WWOX

摘要： 目的:探讨阿帕替尼(Apatinib)是否通过包含氧化还原酶的WW结构域(WWOX)影响子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭.方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L、32μmol/L Apa-tinib作用于子宫内膜癌细胞HEC-124 h、48 h、72 h后的细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、WWOX蛋白水平,Transwell小室法检测迁移细胞数、侵袭细胞数.在HEC-1中转染pcDNA3.1-WWOX,或转染si-WWOX并用16μmol/L Apatinib进行处理,采用上述方法评估细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况.结果:Apatinib明显降低HEC-1细胞活性(P<0.05),呈剂量、时间依赖性;Apatinib显著增加HEC-1细胞凋亡率及p21、Bax蛋白表达量(P<0.05),呈剂量依赖性;Apatinib明显降低Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量(P<0.05),呈剂量依赖性;16μmol/L Apatinib显著减少HEC-1细胞的迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白表达量(P<0.05),明显提高E-cadherin、WWOX蛋白表达量(P<0.05).过表达WWOX明显降低HEC-1细胞中Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量、细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数(P<0.05),提高p21、Bax、E-cadherin、WWOX蛋白表达量及细胞凋亡率(P<0.05).抑制WWOX表达逆转了Apatinib对HEC-1细胞中Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量、细胞活性、迁移、侵袭的抑制作用,以及逆转了其对p21、Bax、E-cadherin、WWOX蛋白表达量、细胞凋亡的促进作用.结论:阿帕替尼通过调控WWOX表达,抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡.

摘要： 目的 对WWOX和P53在子宫内膜癌中的表达及临床病理清了进行分析.方法 选择2016年2月至2018年2月在我院接受手术切除的子宫内膜癌标本58例,分别取肿瘤组织、癌旁正常组织(距肿瘤边缘5cm以内)及正常子宫内膜组织进行研究.以链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(SP法)对患者WWOX和P53表达情况进行检测.收集患者临床病理相关信息,并对不同临床病理情况患者WWOX及P53表达情况进行分析.结果 WWOX在肿瘤组织、癌旁正常组织及正常子宫内膜组织阳性表达率分别为96.55％ 、72.41％ 、53.45％(P0.05).患者分化程度、转移情况的不同P53阳性率差异具有统计学意义(P0.05).相关性分析结果显示WWOX与P53子宫内膜癌中表达呈显著正相关(r>0,P<0.05).结论 子宫内膜癌组织中WWOX及P53均呈低表达,WWOX表达与FIGO分期、分化程度、转移情况及子宫浸润深度有关,P53表达与分化程度、转移情况,在子宫内膜癌患者中WWOX与P53的表达呈显著正相关关系.

摘要： 目的:研究WWOX基因对人急淋巴细胞白血病细胞CCRF-CEM细胞凋亡及细胞周期的影响及分子机制.方法:体外培养CCRF-CRM细胞系,将WWOX基因转染入CCRF-CEM细胞,建立高表达WWOX的CCRF-CEM细胞,流式细胞仪法测定CCRF-CEM细胞的细胞周期和凋亡,Western blot法测定WWOX基因、细胞周期和凋亡相关因子的蛋白表达,qRT-PCR法测定caspase-3的mRNA表达.结果:与对照组和空白质粒组相比,转染入WWOX的CCRF-CEM细胞的WWOX蛋白表达显著增加,G胞比例显著增加,凋亡细胞比例显著增加;CCRF-CEM细胞中cyclin D1、cyclin E、CDK2的蛋白表达显著降低而Wnt-5α和JNK的蛋白表达显著增加,caspase-3的mRNA表达促进CCRF-CEM细胞的凋亡.结论:WWOX基因在急淋巴细胞白血病CCRF-CEM细胞中发挥抑癌基因作用,可以有效促进细胞凋亡并抑周期进程.

摘要： Objective To detect the heterozygosity loss of WWOX(WW domain containing oxidoreductase)gene in color-ectal cancer tissue, and to discuss its relationship with clinicopathological parameters of colorectal cancer. Methods Using PCR-polyacrylamide gel electrophoresis-silver dye method to detect the heterozygosity loss of 3 microsatellite sites of WWOX gene in colorectal cancer tissue,D16S3029,D16S504 and D16S3096. Results Among the 24 cases of colorectal cancer,8(33. 3%)had heterozygous deletion(LOH)on one or more sites. Grouped by the infiltration depth,the LOH positive rate inside the serous mem-brane was 9. 09%(1/11),and the positive rate on the serous membrane and outside the serous membrane was 53. 85%(7/13), and the difference was statistically significant(P＜0. 05). Conclusion WWOX is involved in regulating the development of color-ectal cancer,and LOH may be an important mechanism of WWOX inactivation in tumor.%目的 检测结直肠癌组织中WWOX(WW domain containing oxidoreductase)基因的杂合性缺失,并探讨其与结直肠癌临床病理参数之间的关系.方法 用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法检测结直肠癌组织中WWOX基因3个微卫星位点D16S3029,D16S504,D16S3096的杂合性缺失.结果 24例结直肠癌组织中有8例(33. 3%)存在一个或一个以上位点的杂合性缺失(LOH).按浸润深度分组,浆膜内LOH阳性率为9. 09%(1/11),浆膜及浆膜外LOH阳性率为53. 85%(7/13),两者间差异有统计学意义(P ＜0. 05).结论 WWOX 参与调控结直肠癌的发生发展,LOH 可能是WWOX在肿瘤中失活的重要机制.

摘要： 目的:研究慢病毒介导的含WW域的氧化还原酶(WW Domain-containing Oxidoreductase,WWOX)表达对急性淋巴细胞白血病细胞增殖活性的影响.方法:用过表达WWOX重组慢病毒和阴性对照重组慢病毒感染急性淋巴细胞白血病细胞Jurkat,分别记为Lenti WWOX,Lenti NC;用Realtime PCR和Western印迹法检测细胞中WWOX表达水平.用含有Wnt信号通路抑制剂FH535的培养液培养感染过表达WWOX重组慢病毒和感染阴性对照重组慢病毒的Jurkat细胞,分别记为Lenti WWOX+FH535,Lenti NC+FH535;用Realtime PCR和Western印迹法检测细胞中β-catenin,c-myc 表达水平.MTT测定细胞增殖活性,PI单染和Annexin V-FITC/PI双染法分别检测细胞周期和凋亡变化,Western印迹法检测细胞中周期相关蛋白Cyclin-D1,p27和凋亡蛋白C-Caspase-3表达水平.结果:Lenti WWOX细胞中WWOX表达水平均明显高于Lenti NC(P＜0.05).Lenti WWOX,Lenti NC+FH535,Lenti WWOX+FH535细胞中β-catenin,c-myc蛋白水平均明显低于Lenti NC, 并且Lenti WWOX+FH535细胞中β-catenin,c-myc蛋白水平减少最多.Lenti WWOX,Lenti NC+FH535,Lenti WWOX+FH535细胞增殖能力降低,细胞G0/G1比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中Cyclin-D1蛋白水平降低,p27,C-Caspase-3蛋白水平升高,与Lenti NC比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).Lenti WWOX+FH535细胞增殖能力降低,细胞G0/G1比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中Cyclin-D1蛋白水平降低,p27,C-Caspase-3蛋白水平升高,与Lenti WWOX,LentiNC+FH535比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:慢病毒介导的WWOX表达能够抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,作用机制与抑制Wnt信号通路有关.

摘要： 目的 研究含WW域的氧化还原酶(WWOX)对胰腺癌细胞增殖活性、凋亡及细胞中三磷酸腺苷(ATP)含量影响.方法 在胰腺癌SW1990细胞中转染WWOX过表达质粒,同时转染对照质粒作为阴性组,设置只加入转染试剂的细胞为对照组.荧光定量PCR和Western blot法检测各组胰腺癌细胞中WWOX的表达水平,用MTT法测定胰腺癌细胞增殖活性,用流式细胞术测定胰腺癌细胞凋亡情况,用JC-1法检测胰腺癌细胞线粒体膜电位,用荧光素酶法测定ATP含量,用Western blot法检测胰腺癌细胞线粒体和胞质中细胞色素C(Cyt C)及细胞中剪切型Caspase-9(Cleaved Caspase-9)、剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达.结果 WWOX过表达质粒转染后的SW1990细胞中WWOX mRNA和蛋白水平高于对照组(P＜0.05).高表达WWOX后的SW1990细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中ATP含量降低,线粒体膜电位降低,线粒体中Cyt-C蛋白水平降低,胞质中Cyt-C蛋白水平升高,细胞中Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).阴性组细胞WWOX mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、凋亡率、ATP含量、线粒体膜电位、胞质和线粒体中Cyt-C蛋白水平、细胞中Cleaved Caspase-9和Cleaved Caspase-3蛋白水平与对照组相比均无显著差异(P＞0.05).结论 WWOX可以抑制胰腺癌细胞增殖活性,诱导胰腺癌细胞凋亡,减少细胞中ATP合成,这可能与减少线粒体释放Cyt-C和线粒体膜电位有关.

摘要： 目的:研究慢病毒介导的含WW域的氧化还原酶(WW Domain-containing Oxidoreductase,WWOX)表达对急性淋巴细胞白血病细胞增殖活性的影响。方法:用过表达WWOX重组慢病毒和阴性对照重组慢病毒感染急性淋巴细胞白血病细胞Jurkat,分别记为Lenti WWOX,Lenti NC;用Realtime PCR和Western印迹法检测细胞中WWOX表达水平。用含有Wnt信号通路抑制剂FH535的培养液培养感染过表达WWOX重组慢病毒和感染阴性对照重组慢病毒的Jurkat细胞,分别记为Lenti WWOX+FH535,Lenti NC+FH535;用Realtime PCR和Western印迹法检测细胞中β-catenin,c-myc表达水平。MTT测定细胞增殖活性,PI单染和Annexin V-FITC/PI双染法分别检测细胞周期和凋亡变化,Western印迹法检测细胞中周期相关蛋白Cyclin-D1,p27和凋亡蛋白C-Caspase-3表达水平。结果:Lenti WWOX细胞中WWOX表达水平均明显高于Lenti NC(P<0.05)。Lenti WWOX,Lenti NC+FH535,Lenti WWOX+FH535细胞中β-catenin,c-myc蛋白水平均明显低于Lenti NC,并且Lenti WWOX+FH535细胞中β-catenin,c-myc蛋白水平减少最多。Lenti WWOX,Lenti NC+FH535,Lenti WWOX+FH535细胞增殖能力降低,细胞G0/G1比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中Cyclin-D1蛋白水平降低,p27,C-Caspase-3蛋白水平升高,与Lenti NC比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Lenti WWOX+FH535细胞增殖能力降低,细胞G0/G1比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中Cyclin-D1蛋白水平降低,p27,C-Caspase-3蛋白水平升高,与Lenti WWOX,Lenti NC+FH535比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:慢病毒介导的WWOX表达能够抑制急性淋巴细胞白血病细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,作用机制与抑制Wnt信号通路有关。

摘要： 目的研究含WW域的氧化还原酶(WW Domain-containing Oxidoreductase,WWOX)对胆囊癌细胞侵袭及迁移能力影响。方法胆囊癌细胞株GBC转染过表达WWOX的真核表达载体(pc DNA3. 1-WWOX)和对照载体(pc DNA3. 1),同时以不做转染的细胞为Control,qRT-PCR检测WWOX水平,Western blotting检测WWOX、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)水平,CCK8检测细胞增殖活性,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果 pc DNA3. 1细胞中WWOX、MMP-2、MMP-9、Vimentin、E-cadherin水平和细胞增殖、迁移、侵袭能力与Control相比,差异无统计学意义(P> 0. 05)。pc DNA3. 1-WWOX中WWOX水平明显升高,其细胞增殖、迁移、侵袭能力明显降低,细胞中MMP-2、MMP-9、Vimentin水平下降,E-cadherin水平升高,与Control相比差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 WWOX抑制胆囊癌细胞侵袭和迁移,下调细胞中MMP-2、MMP-9、Vimentin水平,提高细胞中E-cadherin表达。

摘要： Objective To investigate the expression of FHIT,WWOX and MDR1 gene in nasopharyngeal carcinoma and FHIT and WWOX mechanism of inactivation.Methods Real-time PCR was used to test FHIT,WWOX and MDR1 gene′s mRNA expression in 89 nasopharyngeal carcinoma patients (experimental group) and 61 inflammatory patients (control group).Q-MSP was used to test the FHIT and WWOX promoter methylation status.Denatured polyacrylamide gel electrophoresis was used to test the LOH of FHIT and WWOX gene.Results (1)The three genes′ mRNA expression were different between experimental group and control group (P<0.05).After grouped according to the histological type and clinical stages,the expression of FHIT and WWOX mRNA between the patients with serious illness or poorly differentiated squamous cell carcinoma and mild cases or highly differentiated squamous cell carcinoma were significantly different in the experimental group,the difference is statistically significant (P<0.05)Meanwhile,the FHIT and WWOX mRNA expression had statistical association with the clinical stage and histological type(r=-0.731,P=0.000;r=-0.816,P=0.000;r=-0.626,P=0.000;r=-0.536,P=0.001).The MDR1 mRNA expression was different between poorly and highly differentiated squamous cell carcinoma (P=0.021),which was statistical associated with the histological type (r=-0.697,P<0.001).(2)The degrees of FHIT and WWOX promoter methylation in the experimental group was higher than those in the control group,the difference was statistically significant (P<0.05);Also,the expression of FHIT and WWOX mRNA were closely related to the degree of promoter methylation(r=-0.689,P=0.000;r=-0.594,P=0.000).(3) In the experimental group,there were 39 cases (43.8%) of LOH in the FHIT gene,and 42 cases (47.2%)of the WWOX genes were significantly higher than those in the control group (4.9% and 3.3%),the difference was statistically significant (P<0.05).The FHIT and WWOX gene mRNA were negatively correlated with the loss of heterozygosity(r=-0.239,P=0.049;r=-0.364,P=0.013).Conclusion Promoter methylation is the main reason for the down-regulation of FHIT gene and WWOX gene expression in nasopharyngeal carcinoma patients,which may be the main reason for the occurrence and development of nasopharyngeal carcinoma.The higher expression of MDR 1 mRNA is statistical association with the histological type.%目的 探讨FHIT、WWOX基因组在鼻咽癌患者中的表达、失活机制及MDR1基因在鼻咽癌中的表达.方法 采用荧光相对定量RT-PCR法检测89例鼻咽癌患者(试验组)和61例慢性鼻黏膜炎患者(对照组)鼻咽部组织WWOX、FHIT和MDR1基因mRNA表达水平,甲基化特异性(MSP)方法及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析FHIT和WWOX基因mRNA表达下调原因.结果 (1)实验组鼻咽组织中FHIT、WWOX和MDR1基因的mRNA表达量与对照组间的差异有统计学意义(P<0.05);按临床分期和分化程度分层后,试验组中病情较严重者较病情轻者,分化程度低的较分化程度高者间的FHIT和WWOX基因表达量差异有统计学意义(P<0.05),且FHIT和WWOX基因表达量与临床分期、分化程度呈负相关(r=-0.731,P=0.000;r=-0.816,P=0.000;r=-0.626,P=0.000;r=-0.536,P=0.001);试验组低分化者MDR1基因mRNA与高分化者间差异有统计学意义(P=0.021),且组织学类型与MDR1基因mRNA相对表达量呈负相关(r=-0.697,P=0.000);试验组的FHIT与WWOX基因的mRNA相对表达量呈正相关(r=0.540,P=0.000).(2) 试验组的FHIT和WWOX基因启动子甲基化程度明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);且FHIT 和WWOX 的mRNA与该基因启动子甲基化程度呈正相关(r=-0.689,P=0.000;r=-0.594,P=0.000). (3) 试验组中有39例(43.8%)在FHIT基因中至少有1个位点存在杂合性缺失(LOH),在WWOX基因中42例(47.2%)至少一个位点存在LOH,明显高于对照组的3例和2例(4.9%,3.3%),差异有统计学意义(P<0.05).且FHIT和WWOX基因mRNA与该基因基因杂合性缺失呈负相关(r=-0.239,P=0.049;r=-0.364,P=0.013).结论 启动子甲基化是鼻咽癌患者WWOX和FHIT基因表达下调的主要原因,可能也是鼻咽癌的发生、发展的主要原因.MDR1基因过度表达与鼻咽癌的分化程度密切相关.

摘要： 本发明公开了一种靶向性WWOX基因重组腺病毒及其制备方法和应用，该重组腺病毒含有一个WWOX基因表达盒，所述WWOX基因表达盒包含Survivin启动子、WWOX基因和终止子，所述WWOX基因的表达由Survivin启动子调控；本发明的重组腺病毒能够有效并且特异地诱导肿瘤细胞的凋亡并抑制肿瘤细胞的克隆，能够有效抑制肿瘤细胞的生长，同时能够延长荷瘤裸鼠的平均生存期并提高平均生存率；该重组腺病毒还具有转染效率高，稳定性好，肿瘤治疗谱广，制备方法简单等优点，可用于制备抗肿瘤药物，在肿瘤基因治疗领域有着良好的开发应用前景。

摘要： 本发明涉及Wwox作为防治癌症的药物靶点的应用。本发明首次揭示了Wwox的表达和STAT3活化水平呈现负向相关。Wwox一方面通过抑制JAK2的磷酸化，另外一方面通过与JAK2的作用，抑制JAK2和STAT3结合能力，进而抑制STAT3的磷酸化。此外，Wwox也可以通过STAT3来抑制IL‑6的表达，并且Wwox表达量的高低在乳腺癌病人的预后中有显著的相关性。因此，Wwox在肿瘤特别是乳腺癌中起到非常重要的作用，是一个癌症治疗靶点。

摘要： 本发明涉及一种人的抗癌基因WWOXδ6‑8突变蛋白及其应用，通过将大量癌症患者作为研究病例，对病例进行基因检测并进行分析，确定出人的抗癌基因WWOXδ6‑8的突变蛋白，根据该人的抗癌基因WWOXδ6‑8突变蛋白制备基因芯片、单克隆抗体和ELISA试剂盒，为癌症的基因诊断提供的指引作用，实现癌症的早诊断、早发现和相关治疗。

摘要： 本发明公开了一种靶向性WWOX基因重组腺病毒及其制备方法和应用，该重组腺病毒含有一个WWOX基因表达盒，所述WWOX基因表达盒包含Survivin启动子、WWOX基因和终止子，所述WWOX基因的表达由Survivin启动子调控；本发明的重组腺病毒能够有效并且特异地诱导肿瘤细胞的凋亡并抑制肿瘤细胞的克隆，能够有效抑制肿瘤细胞的生长，同时能够延长荷瘤裸鼠的平均生存期并提高平均生存率；该重组腺病毒还具有转染效率高，稳定性好，肿瘤治疗谱广，制备方法简单等优点，可用于制备抗肿瘤药物，在肿瘤基因治疗领域有着良好的开发应用前景。

摘要： 本发明提供了通过对受试者施用编码功能性WWOX基因产物的多核苷酸来诊断、预后和治疗受试者中的癌症的新方法和组合物。