恶臭假单胞菌

摘要： 美国能源部(DOE)国家可再生能源实验室(NREL)的科学家们正致力于将化学和生物学相结合,将PET废料转化为一种性能更好的尼龙材料,可用于制造具有更多功能的新产品。NREL与橡树岭国家实验室(ORNL)和BOTTLE联盟合作设计了一种细菌——恶臭假单胞菌KT2440。该细菌可将分解的PET转化为优质尼龙产品的聚合单体,这些高性能单体随后可以被加工为价值更高的塑料材料和产品,最终减少污染海水、山区。

摘要： 乙二醇(ethylene glycol,EG)是聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)等塑料解聚后的单体产物之一,开发EG为原料的生物转化系统对于解决发酵行业原料替代和塑料资源化利用均具有重要意义。将EG与廉价碳源——乙酸(AC)进行共底物发酵,通过底物浓度优化获得最佳EG与乙酸配比为3∶4,可实现底物的完全消耗,解决了因乙酰辅酶A供给不足导致Pseudomonas putida KT2440难以利用EG的问题;进一步分别组装Pseudomonas aeruginosa PAO1和Pseudomonas aeruginosa KT1115来源的单鼠李糖脂(mono-RL)合成基因线路rhlIRBA,获得mono-RL合成恶臭假单胞菌重组菌株P.putida KT2441和P.putida KT2442。P.putida KT2442表现出更强的mono-RL合成能力,在50 mL摇瓶发酵体系中,P.putida KT2442利用EG和乙酸共底物合成mono-RL产量为0.46 g/L,得率为0.055 g/g;薄层色谱和质谱结果表明合成的mono-RL主要为Rha-C10-C10结构,分子量为503。

摘要： 在恶臭假单胞菌Pseudomonas putida B3中,靛蓝生物合成关键酶基因styAB上游存在一个二元调控系统StyS-StyR.StyS蛋白属于激酶家族,是磷酸化信号转导的重要媒介,但激酶StyS的自磷酸化传导机制对靛蓝生物合成的调节作用尚未探明,因此,研究以Pseudomonas putida B3中激酶蛋白StyS作为研究对象,发现了两个磷酸化结合位点,构建了磷酸化位点突变株.通过分析野生菌株P.putida B3、styS基因缺失菌株P.putida B3-△styS、styS基因回补菌株P.putida B3-△styS-8和磷酸化位点突变株P.putida B3-△styS-1之间的靛蓝产量及酶活发现,P.putida B3产量为10.14 mg/L,P.putida B3-△styS-8产量为3.63 mg/L,磷酸化位点突变菌株无激酶活性且失去了产生靛蓝的能力.结果表明,StyS自磷酸化作用在靛蓝发酵体系中起重要作用.研究结果将为靛蓝生物合成途径的进一步研究提供参考.

摘要： 目的 用高分辨率溶解曲线法分离鉴定包装饮用水和天然矿泉水中的铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌.方法 本研究以假单胞菌16S rDNA为靶基因,采用高分辨率熔解曲线的方法,利用一对引物同时鉴别铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌.结果 Tm值在83°C～84°C出现熔解峰为恶臭假单胞菌,Tm值在84°C～85°C出现熔解峰为铜绿假单胞菌.通过对梯度含量的假单胞菌标准菌株DNA和多种真菌细菌的DNA进行高分辨率熔解曲线检测,显示该方法对其他12种非目标菌无交叉反应,检测限分别为41个拷贝数和48个拷贝数.结论 HRM-Real time PCR检测体系可通过一对引物对上述2种假单胞菌进行有效的鉴别与区分,且具有良好的特异性和灵敏度.该方法可用于包装饮用水和天然矿泉水的日常检测中,为假单胞菌的快速检测提供了新方法.

摘要： 在恶臭假单胞菌Pseudomonas putida B3中,靛蓝生物合成关键酶基因styAB上游存在一个二元调控系统StyS-StyR。StyS蛋白属于激酶家族,是磷酸化信号转导的重要媒介,但激酶StyS的自磷酸化传导机制对靛蓝生物合成的调节作用尚未探明,因此,研究以Pseudomonas putida B3中激酶蛋白StyS作为研究对象,发现了两个磷酸化结合位点,构建了磷酸化位点突变株。通过分析野生菌株P.putida B3、styS基因缺失菌株P.putida B3-ΔstyS、styS基因回补菌株P.putida B3-ΔstyS-8和磷酸化位点突变株P.putida B3-ΔstyS-1之间的靛蓝产量及酶活发现,P.putida B3产量为10.14 mg/L,P.putida B3-ΔstyS-8产量为3.63 mg/L,磷酸化位点突变菌株无激酶活性且失去了产生靛蓝的能力。结果表明,StyS自磷酸化作用在靛蓝发酵体系中起重要作用。研究结果将为靛蓝生物合成途径的进一步研究提供参考。

摘要： 为了探究铁载体在生物化感作用中的影响,从种植地黄的3种土壤样品中,分离纯化具有产铁载体能力的细菌菌株,进行形态学观察以及分子生物学鉴定,测定菌株产铁载体的生长曲线,通过单因素试验和正交试验确定最优产铁载体条件,在此基础上通过薄层层析和硅胶柱层析分离纯化铁载体,并以拟南芥种子为材料,分析铁载体对植物生长发育的影响.结果表明,经形态学和分子生物学鉴定,筛选出高产铁载体菌株为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)S2.该菌株产铁载体最优发酵条件为26°C,180 r·min-1,pH值为10.0,培养时间48 h,此时产铁载体含量为64.37％,分离纯化出大极性和小极性共2种铁载体,大极性铁载体能有效抑制拟南芥主根的生长,根长度由1.80 cm减小到0.76 cm.

摘要： 为了驯化废水中的好氧反硝化细菌,本研究以柠檬酸为碳源,采用活性污泥法,通过3个阶段驯化废水中的好氧反硝化菌群,并逐步提高废水中硝酸根(NO-3)质量浓度,富集好氧反硝化细菌.监测驯化过程中出水的pH、重铬酸盐需氧量(CODCr)去除率、硝酸盐氮(NO-3-N)去除率和污泥理化指标,并采用四区划线法和16SrRNA测序技术筛选并鉴定优势菌群.在3个阶段驯化过程的中,出水溶液酸碱度分别为pH 7.0～6.7、pH 7.1～6.9和pH 7.1～6.87;CODCr的最大去除率分别为82.6％、89.7％和92.3％;NO-3-N最大去除率分别为82.5％、91.9％和59.1％.污泥各项指标显示,驯化后污泥沉降性能和絮凝效果增强,出水浊度降低.16SrRNA测序技术显示最终得到的优势菌为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida),属好氧反硝化菌.

摘要： 从6种细菌(铜绿假单胞菌、黄杆菌、枯草芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、恶臭假单胞菌和金色葡萄球菌)中筛选出降解光氧化褐煤的优势菌株恶臭假单胞菌,并通过单因素实验优化了恶臭假单胞菌降解光氧化内蒙古胜利褐煤的工艺条件.确定恶臭假单胞菌降解光氧化内蒙古胜利褐煤的最佳工艺条件为:煤加量0.3 g·(20 mL)-1、接种量2.0 mL·(20 mL)-1、培养箱振荡频率160 r·min-1、降解时间12 d、煤样粒度(-0.15+0.075)mm、降解温度30°C.

摘要： 在前期菌-煤匹配实验和单因素实验的基础上,选取恶臭假单胞菌降解光-氧氧化褐煤工艺条件中的加煤量、接种量和降解时间作为变量因素,以降解液在450 nm处的吸光度A450值作为响应值,进行三因素三水平的Box-Behnken设计,建立响应曲面模型对降解工艺条件进行模拟优化.结果表明:二次模型失拟项不显著,R2=0.9990,可靠性高,能较好地模拟三个变量对响应值的影响;得出的最佳工艺条件为加煤量0.26 g/20 mL、接种量2.71 mL/20 mL、降解时间14.50 d,对应降解液的吸光度A450值为6.25687,验证实验的解液吸光度A450值为5.936,相对误差为5.12％,与模型预测值吻合度高.

摘要： 本课题组筛选到一株能够以联苯(BP)为唯一碳源生长的菌株一恶臭假单胞菌B6-2,研究了菌株B6-2能够以共代谢方式降解各种PAHs和dioxins类化合物，包括二苯并峡喃(DBF)、咔哇(CA)、二苯并唆吩(DBT )等。菌株B6-2的广底物谱特性适合于复杂芳香化合物污染环境的修复，从转运、调控及代谢关键基因层面进一步揭示其广底物谱特性机制方面的研究正在进行中。通过基因组比对分析，获得了BP降解相关的完整基因簇，并发现该基因簇位于一个基因组岛上;期于通过该基因组岛功能分析，研究其起源与进化，揭示菌株B6-2代谢有机污染物的遗传获得机制。菌株B6-2能够耐受高浓度(体积比20%)有机溶剂甲苯，在体积比100%的对二甲苯中能够生长良好，这一特性使其具有修复有机溶剂污染环境的潜力，在对其有机溶剂耐受机制研究过程中，我们发现菌株B6-2含有有机溶剂外排泵，可能与其有机溶剂耐受能力密切相关。此外，发现菌株B6-2的DBF代谢主要依赖侧面双加氧、间位裂解开环途径，根据检测的代谢中间物，发现11个新的代谢产物;结合差异蛋白组与转录组数据分析，有望寻找到这条代谢途径中新的降解基因，揭示调控机制，逐步完善菌株B6-2的DBF侧面双加氧共代谢的分子机制。基于菌株B6-2具有PAHs和二嗦英类化合物降解能力，期望结合合成生物学手段改造菌株B6-2基因组，使其获得对极难降解且高毒性的卤代类二噁英化合物的代谢能力。

摘要： 本文采用晶体结构生物学等方法探讨了Nfo和Ami这两种执行含氮化合物脱氮反应的酞胺水解酶的底物识别机理。解析了恶臭假单胞菌S16菌株分解尼古丁代谢途径中催化连续两步酞胺水解反应的两个酞胺水解酶-N-甲酞马来酞胺酸脱甲酞基酶Nfo与马来酞胺酸脱氨基酶Ami的晶体结构，以及Ami与其产物马来酸的复合物的晶体结构。通过晶体结构分析与酶一底物对接模拟计算，揭示了Nfo与Ami分别作为含氮杂环化合物降解途径中两类酞胺水解酶一脱甲酞基酶与脱氨基酶的代表，分别特异性地识别各自底物的分子机理。通过序列比对与活性位点结构比较，阐明了水解含梭基底物与含芳香环底物这两类脱氨基酶的底物选择性识别机制。并通过酶活性动力学检测、计算机分子对接模拟、量子化学计算，指出了Nfo与Ami虽然同为酞胺水解酶，但却有着针对各自底物量身定制的活性位点结构，从而不能互相交换酞胺底物进行交叉水解反应的特殊巧妙的分子机制。

摘要： 目的：通对美国进境的环保微生物菌剂恶臭假单胞菌进行鉴定.方法：从该样品中分离、纯化得到菌株,进行形态学、生理生化测定,并提取其基因组DNA,进行16SrDNA扩增、基因测序等,分析该菌是否是恶臭假单胞菌.结果：综合形态学、生理生化特征,16SrDNA扩增片段序列分析及在数据库NCBI上比对结果,分析该样品中不含有恶臭假单胞菌,与申报进境的商品不符.结论：首次截获从美国进境的不合格环保微生物菌剂恶臭假单胞菌.

摘要： 本文利用文库构建、基因组学、蛋白组学、结构生物学等方法首次从分子和生化水平全面系统的阐明了困惑科学家近60年的假单胞菌代谢尼古丁的毗咯代谢主途径的分解代谢机制，发现该途径与人体代谢尼古丁2'轻基化途径类似。对菌株S16进行了比较蛋白组(尼古丁培养基和甘油培养基)分析，获得了1,292个蛋白，占到该菌株的2596(该菌株推测可能的蛋白数目为5,218个)。以尼古丁为唯一碳氮源的培养基中，有126个蛋白高表达，对这些蛋白进行了聚类分析，发现多个蛋白都是与尼古丁代谢、运输相关，对其中10多个基因进行了基因敲除和荧光定量PCR实验，寻找到了编码SP轻化酶SpmABC和NicAl的同工酶NicA2的基因，绘制了S16尼古丁代谢的完整途径。

摘要： 本文介绍了一起由学校饮用水污染事件导致64名学生陆续出现腹泻、腹痛等胃肠疾患的病例,经现场流行病学调查证实为一起由恶臭假单胞菌引起的校内暴发疫情.

摘要： 本课题组2004年在筛选到尼古丁代谢菌株Pseudomonas putida S16的基础上，从休止细胞体系、生长体系、粗酶液体系中验证了该菌株代谢尼古丁的途径并最终明确了关键代谢产物的结构，推测的代谢途径与上世纪Wada所提出的代谢途径基本一致。利用微生物降解尼古丁具有显著的经济效益和社会效益,随着生物技术的发展,微生物将具有更大的应用潜力.

摘要： 硫是原油中的第三大元素,平均含量在 0.05%到5%之间,重油中含硫量甚至达到 14%[1]。超过70%的含硫化合物是二苯并噻吩(DBT)及其衍生物。苯并噻吩类化合物具有致突变性,随着燃油的泄漏释放到环境中,对生态系统中的生物具有很大的影响。研究含硫杂环化合物的降解和石油、煤炭的生物脱硫都以DBT作为模式化合物。

摘要： 紫色杆菌素具有很重要的生物活性,可以作为潜在的抗肿瘤、抗病毒药物及生物染料。挖掘合成蓝紫色色素的微生物资源并建立其微生物高产生产工艺具有重要的研究价值。本研究自新疆冰川样品分离到一株产紫色杆菌素的耐冷细菌B2,采用PCR walking方法成功的分离到B2 菌株的vio 基因簇序列。为了减少蓝色素的合成对菌体生长的影响和解决原始菌株需要低温长时间培养的问题,构建了vio 基因工程菌,现了B2的vio基因簇在恶臭假单胞菌中的异源高效表达。工程菌株经过48小时发酵培养产量比原始菌株提高了25%。由于脱氧紫色杆菌素在蓝紫色素中的比例较小,很难分离得到足够的量来研究其性质和功能,因此目前对其详细的功能还不是很清楚。本研究根据紫色杆菌素的已知合成途径,对合成紫色杆菌素基因簇的D 基因进行敲除,构建了只合成脱氧紫色杆菌素的基因工程菌。合成的脱氧紫色杆菌素产量达到1.4g/l,为原始菌株的10倍左右。

摘要： @@原生质体融合是一种重要的微生物育种技术。微生物原生质体融合育种技术不但可以改良菌种遗传性状、提高代谢产物量，还可以综合不同菌株代谢特征，产生新的有用代谢产物。与小范围局部的基因重组方式相比较，原生质体融合具有广泛适用性和随机性，能够打破菌株的种属界限，实现远缘菌株间的多细胞融合;还可以和其他育种方法相结合，获得亲本菌种的多种优良性状。原生质体融合在工业生产和遗传育种上展示出广阔的应用前景。

摘要： @@原生质体融合是一种重要的微生物育种技术。微生物原生质体融合育种技术不但可以改良菌种遗传性状、提高代谢产物量，还可以综合不同菌株代谢特征，产生新的有用代谢产物。与小范围局部的基因重组方式相比较，原生质体融合具有广泛适用性和随机性，能够打破菌株的种属界限，实现远缘菌株间的多细胞融合;还可以和其他育种方法相结合，获得亲本菌种的多种优良性状。原生质体融合在工业生产和遗传育种上展示出广阔的应用前景。

摘要： 本发明提供一种沼泽红假单胞菌菌株，所述沼泽红假单胞菌菌株为沼泽红假单胞菌LY‑6，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO∶M2014525，沼泽红假单胞菌LY‑6的生产工艺简单、培养时间短、成本低，且该菌株可通过简单、快捷、低成本的操作方法制备得到生防菌剂，可有效防治细菌性条斑病，并具有对环境友好、对人畜无毒、对作物无药害、施用简单方便、成本低等特点。

摘要： 本发明公开了一种施氏假单胞菌，其命名为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)EBT‑2，于2019年9月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2019731。本发明还公开了一种复合菌剂，该复合菌剂由保藏编号为CCTCC M 2019730的巴利阿里假单胞菌(Pseudomonas balearica)EBT‑1的扩培菌液和保藏编号为CCTCC M 2019731的施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)EBT‑2的扩培菌液按体积比1∶1混合而成。本发明最后公开了上述复合菌剂在处理垃圾渗滤液膜浓缩液中的应用。本发明复合菌剂能够实现对垃圾渗滤液膜浓缩液的高效生物脱氮。

摘要： 本发明公开了一种施氏假单胞菌，其命名为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)EBT‑2，于2019年9月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2019731。本发明还公开了一种复合菌剂，该复合菌剂由保藏编号为CCTCC M 2019730的巴利阿里假单胞菌(Pseudomonas balearica)EBT‑1的扩培菌液和保藏编号为CCTCC M 2019731的施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)EBT‑2的扩培菌液按体积比1∶1混合而成。本发明最后公开了上述复合菌剂在处理垃圾渗滤液膜浓缩液中的应用。本发明复合菌剂能够实现对垃圾渗滤液膜浓缩液的高效生物脱氮。

摘要： 本发明提供一种沼泽红假单胞菌菌株，所述沼泽红假单胞菌菌株为沼泽红假单胞菌LY‑6，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO∶M2014525，沼泽红假单胞菌LY‑6的生产工艺简单、培养时间短、成本低，且该菌株可通过简单、快捷、低成本的操作方法制备得到生防菌剂，可有效防治细菌性条斑病，并具有对环境友好、对人畜无毒、对作物无药害、施用简单方便、成本低等特点。

摘要： 本发明提供了一株假单胞菌、包括假单胞菌的菌剂及其制备方法和应用，属于微生物菌剂技术领域；所述假单胞菌的保藏编号为：CGMCCNO.18739。本发明从重金属污染的农田土壤中选育获得一株假单胞菌属植物促生细菌。本发明的菌株具有良好的抗汞性能，能通过生物挥发作用，降低土壤总汞含量，通过生物钝化作用降低土壤汞有效态含量，具有较强的实际应用潜力。

摘要： 本发明公开了一种用于检测恶臭假单胞菌胞内c‑di‑GMP水平的报告载体及其应用，该报告载体含有第一启动子、第一报告基因、第二启动子和第二报告基因，所述第一报告基因的表达受第一启动子控制，所述第二报告基因的表达受第二启动子控制，所述第一报告基因和第二报告基因分别为lacZ基因和egfp，两者方向相反，表达互不干扰。利用本发明构建的报告载体可以对恶臭假单胞菌胞内c‑di‑GMP水平进行检测，并且还能检测比较不同外界刺激对恶臭假单胞菌胞内c‑di‑GMP水平的影响，操作简便快捷，结果准确可靠。

摘要： 本发明提供了一种恶臭假单胞菌ND6偶联蛋白复合体dotL基因缺失突变菌及其构建方法、测定方法，为进一步研究接合转移系统提供基础。含抗性标记的恶臭假单胞菌ND6偶联蛋白复合体dotL基因缺失突变菌，其生物保藏编号CGMCC No.20499。

摘要： 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及鉴别铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌的方法。本发明通过对铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌的基因组序列进行分析，提供了用于高分辨熔解曲线技术鉴别铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌的特异性引物对，其序列如SEQ ID NO.1‑2所示。在此基础上，建立了利用高分辨熔解曲线技术鉴别铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌的方法。该方法具有较高的灵敏度、特异性和准确性，能够高效检出铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌，具有操作简单、成本低、快速、高通量等优点，可用于临床检测、农业生产、食品安全等领域的假单胞菌的鉴别。

摘要： 本发明提供了一种恶臭假单胞菌胞外聚合物及其制备方法和用途。本发明提供的制备方法具有环境友好、经济高效的特点，通过胁迫培养P.putida，改变胞外聚合物的蛋白质和多糖的含量，制备出对重金属具备高效吸附能力的胞外聚合物，作为生物吸附剂，可用于处理低浓度重金属废水，从而减少重金属废水对环境的影响，实现人类与水资源的可持续发展。

摘要： 本发明公开了一种用于检测恶臭假单胞菌胞内c‑di‑GMP水平的报告载体及其应用，该报告载体含有第一启动子、第一报告基因、第二启动子和第二报告基因，所述第一报告基因的表达受第一启动子控制，所述第二报告基因的表达受第二启动子控制，所述第一报告基因和第二报告基因分别为lacZ基因和egfp，两者方向相反，表达互不干扰。利用本发明构建的报告载体可以对恶臭假单胞菌胞内c‑di‑GMP水平进行检测，并且还能检测比较不同外界刺激对恶臭假单胞菌胞内c‑di‑GMP水平的影响，操作简便快捷，结果准确可靠。