抑癌基因p53

摘要： 非综合征型唇腭裂(NSCL/P)是人类最普遍的颅颌面畸形之一,病因复杂,目前普遍认为其发病机制主要与遗传和环境因素有关。通过流行病学调查、全基因组关联研究和动物模型分析等,在NSCL/P易感基因座的鉴定方面取得了重大进展。围绕中国人群进行的NSCL/P遗传病因学最新研究显示,与NSCL/P发病率有重要关系的易感基因有RhoGTP酶激活蛋白29(Arhgap29)、抑癌基因p53、甲状腺转录因子2(TTF2或FOXE1)、成纤维细胞生长因子(FGF)、Sprouty基因(SPRY)、脊髓灰质炎病毒受体相关基因(PVRL)。研究表明,Arhgap29、p53、FOXE1、FGF、SPRY及PVRL基因与中国人群NSCL/P的发生有明显关联。同时,单核苷酸位点包括rs4791774(p53)、rs7043516(FOXE1)等在不同的人群中缺乏一致性,甚至会出现背离现象,这可能源于中国民族构成的复杂性以及NSCL/P的遗传异质性。固而有必要针对其遗传背景、作用机制开展进一步研究。

摘要： 目的探讨Polo样激酶1(PLK1)、P53在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学方法测定42例乳腺癌和16例乳腺良性增生组织的PLK1和P53的表达情况。结果PLK1和P53在乳腺癌中的阳性率分别为54.8%(23/42)、66.7%(28/42),在乳腺良性增生组织中均呈阴性表达。PLK1的表达受病理分期、组织学分级、ER、PR的影响(P0.05)。P53的表达受病理分期、肿瘤大小、淋巴结转移、ER的影响(P0.05)。结论PLK1可能在乳腺癌的发生和发展中发挥重要作用,有望成为乳腺癌治疗的新靶点。

摘要： 目的:观察灵龟八法艾灸对衰老大鼠肝脏中端粒长度和抑癌基因p53及视网膜母细胞瘤基因(Rb)表达的影响,探讨灵龟八法艾灸延缓衰老的作用机制.方法:将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、预防组和治疗组,每组10只.除正常组外,其余3组大鼠用腹腔注射D-半乳糖溶液(200 mg/kg)的方法制备衰老模型,每天1次,共42 d.预防组在造模期间同时给予灵龟八法按时开穴灸,造模结束后继续常规喂养28 d;治疗组在造模期间不做治疗,在造模结束的次日进行灵龟八法按时开穴灸,共28 d.用实时荧光定量PCR法检测肝脏中端粒相对长度及p53和Rb的mRNA表达;用酶联免疫吸附法检测肝脏中p53和Rb的蛋白含量.结果:与正常组比较,模型组大鼠端粒相对长度明显缩短(P0.05).结论:灵龟八法按时开穴灸能抑制衰老大鼠肝脏端粒长度的缩短,并下调p53、Rb的m RN A表达和蛋白含量,延缓细胞衰老的进程.

摘要： 目的 检测长链非编码RNA PCAT19在非小细胞肺癌中的表达水平及对非小细胞肺癌进展的影响.方法 收集2013年1月-2015年1月在我院接受手术治疗的NSCLC患者78例,男性52例,女性26例,年龄37～72岁,记录患者的一般临床资料;qRT-PCR检测非小细胞肺癌肿瘤组织、癌旁组织中PCAT19和p53 mRNA的相对表达水平,根据PCAT19 mRNA相对表达水平将患者分为PCAT19高表达组和低表达组;Kaplan-Meier法计算患者的生存率,log-rank比较PCAT19高表达组和低表达组患者的生存率;Pearson相关性分析NSCLC组织中PCAT19的表达水平与p53 mRNA的相关性;Western blot实验检测PCAT19和p53蛋白表达水平;细胞增殖实验检测各组细胞的增殖能力.结果 PCAT19在非小细胞肺癌组织中的平均表达水平显著高于癌旁组织(t=19.662,P0.05),在TNM分期和淋巴结转移之间有差异(P<0.05),且PCAT19高表达组患者的5年生存率显著低于PCAT19低表达组(HR=1.866,95％CI:1.020-3.414,P=0.043);非小细胞肺癌组织中PCAT19的表达水平与p53 mRNA水平呈负相关(r=-0.279,P=0.014);PCAT19组p53 mRNA水平1.51±0.18与对照组2.7±0.16相比显著降低(q=13.221,P<0.001),PCAT19-siRNA组p53 mRNA 3.28±0.16与对照组2.70±0.16相比显著增加(q=6.831,P=0.009);PCAT19组细胞的增殖能力强于对照组和阴性对照组,PCAT19-siRNA组细胞的增殖能力弱于对照组和阴性对照组,PCAT19+p53组与PCAT19组相比细胞的增殖能力减弱.结论 PCAT19通过负调控p53肿瘤抑制途径,促进非小细胞肺癌细胞的增殖,与肿瘤的分期和淋巴结转移有关.

摘要： 目的 分析甲状腺转录因子1(TTF-1)与细胞角蛋白7(CK7)及抑癌基因p53三项指标于非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达水平及与临床病理的相关性.方法 以我院68例NSCLC患者为研究对象,均施以TTF-1、CK7、抑癌基因p53检测.结果 Ⅲ～Ⅳ期患者TTTF-1、CK7与p53阳性表达率均明显高于I～Ⅱ期患者(P<0.05).NSCLC患者TTTF-1、CK7与p53阳性表达率和临床病理分期呈正相关(P<0.05).结论 NSCLC患者TTTF-1、CK7与p53表达水平与临床病理属于正相关,即NSCLC患者TTTF-1、CK7与p53表达水平越高,临床病理分期越高.

摘要： 目的 分析抑癌基因p53(p53)、肿瘤增殖抗原67(Ki-67)与子宫内膜癌(EC)患者临床病理特征的关系.方法 选取2015年5月至2019年4月于本院接受手术治疗的67例EC患者,收集切除病灶癌组织蜡块并作为观察组,同时选取同期在本院确诊为子宫内膜不典型增生患者50例的病灶组织蜡块作为对照组.采用免疫组化法测定p53、Ki-67.观察两组p53、Ki-67阳性率及与临床病理特征关系.结果 观察组p53、Ki-67阳性率为55.22％、71.64％,高于对照组的22.00％、40.00％,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ+Ⅳ期患者中p53阳性率为90.91％,高于Ⅰ+Ⅱ期的48.21％,G3组织分级患者中Ki-67阳性率为94.74％,高于G1、G2组织分级患者的53.85％、72.73％,差异有统计学意义(P<0.05).结论 EC患者中p53、Ki-67呈高表达,且与临床分期、组织分级临床病理特征有关,可通过观察p53、Ki-67指导临床诊断、治疗.

摘要： 细胞衰老是指细胞进入一种不可逆的增殖阻滞状态,被认为是一种有效的肿瘤抑制机制。很多研究表明,抑癌基因p53在诱导细胞衰老中起着关键作用,但其具体机制尚未完全清楚。最近,一项研究发现在肿瘤细胞中过表达p53可引起细胞衰老和线粒体形态及功能障碍,包括线粒体延伸、膜电位降低、呼吸速率降低和线粒体活性氧(ROS)水平升高;而线粒体选择性和非选择性抗氧化剂均能够通过降低ROS水平来改善由p53所引起的线粒体功能障碍和细胞衰老,但对线粒体延伸无影响。

摘要： 目的 研究抑癌基因p53对丙戊酸(VPA)所致乳腺癌细胞放射增敏性的影响及其与同源重组(HR)修复机制的关系.方法 用含PLKO.1或p53 shRNA慢病毒颗粒液感染乳腺癌MCF7细胞,建立p53表达下调的同源配对MCF7细胞系,即MCF7/野生型p53(MCF7/wtp53)和MCF7/缺欠型p53(MCF7/dp53)细胞;感染MCF7/(pDR-GFP)细胞,建立MCF7/pDR-GFP/wtp53和MCF7/pDR-GFP/dp53细胞;各分为细胞对照组、VPA组(VPA 0.5 mmol·L-1处理24 h)、电离辐射(IR,8 Gy)组和VPA+IR组(VPA 0.5 mmol·L-1预处理24 h后联用IR).通过Western印迹实验检测P53蛋白表达水平,彗星和免疫荧光实验分别检测细胞核拖尾尾距及磷酸化组蛋白(γH2AX)焦点细胞比率,细胞克隆形成实验检测克隆形成率,流式细胞术检测HR修复效率,免疫荧光实验检测含乳腺癌易感基因1(BRCA1)蛋白和重组酶51(Rad51)蛋白焦点细胞比率.结果 Western印迹结果显示,MCF7/wtp53细胞中存在P53蛋白表达,MCF7/dp53细胞中P53蛋白表达显著降低(P<0.05).彗星和免疫荧光结果显示,在MCF7/wtp53细胞中,与IR组相比,VPA+IR组细胞核拖尾尾距和含γH2AX焦点细胞百分率升高(P<0.05);在MCF7/dp53细胞中,与IR组相比,VPA+IR组细胞核拖尾尾距和含γH2AX焦点细胞百分率均升高(P<0.05),但仍低于MCF7/wtp53细胞VPA+IR组(P<0.05).细胞克隆形成结果显示,在MCF7/wtp53细胞中,VPA+IR组细胞存活率低于IR组(P<0.05);在MCF7/dp53细胞中,VPA+IR组细胞存活率虽低于IR组(P<0.05),但高于MCF7/wtp53细胞VPA+IR组(P<0.05).流式细胞术结果显示,在MCF7/pDR-GFP/wtp53细胞中,VPA组HR效率低于细胞对照组(P<0.05);在MCF7/pDR-GFP/dp53细胞中,VPA组HR效率低于细胞对照组(P<0.05),但仍高于MCF7/pDR-GFP/wtp53细胞VPA组(P<0.05).免疫荧光结果显示,在MCF7/wtp53细胞中,VPA+IR组含BRCA1和Rad51焦点细胞百分率均低于IR组(P<0.05);在MCF7/dp53细胞中,VPA+IR组含BRCA1和Rad51焦点细胞百分率均低于IR组(P<0.05),但仍高于MCF7/wtp53细胞VPA+IR组(P<0.05).结论 VPA对乳腺癌MCF7细胞具有放射增敏性;抑制p53表达可降低VPA的放射增敏作用,与BRCA1-Rad51介导的HR机制过度增强有关.

摘要： 本发明涉及转基因技术领域，具体涉及一种转人抑癌基因鸡的制备方法，主要采用Trizol法从早期结肠癌病人的外周血中提取的总RNA，经RT‑PCR扩增人抗癌基因的编码区；从鸡的肝脏组织提取基因组DNA，经PCR扩增MAR调控序列；扩增产物经限制性内切酶消化，DNA连接酶的连接后，转化入感受态大肠杆菌，构建重组真核表达载体pEGFP‑N1‑人抑癌基因和pEGFP‑N1‑人抑癌基因/MAR；然后通过脂质体介导法体外转染人的HepG2肝癌细胞系，最后结合胚盘显微注射法，将脂质体介导的重组真核表达载体pEGFP‑N1‑人抑癌基因/MAR注射到入孵12‑24h的种蛋X期胚盘不同区域，结合蛋壳膜+蛋清封口后继续孵化，记录每组孵化率，进而通过基因检测、荧光检测及外源蛋白检测转人抑癌基因鸡的外源基因整合情况。

摘要： 本发明公开了一种人抑癌基因PML突变型及其应用。本发明通过比较基因组学鉴定出一种鹿科突变型的人抑癌基因PML，所述人抑癌基因PML突变型如SEQ.ID.NO.2所示，编码的人PML鹿科突变型蛋白的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。通过对鹿科突变型PML基因进行癌细胞生长抑制效果的检验分析，确定该鹿科突变型PML可以抑制多种癌细胞的生长，具有比人PML基因更强的抑癌效果；该鹿科突变型的抑癌基因PML可应用于癌症的预防和治疗。

摘要： 本发明涉及转基因技术领域，具体涉及一种转人抑癌基因鸡的制备方法，主要采用Trizol法从早期结肠癌病人的外周血中提取的总RNA，经RT‑PCR扩增人抗癌基因的编码区；从鸡的肝脏组织提取基因组DNA，经PCR扩增MAR调控序列；扩增产物经限制性内切酶消化，DNA连接酶的连接后，转化入感受态大肠杆菌，构建重组真核表达载体pEGFP‑N1‑人抑癌基因和pEGFP‑N1‑人抑癌基因/MAR；然后通过脂质体介导法体外转染人的HepG2肝癌细胞系，最后结合胚盘显微注射法，将脂质体介导的重组真核表达载体pEGFP‑N1‑人抑癌基因/MAR注射到入孵12‑24h的种蛋X期胚盘不同区域，结合蛋壳膜+蛋清封口后继续孵化，记录每组孵化率，进而通过基因检测、荧光检测及外源蛋白检测转人抑癌基因鸡的外源基因整合情况。

摘要： 本发明提供了一种从全基因组中筛选肝癌抑癌基因的方法及其应用，所述方法包括如下步骤：(1)制备CRISPR‑Cas9慢病毒和sgRNA文库慢病毒；(2)使用CRISPR‑Cas9慢病毒转染永生化肝细胞构建CRISPR‑Cas9稳定株；(3)使用sgRNA文库慢病毒转染所述CRISPR‑Cas9稳定株，得到sgRNA文库慢病毒感染的永生化肝细胞；(4)将所述sgRNA文库慢病毒感染的永生化肝细胞移植到免疫缺陷的小鼠体内，通过所述sgRNA文库慢病毒感染的永生化肝细胞筛选肝癌抑癌基因。通过所述方法筛选到的肝癌抑癌基因在肝癌药物筛选和/或药效评价中的具有重要应用前景。

摘要： 本发明涉及调控抑癌基因p53的特异基因及其用途。本发明发现了一种与抑癌基因p53相关的一个新的具有激酶活性的基因。经实验证实，该基因及其编码的蛋白质在参与调控抑癌基因p53活性和制备防治肿瘤药物、诊断试剂等方面，具有广泛的用途。

摘要： 本发明提供一种抑癌基因甲基化联合检测试剂盒，属于试剂盒技术领域，包括盒体和试剂瓶，所述试剂瓶上设置射频标签，所述射频标签内存储试剂瓶的第一信息，所述试剂盒的盒盖内侧设置所述射频标签的读卡器和控制芯片，所述读卡器与控制芯片连接，所述控制芯片用于通过所述读卡器读取射频标签上的第一信息，确定试剂瓶存放的试剂盒是否正确。本发明通过射频技术验证试剂瓶和试剂盒的配对关系，确定试剂瓶是否在规定的试剂盒内；通过蓝牙天线和蓝牙模块对试剂盒在冰柜中的位置进行定位，确定试剂盒是否保存在适宜温度的冰柜内；避免试剂瓶在保存过程中成分变质或分解。

摘要： 本发明通过对胰腺癌患者血浆ctDNA进行转化，预测基因CpG岛，针对5个基因设计多组不同的特异性引物，利用带有Index序列的引物对ctDNA进行多重PCR扩增建立文库等手段，检测ctDNA 5个抑癌基因中CpG位点的甲基化信息，最终筛选得到可用于胰腺癌检测的相关基因及其ctDNA甲基化的引物组合物，从而建立了NGS定量检测胰腺癌ctDNA抑癌基因甲基化的方法，所述方法使用的引物组合物筛选抑癌基因异常高甲基化位点，高于正常值则判断为胰腺癌。方法简便，准确，可应用于胰腺癌的诊断、鉴别诊断和疗效评估，具有良好的临床应用前景。

摘要： 本发明提供一种结直肠癌抑癌基因，为CPEB1基因。本发明还提供一种结直肠癌抑癌基因的启动子区高DNA甲基化的验证方法，通过DNA甲基化靶向测序技术检测甲基化程度、荧光定量PCR技术检测基因mRNA表达、Western印迹技术检测蛋白水平、流式细胞术检测细胞凋亡情况、CCK‑8实验和细胞克隆形成实验评估细胞增殖克隆能力、损伤修复实验评估细胞迁移能力、Transwell小室实验评估细胞侵袭能力、裸鼠成瘤实验模拟CPEB1基因在体内的致瘤能力等实验，证明CPEB1基因是一新的结直肠癌抑癌基因，且其启动子区存在高DNA甲基化位点，基因表达呈低表达模式。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体是一种结直肠癌抑癌基因甲基化高通量检测试剂盒及其应用。试剂盒包括序列如SEQ ID NO：1～20所示的甲基化特异性多重PCR扩增引物和序列如SEQ ID NO：21～41所示的标签引物。本发明能够一次性捕获一个或多个基因的目标甲基化检测区域，获得样本一个或多个基因目标区域甲基化突变序列信息，能够准确有效分析目标区域甲基化状态，使得对目标基因区域进行高通量、高灵敏度、高准确度的甲基化检测成为现实，该方法还具有成本低、操作简便快捷等技术特点，仅通过两轮PCR就可以完成样本文库构建。

摘要： 本发明公开了鼻咽癌的诊治标志物，所述标志物为VILL，实验证明，VILL及其蛋白在鼻咽癌组织中表达显著下调，提示可以将VILL应用于鼻咽癌的诊断或治疗中；进一步，体外细胞实验证实VILL与鼻咽癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭有关，提示VILL可以作为药物靶标应用于鼻咽癌的临床治疗。本发明还公开了与VILL基因相互作用蛋白EIF3J，发现EIF3J与VILL呈正相关，提示可通过EIF3J提高VILL基因的表达水平，从达到治疗鼻咽癌或鼻咽癌转移的目的，提供了一种新的治疗思路。