b型流感嗜血杆菌

摘要： 中世纪早期,英国6岁男孩的悲惨死亡为科学家认识病原体b型流感嗜血杆菌的历史提供了最早的直接线索。这种时间可追溯至550年被称为Hib的细菌感染,是迄今为止此种细菌被诊断出的最古老的感染案例,研究人员2月2日在《基因组生物学》上就此作了报告。下一个确定的案例发生于1300多年后的1892年,那时嗜血杆菌流感首次获得确认。尽管与流感有着相似的名称及症状,但是这种细菌并不引发流感。Hib可导致其他重症,诸如肺炎及脑膜炎--特别在幼儿中。自从20世纪80年代后期以来,一种对抗Hib的疫苗已经最大程度上令这种病毒边缘化了。

摘要： 【目的】比较不同方法制备的羊血巧克力培养基对b型流感嗜血杆菌生长的影响。【方法】分别在水浴温度为85、95以及85°C并补加不同浓度辅酶I(β-Nicotinamide adenine dinucleotide hydrate,NAD)等条件下制备终浓度为5%、7.5%和10%羊血巧克力培养基,以水浴温度85°C制备的兔血巧克力平板为对照,分别接种b型流感嗜血杆菌,比较不同配方和制备方法下b型流感嗜血杆菌的菌落大小和生长率。【结果】相比水浴温度85°C制备的兔血巧克力平板,b型流感嗜血杆菌在水浴温度为85°C制备的不同含量羊血巧克力培养基上均不生长;水浴温度95°C制备的不同含量羊血巧克力培养基上b型流感嗜血杆菌的菌落直径和生长率随着羊血含量增加而增加,差异有统计学意义(P0.05);b型流感嗜血杆菌在水浴温度85°C并补加0.1μg/mL NAD的羊血巧克力培养基上几乎不生长,补加0.2μg/mL及以上NAD的不同浓度羊血巧克力平板上菌落直径和生长率与兔血巧克力培养基相比,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】从易获得性及经济性出发,b型流感嗜血杆菌在水浴温度95°C、添加10%羊血制备的巧克力培养基或水浴温度为85°C、添加5%羊血和0.2μg/mL NAD制备的巧克力培养基为较优选择。

摘要： 目的 验证苯酚法检测b型流感嗜血杆菌荚膜多糖提取新工艺中Triton X-114残留含量的可行性,并建立Triton X-114在Hib荚膜多糖中残留含量的质量标准.方法 参考2015版《中国药典》三部中检测Triton X-100及相关文献中的苯酚法,对其线性范围、准确性、精密性进行验证,对多批次荚膜多糖的残留含量及对应的安全性结果进行统计归纳.结果 苯酚法可以应用于b型流感嗜血杆菌荚膜多糖中Triton X-114的残留量检测,其线性范围、准确性及精密性较好,经15批次荚膜多糖中数据统计,b型流感嗜血杆菌荚膜多糖中Triton X-114的残留含量标准建议定为<25.00mg/g荚膜多糖.结论 苯酚法可以有效检测Triton X-114在b型流感嗜血杆菌荚膜多糖中的残留含量,本研究所制定质量标准可以保证产品的安全性.

摘要： 探明b型流感嗜血杆菌荚膜多糖发酵的最适培养基及接种量,为降低其疫苗荚膜多糖制备成本提供理论依据,设计6种培养基进行摇瓶培养,检测发酵上清液中的茵体量,筛选最适培养基,并在此基础上优化接种浓度及氯化血红素、辅酶Ⅰ添加量进行发酵罐培养,测定荚膜多糖含量,评估培养效果.结果表明:接种后OD600值为0.1的接种量较为适宜b型流感嗜血杆菌生长;3号改良培养基(选择性大豆蛋胨、酵母浸粉、酸水解酪蛋白、K2 HPO4、氯化钠、葡萄糖、氯化血红素、辅酶Ⅰ分别为1％、1％、0.50％、0.25％、0.50％、0.70％、25 mg/L和20 mg/L)对b型流感嗜血杆菌液体进行发酵罐发酵可获得大量菌体且稳定,荚膜多糖含量为(105.6±13.2)mg/L.

摘要： 目的 利用肺炎球菌表面黏附素A(PsaA)为蛋白载体研制b型流感嗜血杆菌(Hib)多糖与蛋白的结合疫苗,并研究其在幼龄大鼠体内的免疫原性以及对肺炎球菌导致的急性中耳炎(AOM)的免疫保护作用.方法 运用酰胺缩合法将PsaA与Hib荚膜多糖偶联结合制备多糖蛋白结合疫苗.选取30只约3周龄无特定病原体(SPF)雌性SD大鼠,体重88 ～ 102 g,随机分成实验组和对照组,每组15只.对幼龄SD大鼠进行疫苗接种,实验组接种Hib-PsaA疫苗,对照组接种磷酸盐缓冲液(PBS).每2周接种1次,3次接种后检测动物血清相关抗体免疫球蛋白G(IgG)水平.然后对实验组及对照组大鼠分别以肺炎球菌经鼓膜穿刺注入中耳以诱发AOM,观察2组大鼠发生AOM的炎症反应情况.结果 运用酰胺缩合法将PsaA与Hib多糖偶联结合,结合物的洗脱峰明显前移,表明细菌多糖与载体蛋白结合成功.接种该结合疫苗的实验组幼龄大鼠产生的抗PsaA抗体IgG的几何平均滴度(GMT)为11 138,抗Hib抗体IgG的GMT为7 017,而对照组抗PsaA抗体IgG的GMT与抗Hib抗体IgG的GMT分别为729和348.实验组2种抗体IgG均明显高于对照组(P＜0.001).肺炎球菌攻击后组织病理学检查发现,实验组大鼠在细菌攻击后第3天和第7天中耳炎症反应明显轻于对照组,显示Hib-PsaA结合疫苗对肺炎球菌诱发的大鼠AOM有免疫保护作用.结论 运用酰胺缩合法可成功将PsaA蛋白与Hib多糖偶联结合,所制备的多糖蛋白结合疫苗在幼龄大鼠体内可诱导分别针对PsaA和Hib多糖的有效免疫应答反应,并且可有效预防肺炎球菌导致的大鼠AOM.

摘要： 2017年11月广东省汕头市报告1例疑似流行性脑脊髓膜炎死亡病例.患者表现为发热、呕吐,经抢救无效死亡.从病例脑脊液标本中检出b型流感嗜血杆菌(Hib),未检出脑膜炎奈瑟菌.确认该病例因感染Hib而死亡.

摘要： 目的:利用31P-NMR核磁共振定量法(QNMR)测定b型流感嗜血杆菌(Hib)荚膜多糖中的磷含量,建立QNMR的质控方法.方法:采用Bruker AVANCEⅡ400核磁共振谱仪,以六甲基磷酰三胺为内标,采集一维定量31P-NMR谱对不同浓度的磷酸二氢钾进行定量分析,采用传统方法验证该新方法的精密度及准确度,并对2种方法进行比较研究.结果:QNMR定量结果相对标准偏差(RSD)均小于1.7％,相对误差为2.1％～3％,不同浓度样品回收率为97.0％～98.1％;传统的化学法定量结果RSD为1.2％～3.2％,相对误差为5％～7％,不同浓度样品回收率为93.0％～94.9％;2种方法检测的3批Hib荚膜多糖中磷含量无明显差别,均符合《中国药典》三部(2010版)规定的68～90 mg/g.结论:31P-NMR定量方法操作简单,耗时短,重现性好,精密度和准确度高,且不破坏多糖成分,可应用于细菌荚膜多糖质量控制的磷定量.

摘要： 2015年上半年，当时国内唯一适用于2岁以下婴幼儿的7价肺炎球菌多糖结合疫苗在中国全面退市。直至2017年3月，断档了近两年的肺炎球菌多糖结合疫苗回归，其疫苗也由7价升级为13价肺炎球菌多糖结合疫苗，并在全国各地陆续开始接种。2017年可以预防百日咳、白喉、破伤风、脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌的5种疾病的疫苗，即五联疫苗，又出现全国多个省市供货告急情况。

摘要： 目的 在b型流感嗜血杆菌结合疫苗生产过程中有效监控1-氰基-4-二甲基氨基-吡啶四氟化硼(CDAP)的残留量.方法 在已有针对流脑多糖衍生物的基于强阳离子交换层析检测法的基础上进行改进.结果 该法具有良好的专属性、准确度、精密度,最低检出限为6μg/L,且在20 ～ 100μg/L的范围内线性良好.结论 建立了一种针对b型流感嗜血杆菌多糖衍生物中CDAP的检测方法.

摘要： 目的 了解江苏省涟水、阜宁两县3～11月龄婴儿b型流感嗜血杆菌荚膜多糖(Hib-PRP)自然感染抗体水平,评价地区差异.方法 通过查阅预防接种证,在两县共筛选无Hib疫苗接种史3～11月龄婴儿3 061人,采集静脉血约2 mL,分离血清,采用酶联免疫吸附试验检测Hib-PRP抗体,计算两县入组婴儿Hib-PRP抗体几何平均浓度(GMC)、短期保护率、长期保护率,并进行比较.结果 Hib-PRP抗体总GMC为0.18 mg/L,涟水县为0.19 mg/L,阜宁县为0.18 mg/L,差异无统计学意义(P=0.178);阜宁县短期、长期保护率(1.64％、23.85％)均高于涟水县(0、21.56％).阜宁县3～5月龄婴儿抗体GMC(0.28 mg/L)明显高于涟水县(0.13mg/L);而6～8月龄和9～11月龄婴儿抗体GMC(0.10 mg/L和0.12 mg/L)明显低于涟水县(0.21 mg/L和0.57 mg/L),差异均有统计学意义(P值均＜0.05).随年龄增长,阜宁县短期保护率呈上升趋势,长期保护率呈先下降后上升趋势;涟水县长期保护率亦随年龄增长呈上升趋势.结论 江苏省涟水、阜宁县3～11月龄婴儿Hib-PRP自然感染抗体水平存在地区差异.

摘要： 目的：建立一种高效大小排阻色谱(HPSEC)方法检测b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗分子大小分布.方法：采用TSK G6000PW色谱柱,1.0％(w/v)Na2SO4作为流动相,流速设置为0.4ml/min,紫外检测波长为206nm,并连接激光散射检测器(MALS),对Hib结合疫苗的原液和制剂样品进行分子大小分布的检测;将该结果与CL-4B凝胶柱检测的结果进行比较.同时对一组原液和制剂样品进行高温处理,用HPSEC法和CL-4B色谱法分析样品降解趋势.结果：HPSEC法可以对小量的以CRM197为载体的Hib结合疫苗进行分子大小分布的检测,每个样品的检测时间仅需40分钟,其检测结果与CL-4B色谱法的结果有着良好的相关性;HPSEC与激光散射检测器相连可以用来进行Hib结合疫苗的重均分子量的测定;通过对一组高温处理的样品进行分析,HPSEC法能够准确地反映出样品的降解趋势,与CL-4B色谱法的结果有着良好的可比性.结论：HPSEC法是一种比CL-4B色谱法检测更高效的分子大小测定方法.

摘要： 目的：培养b型流感嗜血杆菌及纯化PRP多糖。rn 方法：采用改进的CY培养基代替CY培养基，在2L摇瓶中对b型流感嗜血杆菌进行培养，研究培养基处方、发酵、多糖提取及纯化工艺。rn 结果：改进的CY培养基可代改进的CY培养基对b型流感嗜血杆菌进行培养。在培养过程中控制pH值，搅拌有利于细菌生长：在多糖纯化过程中，研究了超滤洗涤次数对核酸蛋白的去除，进一步醇沉和色谱纯化可获得合格的PRP多糖。rn 结论：改进的CY培养基可用于Hib的培养发酵，PRP多糖纯化的工艺可行，为b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗的研制提供了试验基础。

摘要： 目的：比较两种b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗的免疫原性。方法：本研究选取一批国产和一批进口Hib结合疫苗，按照开放、随机、双盲的原则。选择1970名2月龄～5岁的健康婴幼儿为观察对象，按年龄分层为2～5月龄750人，6～11月龄620人，1～5岁600人。两种疫苗按1：1比例进行随机分配，2～5月龄婴儿于0、1、2月，6～11月龄婴幼儿于0、1月，1～5岁幼儿于0月免疫程序分别接种1剂疫苗。各组于首剂免疫前和末次免疫后1个月采集静脉血，分离血清，采用ELISA法检测血清多聚核糖基核糖醇(PRP)抗体。结果：免疫国产Hib结合疫苗后各年龄段婴幼儿血清PRP抗体浓度均达到1.0μg／ml以上，保护率为100％;而免疫进口疫苗后，各年龄段均有血清PRP抗体浓度<0.15μg／ml的婴幼儿，总保护率为99.3％。但是，免疫后国产疫苗组血清PRP抗体几何平均浓度(GMC)普遍低于进口疫苗，小于6月龄组分别为14.136和18.135,6月龄至小于1岁组分别为21.457和25.728，1～5岁组分别为31.095和38.119。结论：不同Hib结合疫苗免疫后的血清抗体水平分布虽然相似，但抗体GMC存在一定差异，应关注其抗体亲和力，跟踪其免疫持久性。

摘要： 目的:建立检测b型流感嗜血杆菌(Hib菌)多糖(多聚核糖基核糖醇磷酸，即PRP)的ELISA方法。方法:用灭活Hib菌免疫6只雌性兔子，一周免疫4次。1个月后开始采血测血清滴度，待抗体效价达到1：32，兔子动脉采血。对兔血清进行非特异性抗体免疫吸收以消除非特异性。纯化兔抗PRP抗体，用纯化的兔抗PRP抗体包被，用标记HRP兔抗PRP抗体作为二抗，建立夹心法检测PRP。结果:该方法可以特异性检测PRP，线性检测范围为0.020ng/ml～0.2ng／ml，其敏感度为0.030ng/ml。结论:该方法可以特异性检测b型流感嗜血杆菌的多糖。

摘要： 目的:研制b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗并考察其稳定性。rn 方法:用溴化氰活化提纯Hib荚膜多糖抗原，通过己二酰肼(ADH)与破伤风类毒素(TT)蛋白共价结合，制备b型流感嗜血杆菌结合物，并考察放置在2～8°C及室温9个月和37°C3个月后的稳定性。rn 结果:用本工艺提取的多糖，合成的多糖衍生物，多糖蛋白结合物的化学组成及结构特性均达到了国外同类产品的质控要求。结合物在2～8°C及室温放置9个月后基本无降解。rn 结论:为临床评价Hib结合疫苗的安全性和保护效果及确定效期提供了实验基础。

摘要： MCV-AC/Hib作为一种新的联合疫苗符合WHO积极推荐的疫苗免疫发展方向，尽管目前暂不能确定MCV-AC/Hib上市后的应用前景，但是我国应参照美国的做法和WHO有关新疫苗引入国家免疫规划的基本原则，从疫苗接种的必要性、安全性、有效性和可行性等各个方面，积极开展相关的研究工作，以期为今后适时纳人到国家扩大免疫规划提前做好技术方面的准备。

摘要： 目的：建立起定量测定b型流感嗜血杆菌总抗体的方法，并进行初步的方法学验证。方法:利用棋盘滴定法优化抗原包被浓度及酶标记抗体的工作浓度，选择参考血清的最适工作范围及适合的底物，并进行特异性、准确度及精密度分析。结果:原包被浓度为:0.4 μg/ml 酶标记抗体的稀释度为1:6000,参考血清的最适线性范围为5 ng/ml ～100ng/ml,特异性较好,准确度为：75.97%～110.63%。试验间变异系数为:15.15%～20.29%。结论: 建立了定量测定血清中b型流感嗜血杆菌总抗体的ELISA方法，特异性较好，精密度和准确度较高。

摘要： B型流感嗜血杆菌是婴幼儿脑膜炎和急性呼吸道传染病的重要病因。由于多糖疫苗不能引发T-细胞依赖型免疫反应，因此在婴幼儿中保护效果很差。采用结合技术将HIB荚膜多糖共价结合到载体蛋白，将HIB荚膜多糖转变为T-细胞依赖型抗原，所制备的HIB结合疫苗可以在婴幼儿中起到良好的免疫应答和保护效果，并被回顾性流行病学研究所证实其有效性。

摘要： B型流感嗜血杆菌是婴幼儿脑膜炎和急性呼吸道传染病的重要病因。由于多糖疫苗不能引发T-细胞依赖型免疫反应，因此在婴幼儿中保护效果很差。采用结合技术将HIB荚膜多糖共价结合到载体蛋白，将HIB荚膜多糖转变为T-细胞依赖型抗原，所制备的HIB结合疫苗可以在婴幼儿中起到良好的免疫应答和保护效果，并被回顾性流行病学研究所证实其有效性。

摘要： B型流感嗜血杆菌是婴幼儿脑膜炎和急性呼吸道传染病的重要病因。由于多糖疫苗不能引发T-细胞依赖型免疫反应，因此在婴幼儿中保护效果很差。采用结合技术将HIB荚膜多糖共价结合到载体蛋白，将HIB荚膜多糖转变为T-细胞依赖型抗原，所制备的HIB结合疫苗可以在婴幼儿中起到良好的免疫应答和保护效果，并被回顾性流行病学研究所证实其有效性。

摘要： 本发明涉及一种快速检测流感嗜血杆菌的Elisa检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包含有：包被抗流感嗜血杆菌D15及Pe蛋白多克隆抗体的酶标板、抗流感嗜血杆菌Pcp及PilA蛋白多克隆抗体、流感嗜血杆菌阳性对照、阴性对照、洗涤液、酶标二抗、酶显色底物和终止液。本发明的试剂盒对流感嗜血杆菌四种特异性表面蛋白进行联合检测，大大提高了流感嗜血杆菌检测的灵敏度、特异性和可重复性，可用于对流感嗜血杆菌非诊断性检测及研究工作。

摘要： 本发明提供稳定的合成糖，其是Hib聚核糖基核糖醇磷酸(PRP)衍生物及其缀合物。所述糖、所述缀合物及其药物组合物耐水解、长期稳定且用于预防和/或治疗与流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)有关的疾病，和更特别的与流感嗜血杆菌b型有关的疾病，优选选自脑膜炎、肺炎和会厌炎的疾病。它们具有通式(I)：其中A是式(II)或式(III)；B是式(IV)；C是式(V)；D是式(VI)；E是式(VII)；F是式(VIII)或式(IX)。

摘要： 本发明涉及一种快速检测流感嗜血杆菌的Elisa检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包含有：包被抗流感嗜血杆菌D15及Pe蛋白多克隆抗体的酶标板、抗流感嗜血杆菌Pcp及PilA蛋白多克隆抗体、流感嗜血杆菌阳性对照、阴性对照、洗涤液、酶标二抗、酶显色底物和终止液。本发明的试剂盒对流感嗜血杆菌四种特异性表面蛋白进行联合检测，大大提高了流感嗜血杆菌检测的灵敏度、特异性和可重复性，可用于对流感嗜血杆菌非诊断性检测及研究工作。

摘要： 本发明公开了荚膜型和非荚膜型流感嗜血杆菌的RPA‑LFS检测引物探针组合及其应用；本发明的引物探针组合具有很好的特异性，对其他的菌株均无交叉扩增，能检测1CFU/ul的流感嗜血杆菌，并且检测灵敏度不受其他病原菌的干扰。本研究与双重PCR检测的结果一致，分别从209份样本中检出203份流感嗜血杆菌和63份荚膜型流感嗜血杆菌，检出率分别为97.1％和63.2％。RPA‑LFS与双重PCR具有相同的实际应用性。本研究成功建立了基于Omp6和BexA基因检测荚膜型和非荚膜型流感嗜血杆菌的RPA‑LFS检测方法，为后续快速检测流感嗜血杆菌提供了方案，确保了患者的及时诊断和抗生素治疗。

摘要： 本发明涉及一种多价疫苗中B型流感嗜血杆菌多糖含量的测定方法，所述的测定方法包括如下步骤：(1)样品预处理，包括：去佐剂：多价疫苗离心去除佐剂，取上清液样品；去保护剂：上清液样品于10kDa超滤离心管内离心后弃滤过液，去除保护剂得待水解样品；待水解样品加入盐酸水解得水解液；水解完成后，中加入NaOH中和并过滤得到供试样品；(2)色谱检测：包括：洗脱液为浓度300～400mmol/L的NaOH溶液，洗脱液流速为0.3ml/min；使用标准曲线法计算出B型流感嗜血杆菌多糖含量。

摘要： 本发明提供稳定的合成糖，其是Hib聚核糖基核糖醇磷酸(PRP)衍生物及其缀合物。所述糖、所述缀合物及其药物组合物耐水解、长期稳定且用于预防和/或治疗与流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)有关的疾病，和更特别的与流感嗜血杆菌b型有关的疾病，优选选自脑膜炎、肺炎和会厌炎的疾病。它们具有通式(I)：其中A是式(II)或式(III)；B是式(IV)；C是式(V)；D是式(VI)；E是式(VII)；F是式(VIII)或式(IX)。

摘要： 本发明公开了一种吸附无细胞百白破‑脊髓灰质炎‑b型流感嗜血杆菌联合疫苗及其制备方法。本发明提供的联合疫苗包括无细胞百日咳抗原、白喉抗原、破伤风抗原、灭活的脊髓灰质炎病毒和b型流感嗜血杆菌抗原；所述脊髓灰质炎病毒为Sabin毒株。本发明采用脊髓灰质炎病毒的弱毒株Sabin毒株制备联合疫苗，具有更高的生物安全性、疫苗的不良反应小，且生产成本低。通过优化联合疫苗的抗原组成、佐剂和稳定剂，本发明提供的联合疫苗中各种抗原的免疫原性得到充分发挥，并具有较高的稳定性，适于推广应用。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种b型流感嗜血杆菌荚膜多糖制备方法。该方法包括对发酵澄清液进行超滤浓缩得到第一浓缩液；将所述第一浓缩液与除核酸液共搅拌后，离心收集上清，超滤浓缩得到第二浓缩液；所述除核酸液为EDTA、醋酸钠和脱氧胆酸钠的30％～50％(v/v)的乙醇溶液；向所述第二浓缩液中加入CTAB至终浓度0.5％～1.5％(g/ml)共搅拌以提取荚膜多糖，离心收集沉淀，用65％～75％(v/v)的乙醇复溶沉淀使得所述荚膜多糖溶剂其中得到复合多糖提取液；对所述复合多糖提取液离心并收集上清，使用无机盐解离除去CTAB后醇沉荚膜多糖。

摘要： 本发明提供了一种速释b型流感嗜血杆菌结合疫苗可溶性微针贴，包括针体和基底层，所述的针体由b型流感嗜血杆菌结合疫苗、佐剂、水溶性高分子材料组成，所述的基底层为柔性高分子材料；其中，佐剂与b型流感嗜血杆菌结合疫苗的含量比为(1：1)～(2：1)，所述的佐剂为SPO1、黄芪多糖、3‑脱‑O‑酰化单磷酰脂质A中的一种或几种。本发明提供的b型流感嗜血杆菌结合疫苗可溶性微针贴，能够实现平衡Th1/Th2型的免疫应答，以及疫苗在皮肤组织内快速释放。

摘要： 本发明公开了一种吸附无细胞百白破‑脊髓灰质炎‑b型流感嗜血杆菌联合疫苗及其制备方法。本发明提供的联合疫苗包括无细胞百日咳抗原、白喉抗原、破伤风抗原、灭活的脊髓灰质炎病毒和b型流感嗜血杆菌抗原；所述脊髓灰质炎病毒为Sabin毒株。本发明采用脊髓灰质炎病毒的弱毒株Sabin毒株制备联合疫苗，具有更高的生物安全性、疫苗的不良反应小，且生产成本低。通过优化联合疫苗的抗原组成、佐剂和稳定剂，本发明提供的联合疫苗中各种抗原的免疫原性得到充分发挥，并具有较高的稳定性，适于推广应用。