心肌/细胞学

摘要： 目的 探讨微小RNA-1(miR-1)对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞凋亡的调节作用.方法 体外培养大鼠胚胎心脏组织来源心肌细胞株H9c2,将处于对数生长期的细胞分为空白对照组、H/R组、miR-1模拟物(mimics) +H/R组、miR-1抑制剂反义寡核苷酸(ASO)+H/R组和微小RNA阴性对照片段(miRNA NC) +H/R组.用含低浓度胎牛血清(FBS)的低糖DMEM培养基作为缺氧条件下的培养基,置于37°C密闭无氧培养箱中(95％N2和5％ CO2)培养12h后,再换取新鲜的含5％ FBS的高糖DMEM培养基,置于37°C密闭培养箱中培养,建立心肌细胞H/R模型;空白对照组用含10％ FBS的高糖DMEM培养基,于37°C、5％ CO2培养箱中培养.miR-1 mimics+H/R组、miR-1 ASO+H/R组、miRNA NC+H/R组分别于制模前在高糖培养基中加入相应转染物,终浓度均为50 nmol/L;空白对照组和H/R组不予转染处理.制模完成后,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测细胞miR-1的表达水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测细胞凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9(caspase-9)、Bcl-2和Bax的表达水平;应用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况.结果 与空白对照组相比,H/R组心肌细胞中miR-1表达水平、caspase-9和Bax的蛋白表达水平、细胞凋亡率均明显升高,而Bcl-2表达水平明显下降,说明H/R心肌细胞中miR-1表达增加,凋亡水平升高.与H/R组相比,miR-1 mimics+H/R组心肌细胞中miR-1表达水平、caspase-9和Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率均进一步升高[miR-1(2-ΔΔCt):11.59±1.48比2.57±0.38,caspase-9蛋白(caspase-9/β-actin):2.59±0.12比1.56±0.20,Bax蛋白(Bax/β-actin):4.09±0.38比1.97±0.13,细胞凋亡率:(25.23±0.87)％比(17.86±0.73)％,均P＜0.01],而Bcl-2蛋白表达水平则进一步下降(Bcl-2/β-actin:0.37±0.02比0.49±0.03,P＜0.01);miR-1 ASO+H/R组miR-1表达水平、caspase-9和Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率显著下降[miR-1(2-ΔΔCt):1.16±0.06比2.57±0.38,caspase-9蛋白(caspase-9/β-actin):1.05±0.24比1.56±0.20,Bax蛋白(Bax/β-actin):0.93±0.11比1.97±0.13,细胞凋亡率:(11.19±0.85)％比(17.86±0.73)％,均P＜ 0.05],而Bcl-2的表达水平则显著升高(Bcl-2/β-actin:0.84±0.17比0.49±0.03,P＜0.05);miRNA NC+H/R组miR-1表达,caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表达以及细胞凋亡率与H/R组比较差异均无统计学意义.结论 H/R心肌细胞中miR-1表达增加、凋亡水平升高,且miR-1可加剧心肌细胞凋亡.

摘要： 【目的】探讨T L R3基因在脓毒症心肌损伤中的作用及其机制。【方法】选择6周雄性野生型小鼠（野生型组）和TLR3基因敲除小鼠（基因敲除组），两组均采用盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture ，CLP）制作小鼠脓毒症模型，采用12 M Hz线阵超声探头评价两组建模前后心功能指标：心率（ HR）、左室舒／缩末期内径（LVEDD ，LVESD），左室前／后壁舒张末厚度（ Awd ，Pwd）、左心室收缩期前、后壁厚度（ Aws ，Pws）、左室短轴缩短率（ FS％）。两组建模48 h后动脉采血及分离左心室心肌，检测小鼠血清肌钙蛋白I（cTnI）和心肌匀浆上清液中肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）、内皮素‐1（ET‐1）浓度。【结果】野生型组小鼠建模后心功能明显变差，表现为左室舒、缩末期内径（L V EDD ，L V ESD ）显著增大（ P ＜0．05），FS％显著降低（ P ＜0．05）。建模后野生型组小鼠的TNF‐α和ET‐1因子在心肌浓度明显升高，且与血清cTnI 呈正相关，与 TLR3基因敲除组小鼠比较有统计学差异（ P ＜0．05）。【结论】TLR3基因是脓毒症心功能损伤的因素之一，其机制可能与炎症因子浸润心肌细胞有关。%[Objective] To explore the effects and mechanism of TLR3 gene in myocardial injury during sepsis .[Methods] Male wild‐type 6‐week‐old TLR3 knockout mice were divided into two groups .A 12 M Hz high‐fre‐quency linear array probe was employed for testing heart function by transthoracic echocardiography for two groups before and 48h after surgery .After 48h ,arterial blood samples were collected and left ventricular myocardium was isolated .And the serum concentration of cardiac troponin I (cTnⅠ) and the levels of tumor necrosis factor‐alpha (TNF‐α) and endothelin 1 (ET‐1) in myocardial homogenate supernatant were detected .[Results]After compa‐ring two groups before and after surgery ,cardiac function significantly worsened after surgery .Both left ventricu‐lar end diastolic diameter (LVEDD) and left ventricular end systolic diameter (LVESD) increased significantly ( P<0 .05) while fractional shortening (FS) declined significantly ( P < 0 .05) .TNF‐α and ET‐1 significantly in‐creased in myocardium after surgery and it was positively correlated with serum cTnI .And significant differences existed with TLR3 knockout mice group ( P <0 .05) .[Conclusion] TLR3 gene is one of factors for cardiac dys‐function during sepsis .And it may be due to an infiltration of inflammatory cytokines .

摘要： Objective]To analyze the changes of miRNA expression profile in cardiomyocytes of neonate rats after hypoxia preconditioning ,and to explore the mechanism of hypoxia preconditioning and therapeutic target .[Methods]Pri‐mary cardiomyocytes of neonate rats were cultured .Survival rate of rat cardiomyocytes and lactate dehydrogenase(LDH) level were detected after hypoxia preconditioning and hypoxia reoxygenation .The expression profiles of miRNA in normal and hypoxia preconditioned cardiomyocytes were detected by miRNA genetic chip .The results were verified by real‐time quantitative polymerase chain reaction(PCR) ,and the biological function of miRNA significantly differentially expressed were analyzed .[Results]The successful establishment of hypoxia preconditioning models was verified by the results of sur‐vival rate of rat cardiomyocytes and LDH levels .The miRNA chip detection results showed that 6 miRNAs in hypoxia preconditioned cardiomyocytes were up‐regulated and 5 miRNAs were down‐regulated in comparison with normal cardio‐myocytes .The biological function of some miRNAs was related to cardiovascular function .[Conclusion]Hypoxia precon‐ditioning leads to the changes of miRNA expression profile which may serve as potential targets for the treatment of hy‐poxia reoxygenation injury .%目的 分析大鼠乳鼠心肌细胞经历缺氧预处理后miRNA的表达谱变化，探索其缺氧预处理机制和治疗靶点。方法 大鼠乳鼠心肌细胞原代培养，经过缺氧预处理和缺氧复氧损伤后检验心肌细胞存活率和乳酸脱氢酶浓度，miRNA芯片技术检测正常心肌和缺氧预处理心肌细胞miRNA表达谱差异，实时定量PCR验证结果的可信性，分析明显差异表达的miRNA的生物学功能。结果 心肌细胞存活率和乳酸脱氢酶浓度结果证实缺氧预处理模型制备成功。miRNA芯片技术结果表明，与正常对照组心肌细胞相比，缺氧预处理心肌细胞中有6个miRNA表达上调，有5个表达下调，其中一部分miRNA的生物学功能与心血管功能相关。结论 缺氧预处理可导致大鼠乳鼠心肌细胞microRNA表达谱发生变化，其可能是缺氧复氧损伤潜在的治疗靶点。

摘要： 目的:评价膜连接蛋白Junctophilin 1 (JP1)亚型在哺乳动物心肌发生过程中,基因转录和蛋白表达特征,为心肌发育生物学及心脏再生医学相关生命现象本质提供实验依据.方法:小鼠胚胎于( embryonic stem,ES)细胞相继制成单细胞悬液和悬滴,收集拟胚体转至培养皿中悬浮分化培养.每隔2d收集细胞供分子生物学评价,并于心肌分化成熟期(第17天),免疫荧光成像原位检测JP1与心肌小节蛋白α-Actinin和Troponin-T是否呈共表达,流式细胞术定量确认JP1阳染率.另以大鼠胎心为研究对象,大鼠受精后第14天起,每隔2d取胎心直至分娩新生鼠,供RT-PCR和免疫印迹实验用.结果:ES细胞分化过程中,JP1在基因转录层面全程表达,至第11天达高峰.蛋白层面呈一过性表达,在第9天达高峰,此后迅速下降,至分化培养第15天消失,分化成熟期未见表达.大鼠胎心表达趋势与ES细胞分化过程基本一致,但JP1蛋白表达持续在出生后.在分化终端,流式细胞术显示JP2和肌小节蛋白双染率达16.59％,而未见JP1阳染细胞.结论:JP1基因在小鼠ES细胞定向分化心肌细胞全程均有转录,但JP1仅在分化早期有一过性表达.大鼠胎心JP1表达趋势与ES细胞分化过程基本相一致.%Objective: To investigate the expression of Junctophilin 1 (JP1 ) in cardiogenesis of mammalian. Methods: Cardiac differentiation of embryonic stem cells (ESCs) was generated by hanging drop method. Fetal heart was obtained from the rats aged d 14-20 of gestation. The expression of JPland JP2 during cardiogenesis of ESCs and rat embryos was analyzed by RT-PCR or Western blotting. Immunofluorescence staining was employed to reveal the distribution of JP1 and JP2 in embryoid body ( EB) , probing for merging of JPland JP2 and cardiac sarcomeric α-Actinin or Troponin-T. Percentage of JPland JP2-positive staining cells was analyzed quantitatively by FCS on dl7. Results: JPl mRNA was up-regulated at the early stage (d 5-11) and then decreased. The expression of JP1 protein was up-regulated at the early stage (d 7-9) , then decreased gradually and disappeared after d 15. While JP2 gene and protein expression increased in a time-dependent manner during cardiogenesis of rat embryos. The results of immunofluorescence staining showed that there was a parallel co-localization of JP2 with Troponin-T or a-Actinin on dl7, while JP1 failed to express in the sarcomeric positive area at the same time point. Furthermore, FCS analysis showed that about 16. 59% of cells were JP2-positive, while no cells were stained positively for JPl in dl7 EBs. Conclusions: JPl gene is expressed during the whole process of cardiogenesis, while JPl protein only appears on the early stage. The expression of JPl in cardiogenesis of ESCs is consistent with that of rat embryos.

摘要： 目的 观察溶血磷脂酸 (LPA)对豚鼠心室肌细胞单通道延迟整流钾电流的影响,探讨LPA 在室性心律失常中的作用.方法 Langendorff离体心脏逆向灌流法分离豚鼠心室肌细胞,随机选取心室肌细胞分为对照组、LPA (10 μmol·L-1)组及LPA (10 μmol·L-1)+PTX(1 μmol·L-1 )组.应用细胞贴附式方式记录心室肌细胞延迟整流钾电流(Ik),分析LPA对Ik通道动力学的影响.结果 LPA组心室肌细胞通道开放时间,开放概率明显低于对照组(P＜0.05),关闭时间明显高于对照组(P＜0.05);LPA (10 μmol·L-1)+ PTX(1μmol·L-1)组通道开放时间,开放概率以及关闭时间与对照组相比,无显著差异(P>0.05).结论 LPA通过缩短开放时间、延长关闭时间、降低开放概率抑制心室肌细胞延迟整流钾电流(Ik)外流,G-蛋白耦联通路可能参与了LPA对Ik通道动力学作用的调控.%Objective To investigate the effects of lysophosphatidic acid on single-channel delayed rectifierK + current in heat ventricular myocytes of guinea pigs and explore the role of lysophosphatidic acid in ventricular arrhythm ia.Methods The Langendorff perfusion method was used to isolate ventricularm yocytes of guinea pigs and the ventricularm yocytes were random ly divided into normal control group ,LPA (10 μm ol· L 1 ) group and LPA (10 μmol· L- 1 )+ PTX (1 μm o· L- 1 )group.The current of delayed rectifier potassium channel was recorded by cell- attached recording.Results Compared with control group ,the opening dw ell time and the opening probabiiity decreased ,while the closing dwell time increased in LPA (10 μmol·L- 1 ) group ( P＜0.05 ) ;and we also found there is nothing obviously different between the LPA (10 μmol·L- 1 )+ PTX (1 μmol·L- 1 )group Compared with control group P＞0.05).Conclusion LPA inhibits delayed rectifier potassium currentb of ventricular myocyte in guinea pig by shortening its opening dwell time ,extending its closing dwell time and reducing the opening probability.The function above is mediated possibly by Gprotein-coupled receptor.

摘要： 目的 长期失重/模拟失重恢复初期因心血管功能失调而使循环系统儿茶酚胺浓度代偿性增加,在心肌β-肾上腺素受体敏感性增强的基础上,高浓度儿茶酚胺可能导致心肌细胞凋亡率增加,为保障航天员航天飞行返回地面后的健康,亟待探明心肌细胞凋亡的机制.方法 采用尾部悬吊大鼠模型在地面模拟失重.结果 本研究发现模拟失重4周大鼠心肌钙蛋白酶Calpain-2活性增加,抑制Calpains活性可防止模拟失重大鼠恢复初期发生心肌细胞凋亡.同时证实β-肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素(ISO)可诱导模拟失重大鼠心肌细胞凋亡,ISO刺激会进一步激活Calpain-2,最终导致心肌细胞凋亡增加.结论 这些结果表明:ISO是引起模拟失重大鼠恢复期心肌细胞凋亡的原因之一,Calpain-2参与了模拟失重大鼠恢复初期心肌细胞凋亡过程.

摘要： 目的:观察5-氮胞苷(5-aza)在体外诱导人骨髓间充质干细胞转化为心肌样细胞的心钠素(ANP)、脑钠素(BNP)、α-骨骼肌动蛋白(α-skeletal actin)、肌球蛋白轻链-2v(MLC-2v)、锌指结构转录因子(GATA-4)和心脏特异同源转录因子(Nkx2.5)基因表达.方法:取非血液疾病的5例胸科手术患者术中已切除掉的肋骨,抽取骨髓.利用淋巴细胞分离液行密度梯度离心法和差异贴壁法进行分离、提纯骨髓问充质干细胞,并进行培养扩增.用流式细胞仪对第2代的骨髓间充质干细胞细胞表面抗原进行测定.应用10 μmol/L 5-aza对第2代的骨髓间充质干细胞诱导24h,于诱导后1,2,3及4周,用反转录.聚合酶链反应检测ANP、BNP、α-skeletal actin、MLC-2v、GATA-4和Nkx2.5基因表达.结果:3份第2代骨髓间充质干细胞样本重复测定,表达CD29,CD44,不表达CD34,CD45.以5-aza诱导培养24 h后,骨髓间充质干细胞形态和排列方式发生明显变化,诱导1周后,细胞体积增大,多呈长梭行,平行排列;诱导2周后,细胞变为短柱状,突起位于2端,相邻细胞的突起紧密接触;诱导3周后,短柱状细胞的突起相互连接,部分细胞可见类肌管样结构;诱导4周后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构.诱导组细胞ANP、BNP、α-skeletal aetin、MLC-2v、GATA-4和Nkx2.5的聚合酶链反应产物凝胶电泳呈阳性,对照组为阴性,诱导组基因表达量均随着时间延长逐渐增加.结论:5-aza可诱导骨髓间充质于细胞向心肌样细胞转化,其处于祖心肌细胞和分化的心肌细胞之间,并可能具有心肌细胞的功能.

摘要： 目的 观察艾司洛尔对豚鼠心室肌细胞动作电位(AP)和L-型钙离子通道的影响.方法 Langendorff离体心脏逆向灌流法分离豚鼠心室肌细胞,随机选取心室肌细胞分为正常对照组和艾司洛尔(50 μmol/L和100 μmol/L)组.应用全细胞电流钳模式记录心室肌细胞AP,应用电压钳模式记录L-型钙离子通道电流(ICa-L).结果 艾司洛尔(100 μmol/L )可使心肌细胞AP时程APD20、APD50明显缩短(P<0.05),心室肌细胞ICa-L峰值电流明显降低(P<0.05).结论 艾司洛尔缩短心室肌细胞AP时程和抑制钙通道可能是其抑制交感风暴的机制之一.

摘要： [目的]制备携带萤火虫荧光素酶基因的重组AAV1病毒(rAAV1-Luc),观察该病毒载体体外转染大鼠心肌细胞培养细胞.[方法]通过"一株载体细胞/一株辅助病毒"的双因素包装策略制备出rAAV1-Luc,AAV1-Luc按转染复数(MOI) 1×102、1×103、1×104、1×105、1×106、2×106 v.g./cell转染大鼠心肌细胞(H9C2细胞)96 h后,检测荧光素酶的表量,并在光镜下观察转染后细胞生长形态.[结果]成功的制备了重组AAV1-Luc;rAAV1-Luc能有效地转染H9C2细胞,转染后,细胞生长及形态正常;一定范围内,随着rAAV1-Luc转染细胞的MOI(即每个细胞感染的病毒基因组数)值增高,荧光素酶的表达水平也增高,MOI为1×106但表达量达到最高,更高的MOI(大于107)反而使荧光素酶的表达水平下降.[结论]本研究为开展rAAV1载体介导转移心肌细胞的基因治疗打下了良好的基础.

摘要： 本发明的课题在于，改善纯化至不含有心肌细胞以外的细胞且不含有来源于其他物种的成分的心肌细胞在移植后的存活率。为了解决上述课题，本发明人等就经纯化的心肌细胞是否能够构筑细胞块进行了研究。其结果明确了：通过提供一种制备来源于多能干细胞的心肌细胞的细胞块的方法，可以解决上述课题。该方法的特征在于，将心肌细胞用无血清条件下的培养基进行培养，使该细胞聚集，所述心肌细胞为如下的心肌细胞：使包含由多能干细胞分化、诱导出的心肌细胞的、聚集状态的细胞块分散并单细胞化，从而得到的经纯化的来源于多能干细胞的心肌细胞。

摘要： 本发明以开发下述方法的课题，即，利用了在目前以纯化心肌细胞为目的研究中从未想到过利用的诸多性质、以及新发现的诸多性质，可在不改变遗传基因，不添加特别的蛋白质及生理活性物质的情况下，从含有来源于胚胎及干细胞的心肌细胞的细胞混合物中，高度且高收率的纯化心肌干细胞。本发明者们发现，通过在低血清条件、低糖条件、低营养条件、低钙条件、弱酸性pH条件、添加乳酸条件、添加天门冬氨酸·谷氨酸条件、和/或添加丙酮酸条件的培养液中培养胚胎干细胞来源的心肌细胞，可有效且高收率的选择和纯化心肌细胞。另外，还发现在胚胎干细胞中发现的方法还可应用于胎儿来源的心肌细胞的选择和纯化、或成体干细胞来源的心肌细胞的选择和纯化。

摘要： 本发明涉及产生胚胎干细胞来源的心肌细胞的方法和由所述方法产生的心肌细胞、由心肌细胞产生心肌细胞聚集体的方法和由所述方法产生的心肌细胞聚集体、用于治疗心脏病的包含所述心肌细胞聚集体作为活性成分的细胞治疗产品、使用所述细胞治疗产品治疗心脏病的方法、以及心肌细胞和心肌细胞聚集体用于产生细胞治疗产品的用途。通过使用本发明的产生心肌细胞的方法，可以容易地纯化胚胎干细胞来源的心肌细胞，并且心肌细胞聚集体可以由纯化的心肌细胞产生，因此可用作可以用于治疗心脏病的细胞治疗产品。因此，本发明可以广泛用于开发用于预防或治疗多种心脏病的制剂。

摘要： 本发明公开了一种诱导干细胞往心肌细胞方向分化及心肌细胞传代与纯化的方法及药剂，属于人多能干细胞向心肌细胞分化调控及维持技术领域。该诱导干细胞往心肌细胞方向分化的方法包括：将人多能干细胞置于含烟酰胺的第一培养基中培养，第一培养基为E5培养基。心肌细胞的传代方法包括：将心肌细胞置于含烟酰胺的第二培养基中培养，第二培养基为E6培养基。心肌细胞的纯化方法包括：将传代处理后的心肌细胞置于含烟酰胺的第三培养基中培养，第三培养基为E6培养基。上述方法能够为人多能干细胞来源的心肌细胞的产生和传代培养提供有效可行的新方法，且效率稳定，费用较低，利于大规模生产。相应的药剂应用前景较广。

摘要： 本发明公开了一种氯离子阻断剂诱导干细胞分化成心肌细胞的方法及心肌细胞与其应用，属于人多能干细胞向心肌细胞分化调控技术领域，其包括以下步骤：于含有分化第3‑5天的干细胞的分化培养基中加入氯离子通道阻断剂以诱导干细胞向心肌方向分化。该方法的特点是采用氯离子阻断剂来诱导干细胞向心肌方向分化。本申请详细阐述了该方法的具体操作步骤，并对分化的心肌细胞进行了鉴定和功能分析，为人多能干细胞来源的心肌细胞的产生提供了新思路。

摘要： 本发明涉及细胞片的制造方法，所述方法包含下述工序：在使动物细胞朝培养液的中央方向集中的同时对培养液中分散的动物细胞进行悬浮培养，在所述培养液中形成悬浮的细胞片。

摘要： 公开了用于从多能干细胞产生心肌细胞群体的方法。群体可以对于心房心肌细胞或心室心肌细胞进行富集，并且所得到的心室群体可以基本上不含起搏细胞。该方法包括使在合适的培养基中的多能干细胞与BMP组分和激活素组分一起温育，激活素的量可以改变以富集心房心肌细胞或心室心肌细胞。公开了富集的群体，以及使用其治疗需要心脏修复的患者的方法。

摘要： 本发明以开发下述方法的课题，即，利用了在目前以纯化心肌细胞为目的研究中从未想到过利用的诸多性质、以及新发现的诸多性质，可在不改变遗传基因，不添加特别的蛋白质及生理活性物质的情况下，从含有来源于胚胎及干细胞的心肌细胞的细胞混合物中，高度且高收率的纯化心肌干细胞。本发明者们发现，通过在低血清条件、低糖条件、低营养条件、低钙条件、弱酸性pH条件、添加乳酸条件、添加天门冬氨酸·谷氨酸条件、和/或添加丙酮酸条件的培养液中培养胚胎干细胞来源的心肌细胞，可有效且高收率的选择和纯化心肌细胞。另外，还发现在胚胎干细胞中发现的方法还可应用于胎儿来源的心肌细胞的选择和纯化、或成体干细胞来源的心肌细胞的选择和纯化。

摘要： 本发明的课题在于，改善纯化至不含有心肌细胞以外的细胞且不含有来源于其他物种的成分的心肌细胞在移植后的存活率。为了解决上述课题，本发明人等就经纯化的心肌细胞是否能够构筑细胞块进行了研究。其结果明确了：通过提供一种制备来源于多能干细胞的心肌细胞的细胞块的方法，可以解决上述课题。该方法的特征在于，将心肌细胞用无血清条件下的培养基进行培养，使该细胞聚集，所述心肌细胞为如下的心肌细胞：使包含由多能干细胞分化、诱导出的心肌细胞的、聚集状态的细胞块分散并单细胞化，从而得到的经纯化的来源于多能干细胞的心肌细胞。

摘要： 本发明以开发下述方法的课题，即，利用了在目前以纯化心肌细胞为目的研究中从未想到过利用的诸多性质、以及新发现的诸多性质，可在不改变遗传基因，不添加特别的蛋白质及生理活性物质的情况下，从含有来源于胚胎及干细胞的心肌细胞的细胞混合物中，高度且高收率的纯化心肌干细胞。本发明者们发现，通过在低血清条件、低糖条件、低营养条件、低钙条件、弱酸性pH条件、添加乳酸条件、添加天门冬氨酸·谷氨酸条件、和/或添加丙酮酸条件的培养液中培养胚胎干细胞来源的心肌细胞，可有效且高收率的选择和纯化心肌细胞。另外，还发现在胚胎干细胞中发现的方法还可应用于胎儿来源的心肌细胞的选择和纯化、或成体干细胞来源的心肌细胞的选择和纯化。