抗凝活性

摘要： 目的:分离中华抱茎蓼抗凝活性部位单体,研究单体化合物抗凝血作用及对血小板聚集的影响。方法:通过正相硅胶柱、正相滴柱、高效液相色谱法等对中华抱茎蓼乙酸乙酯部位浸膏分离,首次从该药中得到—(-)-Afzelechin(1)即(-)-阿夫儿茶精,(+)-Afzelechin(2)即(+)-阿夫儿茶精、urticol(3)即2,3-顺式-2-羟基-甲基-3[双(4-羟基-3-甲氧基苯基)甲基]丁内酯。以二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集,采用比浊法测定血小板聚集率,基于凝固法原理测定凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)。结果:化合物1、化合物2能显著延长兔血浆APTT、TT,能显著抑制由ADP诱导的兔血小板聚集。结论:(-)-Afzelechin(1)、(+)-Afzelechin(2)具有一定抗凝活性、抑制血小板聚集作用,抗凝活性主要影响内源性凝血系统,对外源性凝血系统影响较弱。

摘要： 目的 对绿藻多糖SHW及其低分子量片段的结构及抗凝活性进行研究.方法 通过热水提取、强阴离子交换色谱和凝胶渗透色谱,从绿藻硬毛藻中提取分离得到硫酸多糖SHW;通过可控酸解方法制备SHW低分子量片段;采用高效凝胶渗透色谱、高效液相色谱、红外光谱及甲基化方法对多糖结构进行表征;通过活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间研究多糖SHW及其低分子量片段体外抗凝血活性.结果 多糖SHW及其低分子量片段主要由阿拉伯糖组成,含有少量半乳糖和氨基葡萄糖;糖链中阿拉伯糖主要以→4)-Arap-(1→和→3,4)Arap-(1→的形式存在,半乳糖以→4)-Ga1p-(1→形式存在,硫酸根主要位于→4)-Arap-(1→的C-3位.SHW及其低分子量片段A1～A6的分子量分别为492、200、170、100、26、14和10 kDa.SHW具有较高的抗凝血活性,且其抗凝活性随着其分子量的减少而降低.结论 海藻多糖SHW是1种具有抗凝活性的新颖硫酸多糖,其抗凝活性与分子量密切相关.

摘要： 为研究蚂蟥各部位的抗凝活性,分别采用生理盐水提取法和仿生提取法提取蚂蟥内脏、肌肉、吊干品中的抗凝活性成分,以凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、抗凝血酶活性为指标进行抗凝测定.对比发现,采用生理盐水提取时,内脏的TT和APTT两种指标结果均大于肌肉和吊干品,而三者间的PT指标和抗凝血酶活性实验结果均显示没有显著性差异.采用仿生提取时,在TT指标测定和抗凝血酶活性实验中,内脏的抗凝活性低于肌肉和吊干品,在APTT指标测定中,内脏与肌肉和吊干品相比,具有较强的抗凝活性,在PT指标测定中,各部位抗凝活性没有显著性差异.仿生提取法由于模拟蚂蟥口服后在体内消化过程,因此较生理盐水提取更具有科学性.由此得出蚂蟥各部位针对不同的凝血途径,其抗凝活性具有一定的差异,抗凝物质基础较为分散.

摘要： 目的 利用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法对僵蚕胃蛋白酶提取液的有效抗凝成分进行结构分析.方法 采用Hola C18(2.1 mm×100 mm,2.7μm)色谱柱,以0.05％甲酸水溶液-0.05％甲酸乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,高效液相色谱-串联质谱法正离子模式分析,初步探究抗凝活性成分的相对分子量和氨基酸组成.结果 僵蚕经胃蛋白酶解得到相对分子量500～1000的活性肽,且多肽为低于10个氨基酸组成的低聚肽.结论 僵蚕蛋白类组分通过酶解为活性低聚肽发挥抗凝作用,胃蛋白酶提取法更具科学性.

摘要： 目的利用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法对僵蚕胃蛋白酶提取液的有效抗凝成分进行结构分析.方法采用Hola C18(2.1 mm×100 mm,2.7μm)色谱柱,以0.05%甲酸水溶液-0.05%甲酸乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,高效液相色谱-串联质谱法正离子模式分析,初步探究抗凝活性成分的相对分子量和氨基酸组成.结果僵蚕经胃蛋白酶解得到相对分子量500~1000的活性肽,且多肽为低于10个氨基酸组成的低聚肽.结论僵蚕蛋白类组分通过酶解为活性低聚肽发挥抗凝作用,胃蛋白酶提取法更具科学性.

摘要： 新蛭素(EH)具有很好的抗凝血效果,但由于半衰期短限制了其在临床上的推广和应用.为延长EH的半衰期,制备人IgG-Fc和EH的融合蛋白,并对其活性和药代动力学进行初步研究.将合成的Fc-EH和Fc-L-EH融合基因克隆至表达载体pcDNAHC上,再将重组表达载体转染CHO细胞.蛋白A亲和柱纯化融合蛋白,用SDS-PAGE和Western Blot鉴定蛋白表达情况,质谱法检测蛋白的分子质量和C端序列,体外凝块法和大鼠颈静脉血栓模型分别验证融合蛋白的体外抗凝活性和体内抗栓效果,应用化学发光免疫法检测融合蛋白半衰期.结果表明,成功构建了pcDNAHC-Fc-EH和pcDNAHC-Fc-L-EH两个重组表达载体,融合蛋白Fc-EH和Fc-L-EH分子质量分别为68476,u和70542,u,蛋白的C端序列正确,Fc-EH和Fc-L-EH活性分别为256,ATU/mg和64,ATU/mg.大鼠颈静脉血栓实验表明,Fc-EH具有抗血栓作用,体内消除半衰期为39.4,h.融合蛋白Fc-EH能延长EH体内半衰期,为融合蛋白的进一步研究奠定了基础.

摘要： 应用凝血酶滴定法,比较不同提取方法的提取效率和不同相对分子质量的超滤膜对菲牛蛭抗凝血酶活性成分的分离作用,并用SDS-PAGE电泳测定分离得到抗凝活性成分的相对分子质量.结果 表明:盐提取法更优于水提法、水提醇沉法和丙酮法;用盐提法对菲牛蛭头部提取的抗凝成分活性达1 811.11U·g-1,选择10×103和30×103的超滤膜进行再次超滤得抗凝成分相对分子质量约为15.96×103.

摘要： 目的:采用溶剂萃取和凝胶柱色谱法对土鳖虫胰酶解物进行分离纯化，初步确定其抗凝活性部位及化学成分组成。rn 方法:应用胰酶酶解法制备土鳖虫胰酶酶解物，以APTT 凝血时间为指标，采用溶剂萃取法，获得抗凝活性部位IV，经凝胶柱色谱法对其进行进一步分离纯化获得胰酶酶解纯化物，采用考马斯亮蓝法对其进行定量，通过MALDI-TOF-MS 法检测分离部分的分子量分布范围。rn 结果:土鳖虫胰酶酶解物部位IV 有较强的抗凝活性，其抗凝活性强度与浓度相关；部位IV 经Sephadex G-25 纯化后考马斯亮蓝法测得其蛋白含量为 5.5%；进一步用Sephadex G-10 脱盐的纯化物，采用MALDI-TOF-MS 检测确定为分子量在 850～910Da 间的3 组多肽混合物。rn 结论:体外抗凝实验表明，凝胶柱色谱法分离纯化土鳖虫胰酶酶解物方法可行，抗凝活性组分为小于1000Da的小分子肽类。

摘要： 目的：对重组水蛭素-2(rHV2)鼻腔壳聚糖(CS)黏附纳米粒及其冻干粉进行药代动力学和抗凝活性评价。方法：采用呈色肽比色法检测rHV2血药浓度：以正常麻醉大鼠为模型，测定经鼻腔给予rHV2生理盐水溶液、rHV2纳米粒溶液及其纳米粒冻干粉复溶液的药-时曲线，计算药代动力学参数及与rHV2生理盐水溶液皮下注射给药的相对生物利用度：同时以部分凝血活酶时间(APTT)为指标比较它们的抗凝活性。结果：rHV2纳米粒比其生理盐水溶液鼻腔给药的相对生物利用度提高了8．99倍，rHV2纳米粒冻干粉复溶液也较其生理盐水溶液鼻腔给药的相对生物利用度提高了8．48倍。rHV2纳米粒及其冻干粉鼻腔给药后，均表现出显著的抗凝血活性，而rHV2生理盐水鼻腔给药则基本无效。结论：制备的rHV2鼻腔壳聚糖黏附纳米粒制剂具有较高的生物利用度，制成冻干粉后，仍保持较高的生物利用度。由于rHV2冻干粉制剂稳定性更高，有望成为rHV2经鼻腔给药的有效制剂。

摘要： 目的:比较水蛭不同提取工艺抗凝作用，初步研究水蛭酶解产物的化学成分组成，为水蛭进一步开发提供实验依据。方法:以活化部分凝血活酶时间(APTT)实验及纤维蛋白平板实验等抗凝活性为指标，评价水蛭不同提取工艺的差别；将水蛭胃蛋白酶水解物经Sephadex G-100凝胶色谱分离纯化，用MALDI-TOF-MS法对其组成进行分析。结果:水蛭仿生酶解得到的胃蛋白酶水解物(未调pH)及胃蛋白酶水解物(调pH4～5)较之水煎和醇提工艺提取物可使大鼠APTT显著延长，纤维蛋白平板实验呈明显的溶解圈。SephadexG-100凝胶柱色谱分离纯化得到两个混合多肽组分，经MALDL-TOF-MS检测其相对分子质量范围在700～3 200之间。结论:水蛭酶法提取物的体外抗凝与溶栓活性强于其他几种提取方法；水蛭经胃蛋白酶水解后已经形成寡肽。

摘要： 目的：表达具有生物活性的重组人蛋白C及其突变体。rn 方法：利用脂质体转染法，将所构建的真核表达载体pIRES/hPC和pIRES/mhPC分别转染人胚肾293细胞，通过C418抗性筛选，获得抗性细胞，利用有限稀释法挑选抗性细胞的单克隆，分别提取细胞的基因组DNA及总RNA，应用PCR及RT-PCR检测目的基因的整合及转录表达情况。分别收集不同细胞克隆的表达上清，样品浓缩后进行SDS-PAGE及western Blot检测，并以活化的部分凝血活酶时间测定法(actirated partial trombin time，APTT)测定表达产物的抗凝活性。rn 结果：对获得的5株HEK293-hPC细胞和5株HEK293-mhPC细胞进行鉴定，SDS-PAGE显示相对分子量与血浆人蛋白C相近，Western-Blot检测结果为阳性，经APTT法测定表达产物的抗凝活性，但是重组人蛋白C经活化后其抗凝活性低于血浆人蛋白C，而重组人蛋白C突变体表达后无需活化即具有抗凝活性，活性与重组人蛋白C相近。rn 结论：成功表达了具有生物活性的重组人蛋白C及其突变体，且重组蛋白C突变体表达后无需活化即具有抗凝活性。

摘要： 目的: 制备β-1,3/1,6-葡聚糖硫酸酯并进行生物活性研究.rn 方法: 以具有β-1,3/1,6-葡聚糖结构的水溶性灰树花多糖GF6F2为原料,以三氧化硫三甲胺盐(SO3·Me3N)为酯化试剂,合成了该多糖硫酸酯衍生物SGF6F2.rn 结果: 所得产物酯化度为0.8,相对分子量为210 kDa.体外实验结果表明SGF6F2具有较好的抗凝活性及Src酪氨酸激酶抑制活性.rn 结论: 灰树花多糖硫酸酯不仅具有一定的抗凝血活性,而且显示良好的抑制Sre活性,为该糖类药物的开发提供了有用数据.

摘要： 硫酸化的糖胺聚糖(glycosaminoglycan)是自然界中最为丰富的非哺乳类硫酸化多糖.从猪脏器上获得的肝素即是这糖胺聚糖家族中一种异质硫酸化多糖.它是一个已用于临床的重要的预防和治疗血栓性疾病的硫酸化糖胺聚糖.抗凝活性是硫酸化多糖中研究最多的性质.硫酸化基团在肝素抗凝活性中发挥了关键作用.然而,其药代学与生物物理学上的缺陷限制了它的临床应用.因而,需要借助肝素的启示来发展新的抗凝剂、抗血栓剂.海洋生物提供了硫酸化多糖的丰富资源.本文研究海洋硫酸化多糖来源的多样性，硫酸化对海洋多糖抗凝、抗血栓活性有重要影响。

摘要： 目的:重组双功能水蛭素(RGD-hirudin)是在野生型水蛭素分子的合理部位融入了Arg-Gly-Asp(RGD)序列融合在野生型水蛭素的合理部位,具有抗凝血酶、抗血小板聚集的双重功能.但是RGD-Hirudin是一种蛋白质,只能通过静脉注射给药,临床应用范围有限.以RGD-hirudin序列为基础,保留其C末端和N末端的功能氨基酸残基,利用分子模拟和同源建模技术设计具有抗凝活性的短肽(Direct Thrombin Inhibitor Peptide,DTIP),以利于皮下用药. 方法:利用同源建模和分子模拟,以RGD-hirudin的序列为基础,保留其功能氨基酸残基,借助分子模拟软件设计多肽类似物；利用毕赤酵母表达DTIP；经纯化后获得目的蛋白；利用毕赤酵母表达DTIP；经纯化后获得目的蛋白；凝血酶滴定法测定DTIP的抗凝活性；HPLC-MS测定DTIP的纯度、分子量,利用生物膜干涉技术测定凝血酶与DTIP的亲和力.在体外实验中,通过血栓弹力试验测定DTIP对血栓形成的抑制作用.大鼠皮下注射DTIP,比较给药前后部分凝血活酶时间(Activated Partial Thromboplastin Time,aPTT),凝血酶原时间(Prothrombin Time,PT),凝血酶时间(Thrombin Time,TT)和凝血时间(Clotting Time)的变化.分别构建尾静脉注射肾上腺素和胶原诱导的急性肺栓塞模型和FeCl3损伤诱导的肠系膜微动脉血栓模型,研究DTIP预防血栓形成的药效学作用. 结果:利用同源建模设计出一条具有抗凝活性的短肽DTIP；DTIP抗凝比活性为7000ATU/mg,与凝血酶的亲和力为0.9μMol/L.体内和体外试验结果均显示DTIP显著延长aPTT、PT和TT,体内试验中,用药后,CT也显著延长,但不会引起出血.在急性肺栓塞模型中,DTIP显著提高小鼠存活率；在肠系膜微动脉血栓模型中,DTIP抑制血栓的形成. 结论:DTIP具有抗凝活性,且可以通过皮下注射的方式预防血栓的形成,可作为一种潜在的皮下注射直接凝血酶抑制剂进行更加深入的研究.

摘要： 本发明提供了用于治疗或预防炎症和/或血液过度凝固的多肽，所述多肽包含源自调控血液凝固的天然存在的蛋白质的氨基酸序列、或其片段、变体、融合物或衍生物，或所述其片段、变体或衍生物的融合物，或由该氨基酸序列、或其片段、变体、融合物或衍生物，或所述其片段、变体或衍生物的融合物组成。本发明的相关方面提供了包含SEQ ID NOS:1至3的氨基酸序列、或其展现出抗炎活性的片段、变体、融合物或衍生物，或所述其片段、变体或衍生物的融合物或由SEQ ID NOS:1至3的氨基酸序列、或展现出抗炎活性的其片段、变体、融合物或衍生物，或所述其片段、变体或衍生物的融合物组成的分离的多肽，以及用于制备它们的分离的核酸分子、载体和宿主细胞。另外，提供了包含本发明的多肽的药物组合物，及使用其治疗和/或预防炎症和/或过度凝固的方法。

摘要： 本发明属于血液净化技术领域，公开了一种自抗凝双层活性炭血液灌流器及血液灌流方法，所述血液灌流器包括灌流器本体；所述灌流器本体内沿血液流动方向依次设有凝胶微球抗凝层和活性炭吸附层；所述血液灌流方法包括将血液依次通过凝胶微球抗凝层和活性炭吸附层的步骤。本发明避免了使用肝素来防止血液凝固和避免了采用聚合物包埋活性炭进行吸附的方式导致的活性炭容易脱落的问题。

摘要： 本发明提供了用于治疗或预防炎症和/或血液过度凝固的多肽，所述多肽包含源自调控血液凝固的天然存在的蛋白质的氨基酸序列、或其片段、变体、融合物或衍生物，或所述其片段、变体或衍生物的融合物，或由该氨基酸序列、或其片段、变体、融合物或衍生物，或所述其片段、变体或衍生物的融合物组成。本发明的相关方面提供了包含SEQ ID NOS:1至3的氨基酸序列、或其展现出抗炎活性的片段、变体、融合物或衍生物，或所述其片段、变体或衍生物的融合物或由SEQ ID NOS:1至3的氨基酸序列、或展现出抗炎活性的其片段、变体、融合物或衍生物，或所述其片段、变体或衍生物的融合物组成的分离的多肽，以及用于制备它们的分离的核酸分子、载体和宿主细胞。另外，提供了包含本发明的多肽的药物组合物，及使用其治疗和/或预防炎症和/或过度凝固的方法。

摘要： 本发明涉及分子快速检测技术领域，具体涉及一种抗凝药物活性检测系统及其检测方法。抗凝药物活性检测系统，其包括VPACT活化剂和VPACT启动剂；VPACT活化剂中含有磷脂、V因子活化剂、活化因子X、HEPES和甘露醇，VPACT启动剂中含有钙离子。本方案解决了抗凝药物活性检测系统受到凝血级联反应的初始步骤影响的技术问题，可以稳定而可靠地进行直接或间接靶向FXa和/或FIIa的抗凝血药的疗效监测，显示出广泛的适用范围。

摘要： 本发明描述了部分脱硫酸化糖胺聚糖衍生物，特别是肝素，更特别是式(I)化合物，其中U、R和R1基团具有在说明书中给出的含义。所述糖胺聚糖衍生物具有抗血管生成和类肝素酶抑制活性，并且没有抗凝活性。

摘要： 本发明描述了部分脱硫酸化的糖胺聚糖，特别是肝素，并且更特别的是式(I)的化合物，其中U、R和R1基团具有说明书中的定义。所述的糖胺聚糖衍生物具有抗血管生成活性并且没有抗凝活性。

摘要： 本申请描述了部分脱硫酸化糖胺聚糖衍生物，特别是肝素，更特别是式(I)化合物，其中U、R和R1基团具有在说明书中给出的含义。所述糖胺聚糖衍生物具有抗血管生成和类肝素酶抑制活性，并且没有抗凝活性。

摘要： 本发明描述了部分脱硫酸化的糖胺聚糖，特别是肝素，并且更特别的是式(I)的化合物，其中U、R和R1基团具有说明书中的定义。所述的糖胺聚糖衍生物具有抗血管生成活性并且没有抗凝活性。

摘要： 本发明提供一种快速检测菲牛蛭抗凝活性的方法，包括步骤1.取活体菲牛蛭，沥干水分，称重记录。步骤2.根据称重重量，加入菲牛蛭重量1.5倍的水。步骤3.用高速搅拌设备将加水的菲牛蛭活体进行匀浆处理。步骤4.用滴管吸取菲牛蛭浆1g，加入0.9％氯化钠溶液5ml，摇匀浸提30min，用滤纸过滤得滤液，进行滴定操作。步骤5.根据以上滴定检测的结果，将所得U值带入到推导的公式y＝10.287x‑13.211中，x值即为步骤4所得U值，计算后所得结果即为本批菲牛蛭原料制成冻干粉之后预期活性。本发明通过对活体样品加入一定比例的水进行匀浆，直接检测样品浆的活性，简化了流程，节约了时间。

摘要： 本发明公开了一种具有强效抗凝活性的海带多糖，所述海带多糖0.6MNaCl洗脱组分峰值分子量(Mp)为130±10kDa，易溶于水，不溶于有机溶剂，其中，岩藻糖含量为10％～40％、硫酸酯基含量为5％～30％，蛋白质含量1％，硫酸羧酸摩尔比为1.5～4.5。本发明采用上述的一种具有强效抗凝活性的海带多糖及其制备方法和应用，所得海带多糖具有强效的因子X酶抑制活性，与低分子量肝素活性相当，有望开发为新型的预防或治疗血栓性疾病的抗凝药物及功能性食品。