-20份的新枞酸和67-89份的有机溶剂组成。本发明的松材线虫杀虫剂在松材线虫病防治中的应用，其特征在于：将所述松材线虫杀虫剂置于含松材线虫的松树中，所述香榧酯用量为5-15ul/m

摘要： 本发明属于植物病原菌检测领域，公开了一种基于SSR标记筛选出的对松材线虫特异性及灵敏度好的引物及其用途，并建立了检测松树病株中松材线虫的PCR方法。本发明提供的引物和检测方法可为松材线虫的检疫检验和病害诊断提供稳定有效的检测手段，对降低松材线虫病造成的林业损失具有积极作用。

摘要： 本发明提供一种不从来自松属等树木的木片分离松材线虫而提取松材线虫的DNA并检出的方法。该方法包括：从收集的含有松材线虫的木片提取松材线虫的DNA的方法；由与松材线虫的DNA的特定区域进行退火的引物组成的LAMP引物组；和使用该引物组，利用LAMP法进行DNA的扩增而检出的从木片中检出松材线虫的方法。

摘要： 本发明公开了一种利用美国松材线虫体表细菌防治松材线虫病的方法，包括以下步骤：分离线虫和细菌：采用贝尔曼漏斗法分离供试木块中的线虫，采用稀释分离法分离线虫体表的细菌；制备细菌悬浮液；制备细菌无细胞培养液；施用细菌无细胞滤液：根据松树胸径大小施用细菌无细胞滤液，所述细菌无细胞滤液的使用频率为2年/次。本发明所述的一种利用美国松材线虫体表细菌防治松材线虫病的方法，通过松树胸径的大小确定施药量，利用松材线虫体表细菌生态位的替换，有效降低松树患病率，提高松树存活率，延长其防治周期，打一次药剂可保2～3年，且本发明方法操作简单，成本低，利用本发明的方法治疗松树，松树成活率达到了99％。

摘要： 本发明涉及包含阿拉酸式苯‑S‑甲基作为有效成分的松材线虫病防治用组合物及利用其的松材线虫防治方法，在体外确认了本发明的阿拉酸式苯‑S‑甲基的防治效果起因于诱导抗性。通常，由于诱导抗性以少量有效并作为在植物体内表达基因的机制显示药效，因此对人体无害且不诱发环境污染。因此，能够开发松材线虫病的环保药剂，能够提高开发利用其的新概念松材线虫病防治剂的可能性。并且，在将现有的为了防治松材线虫病而使用的杀线虫制剂的树干注入方法转换为诱导抗性制剂的土壤浇灌或叶面喷洒方法的情况下，具有能够以低廉费用进行有效防治并扩大松材线虫病防治剂的喷洒适用范围的优点。

摘要： 本发明涉及一种松材线虫杀虫剂及其在松材线虫病防治中的应用。目前还没有一种结构稳定，使用方便，防治效果显著的松材线虫杀虫剂及其在松材线虫病防治中的应用。本发明松材线虫杀虫剂的特点在于：它由重量份数为1-3份的香榧酯、10-20份的新枞酸和67-89份的有机溶剂组成。本发明的松材线虫杀虫剂在松材线虫病防治中的应用，其特征在于：将所述松材线虫杀虫剂置于含松材线虫的松树中，所述香榧酯用量为5-15μl/m

摘要： 本发明公开了一种松材或拟松材线虫的荧光定量PCR检测引物、试剂盒及方法，其中，松材线虫的荧光定量PCR检测引物，包括PCR扩增引物一；所述PCR扩增引物一包括PCR扩增上游引物一，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示(5’‑GTTCCGCCTACTGATGGTTC‑3’)，以及PCR扩增下游引物一，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示(5’‑CGGGCTTTTCAATCCTACGC‑3’)；拟松材线虫的荧光定量PCR检测引物，包括PCR扩增引物二；所述PCR扩增引物二包括PCR扩增上游引物二，其核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示(5’‑TTCTACGCACTGTTTGTCCG‑3’)，以及PCR扩增下游引物二，其核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示(5’‑TTCACGACGAAGCTCAACAA‑3’)。本发明具有良好的DNA提取效果，操作简单、耗时短(1小时内)，结果准确可靠，最低可检出单条线虫，具有灵敏度高和特异性强的特点。