底物特异性

摘要： 为研究Lactobacillus plantarum SL32-2自溶酶的酶学性质及底物特异性,以该细菌细胞为底物分析其自溶酶的最适温度及最适pH,结合该菌株在有无外加自溶酶、自溶前后还原糖和氨基酸的变化以及对4种底物的敏感性,分析其自溶酶的底物特异性。结果表明,L.plantarum SL32-2在对数早期培养4 h时,自溶度最高;其自溶酶的最适pH为7.5,最适温度为37°C;添加自溶酶后,L.plantarum SL32-2的自溶度增加了12.04%、还原糖和氨基酸分别增加了1.05和42.83倍;底物特异性分析发现,L.plantarum SL32-2自溶酶中β-N-乙酰葡萄糖胺酶、酰胺酶、羧肽酶、内肽酶的活性分别为0.0036、0.0027、1.1267和2.0987 U,表明作用于肽链的酶活性远高于作用于糖链的酶。因此,有望通过添加自溶酶的方式,控制酒醅中乳酸菌的过量生长。

摘要： 结构甘油酯为通过改变甘油酯中脂肪酸组成、脂肪酸位置分布而得到具有特定营养功能的一类甘油酯。因结构甘油酯具有较大的潜在功能和高的商业价值而备受人们关注,因此结构甘油酯的研究是近年来的热点。文章综述了近年来结构甘油酯定向合成的研究进展,包括化学法及酶法合成的工艺,重点总结了酶法合成结构甘油酯的底物特异性和位置特异性,阐述了结构甘油酯在食品工业中的应用及其功能的发挥,最后展望了现代生物技术,例如生物信息学,在开发特异性脂肪酶和有效合成结构甘油酯方面的前景。

摘要： 杜邦嗜热菌脂肪酶(LIP1)是一种在洗涤行业、生物柴油制备、油脂改性等领域具有良好应用潜力的碱性脂肪酶,然而其天然产量极低,难以满足产业化需求。采用组合优化策略筛选出高效表达LIP1的毕赤酵母重组菌株。首先,构建毕赤酵母密码子偏好性优化的LIP1基因,通过高浓度G418抗性平板和BMMY-罗丹明B定性平板筛选出脂肪酶活性较高的重组菌株;其次,利用信号肽优化和分子伴侣共表达优化筛选得到一株高效表达的重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-Mss-SSA4-LIP1,采用碱滴定法测定其酶活,采用比色法测定其底物特异性。结果表明,经组合优化策略筛选出的菌株在摇瓶和5 L发酵罐中发酵最高分泌酶活分别达到1 136 U/mL和12 150 U/mL。底物特异性结果显示重组脂肪酶LIP1最适底物为C8链长的对硝基苯酚酯。综上所述,基于组合优化策略实现了LIP1在毕赤酵母中的高效表达,为未来LIP1的产业化奠定基础。

摘要： 糖基化是自然界增加小分子化合物功能多样性的有效方法,并能显著改善化合物的水溶性、稳定性等物理化学性质,其中β-糖苷类化合物广泛存在于自然界中,具有重要的生物活性。由于缺乏高效β-糖基化修饰的酶催化剂,许多β-异构体糖苷的生产主要采用天然产物的分离提取和化学合成等方法。文章主要总结了可实现小分子化合物β-糖基化的酶的特性、催化机制和底物特异性等,并概述了以廉价寡糖为供体的β-糖基化酶的定向进化,为小分子化合物的β-糖基化研究提供参考。

摘要： 氨基转移酶催化L-氨基酸和α-酮酸之间的氨基转移.TLC(薄层层析)和甲臜颜色反应检测大肠杆菌4种氨基转移酶(TyrAT、IlvAT、AspAT和AvtAT)催化6种非天然氨基酸的转氨活性,发现AvtAT和AspAT无非天然氨基酸转氨活性.TyrAT能催化DL-高苯丙氨酸、L-正亮氨酸和L-正缬氨酸的转氨反应,而IlvAT则催化DL-高苯丙氨酸、L-正缬氨酸、L-正亮氨酸、L-叔亮氨酸和L-新戊基甘氨酸的氨基转移.使用易错PCR突变和DL-高苯丙氨酸/L-正亮氨酸作氮源定向进化筛选,获得10个不同位点突变的TyrAT突变酶.酶活分析发现,这些突变酶虽酶活不同但尚未扩展TyrAT的非天然氨基酸底物特异性.10个突变酶中,每个酶蛋白210位都出现Cys替换Phe.与野生型酶比较,TyrAT的F210C突变明显改变酶的催化最适温度并且提高酶在37°C的催化效率.

摘要： 对地杆菌α-L-岩藻糖苷酶进行分子改造,以提高其酶法合成2'-岩藻糖基乳糖(2'-fucosyllactose,2'-FL)的转化效率.利用易错聚合酶链式反应构建了α-L-岩藻糖苷酶的突变体文库,筛选得到一个合成2'-FL转化率提高的突变酶(mPbFuc29A1).酶学性质研究结果表明mPbFuc29A1的最适pH值和温度分别为pH?5.0和40?°C,最适温度较野生型PbFuc29A1提高了5?°C;突变酶水解2'-FL的比活力提高到3倍,但是水解4-硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(4-nitrophenyl-α-L-fucopyranoside,pNP-FUC)和3'-岩藻糖基乳糖(3'-fucosyllactose,3'-FL)的比活力分别降低了22.8％和52.5％.以pNP-FUC和乳糖为底物,采用mPbFuc29A1酶法催化合成2'-FL和3'-FL,转化率分别为23.6％和56.4％,其中2'-FL的转化率较PbFuc29A1提高了9.1％.通过序列及定点突变分析发现mPbFuc29A1的氨基酸序列中有2个位点发生突变(Asp21Val和Glu266Lys),其中位于loop区的Glu266Lys可能是mPbFuc29A1底物特异性和转糖苷产物组成发生改变的关键.优良的酶学特性使mPbFuc29A1在2'-FL合成中具有较大的应用潜力.

摘要： DDTs (dichlorodiphenyltrichloroethane,1,1,1-三氯-2,2-双氯苯基乙烷)是一种典型的持久性有机污染物,曾在疟疾防治和农业除虫方面被广泛应用.虽然包括我国在内的很多国家已经禁止使用DDTs,但目前对环境中DDTs的检测发现它仍然广泛存在且具有新的输入源.DDTs的持续存在对近海生态系统和人类健康具有一定危害,因此它所造成的环境污染问题仍然值得关注.由于Rieske型芳香羟化双加氧酶能够起始多种持久性污染物的降解,过去的几十年里一直是芳香化合物降解领域的焦点.[目的]为探讨联苯双加氧酶对DDTs的降解特性及机制,本研究选取了食异生素伯克霍尔德氏菌LB400(Burkholderia xenovorans)联苯双加氧酶及突变体对p,p'-DDT和o,p'-DDT的降解过程进行研究.[方法]以BphAELB400为亲本,通过两步定点突变将283位的丝氨酸突变为蛋氨酸,获得突变体BphAES283M.通过比较亲本酶与突变体对DDTs的催化性能,模拟突变蛋白结构和分子对接等方法,探究其降解特性及机制.[结果]BphAELB400和突变体BphAES283M都无法降解对位的p,p'-DDT,但突变体BphAES283M可以代谢o,p'-DDT并产生2个立体异构体.对接p,p'-DDT的BphAELB400和BphAES283M的结构分析表明,BphAELB400和BphAES283M中p,p'-DDT的反应环均不与原晶体结构中的联苯反应环重合.而对接o,p'-DDT的BphAES283M的结构分析表明o,p'-DDT的反应环与晶体结构中的联苯反应环距离很近,且2、3位的碳原子与单核铁原子催化中心的距离在0.5 nm以内,此外,BphAES283M的催化腔表面积和体积比BphAELB400更大,这很可能有助于BphAES283M与o,p'-DDT的结合.[结论]283位氨基酸是影响BphAELB400对DDTs的催化代谢能力的关键氨基酸残基,它可以通过调节反应碳原子与催化中心的距离以及催化腔的大小来影响底物特异性.本次研究进一步阐明了283位氨基酸残基的影响机理,为更有效修复DDTs污染提供理论依据和技术支持.

摘要： 该研究以产胆盐水解酶的屎肠球菌(Enterococcus faecium)R40为研究对象,模拟人体胆盐条件,对其发酵动力学进行分析.采用Logistic、Luedeking-Piret、Luedeking方程描述屎肠球菌R40发酵过程中菌体生长、产物生成、底物消耗的内在关系,并比较不同胆盐条件对屎肠球菌R40生长和降胆固醇能力的影响,判断其产生的胆盐水解酶是否存在底物特异性.结果表明,拟合模型的相关系数R2均>0.9,效果良好,模型预测值与试验测量值的误差均<10％,说明可以通过建立发酵动力学模型对屎肠球菌R40产酶情况进行预测和描述.胆盐的添加有利于屎肠球菌R40发挥降胆固醇作用,使菌株R40提前4 h进入对数生长期,且提高了菌株R40的生物量.不同胆盐对菌株R40生长的影响存在差异性,甘氨酸脱氧胆盐虽能提高生物量,但未缩短适应期.牛磺酸胆盐和甘氨酸胆盐缩短了菌株R40的适应期,但对生物量并无显著影响,说明菌株R40产的胆盐水解酶具有一定的底物特异性.

摘要： 人鼻病毒(HRV)是单股正链小RNA病毒,其编码的3C蛋白酶属于半胱氨酸蛋白酶家族,可以识别多肽序列LEVLFQ△GP,并在Gln和Gly之间进行切割.HRV3C蛋白酶具有特异性强,酶活高等特性,即使在4°C低温条件下依然有较高的酶活.

摘要： 本研究以细菌属Shewanellawoodyi源半乳糖激酶-Sw3773,Sw2155和Sw0678作为研究对象，以包括单糖、单糖衍生物或二糖在内的47种糖为底物检测酶的底物特异性，结果显示三种激酶都对半乳糖没有活性，反而都能作用于葡萄糖。然而目前报道过的半乳糖激酶都对半乳糖有活性，且相比其他底物，活性最高。为了确定激酶催化产物的磷酸化位置，我们通过核磁共振波谱法(NMR)对产物进行结构分析。将纯化后样品的NMR谱图分别与商业化葡萄糖-1-磷酸和葡萄糖-6-磷酸标准品的谱图进行对比，发现纯化产物为葡萄糖-6-磷酸。己知，半乳糖激酶对底物的C-1位进行磷酸化，而葡萄糖激酶对底物的C-6位上进行磷酸化，因此猜测三种S.woodyii源拟半乳糖激酶实际上为葡萄糖激酶。

摘要： 本文对来源于金色链霉菌的溴过氧化物酶A2进行了改造，构建了可以在大肠杆菌菌株中可溶表达的新酶。通过测定对不同链长模式底物的水解活性，可以发现尽管与天然的脂肪酶相比其活性极低，但是所设计的新酶对长链底物的水解活性获得了一定提高，同时使得对长链和短链底物的活性之比提高了约60倍，为定向进化提高脂肪酶活性提供了一个较好的模板。

摘要： 本文研究了不同富集培养基成分对含腈水合酶微生物筛选的影响。富集过程分别以乙腈、丙烯腈、苯乙腈、己二腈、2,2-二甲基环丙腈(DMCPMCA)等为唯一氮源,抑制杂菌生长。结果在各种富集培养基上,共筛选到含腈水合酶的菌株11株。初步鉴定结果表明,相同的土样,在不同的氮源富集条件下,筛选得到的菌株在生理生化特性、底物特异性上有很大的不同。

摘要： 酰胺酶(Amidase,EC3.5.1.4)是一类能够催化酰胺水解生成羧酸和氨的水解酶,在羟胺存在条件下,则催化酰基转移反应生成相应的氧肟酸和氨.酰胺酶的高立体选择性和宽广底物谱使其成为合成手性羧酸、酰胺及其衍生物的重要工具酶.

摘要： 酰胺酶(Amidase,EC3.5.1.4)是一类能够催化酰胺水解生成羧酸和氨的水解酶,在羟胺存在条件下,则催化酰基转移反应生成相应的氧肟酸和氨.酰胺酶的高立体选择性和宽广底物谱使其成为合成手性羧酸、酰胺及其衍生物的重要工具酶.

摘要： 酰胺酶(Amidase,EC3.5.1.4)是一类能够催化酰胺水解生成羧酸和氨的水解酶,在羟胺存在条件下,则催化酰基转移反应生成相应的氧肟酸和氨.酰胺酶的高立体选择性和宽广底物谱使其成为合成手性羧酸、酰胺及其衍生物的重要工具酶.

摘要： 酰胺酶(Amidase,EC3.5.1.4)是一类能够催化酰胺水解生成羧酸和氨的水解酶,在羟胺存在条件下,则催化酰基转移反应生成相应的氧肟酸和氨.酰胺酶的高立体选择性和宽广底物谱使其成为合成手性羧酸、酰胺及其衍生物的重要工具酶.

摘要： 普鲁兰酶是在普鲁兰糖和淀粉中水解α-1,6-糖苷键的脱支酶.目前淀粉工业中使用的α-淀粉酶,淀粉葡萄糖苷酶水解支链淀粉的效率不高,在糖化反应中添加的普鲁兰酶一般来源于嗜热菌,催化反应温度高于60°C.

摘要： 普鲁兰酶是在普鲁兰糖和淀粉中水解α-1,6-糖苷键的脱支酶.目前淀粉工业中使用的α-淀粉酶,淀粉葡萄糖苷酶水解支链淀粉的效率不高,在糖化反应中添加的普鲁兰酶一般来源于嗜热菌,催化反应温度高于60°C.

摘要： 本发明提供包含阻断剂和第一引物寡核苷酸的寡核苷酸组合物。所述阻断剂寡核苷酸包含具有靶中性子序列和阻断剂可变子序列的第一序列。非靶特异子序列在其3’和5’端被所述靶中性子序列侧接，并且与该靶中性子序列连续。所述第一引物寡核苷酸足以诱导酶促延伸；本文中，第一引物寡核苷酸包含第二序列。所述第二序列与该靶中性子序列的5’端重叠至少5个核苷酸；本文中，第二序列包含重叠子序列和非重叠子序列。所述第二序列不包含该非靶特异子序列。

摘要： 本发明涉及包含至少一个对DR5特异性的抗原结合位点和至少一个对FAP特异性的抗原结合位点的双特异性抗体，对DR5特异性的抗体，用于生成它们的方法，包含所述抗体的药物组合物，和它们的用途。

摘要： 本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及一种肉毒毒素特异性底物肽、检测试剂盒和检测方法。本发明提供肉毒毒素特异性底物肽，所述底物肽为氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑4所示的多肽中的一种或多种。利用该特异性底物肽结合其经肉毒毒素切割产生的血清型特异性目的肽段，能够实现较为特异、灵敏、准确的肉毒毒素及其血清型鉴定。本发明还提供了基于该特异性底物肽的检测试剂盒以及检测方法，利用该试剂盒和方法能够快速、高通量、灵敏、准确地进行肉毒毒素及其血清型鉴定，为肉毒毒素检测提供技术支撑。

摘要： 本发明提供包含阻断剂和第一引物寡核苷酸的寡核苷酸组合物。所述阻断剂寡核苷酸包含具有靶中性子序列和阻断剂可变子序列的第一序列。非靶特异子序列在其3’和5’端被所述靶中性子序列侧接，并且与该靶中性子序列连续。所述第一引物寡核苷酸足以诱导酶促延伸；本文中，第一引物寡核苷酸包含第二序列。所述第二序列与该靶中性子序列的5’端重叠至少5个核苷酸；本文中，第二序列包含重叠子序列和非重叠子序列。所述第二序列不包含该非靶特异子序列。

摘要： 本发明提供包含阻断剂和第一引物寡核苷酸的寡核苷酸组合物。所述阻断剂寡核苷酸包含具有靶中性子序列和阻断剂可变子序列的第一序列。非靶特异子序列在其3’和5’端被所述靶中性子序列侧接，并且与该靶中性子序列连续。所述第一引物寡核苷酸足以诱导酶促延伸；本文中，第一引物寡核苷酸包含第二序列。所述第二序列与该靶中性子序列的5’端重叠至少5个核苷酸；本文中，第二序列包含重叠子序列和非重叠子序列。所述第二序列不包含该非靶特异子序列。

摘要： 本发明涉及包含至少一个对DR5特异性的抗原结合位点和至少一个对FAP特异性的抗原结合位点的双特异性抗体，对DR5特异性的抗体，用于生成它们的方法，包含所述抗体的药物组合物，和它们的用途。

摘要： 本发明描述了与动物精子细胞膜相关联的性染色体特异性分子，以及分离它们的方法。具体描述了在SDS－PAGE上具有表观分子量为32kDa的X染色体特异性分子(蛋白质)。该方法涉及从动物精细胞制备细胞膜级分；用一种或多种物质处理该细胞膜级分，所述物质结合细胞膜级分中的X或Y染色体特异性分子并且X或Y染色体特异性分子与所述物质之间形成结合物；分离细胞膜级分中不结合所述物质的材料，获得含有性染色体特异性分子的亚级分。还描述了使用这种性染色体特异性分子确定精子性别的方法。

摘要： 本发明属于生物医药技术领域，公开了一种测定羧酸酯酶1活性的特异性荧光探针底物及其制备方法和应用。该探针底物可用于不同种属来源的细胞或组织样本中CES1酶活性的定量检测，还可用于CES1调控剂的快速筛选，同时可以作为实验动物在体及整体CES1的探针底物，评估代谢酶CES1的个体及种属差异。本发明还公开了该探针底物的制备方法。本发明CES1荧光探针底物检测CES1单酶体外活性具有高特异性，高灵敏度，高检测便利性及高通量检测性，与荧光探针相比具有不同的检测方式，基本不受生物基质的干扰，且具有更高的选择性和精确性。

摘要： 本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及一种肉毒毒素特异性底物肽、检测试剂盒和检测方法。本发明提供肉毒毒素特异性底物肽，所述底物肽为氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑4所示的多肽中的一种或多种。利用该特异性底物肽结合其经肉毒毒素切割产生的血清型特异性目的肽段，能够实现较为特异、灵敏、准确的肉毒毒素及其血清型鉴定。本发明还提供了基于该特异性底物肽的检测试剂盒以及检测方法，利用该试剂盒和方法能够快速、高通量、灵敏、准确地进行肉毒毒素及其血清型鉴定，为肉毒毒素检测提供技术支撑。

摘要： 本发明公开了一种褐藻胶裂解酶FaAly7，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码褐藻胶裂解酶FaAly7的基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示。一种降解褐藻胶/制备褐藻寡糖的方法：采用褐藻胶裂解酶FaAly7降解褐藻胶。本发明还公开了包含褐藻胶裂解酶FaAly7基因的重组表达载体和重组宿主。本发明的褐藻胶裂解酶FaAly7，属于PL7家族，能够降解海藻酸钠和polyG，具有较明显的底物特异性(海藻酸钠＝100％，polyG＝312％)。降解polyG产生不饱和2‑8糖，酶解主要产物为不饱和2‑4糖，具有良好的生物催化效率。