成骨生长肽

摘要： 目的检测成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)与低氧环境对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成脂肪分化的影响。方法实验随机分为4组:A组(常氧组)、B组(1%O_(2)组)、C组(常氧+10^(-9)mol/L OGP组)、D组(1%O_(2)+10^(-9)mol/L OGP组)。ELISA法定量检测低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)蛋白的表达;14 d后,油红O染色观察BMSCs脂滴形成情况;实时荧光定量PCR和Western blotting检测成脂相关基因PPAR-γ和C/EBPα的mRNA和蛋白表达水平。结果与A组及C组相比,B组与D组HIF-1α表达明显上调(P<0.01);与A组相比,B组、C组、D组脂滴生成及PPAR-γ和C/EBPα的mRNA和蛋白表达降低(P<0.01);与B组及C组相比,D组中脂滴生成及PPAR-γ和C/EBPα的信使RNA和蛋白表达下调(P<0.01)。结论OGP及1%低氧环境均能抑制BMSCs成脂分化,且二者抑制BMSCs成脂分化具有协同效应。

摘要： 目的 从体内外水平评价一种负载了成骨生长肽(OGP)的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纤维支架作为新型骨组织工程支架的可行性.方法 采用静电纺丝法制备支架,一共有4组.对照组:纯PLGA支架(不含OGP的PLGA支架);实验组:0.1％OGP@PLGA(电纺含有0.1％OGP的PLGA溶液制得的支架)、0.2％OGP@PLGA(电纺含有0.2％OGP的PLGA溶液制得的支架)、0.4％OGP@PLGA(电纺含有0.4％OGP的PLGA溶液制得的支架).通过扫描电子显微镜(SEM)观察支架的微观结构,将材料浸泡在PBS中观察支架中OGP的释放规律,CCK-8和活死细胞染色实验评估支架的体外生物相容性,ALP活性检测和ARS染色评估支架上大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)的体外成骨分化水平,在雄性SD大鼠上制备直径为5 mm大小的颅骨缺损模型,将支架植入8周后利用Micro-CT检测、HE染色和Masson染色分析缺损处的骨修复情况.结果 SEM结果显示,支架具有类细胞外基质(ECM)的纤维结构,负载的OGP能持续从支架内缓释长达1月以上,将细胞与支架共培养4、7 d后,负载高浓度OGP(OGP浓度大于2％)的PLGA支架细胞增殖率显著高于纯PLGA支架(P<0.01),ALP活性检测结果显示第14天时,在负载0.4％含量OGP的PLGA支架上rBMSCs的ALP活性最高(P<0.01).ARS染色结果显示,细胞14后在负载0.4％OGP的PLGA支架上分泌的钙化结节最多.Micro-CT扫描结果发现,负载0.4％OGP的PLGA组材料周围较其他两组有更多的新骨生成(P<0.01).此外组织学HE和Masson染色结果和以上结果类似.结论 负载OGP的静电纺丝PLGA支架有效模拟了体内细胞外基质,具有良好的生物相容性及促成骨分化能力,是一种具有潜在应用价值的新型骨组织工程支架.

摘要： 目的 研究成骨生长肽(OGP)对体外培养的来源于绝经后骨质疏松患者的骨髓间充质干细胞的成骨和成脂肪分化能力的影响,探讨OGP治疗绝经后骨质疏松症的作用机制.方法 分离培养绝经后骨质疏松患者的骨髓间充质干细胞(BMSCs),按照加入OGP浓度的不同分别分为A组(健康成人)、B组(患者)、C组(10-7 mol/L OGP)、D组(10-9 mol/L OGP)、E组(10-11 mol/L OGP),倒置相差显微镜观察各组细胞的生长情况和形态特征,MTT法测量细胞增殖率的变化,RT-PCR定量检测成骨标记物[碱性磷酸酶(ALP)、I型胶原(COL-1)、骨钙素(OC)]及成脂肪标记物[脂蛋白脂酶(LPL),脂肪细胞结合蛋白-2(AP-2),瘦素(Leptin)]及骨保护素(OPG)、可溶性细胞核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)的mRNA含量,Western blot定量检测成骨标记物、成脂肪标记物及OPG、RANKL的蛋白表达.结果 与A组比较,B组成骨标记物、OPG及RANKL mRNA和蛋白表达量较低(P＜0.05),成脂肪标记物mRNA和蛋白表达量较高(P＜0.05).与B组比较,加入不同浓度的OGP后,C、D、E组的成骨标记物、OPG及RANKL mRNA和蛋白表达量显著上升(P＜0.05),成脂肪标记物mRNA和蛋白表达量显著下降(P＜0.05);与C组相比,D、E两组成骨标记物、OPG及RANKL mRNA和蛋白表达量显著上升(P＜0.05),成脂肪标记物mRNA和蛋白表达量显著下降(P＜0.05),E组上述指标与D组及A组之间无显著性差异(P＞0.05).结论 相比较加入10-7、10-11 mol/L OGP,加入10-9mol/L OGP对绝经后骨质疏松患者的BMSCs的改善效果最佳,能够促进BMSCs增殖,向成骨方向分化,并抑制向成脂肪方向的分化,进而促进骨-脂肪平衡.

摘要： 目的 探讨低氧对成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)诱导的小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖与成骨分化的影响.方法 将第三代小鼠BMSCs随机分为四组:对照组(A组,常氧条件下培养);1％O2组(B组,1％O2条件下培养);OGP组(C组,常氧条件下添加OGP培养)、1％O2联合OGP组(D组,1％O2条件下添加OGP).分别于培养后1天、2天、3天、4天收集细胞,噻唑蓝(Methyhhiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色法观察BMSCs增殖能力;培养7、14天后收集细胞,可见光比色法检测细胞碱性磷酸酶活性(alkaline phosphatase,ALP);培养1天后收集细胞,ELISA法检测低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor,HIF-1α)表达,培养3、7天后收集细胞,实时荧光定量PCR检测RUNX2、Osterix表达.结果 MTT结果显示,与C组相比,在培养第2、3、4天D组能明显促进BMSCs增殖(P＜0.05).与C组相比,在培养第7、14天D组能明显上调ALP表达(P＜0.05).与C组相比,在培养第3、7天D组能明显上调RUNX2、Osterix信使RNA表达(P＜0.05).在培养后1天,A组及C组未能检测到HIF-1α蛋白,B组与D组HIF-1α表达明显增加(P＜0.001).结论 低氧明显增强了OGP促进BMSCs增殖及成骨分化的作用.

摘要： 成骨生长肽是具有促进成骨和刺激造血作用的多肽类生长因子,原肽由十四个氨基酸组成,碳端五肽是维持原肽全部活性的最短氨基酸序列.本文就成骨生长肽的生物学特征及构效关系进行综述.

摘要： 目的 探讨成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)对MC3T3-E1成骨细胞的增殖的影响及其机制.方法 常规培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,分为OGP高、中、低剂量组(1 ×10-8、1×10-10、1×10-12 mol/L)以及对照组,利用MTT法检测OGP作用24h、48 h以及72 h对MC3T3-E1成骨细胞增殖作用,利用免疫化学染色法检测成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白水平,ELISA法检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)含量.结果 在24h时,各剂量OGP对MC3T3-E1的增殖无影响;作用48、72 h,OGP 10-10 mol/L以及OGP 1 ×10-8 mol/L显著促进MC3T3-E1细胞增殖(P＜0.05),其中OGP 1×10-8mol/L 48 h促进MC3T3-E1细胞增殖作用最强.作用24 h,各组成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白IOD值差异均无统计学意义;作用48 h,OGP 1×10-8mol/L组细胞Ⅰ型胶原蛋白IOD值显著高于对照组(P＜0.05);作用72 h,OGP 1×10-10mol/L组以及OGP 1×10-8mol/L组细胞Ⅰ型胶原蛋白IOD值均显著高于对照组(P＜0.05).作用24h,各组成骨细胞OPN OD值差异均无统计学意义;作用48 h、72 h,OGP 1×10-1omol/L组以及OGP1 ×10-8mol/L组细胞OPNOD值显著高于对照组(P＜0.05).结论 OGP能够明显促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖,其可能的作用机制是增加成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达以及OPN的表达,且其作用与浓度密切相关,在1×10-8mol/L时,其促成骨细胞增殖作用最强.

摘要： 背景：通过双螺杆挤压技术能够使人参中的化学成分发生改变而产生新型的人参产品。 目的：分析新型人参加工产品双螺杆挤压人参对大鼠骨骼生长以及骨生物力学性能的影响。 方法：将32只SD大鼠，随机分为空白对照组和双螺杆挤压人参低、中、高剂量组，每组8只。分别灌胃蒸馏水和双螺杆挤压人参悬浊液（0.75，1.5，3 g/kg），连续灌胃3周。心脏采血后取股骨，测量股骨长度；利用三点弯曲生物力学实验测量股骨最大弯曲应力、弯曲弹性模量、弯曲能量等生物力学性能指标。检测血液中骨钙素和成骨生长肽浓度。 结果与结论：中剂量双螺杆挤压人参组大鼠股骨长度、骨钙素与成骨生长肽浓度明显大于对照组（P〈0.05），同时其骨生物力学性能各项指标也明显优于对照组。结果表明双螺杆挤压人参能够促进骨骼生长且同时提升骨生物力学性能，可能与其调节骨钙素及成骨生长肽的分泌量有关。

摘要： BACKGROUND:The twin-screw extrusion technology can alter the chemical composition of ginseng and then produce a new type of ginseng products. n OBJECTIVE:To investigate the effect of a new ginseng product, twin-screw extrusion ginseng, on the growth and biomechanics properties of the bone in rats and to discuss the possible biochemistry mechanism. n METHODS: Thirty Sprague-Dawley rats were randomly divided into control group, low-, middle-, and high-dose twin-screw extrusion ginseng groups, eight rats in each group. These rats were subjected to intragastric administration of ginseng suspension (0.75, 1.5, 3 g/kg) and distiled water for 3 weeks. After colecting the blood of heart, the femurs were taken to measure the length. Though the three-point bending test, the biomechanical properties such as the maximum bending stress, flexural modulus, bending energy of the femurs were measured. The concentration of osteocalcin and osteogenic growth peptide were tested. n RESULTS AND CONCLUSION:The bone length and concentration of osteocalcin and osteogenic growth peptide of rats in the middle-dose twin-screw extrusion ginseng group were significantly higher than those in the control group (P < 0.05). Meanwhile, the biomechanics properties of the bone in the middle-dose twin-screw extrusion ginseng group were also better than those in the control group (P < 0.05). Experimental results show that the twin-screw extrusion ginseng can promote the growth and biomechanics properties of the bone in rats, which may be relevant to the regulation of osteocalcin and osteognic growth peptide.%背景：通过双螺杆挤压技术能够使人参中的化学成分发生改变而产生新型的人参产品。n　　目的：分析新型人参加工产品双螺杆挤压人参对大鼠骨骼生长以及骨生物力学性能的影响。n　　方法：将32只SD大鼠，随机分为空白对照组和双螺杆挤压人参低、中、高剂量组，每组8只。分别灌胃蒸馏水和双螺杆挤压人参悬浊液(0.75，1.5，3 g/kg)，连续灌胃3周。心脏采血后取股骨，测量股骨长度；利用三点弯曲生物力学实验测量股骨最大弯曲应力、弯曲弹性模量、弯曲能量等生物力学性能指标。检测血液中骨钙素和成骨生长肽浓度。n　　结果与结论：中剂量双螺杆挤压人参组大鼠股骨长度、骨钙素与成骨生长肽浓度明显大于对照组(P<0.05)，同时其骨生物力学性能各项指标也明显优于对照组。结果表明双螺杆挤压人参能够促进骨骼生长且同时提升骨生物力学性能，可能与其调节骨钙素及成骨生长肽的分泌量有关。

摘要： 目的 研制成骨生长肽(OGP)鼻喷剂并考察其吸收特性.方法 采用大鼠鼻腔灌流模型,以成骨生长肽在大鼠鼻腔的下降量为指标,运用正交试验,筛选吸收促进剂;优化蛋白酶抑制剂及其剂量,考察并验证最佳处方及其稳定性.并采用扫描电镜观察经成骨生长肽鼻喷剂灌流4h后大鼠鼻黏膜纤毛形态的改变,进行局部安全性评价.结果 成骨生长肽鼻喷剂的最佳处方为合成骨生长肽0.2 mg·mL-1、枸橼酸5 mg· mL-1、羟丙基-β-环糊精10 mg·mL-1、聚山梨酯-80 30 mg·mL-1及杆菌肽锌5 mg·mL-的pH3邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液;该鼻喷剂对鼻黏膜刺激性较小.结论 成骨生长肽鼻喷剂在大鼠鼻腔具有良好的吸收、质量稳定.

摘要： 本文成功制备载有成骨生长肽的聚乳酸羟基乙酸复合生物活性玻璃的骨修复支架材料，支架材料具有良好的三维网络多孔结构，具有良好的细胞粘附性能，在骨组织再生医学修复材料研究中具有良好的前景。

摘要： 目的：探讨补肾活髓通络颗粒对非重型再生障碍性贫血(NSAA)血清成骨成生长肽表达水平(OGP)的影响.方法：采用酶联免疫吸附法(ELISA)对36例NSAA患者(观察组)治疗前及经补肾活髓通络颗粒治疗后血清OGP表达水平进行检测,并与18例健康人(对照组)相比较.结果：治疗前观察组血清OGP明显低于对照组(P＜0.05),治疗后明显高于治疗前,但仍低于对照组.结论：补肾活髓通络颗粒可以升高NSAA患者血清OGP表达水平;血清OGP表达水平增高可作为NSAA治疗有效的一项指标;血清OGP在NSAA中呈低表达，可通过影响造血微环境而影响造血干细胞的增殖和分化，参与NSAA的发生和发展。

摘要： 本发明公开了OGP对红系造血祖细胞的明显的促增殖作用，并对实验性再生障碍性贫血(EAA)有有效的治疗作用。本发明还提供了利用OGP在体外促进红系造血祖细胞生长的方法，将OGP或相关肽用于制备治疗再生障碍性贫血等疾病的药物组合物方面的用途。

摘要： 一种成骨生长肽碳端五肽的合成方法，由以下步骤组成：合成Fmoc-Tyr(tbu)-COOSu、Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-OH、Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-OH活化，依次合成Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-Phe-OH、Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-Phe-COOSu、Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-Phe-Gly-OH、Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-Phe-Gly-ONp、Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-Phe-Gly-Gly-OH、NH2-Tyr(tbu)-Gly-Phe-Gly-Gly-OH、NH2-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly-OH。

摘要： 成骨生长肽与降钙素基因相关肽融合蛋白及其编码基因，涉及一种融合蛋白及其编码基因。本发明的目的在于提供成骨生长肽与降钙素基因相关肽融合蛋白及其编码基因，以期获得一种能同时具有治疗骨质疏松症和心肌缺血双种作用的融合蛋白，两种蛋白之间作用互补且协同增效。融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明将成骨生长肽与降钙素基因相关肽融合，两者之间作用互补且协同增效，所得融合蛋白经实验证实具有很好的治疗骨质疏松和心肌缺血的作用。本发明的融合蛋白可由于制备预防和治疗骨质疏松及心肌缺血疾病的药物。

摘要： 产成骨生长肽与降钙素基因相关肽融合蛋白基因工程菌株及其构建方法，涉及一种基因工程菌株及其构建方法。本发明的目的在于提供一种产成骨生长肽与降钙素基因相关肽融合蛋白基因工程菌株及其构建方法，该菌株可以生产OGP-CGRP融合蛋白，该融合蛋白具有治疗骨质疏松症和心肌缺血双重作用。该基因工程菌株含有融合蛋白OGP/CGRP基因。方法：一、融合蛋白OGP/CGRP基因的合成；二、重组表达载体的构建；三、将重组表达载体转化到大肠杆菌中，随机挑取转化菌，提取质粒DNA，用KpnⅠ单酶切，进行基因测序，测序结果正确的即为阳性重组菌。本发明由于生产具有治疗骨质疏松症和心肌缺血双重作用的OGP-CGRP融合蛋白。

摘要： 本发明提供了一种成骨生长肽的纯化方法，包括：粗纯：将成骨生长肽粗品水溶液上样至反相聚合物柱，用流动相进行梯度洗脱，收集洗脱液并减压浓缩得到浓缩液；和转盐：将浓缩液上样至弱阴离子交换柱，用醋酸洗脱，收集醋酸型成骨生长肽溶液，减压浓缩与冷冻干燥得到成骨生长肽。本发明的方法成本低，得到的成骨生长肽纯度高，适合产业化的纯化成骨生长肽。

摘要： 本发明提供一种成骨生长肽碳端五肽衍生物及其制备方法和应用。该成骨生长肽碳端五肽衍生物包括：H‑Dopa‑Gly‑Phe‑Gly‑Gly‑OH，H‑D‑Tyr‑Pro‑D‑Phe‑Gly‑Gly‑OH，Cyclo(Gly‑Gly‑D‑Phe‑Pro‑D‑Tyr)，Cyclo(Tyr‑Gly‑D‑Phe‑Gly‑Gly)，Cyclo(D‑Tyr‑Gly‑Phe‑Gly‑Gly)，Cyclo(Gly‑Gly‑D‑Phe‑Gly‑Tyr)，Cyclo(Gly‑Gly‑Phe‑Gly‑D‑Tyr)中的一种或多种。其在结构上保留了原有五肽的药效基团Tyr10和Phe12，具备改善代谢稳定性的结构特点。

摘要： 一种成骨生长肽碳端五肽的合成方法，由以下步骤组成：合成Fmoc-Tyr(tbu)-COOSu、Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-OH、Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-OH活化，依次合成Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-Phe-OH、Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-Phe-COOSu、Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-Phe-Gly-OH、Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-Phe-Gly-ONp、Fmoc-Tyr(tbu)-Gly-Phe-Gly-Gly-OH、NH2-Tyr(tbu)-Gly-Phe-Gly-Gly-OH、NH2-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly-OH。

摘要： 产成骨生长肽与降钙素基因相关肽融合蛋白基因工程菌株及其构建方法，涉及一种基因工程菌株及其构建方法。本发明的目的在于提供一种产成骨生长肽与降钙素基因相关肽融合蛋白基因工程菌株及其构建方法，该菌株可以生产OGP-CGRP融合蛋白，该融合蛋白具有治疗骨质疏松症和心肌缺血双重作用。该基因工程菌株含有融合蛋白OGP/CGRP基因。方法：一、融合蛋白OGP/CGRP基因的合成；二、重组表达载体的构建；三、将重组表达载体转化到大肠杆菌中，随机挑取转化菌，提取质粒DNA，用KpnⅠ单酶切，进行基因测序，测序结果正确的即为阳性重组菌。本发明由于生产具有治疗骨质疏松症和心肌缺血双重作用的OGP-CGRP融合蛋白。

摘要： 成骨生长肽与降钙素基因相关肽融合蛋白及其编码基因，涉及一种融合蛋白及其编码基因。本发明的目的在于提供成骨生长肽与降钙素基因相关肽融合蛋白及其编码基因，以期获得一种能同时具有治疗骨质疏松症和心肌缺血双种作用的融合蛋白，两种蛋白之间作用互补且协同增效。融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。其编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明将成骨生长肽与降钙素基因相关肽融合，两者之间作用互补且协同增效，所得融合蛋白经实验证实具有很好的治疗骨质疏松和心肌缺血的作用。本发明的融合蛋白可由于制备预防和治疗骨质疏松及心肌缺血疾病的药物。

摘要： 本发明提供了一种成骨生长肽的纯化方法，包括：粗纯：将成骨生长肽粗品水溶液上样至反相聚合物柱，用流动相进行梯度洗脱，收集洗脱液并减压浓缩得到浓缩液；和转盐：将浓缩液上样至弱阴离子交换柱，用醋酸洗脱，收集醋酸型成骨生长肽溶液，减压浓缩与冷冻干燥得到成骨生长肽。本发明的方法成本低，得到的成骨生长肽纯度高，适合产业化的纯化成骨生长肽。