一步法RT-PCR
一步法RT-PCR的相关文献在2001年到2022年内共计69篇,主要集中在畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂、植物保护、园艺
等领域,其中期刊论文65篇、会议论文4篇、专利文献104776篇;相关期刊44种,包括中国法医学杂志、石河子大学学报(自然科学版)、中国病毒学等;
相关会议3种,包括广西畜牧兽医学会养猪学分会2010年年会暨学术报告会、中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会、中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会等;一步法RT-PCR的相关文献由291位作者贡献,包括于新友、李天芝、沈志强等。
一步法RT-PCR—发文量
专利文献>
论文:104776篇
占比:99.93%
总计:104845篇
一步法RT-PCR
-研究学者
- 于新友
- 李天芝
- 沈志强
- 王金良
- 李峰
- 李玉峰
- 王莉莉
- 黄兵
- 刘玉山
- 周常勇
- 周彦
- 唐科志
- 施开创
- 李军
- 杨荣
- 王志亮
- 胡丽萍
- 莫玲
- 莫胜兰
- 郑敏
- 陈溥言
- 马秀丽
- 云涛
- 刘加波
- 华炯钢
- 叶伟成
- 向本春
- 吕婵娟
- 唐小飞
- 孟良玉
- 宋翠平
- 庄金秋
- 庞耀珊
- 廖敏
- 张存
- 张永江
- 李文佳
- 李新霞
- 李洪安
- 李锋
- 梁学超
- 胡文浩
- 苏海娣
- 谢志勤
- 谢芝勋
- 赵凤菊
- 邓显文
- 郑东霞
- 郑银英
- 陆天才
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肖亦辰;
杨颖;
马平;
赵冬敏;
章丽娇;
刘青涛;
杨婧;
李银;
刘宇卓;
韩凯凯;
黄欣梅
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摘要:
新型鹅星状病毒(goose astrovirus, GoAstV)感染引起的鹅痛风病,是近年严重危害我国养鹅业的传染病之一,给我国养鹅产业造成严重经济损失,快速准确诊断有助于更好地防控该病。为了建立一种鉴定新型GoAstV的一步法RT-PCR方法,根据新型GoAstV ORF2基因序列设计特异性引物,构建质粒标准品,并对引物用量和退火温度等反应体系和条件进行了优化。结果表明,该方法能特异性扩增新型GoAstV 512 bp基因片段,其他鹅常见病毒性病原扩增结果均为阴性,具有较高的特异性。敏感性试验结果提示,最小检测限量达4.54×10^(2)拷贝/μL。此外,该方法重复性良好,应用所建立的方法对新型GoAstV临床样品进行检测,102份鹅泄殖腔拭子的阳性率为46.08%,24份痛风症状患病鹅内脏样本阳性率为91.70%。本研究建立的新型GoAstV一步法RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,且操作简便、经济、快速,可用于新型GoAstV的临床鉴别诊断和流行病学调查。
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王宏宇;
朱寅初;
云涛;
华炯钢;
叶伟成;
倪征;
陈柳;
张存
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摘要:
鹅星状病毒(GAstV)是近年临床新发病原,也是导致当前雏鹅痛风致死的主要病因,研究显示该病毒存在两种不同基因型.为建立快速准确的核酸鉴别诊断方法,本研究针对不同基因型GAstV保守域RNA依赖性RNA聚合酶序列各设计1对特异性引物,建立以RNA为模板的双重一步法RT-PCR检测方法.条件优化试验结果显示,双重RT-PCR方法彼此无干扰;引物特异性强,对坦布苏病毒、鹅细小病毒、呼肠孤病毒、鸭瘟病毒的检测均为阴性;体系中引物适宜浓度为1μmol,退火温度范围广,50~54°C皆可;敏感性高,最低检测限分别为103拷贝数和102拷贝数.对采集自江浙地区的73份样品进行检测,结果显示,鹅星状病毒阳性率为93.2%,主要为Ⅱ型星状病毒的单一感染(阳性率86.3%),部分样品呈现两种类型星状病毒混合感染现象(阳性率6.8%).上述结果表明本研究建立的双重RT-PCR方法可用于GAstV的鉴别诊断和分子流行病学调查.
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李文佳;
陈姗;
高旭
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摘要:
为建立犬瘟热病毒(CDV)的一步法RT-PCR检测方法,并将其应用于临床实践检测.本研究根据GenBank上已登录的CDV基因序列,设计一对特异性引物,建立CDV一步法RT-PCR检测方法,并将该方法应用于临床检测.结果显示,该方法具有较好的敏感性、特异性和重复性,可用于CDV感染的早期诊断和病原监测.
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陈姗;
李文佳;
鲁旭波;
高旭;
梁晚枫;
鲁承
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摘要:
为建立延边黄牛牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的一步法RT-PC检测方法,根据GenBank上已登录的BVDV基因序列,应用Oligo6.0设计一对特异性引物,建立BVDV的一步法RT-PCR检测方法,并将该方法应用于临床检测.结果 显示,该方法对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因扩增均为阴性,敏感性为1 ng基因组RNA,具有较好的敏感性、特异性和重复性,可用于延边黄牛BVDV感染的早期诊断和病原体监测.
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张康;
王丹阳;
王旭荣;
张凯;
张景艳;
王磊;
李建喜
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摘要:
根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立了BVDV的RT-PCR检测方法.该方法从BVDV标准毒株NADL中扩增出了279bp的特异性片段,而对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛轮状病毒、MDBK细胞等的扩增结果均为阴性.经对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达10-1×TCID50.提取9份细胞毒总RNA后,进行一步法RT-PCR扩增可获得一致的检测结果,说明该方法重复性很好.应用该方法对45份临床疑似患牛的样品进行检测,结果检出4份阳性,表明该方法具有较好的临床应用性,且检测结果与参考实验室检测结果完全相符,可用于BVDV的快速诊断.
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葛玉凤;
崔治亮;
高广仁;
刘学荣;
武发菊;
安芳兰
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摘要:
为建立一种快速检测猪瘟(CSF)疫苗中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)污染的方法,试验根据GenBank上登录的BVDV 5'端非编码区基因组序列设计1对引物,经一步法RT-PCR反应条件的优化,建立了检测猪瘟疫苗中BVDV污染的一步法RT-PCR.结果表明:该方法对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒、牛副流感病毒3型、牛传染性鼻气管炎病毒的扩增结果均为阴性,对BVDV基因组RNA的检测灵敏度达0.1 ng,与细胞培养法的符合率达100%.应用该方法对猪瘟疫苗、牛血清等138份样品进行BVDV污染的检测,阳性污染率达11.59%.该一步法RT-PCR具有良好的特异性、敏感性、准确性和适用性,可用于猪瘟疫苗生产中血清、细胞、毒种、半成品等的质量控制及猪瘟疫苗临床应用中的质量检验.
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杨世安;
李战彪;
秦碧霞;
谢慧婷;
崔丽贤;
苏琴;
邓铁军;
蔡健和
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摘要:
瓜类褪绿黄化病毒Cucurbits chlorotic yellows virus(CCYV)、甜瓜黄化斑点病毒Melon yellow spot virus (MYSV)及甜瓜坏死斑点病毒Melon necrotic spot virus (MNSV)是近年来报道侵染瓜类作物的新病毒,在个别种植区大面积发生,对生产构成严重威胁.为了解3种病毒在广西的发生情况,先后到各西甜瓜种植区进行了调查,并采集疑似CCYV、MYSV及MNSV的甜瓜病叶样品,提取病叶总RNA,通过特异性引物分别进行一步法RT-PCR扩增,电泳结果显示RT-PCR产物与预期大小一致的序列条带;将扩增产物分别连接到pMD19-T克隆载体上,挑选阳性克隆子进行序列测定及比对分析.结果表明:CCYV、MYSV和MNSV广西分离物的CP基因序列与其他已报道核苷酸序列一致性分别达95.1%~100%、96.5%~99%和83.7%~92.5%.%Cucurbit chlorotic yellows virus (CCYV),Melon yellow spot virus (MYSV) and Melon necrotic spot virus (MNSV),which were emerging threat to melon plantation,have recently been found infecting melons in some large melon-growing areas.In order to understand the incidences of these three viruses,a survey was conducted on these viruses on melons,and leaves infected by CCYV,MYSV and MNSV were collected from Nanning and Beihai,Guangxi.Total RNAs were extracted from these diseased samples and RT-PCR was performed by using specific primers.The PCR products were purified and inserted into pMD19-T cloning vector,and the expected DNA fragment were sequenced and analyzed by BLASTn in GenBank.The results showed that nucleocapsid protein gene sequences of CCYV,MYSV and MNSV isolates from Guangxi had 95.1%-100%,96.5 %-99% and 83.7%-92.5 % identities with those of the isolates from other parts of China or some countries reported previously.
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赵凤菊;
关淼;
李井春;
关乃鹏;
陈瑶;
赵晓彤
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摘要:
为建立一种快速检测猪A群轮状病毒的检测方法,基于猪A群轮状病毒NSP4基因序列利用Premier 5.0软件设计并合成了一对特异性引物,建立了猪A群轮状病毒一步法RT-PCR检测方法,通过反复试验确定了引物的最佳退火温度为56°C,通过灵敏性试验确定了最低的检测浓度为13.17 pg/μL,通过特异性与稳定性试验表明该方法具有良好的特异性与稳定性,同时应用该方法对临床病料进行了检测,并选取扩增阳性样品进行了序列测定与分析,样品阳性率为90% (27/30),与GenBank中其他猪A群轮状病毒NSP4基因序列同源性均在98%以上.结果表明:该方法具有良好的灵敏性、特异性与稳定性,可以为猪A群轮状病毒病的快速检测和流行病学调查提供有效的技术手段.
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郭敏;
鱼轲;
刘军;
刘艳;
魏至栋
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摘要:
目的 对生物制品生产过程中使用的牛源材料(牛血清、牛源细胞等)进行牛病毒性腹泻病毒(BVDV)检测以保证制品的生物安全性.方法 参照制药质量体系Q10(ICH Q10)对杂质的定性检测要求,采用一步法RT-PCR检测BVDV的5'-UTR保守区,并对其特异性、敏感性和重复性进行验证,然后将其应用于牛源材料中BVDV的检测.结果 扩增产物为250 bp的目的片段,测序后经序列比对分析软件BLAST比对,同源性达99%,且与其他5种牛源病毒均无相关性;敏感度达1CCID5o/mL.应用该方法对牛血清、牛鼻甲骨细胞(BT)、牛肾原代细胞、MDBK细胞等样品进行检测,15份为阳性,阳性检出率为12%.结论 一步法RT-PCR检测BVDV,特异性强、重复性好、敏感性高,可用于牛源材料中BVDV的快速检测.
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黄兵;
南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室;
马秀丽;
王莉莉;
李玉峰;
刘玉山;
陈溥言
- 《中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会》
| 2005年
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摘要:
建立简便的一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(AIV)的血凝素(HA)分型进行了研究.参照AIV的HA基因序列设计了1对引物,对H9和H5亚型AIV的扩增产物大小分别为579bp和177bp,很容易通过凝胶电泳进行辨别.该引物与EDSV、NDV、IBV、IBDV、REV、REOV及SPF鸡肌肉组织的核酸无交叉反应,对Genebank收录的部分毒株HA序列的互补性分析结果进一步核实了检测引物的特异性.敏感性分析发现,从50pg的AIV总RNA中亦能检测到目的条带.这些结果表明,此次利用1对引物建立的一步法RT-PCR简便适用,可以在一个反应管中同时将H9和H5亚型AIV进行快速检测和分型.同时,两个亚型的扩增产物均包含了裂解位点在内的HA基因序列,可通过测序推导出氨基酸顺序以判定H5或H9亚型禽流感病毒的潜在毒力。
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黄兵;
南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室;
马秀丽;
王莉莉;
李玉峰;
刘玉山;
陈溥言
- 《中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会》
| 2005年
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摘要:
建立简便的一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(AIV)的血凝素(HA)分型进行了研究.参照AIV的HA基因序列设计了1对引物,对H9和H5亚型AIV的扩增产物大小分别为579bp和177bp,很容易通过凝胶电泳进行辨别.该引物与EDSV、NDV、IBV、IBDV、REV、REOV及SPF鸡肌肉组织的核酸无交叉反应,对Genebank收录的部分毒株HA序列的互补性分析结果进一步核实了检测引物的特异性.敏感性分析发现,从50pg的AIV总RNA中亦能检测到目的条带.这些结果表明,此次利用1对引物建立的一步法RT-PCR简便适用,可以在一个反应管中同时将H9和H5亚型AIV进行快速检测和分型.同时,两个亚型的扩增产物均包含了裂解位点在内的HA基因序列,可通过测序推导出氨基酸顺序以判定H5或H9亚型禽流感病毒的潜在毒力。
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黄兵;
南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室;
马秀丽;
王莉莉;
李玉峰;
刘玉山;
陈溥言
- 《中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会》
| 2005年
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摘要:
建立简便的一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(AIV)的血凝素(HA)分型进行了研究.参照AIV的HA基因序列设计了1对引物,对H9和H5亚型AIV的扩增产物大小分别为579bp和177bp,很容易通过凝胶电泳进行辨别.该引物与EDSV、NDV、IBV、IBDV、REV、REOV及SPF鸡肌肉组织的核酸无交叉反应,对Genebank收录的部分毒株HA序列的互补性分析结果进一步核实了检测引物的特异性.敏感性分析发现,从50pg的AIV总RNA中亦能检测到目的条带.这些结果表明,此次利用1对引物建立的一步法RT-PCR简便适用,可以在一个反应管中同时将H9和H5亚型AIV进行快速检测和分型.同时,两个亚型的扩增产物均包含了裂解位点在内的HA基因序列,可通过测序推导出氨基酸顺序以判定H5或H9亚型禽流感病毒的潜在毒力。
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黄兵;
南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室;
马秀丽;
王莉莉;
李玉峰;
刘玉山;
陈溥言
- 《中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会》
| 2005年
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摘要:
建立简便的一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(AIV)的血凝素(HA)分型进行了研究.参照AIV的HA基因序列设计了1对引物,对H9和H5亚型AIV的扩增产物大小分别为579bp和177bp,很容易通过凝胶电泳进行辨别.该引物与EDSV、NDV、IBV、IBDV、REV、REOV及SPF鸡肌肉组织的核酸无交叉反应,对Genebank收录的部分毒株HA序列的互补性分析结果进一步核实了检测引物的特异性.敏感性分析发现,从50pg的AIV总RNA中亦能检测到目的条带.这些结果表明,此次利用1对引物建立的一步法RT-PCR简便适用,可以在一个反应管中同时将H9和H5亚型AIV进行快速检测和分型.同时,两个亚型的扩增产物均包含了裂解位点在内的HA基因序列,可通过测序推导出氨基酸顺序以判定H5或H9亚型禽流感病毒的潜在毒力。
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黄兵;
南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室;
马秀丽;
王莉莉;
李玉峰;
刘玉山;
陈溥言
- 《中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会》
| 2005年
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摘要:
建立简便的一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(AIV)的血凝素(HA)分型进行了研究.参照AIV的HA基因序列设计了1对引物,对H9和H5亚型AIV的扩增产物大小分别为579bp和177bp,很容易通过凝胶电泳进行辨别.该引物与EDSV、NDV、IBV、IBDV、REV、REOV及SPF鸡肌肉组织的核酸无交叉反应,对Genebank收录的部分毒株HA序列的互补性分析结果进一步核实了检测引物的特异性.敏感性分析发现,从50pg的AIV总RNA中亦能检测到目的条带.这些结果表明,此次利用1对引物建立的一步法RT-PCR简便适用,可以在一个反应管中同时将H9和H5亚型AIV进行快速检测和分型.同时,两个亚型的扩增产物均包含了裂解位点在内的HA基因序列,可通过测序推导出氨基酸顺序以判定H5或H9亚型禽流感病毒的潜在毒力。
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王志亮;
徐江涛;
孙承英;
郑东霞;
孟良玉;
魏荣;
宋翠平
- 《中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会》
| 2004年
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摘要:
本研究利用一步法RT-PCR技术成功扩增了65个新城疫病毒分离株的F基因片段(约500bp),其中3株属于鸽源病毒,2株属于鹅源病毒,3株分离于鸵鸟,1株分离自麻雀.通过对分离株的测序和基因分型表明,47株属于基因Ⅶ型,6株属于基因Ⅵ型,6株属于基因Ⅲ型,6株属于基因Ⅱ型,另外NDV026从氨基酸方面分析属于强毒,但从进化树方面看属于基因Ⅱ型,并且,扩增的片段除112、115、117位氨基酸与强毒相同外,其它位点则与基因Ⅱ型几乎相同,对于该毒株的具体分型有待从更多的基因上作进一步研究.结果表明,2003年我国新城疫流行株主要为基因Ⅶ型.
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王志亮;
徐江涛;
孙承英;
郑东霞;
孟良玉;
魏荣;
宋翠平
- 《中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会》
| 2004年
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摘要:
本研究利用一步法RT-PCR技术成功扩增了65个新城疫病毒分离株的F基因片段(约500bp),其中3株属于鸽源病毒,2株属于鹅源病毒,3株分离于鸵鸟,1株分离自麻雀.通过对分离株的测序和基因分型表明,47株属于基因Ⅶ型,6株属于基因Ⅵ型,6株属于基因Ⅲ型,6株属于基因Ⅱ型,另外NDV026从氨基酸方面分析属于强毒,但从进化树方面看属于基因Ⅱ型,并且,扩增的片段除112、115、117位氨基酸与强毒相同外,其它位点则与基因Ⅱ型几乎相同,对于该毒株的具体分型有待从更多的基因上作进一步研究.结果表明,2003年我国新城疫流行株主要为基因Ⅶ型.
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- 贵州大学
- 公开公告日期:1999-04-14
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摘要:
本发明是一步解氯制备硫酸钾及一步生产氮磷钾复肥的方法,是以氯化钾和硫酸铵为原料制备硫酸钾,并利用其母液生产氮磷钾复肥和普通过磷酸钙。在制备过程中加入解氯剂,于常温常压下,一步制备得农用硫酸钾,并利用分离硫酸钾后的母液配酸处理磷矿粉,一步生产氮磷钾复肥和含一定量氮钾的普通过磷酸钙,无废渣、废液产生。所生产的复肥既可作烤烟专用肥,也可作通用复肥。
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- 亨克尔两合股份公司
- 公开公告日期:2000-04-05
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摘要:
为了提高牢度,推荐一种用于粘合装订书籍的光敏感的黏合剂,它可以发生自由基和/或阳离子反应。它可以应用于一步法或二步法中。作为第二种黏合剂,考虑通常的熔体黏合剂和分散体黏合剂。新方法还简化了操作,因为罐装时间长短随意。
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