异构酶

摘要： 碳酸酐酶IX(CAIX)是碳酸酐酶的一种异构酶,作用于细胞增殖和肿瘤的形成过程中,并且和肿瘤的乏氧代谢密切相关。以苯磺酰胺为母体构建了30种抑制剂分子,使用AutoDock4.2将30种抑制剂分子对接到CAIX的活性中心。结果表明:抑制剂分子氨基上的H与THR198上的O形成氢键,活动中心的金属离子Zn^(2+)与小分子、HIS93、HIS91、HIS117形成配位键,使抑制剂分子能够稳定在CAIX的活动中心。5、6、7、30号抑制剂分子与CAIX的结合最稳定,结合能分别是-7.31、-9.19、-9.86、-7.29 kcal/mol。

摘要： 异构体是指具有相同分子式而原子空间排布不同的化合物,异构体现象在自然界中广泛存在,例如常见的糖类、氨基酸、手性药物等化合物.催化异构体之间相互转化的反应即为异构反应,生物体内的异构反应主要通过异构酶来实现.随着现代生物技术的不断发展,越来越多的异构酶获得了挖掘、研究、应用,多种化合物可以通过生物异构反应来制造,这对于化工产业是强有力的补充与发展.研究人员结合自身工作,综述了近年来异构酶在生物化工领域的研究与应用进展.

摘要： 来源于痤疮丙酸杆菌异构酶(Propionibacterium acnes isomerase,PAI)能够将亚油酸转化成反式10,顺式12-共轭亚油酸(trans 10,cis 12-conjugated linoleic acid,t10c12-CLA),饲喂t10c12-CLA的动物会减少脂肪沉积和乳脂含量,能量的动态平衡受到影响.本研究用密码子优化的pai基因转染小鼠(Mus musculus)3T3细胞,经高压气相色谱分析证实,PAI将底物亚油酸高效催化成t10c12-CLA,t10c12-CLA含量最高达到了细胞内多不饱和脂肪酸总量的7.09％;与转染pIRES2-AcGFP1的对照细胞株比较,转染pai基因并合成t10c12-CLA的细胞株出现亚油酸积累(12.46％vs 14.38％～15.54％)(P<0.05)和花生四烯酸减少(13.31％vs 9.03％～11.13％)(P<0.05),同时硬脂酸(14.07％vs 11.85％～12.54％)(P<0.05)和油酸(20.29％vs 14.89％～16.87％)(P<0.05)同步减少.qPCR结果显示,pai转染细胞中生成的t10c12-CLA可上调硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase 1,scd1)基因表达(P<0.05),可能是转基因细胞中硬脂酸含量下降的原因;但是,外源t10c12-CLA没有下调脂肪酸去饱和酶1(fatty acid desaturase 1,fads1)和fads2基因表达.高压气相色谱检测结果显示,外源添加的t10c12-CLA阻滞了亚油酸向下游花生四烯酸的代谢(P<0.05),即t10c12-CLA可能竞争性结合FADS2/FADS1酶系,从而抑制亚油酸向花生四烯酸的正常代谢.本研究证实微生物的pai基因能够在哺乳动物细胞中正常表达并生产t10c12-CLA,可为研制pai转基因动物提供参考依据.

摘要： [背景]D-甘露糖的酶促转化方法已受到相当大的关注.[目的]研究D-葡萄糖异构酶(D-glucose isomerase,D-GIase)和D-来苏糖异构酶(D-lyxose isomerase,D-LIase)共表达于大肠杆菌细胞生产D-甘露糖的工艺条件.[方法]将D-GIase和D-LIase基因片段合成后酶切连接到载体pCDFDuet-1上,构建pCDFDuet-Acce-DGI/Peba-DLI重组质粒并导入到大肠杆菌BL21(DE3)中共表达,通过摇瓶培养得到产D-GIase和D-LIase的菌体,测定该共表达细胞体系的反应条件.[结果]添加1 mmol/L Co2+,共表达体系酶的最适温度和pH分别为70°C和6.0.以浓度分别为100、300、500 g/L的D-葡萄糖为底物生产D-甘露糖,平衡后D-甘露糖质量浓度分别为13.8、38.1、62.6 g/L,相应的转化率分别为13.8％、12.7％、12.5％,D-葡萄糖、D-果糖和D-甘露糖的平衡比约为50:37.5:12.5.[结论]D-GIase和D-LIase在大肠杆菌细胞中组成的共表达体系通过一锅法可利用D-葡萄糖为底物生产D-甘露糖.

摘要： [背景]L-异亮氨酸(L-isoleucine,L-Ile)和L-别异亮氨酸(L-allo-isoleucine,L-allo-Ile)是自然界中广泛存在的一对同分异构体.抗感染抗生素Desotamides结构中含L-别异亮氨酸结构单元,其生物合成途径中的氨基转移酶DsaD和异构酶DsaE可以协作催化L-异亮氨酸和L-别异亮氨酸相互转化.[目的]通过理性设计,使氨基转移酶DsaD和异构酶DsaE融合表达,研究融合蛋白DsaDE催化异亮氨酸和别异亮氨酸相互转化的功能.[方法]利用PCR分别扩增dsaE基因编码区DNA片段、以及含dsaD基因编码区和114个碱基接头序列的DNA片段dsaD-linker,利用酶切位点KpnⅠ将dsaE和dsaD-linker相连,形成dasDE重组序列,并克隆至pET28a(+)中,将重组质粒pET28a-dsaDE转化至Escherichia coli BL21 (DE3)中进行融合表达,利用Ni-NTA亲和层析法纯化融合蛋白DsaDE;分别以L-异亮氨酸和L-别异亮氨酸为底物进行融合蛋白的体外酶活性检测,利用高效液相色谱对酶反应产物进行分析.[结果]PCR验证、酶切验证以及测序结果证明pET28a-dsaDE重组载体具有正确序列;N-末端和C-末端融合6个组氨酸标签的融合蛋白DsaDE在E.coli BL21 (DE3)中获得可溶性表达,经Ni-NTA亲和层析法一步纯化获得纯度约95％的融合蛋白,纯化的融合蛋白DsaDE具有较好的活性,能够催化L-isoleucine和L-allo-isoleucine间的相互转化.[结论]氨基转移酶DsaD和异构酶DsaE成功融合表达,经一步Ni-NTA亲和层析法纯化即可获得纯度较高的融合蛋白,融合蛋白同时具有氨基转移酶和异构酶的活性,为进一步研究L-别异亮氨酸的工业化生产奠定了基础.

摘要： 文章以高纯葡萄糖浆为主要原料,采用异构酶法制备果葡糖液,后经脱色、精滤、离子交换、真空蒸发浓缩等工序制得果葡糖浆产品.通过单因素试验,并结合二次回归正交旋转组合设计进行异构酶法工艺条件研究,得出其最佳工艺条件.研究结果表明异构酶法的最佳工艺条件为:葡萄糖液浓度为47%(W/W),pH为8.3,温度为60°C,葡萄糖异构酶添加量为10.2mg/g葡萄糖,异构时间为38h,此条件下测得果葡糖浆中的果糖含量为18.52%.

摘要： 十七羟脱氢酶(17β-HSDs)是一类与固醇类激素代谢直接相关的酶,它们催化雌激素活化的第一步和雄激素降解的最后一步,同时17β-HSDs在脂肪酸和胆固醇代谢中也起着重要作用.十七羟脱氢酶家族包括十五种异构酶,它们在体内各组织中广泛分布.这些异构酶的变异会导致体内雌雄激素水平异常,阻碍脂肪酸和胆固醇代谢,进而诱发乳腺癌和前列腺癌等疾病的发生.根据其在体内参与的代谢途径,可以划分为三类:一是与雌雄激素代谢直接相关的异构酶,包括17β-HSD1、17β-HSD2、17β-HSD5、17β-HSD7和17β-HSD14;二是与胆固醇和脂肪酸代谢等相关的异构酶,包括17β-HSD3、17β-HSD4、17β-HSD8、17β-HSD10和17β-HSD12;三是一些新近发现的酶,包括17β-HSD11、17β-HSD13和17β-HSD15.本文就这些异构酶的细胞定位、组织分布、空间结构、生理功能及与疾病关联等方面的研究进展进行了综述,并指出今后研究重点和发展趋势,以期为相关疾病的预防和治疗提供积极有益的参考.

摘要： 用中间产物学说和化学反应的过渡态理论探讨了顺乌头酸酶为何不宜被划分为异构酶的原因.

摘要： 本文主要对D-塔格糖-3-差向异构酶(D-TE)，L-阿拉伯糖异构酶(L-AI)以及L-鼠李糖异构酶(L-RhI)等酶进行了研究。结果表明后两种酶能实现醛和酮之间的相互转化。同时，研究了L-AI对稀少糖的转化作用。

摘要： 葡萄糖异构酶是水溶性酶，固定化葡萄糖异构酶是指通过物理、化学的方法把这种酶固定在不溶性的固体载体上，使载体具有较高的酶活性。得到的固定化酶可以把底物葡萄糖部分的转化为果糖，这种葡萄糖和果糖的混合糖浆称为果葡糖浆。由于固定化酶有许多优点，如:酶可长期多次使用，工业生产可连续化、自动化，易于控制，避免不利副产品的反应发生和产品易精制，从而提高了产品质量，降低了生产成本。因此，固定化葡萄糖异构酶这一新技术的问世促进了果葡糖浆事业的飞跃发展。本文对菌种的筛选、固定化酶制备条件的选择及固定化酶的主要性质进行介绍，简述了工业化生产固定化酶的方法。

摘要： 本文对微生物转化法生产CLA进行介绍，简述了亚油酸异构酶的特性研究，指出目前，亟待解决的问题是继续筛选高产菌株，改良现有的菌种，并进一步优化发酵条件以提高CLA的产量，同时开展对亚油酸异构酶的结构和性质的研究，利用生物工程和基因工程对亚油酸异构酶进行有效地改造，以应用于CLA的生产过程中。

摘要： 本文主要介绍了果葡糖浆及其用途和生产工艺过程,异构化条件,系统及生产运行要点等.通过分析认为;正确的工艺设计,精准的工艺控制,熟练的系统操作和科学的工艺管理是保证高效生产果葡糖浆的关键.并就这些关键因素做了相关阐述.

摘要： 本文主要介绍了果葡糖浆及其用途和生产工艺过程,异构化条件,系统及生产运行要点等.通过分析认为;正确的工艺设计,精准的工艺控制,熟练的系统操作和科学的工艺管理是保证高效生产果葡糖浆的关键.并就这些关键因素做了相关阐述.

摘要： 本文主要介绍了果葡糖浆及其用途和生产工艺过程,异构化条件,系统及生产运行要点等.通过分析认为;正确的工艺设计,精准的工艺控制,熟练的系统操作和科学的工艺管理是保证高效生产果葡糖浆的关键.并就这些关键因素做了相关阐述.

摘要： 本文主要介绍了果葡糖浆及其用途和生产工艺过程,异构化条件,系统及生产运行要点等.通过分析认为;正确的工艺设计,精准的工艺控制,熟练的系统操作和科学的工艺管理是保证高效生产果葡糖浆的关键.并就这些关键因素做了相关阐述.

摘要： 本发明公开了一种固定D‑葡萄糖异构酶与D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的方法，属于食品加工技术领域。本发明具体公开了一种以大孔载体、交联剂、双酶、无机金属离子杂化形成纳米花的固定化双酶方法，具体步骤是：a具有吸附功能的大孔载体吸附D‑葡萄糖异构酶与D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶；b加入交联剂对酶进行交联；c酶与无机金属离子组装形成双酶‑无机杂化纳米花；其中可以将a、b和c按任意顺序或同时进行制备固定化酶。本固定化双酶既具有较高的酶活，还能保持较好的稳定性和机械强度，既改善大孔载体固定化酶易解吸的问题，又解决有机‑无机杂化纳米花不易装柱连续生产的弊端，对双酶和多酶的固定化应用具有重要意义。

摘要： 本公开涉及一种新糖磷酸异构酶/差向异构酶变体、包含所述变体的谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)菌株以及使用所述菌株生产L‑赖氨酸的方法。

摘要： 本发明公开了一种共表达L‑阿拉伯糖异构酶基因和甘露糖‑6‑磷酸异构酶的基因工程菌。该菌株包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。本发明的基因工程菌可以通过催化L‑阿拉伯糖生产L‑核糖，一步转化，工艺简单，转化率高，通过本发明的基因工程菌，L‑核糖的转化率达到25~50%，具有良好的产业化前景。

摘要： 本发明提供谷氨酸棒状杆菌KCCM？11046P菌株以及使用阿洛酮糖-差向异构酶制备D-阿洛酮糖的方法。本发明涉及一种通过使用来源于根癌农杆菌且以食品安全形式表达的阿洛酮糖-差向异构酶而连续地由D-果糖或D-葡萄糖制备D-阿洛酮糖的方法。

摘要： 本发明公开了从牛瘤胃液宏基因组文库中获得的一种新的木糖异构酶核苷酸序列，还提供了该核苷酸序列编码的氨基酸序列。本发明还涉及含有该核苷酸序列的载体及转化体。当该木糖异构酶被表达时，赋予宿主细胞将木糖转化为木酮糖的能力，木酮糖进一步被宿主细胞代谢。因此，宿主细胞能够以木糖作为碳源生长。新来源的木糖异构酶在酿酒酵母内高活性表达，且该酶为嗜温性酶，最适酶活温度为60°C。本发明还涉及木糖异构酶可作为模式蛋白在理论研究上的应用，及在燃料乙醇、高果糖浆等实际生产上的应用。

摘要： 本公开涉及一种新糖磷酸异构酶/差向异构酶变体、包含所述变体的谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)菌株以及使用所述菌株生产L‑赖氨酸的方法。

摘要： 本发明公开了一种固定D‑葡萄糖异构酶与D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的方法，属于食品加工技术领域。本发明具体公开了一种以大孔载体、交联剂、双酶、无机金属离子杂化形成纳米花的固定化双酶方法，具体步骤是：a具有吸附功能的大孔载体吸附D‑葡萄糖异构酶与D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶；b加入交联剂对酶进行交联；c酶与无机金属离子组装形成双酶‑无机杂化纳米花；其中可以将a、b和c按任意顺序或同时进行制备固定化酶。本固定化双酶既具有较高的酶活，还能保持较好的稳定性和机械强度，既改善大孔载体固定化酶易解吸的问题，又解决有机‑无机杂化纳米花不易装柱连续生产的弊端，对双酶和多酶的固定化应用具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种共表达L-阿拉伯糖异构酶基因和甘露糖-6-磷酸异构酶的基因工程菌。该菌株包含SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。本发明的基因工程菌可以通过催化L-阿拉伯糖生产L-核糖，一步转化，工艺简单，转化率高，通过本发明的基因工程菌，L-核糖的转化率达到25~50%，具有良好的产业化前景。

摘要： 本发明涉及一种通过使用来源于根癌农杆菌且以食品安全形式表达的阿洛酮糖-差向异构酶而连续地由D-果糖或D-葡萄糖制备D-阿洛酮糖的方法。

摘要： 本发明公开了从牛瘤胃液宏基因组文库中获得的一种新的木糖异构酶核苷酸序列，还提供了该核苷酸序列编码的氨基酸序列。本发明还涉及含有该核苷酸序列的载体及转化体。当该木糖异构酶被表达时，赋予宿主细胞将木糖转化为木酮糖的能力，木酮糖进一步被宿主细胞代谢。因此，宿主细胞能够以木糖作为碳源生长。新来源的木糖异构酶在酿酒酵母内高活性表达，且该酶为嗜温性酶，最适酶活温度为60°C。本发明还涉及木糖异构酶可作为模式蛋白在理论研究上的应用，及在燃料乙醇、高果糖浆等实际生产上的应用。