3T3-L1细胞

摘要： 目的探究长链非编码RNA(LncRNA)生长抑制特异因子5(GAS5)靶向微小RNA(miR)-103,从而减轻3T3L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)的机制。方法培养并诱导分化3T3L1小鼠前脂肪细胞,油红O染色鉴定细胞分化情况。建立3T3L1脂肪细胞IR模型。实验分为对照组、模型组、空载体组(转染pEGFP-C1空载体)、GAS5过表达组(转染pEGFP-C1-GAS5载体)、GAS5过表达+mimic NC组(转染pEGFP-C1-GAS5+mimic NC)、GAS5过表达+miR-103 mimic组(转染pEGFP-C1-GAS5+miR-103 mimic)。实时荧光定量PCR检测细胞中GAS5、miR-103 mRNA水平;液体闪烁法检测葡萄糖摄取能力;蛋白质免疫印迹检测细胞中胰岛素受体底物-1(IRS-1)、p-IRS-1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT蛋白表达水平;双荧光素酶鉴定miR-103与GAS5的靶向位点。结果诱导后脂肪细胞呈圆形、胞体变大,胞浆丰富,含有大量脂滴,油红染色明显,呈"指环样"结构,模型构建成功。与对照组比较,模型组、空载体组、GAS5过表达+miR-103 mimic组细胞中GAS5mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平降低,细胞中miR-103 mRNA水平升高(P<0.05);与模型组、空载体组比较,GAS5过表达组、GAS5过表达+mimic NC组细胞中GAS5 mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平升高,而miR-103 m RNA水平降低(P<0.05);与GAS5过表达组、GAS5过表达+mimic NC组比较,GAS5过表达+miR-103 mimic组细胞中GAS5 mRNA水平、葡萄糖摄取能力、p-IRS-1/IRS-1、PPARγ、GLUT4、p-AKT/AKT蛋白水平降低,miR-103 mRNA水平升高(P<0.05)。miR-103与GAS5存在互补的结合位点并经双荧光素酶靶向关系验证。结论过表达GAS5后靶向下调miR-103的表达可减轻3T3L1脂肪细胞IR。

摘要： 分泌型卷曲相关蛋白5(secreted frizzled-related proteins,SFRP5)是一种可溶性蛋白质,主要是由白色脂肪组织分泌,隶属于SFRPs家族。为揭示SFRP5在脂肪细胞增殖分化过程中的调控作用。本次试验研究以HEK293A细胞为试验材料,通过SFRP5腺病毒干扰载体的鉴定、病毒制备、病毒扩繁、病毒滴度测定、重组腺病毒感染效率测定、HEK293A细胞培养。本次试验研究将腺病毒干扰载体进行鉴定,干扰载体成功包装并感染3T3-L1细胞系,出现荧光蛋白表达,说明小鼠SFRP5基因干扰载体构建及鉴定成功。

摘要： 【目的】研究miR-140-5p在前脂肪细胞(3T3-L1)成脂分化过程中的功能及其作用机制。【方法】待3T3-L1细胞汇合度达100%时诱导其成脂分化,收集分化第―1(诱导分化前1 d)、0、1、2、3、5、7天的细胞,用实时荧光定量PCR检测miR-140-5p相对表达量;将miR-140-5p mimics、NC转染3T3-L1细胞并诱导成脂分化,油红O染色观察脂滴形成情况,实时荧光定量PCR检测成脂标志基因CAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、CAAT增强子结合蛋白δ(C/EBPδ)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)相对表达量;利用miRandn和TargetScan在线网站预测miR-140-5p的靶基因;通过对比序列差异分析P300/CBP相关因子(PCAF)的3′-UTR序列中与miR-140-5p的结合位点序列在小鼠、人等不同物种间的序列保守性。将miR-140-5p mimics、inhibitor、NC转染3T3-L1细胞并诱导成脂分化,实时荧光定量PCR检测miR-140-5p、PCAF相对表达量,Western blotting检测PCAF蛋白水平;将PEGFP-N1-PCAF、PEGFP-N1转染3T3-L1细胞,油红O染色观察脂滴形成情况,实时荧光定量PCR检测PCAF、C/EBPδ、PPARγ基因相对表达量,Western blotting检测C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ蛋白表达水平。将3条PCAF siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3)、siRNA NC转染3T3-L1细胞,Western blotting法检测PCAF蛋白水平,筛选最佳PCAF siRNA。将最佳PCAF siRNA和siRNA NC转染3T3-L1细胞,油红O染色观察脂滴形成情况,实时荧光定量PCR检测PCAF、C/EBPβ、C/EBPδ与PPARγ基因相对表达量,Western blotting检测C/EBPβ、PPARγ蛋白表达水平。分别将miR-140-5p mimics、NC与PGL0-PCAF 3′-UTR载体和PGLO空载体共转染293T细胞,用双荧光素酶报告试验检测miR-140-5p与PCAF的靶向关系。【结果】在诱导3T3-L1细胞成脂分化过程中,与诱导分化前1 d相比,在细胞成脂分化第1、2天时miR-140-5p相对表达量极显著升高(P<0.01),在分化第3天时显著升高(P<0.05)。与NC组相比,miR-140-5p mimics组脂滴数量明显增加,miR-140-5p mimics组成脂标志基因C/EBPδ与PPARγ相对表达量均极显著升高(P<0.01)。靶基因预测结果表明,miR-140-5p与PCAF存在预期结合位点;保守性分析结果表明,靶基因PCAF结合位点序列在不同物种间具有高度保守性。与NC组相比,mimics组miR-140-5p和PCAF相对表达量均极显著升高(P<0.01),inhibitor组miR-140-5p极显著降低(P<0.01)、PCAF显著降低(P<0.05),PCAF蛋白表达量显著升高(P<0.05)。与PEGFP-N1组相比,PEGFP-N1-PCAF组脂滴数量增多,PCAF、PPARγ基因相对表达量和C/EBPβ、C/EBPδ蛋白水平极显著升高(P<0.01),PPARγ蛋白水平显著升高(P<0.05)。PCAF siRNA1、siRNA2与siRNA3均极显著抑制PCAF蛋白的表达(P<0.01),siRNA3的效果最显著,因此选择siRNA3进行后续试验。与NC组相比,PCAF siRNA3组3T3-L1细胞中脂滴数量较少,PCAF、C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ基因相对表达量和C/EBPβ蛋白水平均极显著下降(P<0.01)。双荧光素酶报告试验结果显示,miR-140-5p与PCAF基因之间无靶标关系。【结论】内源性miR-140-5p在3T3-L1细胞分化过程中表达升高,miR-140-5p可能通过间接上调PCAF基因表达促进3T3-L1细胞成脂分化。

摘要： 目的 利用网络药理学与分子对接的方法探讨桔梗皂苷D(PD)治疗肥胖的潜在作用靶点及相关通路,并通过体外实验进行初步验证。方法 通过Gene Card、OMIM和TTD数据库检索肥胖相关靶点,使用CTD、HREB、SEA以及Swisse Target prediction等平台,并结合查阅相关文献获取PD的靶点,利用VENNY作图获取药物与疾病基因交集靶点并获得关键基因;利用STRING、R软件进行蛋白相互作用(PPI)与GO、KEGG通路富集分析,通过微生信平台将结果可视化,并构建药物-靶点-通路网络图;最后采用分子对接技术,将PD分别与AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)及脂肪酸合成酶(FAS)进行分子对接;以小鼠3T3-L1前脂肪细胞作为研究对象,取对数生长期的3T3-L1前脂肪细胞,分别给予5、10、20、40、60、80μmol/L PD处理24、48及72 h;采用细胞增殖实验(CCK-8)法测定细胞存活率,流式细胞仪检测PD对3T3-L1前脂肪细胞凋亡的影响,采用油红O染色检测PD在3T3-L1前脂肪细胞中脂滴的积累情况,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)实验检测不同浓度PD对固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)的m RNA及蛋白表达的影响。结果 获得PD与肥胖交集靶点131个,网络拓扑分析筛选出关键靶点10个;PPI结果显示,PD对应的关键靶点基因为蛋白激酶B-α(AKT1)、肿瘤蛋白p53(TP53)、信号传导与转录激活因子3(STAT3)、白介素6(IL6)、肿瘤坏死因子(TNF)、表皮生长因子受体(EGFR)等;GO富集分析显示,PD与类固醇结合、细胞氧化应激、线粒体生成等相关;KEGG通路分析结果表明,其可调控154条信号通路,包括AMPK信号通路、脂肪细胞因子通路、胰岛素信号通路等;在分子对接中,PD与关键靶点AMPK、SREBP-1c、FAS的对接效果良好,结合能为-10.2~-8.8 kcal/mol;CCK-8结果显示,PD浓度<20μmol/L为安全浓度范围,且不造成细胞凋亡;油红O染色结果显示,PD可抑制细胞分化,并具有浓度依赖效应;PD能够显著抑制SREBP-1c、FAS的表达。结论 PD可以通过调控多靶点、多通路对肥胖产生影响,其抑制3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞的作用机制可能与下调SREBP-1c、FAS蛋白表达有关。

摘要： 目的探索绞股蓝总皂苷对3T3-L1前脂肪细胞棕色化及自噬活性的影响。方法通过诱导使3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,油红O染色法对其进行鉴定。采用CCK8法筛选绞股蓝总皂苷的干预剂量,Western blot法检测细胞UCP1、PGC-1α、LC3、Beclin-1、SQSTM1/P62及ComplexⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ蛋白表达,RT-qPCR法检测Cidea、Dio2、Cox2、Cox8b mRNA表达。结果绞股蓝总皂苷促进了细胞UCP1、PGC-1α、SQSTM1/P62及ComplexⅠ、Ⅱ、Ⅴ蛋白表达以及Cidea、Dio2、Cox2、Cox8b mRNA表达,抑制了ComplexⅣ、LC3、Beclin-1蛋白表达。结论绞股蓝总皂苷可以促进3T3-L1前脂肪细胞棕色化并抑制其自噬活性。

摘要： 目的 探讨羊栖菜多糖(Sargassum fusiforme polysaccha-ride,SFPS)在3T3-L1细胞脂代谢中的作用.方法 培养3T3-L1细胞,并建立胰岛素抵抗模型,胰岛素抵抗模型细胞经不同浓度SFPS处理48h后,测定葡萄糖消耗量(glucose consumption,Glu)、游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)生成量和细胞中甘油三酯(triglyceride,TG)含量.MTT法检测细胞相对增殖率,RT-PCR检测3T3-L1细胞中GLUT-4、HSL的mRNA表达情况.结果 与模型组比较,不同浓度SFPS显著增加胰岛素抵抗3T3-L1细胞葡萄糖消耗量,显著降低FFA生成量,显著增加GLUT-4 mRNA的表达,显著降低HSL mRNA的表达.结论 SFPS改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的分子机制可能与调控GLUT-4和HSL mRNA的表达有关.

摘要： 目的探讨羊栖菜多糖(Sargassum fusiforme polysaccha-ride,SFPS)在3T3-L1细胞脂代谢中的作用。方法培养3T3-L1细胞,并建立胰岛素抵抗模型,胰岛素抵抗模型细胞经不同浓度SFPS处理48h后,测定葡萄糖消耗量(glucose consumption,Glu)、游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)生成量和细胞中甘油三酯(triglyceride,TG)含量。MTT法检测细胞相对增殖率,RT-PCR检测3T3-L1细胞中GLUT-4、HSL的mRNA表达情况。结果与模型组比较,不同浓度SFPS显著增加胰岛素抵抗3T3-L1细胞葡萄糖消耗量,显著降低FFA生成量,显著增加GLUT-4 mRNA 的表达,显著降低HSL mRNA的表达。结论 SFPS改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的分子机制可能与调控GLUT-4和HSL mRNA的表达有关。

摘要： 目的 研究甘露聚糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)对3T3-L1脂肪细胞分化过程中自噬的调节及其机制,为靶向自噬在固有免疫上预防肥胖及相关病理改变提供可行性.方法 体外培养3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化.油红O染色分析细胞分化成熟及脂滴积累情况,CCK-8法检测不同浓度MBL(0、1、5、10 μg/ml)对不同分化阶段细胞增殖能力的影响,Western blot分析MBL(10μg/ml)对不同分化阶段细胞自噬关键因子LC3B、Beclin1和p62蛋白的表达,油红O染色观察MBL干预下脂滴蓄积的改变,Western blot、qRT-PCR检测不同浓度MBL干预下自噬关键因子蛋白质及mRNA表达水平,基于自噬性降解的自噬流分析来进一步说明自噬活性,Western blot分析单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号分子的表达及磷酸化.结果 油红O染色结果显示经过10 d诱导的3T3-L1前脂肪细胞可达到完全分化状态;CCK-8结果表明实验组各浓度MBL(1～10μg/ml)对不同分化阶段细胞增殖无影响;Western blot及qRT-PCR检测发现在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中,MBL处理组自噬相关蛋白及mRNA表达水平增强,并呈一定浓度依赖关系;油红O染色显示不同分化阶段脂肪细胞内脂滴在MBL干预下呈不同程度的减少;荧光显微镜检测结果进一步证实MBL通过增加自噬体的合成增强脂肪细胞自噬活性;并且在MBL干预下,AMPK的磷酸化水平明显上调,mTOR的磷酸化水平明显下调,同样呈现浓度依赖关系.结论 MBL通过AMPK/mTOR信号通路加快3T3-L1脂肪细胞分化过程中的自噬进程,降低脂质积累,为治疗肥胖及其相关代谢疾病提供了一种潜在的功能途径.

摘要： 银杏叶提取物(EGB)包含了两大类活性成分——黄酮类和萜内酯类,并具有多种药用价值.本研究以3T3-L1细胞为研究对象,通过MTT法、油红O染色法和荧光定量PCR法研究银杏叶提取物中三种黄酮对脂肪细胞的成脂代谢影响.结果显示,山奈酚、槲皮素和异鼠李素在较高浓度下(100μmol/L)对成熟脂肪细胞的细胞毒性较为显著,分别是44％、26％和14％.山奈酚和槲皮素在100μmol/L时对前脂肪细胞的增殖抑制作用为分别27％和19％,异鼠李素对前脂肪细胞的增殖抑制效果小于5％,影响较小,以上数值均有统计学意义.油红O染色半定量结果表明异鼠李素,山奈酚和槲皮素在相同浓度下(50μmol/L)对脂质积累的抑制率分别为43％、29％和17％,且具有统计学意义.荧光定量PCR结果表明三种银杏黄酮在较高浓度下能够显著抑制细胞分化终末期的关键转录因子PPARγ、C/EBPα和SREBP-1c的表达,进而影响其下游与脂质合成相关的酶和蛋白的转录水平表达.综上,三种银杏黄酮对3T3-L1细胞的主要影响方式是对成熟脂肪的细胞毒性以及对脂肪细胞分化和脂质积累的抑制.

摘要： 目的:探讨羊栖菜多糖(Sargassum fusiforme polysaccha-ride,SFPS)在3T3-L1前脂肪细胞分化中的作用及其机制.方法:采用MTT法测定细胞增殖活性,采用油红O染色分析细胞分化程度,采用生化法检测甘油三酯(triglyceride,TG)的含量,蛋白印迹法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator activator receptorγ,PPARγ)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)的蛋白表达.结果:不同浓度SFPS组与对照组比较,3T3-L1细胞的分化显著抑制,细胞中的脂质及甘油三酯含量显著降低,PPARγ、FAS蛋白表达显著减少.结论:SFPS可以抑制3T3-L1细胞分化,其机制可能与抑制PPARγ、FAS蛋白表达有关.

摘要： 目的：探讨HDL对3T3-L1细胞的葡萄糖转运的影响及其机制.方法：通过对3T3-L1成纤维细胞的分化,培养出符合实验要求的3T3-L1脂肪细胞.通过葡萄糖消耗实验和3H标记的2-脱氧葡萄糖的摄取实验来研究HDL对葡萄糖转运的影响.通过RT-PCR和West-blotting实验来探讨这个过程的机制.结果：HDL可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取.3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取过程中,蛋白在RNA转录水平上没有增加,而是发生了AKT和AMPK蛋白的磷酸化.结论：HDL促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取是通过AKT和AMPK两条途径来实现的.

摘要： 目的：探讨HDL对3T3-L1细胞的葡萄糖转运的影响及其机制.方法：通过对3T3-L1成纤维细胞的分化,培养出符合实验要求的3T3-L1脂肪细胞.通过葡萄糖消耗实验和3H标记的2-脱氧葡萄糖的摄取实验来研究HDL对葡萄糖转运的影响.通过RT-PCR和West-blotting实验来探讨这个过程的机制.结果：HDL可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取.3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取过程中,蛋白在RNA转录水平上没有增加,而是发生了AKT和AMPK蛋白的磷酸化.结论：HDL促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取是通过AKT和AMPK两条途径来实现的.

摘要： 目的：探讨HDL对3T3-L1细胞的葡萄糖转运的影响及其机制.方法：通过对3T3-L1成纤维细胞的分化,培养出符合实验要求的3T3-L1脂肪细胞.通过葡萄糖消耗实验和3H标记的2-脱氧葡萄糖的摄取实验来研究HDL对葡萄糖转运的影响.通过RT-PCR和West-blotting实验来探讨这个过程的机制.结果：HDL可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取.3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取过程中,蛋白在RNA转录水平上没有增加,而是发生了AKT和AMPK蛋白的磷酸化.结论：HDL促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取是通过AKT和AMPK两条途径来实现的.

摘要： 目的：探讨HDL对3T3-L1细胞的葡萄糖转运的影响及其机制.方法：通过对3T3-L1成纤维细胞的分化,培养出符合实验要求的3T3-L1脂肪细胞.通过葡萄糖消耗实验和3H标记的2-脱氧葡萄糖的摄取实验来研究HDL对葡萄糖转运的影响.通过RT-PCR和West-blotting实验来探讨这个过程的机制.结果：HDL可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取.3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取过程中,蛋白在RNA转录水平上没有增加,而是发生了AKT和AMPK蛋白的磷酸化.结论：HDL促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取是通过AKT和AMPK两条途径来实现的.

摘要： 目的：探讨HDL对3T3-L1细胞的葡萄糖转运的影响及其机制.方法：通过对3T3-L1成纤维细胞的分化,培养出符合实验要求的3T3-L1脂肪细胞.通过葡萄糖消耗实验和3H标记的2-脱氧葡萄糖的摄取实验来研究HDL对葡萄糖转运的影响.通过RT-PCR和West-blotting实验来探讨这个过程的机制.结果：HDL可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取.3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的转运和摄取过程中,蛋白在RNA转录水平上没有增加,而是发生了AKT和AMPK蛋白的磷酸化.结论：HDL促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取是通过AKT和AMPK两条途径来实现的.

摘要： 脂肪分化是一个十分复杂的过程：脂肪前体细胞长满后出现接触抑制，退出细胞周期。在相关分化激素诱导下，细胞首先会重新进入细胞周期进行有丝分裂，经过两轮克隆增殖后，细胞停止有丝分裂进入增殖静息状态。随着C/EBPβ和δ表达增加，细胞启动分化，分化相关基因PPARγ、C/EBPα等大量表达直至形成富含脂滴的成熟脂肪细胞。microRNA通过靶向mRNA的3’UTR造成mRNA的降解或翻译抑制而对蛋白表达进行转录后水平的调控。MAPK信号通路包括ERK通路、p38 MAPK通路和JNK通路。ERK5和TAK1分别属于ERK通路和p38MAPK通路的成员。本文旨在研究在未分化的脂肪细胞中过表达miR-143对MAPK信号通路中的ERK5和TAK1的影响，进而可能对脂肪分化产生影响。

摘要： 脂肪分化是一个十分复杂的过程：脂肪前体细胞长满后出现接触抑制，退出细胞周期。在相关分化激素诱导下，细胞首先会重新进入细胞周期进行有丝分裂，经过两轮克隆增殖后，细胞停止有丝分裂进入增殖静息状态。随着C/EBPβ和δ表达增加，细胞启动分化，分化相关基因PPARγ、C/EBPα等大量表达直至形成富含脂滴的成熟脂肪细胞。microRNA通过靶向mRNA的3’UTR造成mRNA的降解或翻译抑制而对蛋白表达进行转录后水平的调控。MAPK信号通路包括ERK通路、p38 MAPK通路和JNK通路。ERK5和TAK1分别属于ERK通路和p38MAPK通路的成员。本文旨在研究在未分化的脂肪细胞中过表达miR-143对MAPK信号通路中的ERK5和TAK1的影响，进而可能对脂肪分化产生影响。

摘要： 脂肪分化是一个十分复杂的过程：脂肪前体细胞长满后出现接触抑制，退出细胞周期。在相关分化激素诱导下，细胞首先会重新进入细胞周期进行有丝分裂，经过两轮克隆增殖后，细胞停止有丝分裂进入增殖静息状态。随着C/EBPβ和δ表达增加，细胞启动分化，分化相关基因PPARγ、C/EBPα等大量表达直至形成富含脂滴的成熟脂肪细胞。microRNA通过靶向mRNA的3’UTR造成mRNA的降解或翻译抑制而对蛋白表达进行转录后水平的调控。MAPK信号通路包括ERK通路、p38 MAPK通路和JNK通路。ERK5和TAK1分别属于ERK通路和p38MAPK通路的成员。本文旨在研究在未分化的脂肪细胞中过表达miR-143对MAPK信号通路中的ERK5和TAK1的影响，进而可能对脂肪分化产生影响。

摘要： 脂肪分化是一个十分复杂的过程：脂肪前体细胞长满后出现接触抑制，退出细胞周期。在相关分化激素诱导下，细胞首先会重新进入细胞周期进行有丝分裂，经过两轮克隆增殖后，细胞停止有丝分裂进入增殖静息状态。随着C/EBPβ和δ表达增加，细胞启动分化，分化相关基因PPARγ、C/EBPα等大量表达直至形成富含脂滴的成熟脂肪细胞。microRNA通过靶向mRNA的3’UTR造成mRNA的降解或翻译抑制而对蛋白表达进行转录后水平的调控。MAPK信号通路包括ERK通路、p38 MAPK通路和JNK通路。ERK5和TAK1分别属于ERK通路和p38MAPK通路的成员。本文旨在研究在未分化的脂肪细胞中过表达miR-143对MAPK信号通路中的ERK5和TAK1的影响，进而可能对脂肪分化产生影响。

摘要： 目的: 观察五味清浊散(WQS)对脂肪细胞血糖浓度和TNF-α水平及其mRNA其表达的影响.rn 方法: 药物处理48h后,采用GOD-POD法检测3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)模型培养液中葡萄糖浓度,ELISA法检测TNF-α浓度,RT-PCR法检测TNF-α基因mRNA的表达.rn 结果: WQS使脂肪细胞IR模型培养液葡萄糖、TNF-α浓度降低,并下调TNF-α基因mRNA的表达.rn 结论: WQS有显著的降糖作用,并下调TNF-α水平.

摘要： 本发明提供一种三维细胞培养支架的制备方法，包括如下步骤：a.称取1~10g的聚合物溶于的有机溶剂中，配成聚合物溶液；b.称取0~500mg增塑剂加到上述聚合物溶液中，混合均匀；c.称取羟基磷灰石胶纳米颗粒；银纳米颗粒；氧化锌纳米颗粒；壳聚糖纳米颗粒，加入到步骤b处理的溶液中，混合均匀，获得纺丝原液；d.将纺丝原液注入到静电纺丝设备中，在静电纺丝设备的接收装置上获得纺丝；e.将纺丝烘干，制得三维细胞培养支架。本发明还提供一种基于所述三维细胞培养支架制备方法所获得的三维细胞培养装置。所述培养装置可为培养的细胞提供无毒的具有生物相容性的生长环境，同时可适用于多种不同的种类细胞的培养。

摘要： 本发明提供一种三维成纤维细胞集合体、该细胞集合体的制造方法以及包含由成纤维细胞培养的成纤维细胞集合体的体外(In vitro)三维皮肤真皮模型及使用该模型而筛选药物的方法。

摘要： 本发明涉及含细胞外基质的组合物、三维组织体形成用临时支架材料及三维组织体形成剂以及从三维组织体中回收细胞的方法。所述含细胞外基质的组合物包含片段化的细胞外基质成分和水性介质。

摘要： 本公开涉及用于控制细胞行为的三维微环境结构、用于控制细胞行为的三维表面、以及用于制造阵列和三维微环境结构的方法。

摘要： 一种三维骨细胞主动接种方法、三维骨细胞主动接种支架及其制备方法。该制备方法包括：将聚有机硅氧烷与固化剂加入反应瓶中搅拌混匀，真空抽滤得混合物，加入导电填料、成孔剂后充分混合后超声处理，然后浇筑到模具中加热固化，得到复合导电薄层，在其表面浇筑一层混合物形成绝缘层，加热固化后激光切割，得到具有微结构的电极状薄膜，除去电极状薄膜中的成孔剂；将多个去除成孔剂后的电极状薄膜进行粘贴，形成三维骨细胞主动接种支架。该三维骨细胞主动接种方法包括：将该支架置于细胞悬浮液中进行细胞吸附，吸附牢固后转移至细胞培养液中培养一周。本发明具有较高的孔隙率、细胞接种效率高，制备方法简单，成本低廉，具有很大的市场潜力。

摘要： 本发明提供一种三维细胞培养支架的制备方法，该方法包括如下步骤：a.称取1~10g的聚合物溶于10~100ml的有机溶剂中，配成聚合物溶液；b.称取0~500mg增塑剂，加到上述聚合物溶液中，混合均匀；c.称取羟基磷灰石胶纳米颗粒、银纳米颗粒、氧化锌纳米颗粒、壳聚糖纳米颗粒各0~2g，加入到步骤b处理的溶液中，混合均匀，获得纺丝原液；d.将所述纺丝原液注入到静电纺丝设备中，在静电纺丝设备的接收装置上获得纺丝；e.将所获得的纺丝进行烘干处理，即制得三维细胞培养支架。本发明还提供一种基于所述三维细胞培养支架制备方法所获得的三维细胞培养装置。所述培养装置可为培养的细胞提供无毒的具有生物相容性的生长环境，同时可适用于多种不同的种类细胞的培养。

摘要： 本发明公开的三种肺泡结构细胞与胶原共同三维立体培养模型的方法，包括向已灭菌的培养板中各孔移入肺泡上皮细胞混悬液，静置观察细胞贴附在孔底后，移液枪吸取上清培养液；向位于冰盒中的离心管内加入NaOH，之后加入I型胶原溶液混匀，再加入DMEM形成等渗等离子胶原溶液；向离心管内加入成纤维细胞混悬液混匀，取含成纤维细胞的胶原溶液分配于培养板孔内，室温静置观察胶原溶液凝固形成三维立体细胞胶原；向培养板孔内加入血管内皮细胞混悬液于胶原上面，形成血管内皮细胞层面，待血管内皮细胞贴于胶原后，用消毒药铲将胶原分离并浸漂在培养液中。本发明解决了现有三维立体培养方法不能模拟肺泡组织完整结构的问题。

摘要： 本发明提供一种三维成纤维细胞集合体、该细胞集合体的制造方法以及包含由成纤维细胞培养的成纤维细胞集合体的体外(In vitro)三维皮肤真皮模型及使用该模型而筛选药物的方法。

摘要： 本发明涉及含细胞外基质的组合物及其制造方法、以及三维组织体、三维组织体形成剂。所述含细胞外基质的组合物含有片段化的细胞外基质成分，片段化的细胞外基质成分的至少一部分发生了交联。

摘要： 本发明建立一种三联袋以及应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法，本方法采用三联袋的方式从脐带血中分离出造血干细胞，三联袋分离的整个操作过程在封闭无菌的环境内完成，既可以减少操作过程的污染，同时对操作环境和人员的无菌要求低，便于操作；分离过程采用自动分浆夹去除血浆，速度快，操作简单，提高了操作效率。