尿苷

摘要： 目的:对海藻配方颗粒的指纹图谱与含量测定研究。方法:采用Shim-pack GIST C18-AQ(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以有机相乙腈和水相0.08%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱。结果:15批海藻配方颗粒的指纹图谱中确定了7个共有峰且相似度大于0.90,含量测定:尿苷在1.5μg/mL~37.4μg/mL范围内的回归方程为y=30521867.57x+560.98,R^(2)=0.9999,平均回收率为95.9%(n=9),RSD为0.83%,两者重复性、精密度、稳定性方法学均符合规定。结论:该方法建立可为海藻配方颗粒的质量评价提供参考。

摘要： 目的:采用高效液相色谱法(HPLC)建立板蓝根颗粒提取物含量测定的质量控制方法。方法:采用C18 4.6 ×250 mm色谱柱(天津喆分医药科技、中谱科技和谱宁科技),甲醇和水的梯度洗脱,流速0.8 ml/min,检测波长为254 nm,柱温为30°C。结果:尿苷在5.05 μg/ml~80.88 μg/ml范围内有良好的线性关系;鸟苷在5.01 μg/ml~80.08 μg/ml范围内有良好的线性关系;腺苷在6.23 μg/ml~99.60 μg/ml范围内有良好的线性关系,尿苷回归方程y = 0.8851x − 0.1210 (r2 = 1.000),鸟苷回归方程y = 1.0852x − 0.1685 (r2 = 1.000);腺苷回归方程y = 1.6328x – 02553 (r2 = 1.000)。尿苷回收率为102.6%,RSD为1.2%;鸟苷回收率为99.1%,RSD为0.9%;腺苷回收率为98.8%,RSD为1.0%,回收率良好。结论:该方法科学、简便、准确,能有效控制板蓝根颗粒提取物含量测定的质量。

摘要： 目的 采用高效液相色谱(HPLC)法同时测定郁金配方颗粒中2种指标成分的含量,并建立该制剂的HPLC指纹图谱.方法 色谱柱为WelchUltimate AQ-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1％磷酸二氢钾溶液(梯度洗脱),流速为0.8 mL/min,检测波长为260 nm,柱温为30°C.采用"中药色谱指纹图谱相似度软件(2012.130723版)"进行相似度评价,并确定共有峰.结果 15批煎剂及4批样品的HPLC图谱中有3个共有峰,1号峰为尿苷,3号峰为腺苷,相似度均大于0.85.尿苷、腺苷进样量分别在5.1～264.4 ng(r=0.9997)和15.9～792.6 ng(r=0.9997)范围内与峰面积线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2.00％(n=6),平均加样回收率分别为93.65％及93.51％,RSD分别为1.84％及2.03％(n=6).结论 该方法操作简便、准确,重复性好,结合所建立的指纹图谱,可为郁金配方颗粒的质量评价提供参考.

摘要： 目的:建立炒土鳖虫中有效成分尿嘧啶和尿苷的高效液相色谱测定方法.方法:采用Agilent ZORBAX NH2(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水(95:5)作为流动相,流速为1.0 mL/min,温度40°C,紫外检测器,检测波长为205 nm.结果:高效液相色谱法(HPLC)检测炒土鳖虫尿嘧啶和尿苷在0.50～10.0μg/mL(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系,尿嘧啶平均回收率为98.56％(RSD=1.0％,n=6),尿苷平均回收率为98.06％(RSD=0.8％,n=6).结论:HPLC测定炒土鳖虫中的有效成分尿嘧啶和尿苷,其操作方法简单快速,结果准确可靠,是一种有效测定含量的方法.

摘要： 金水宝胶囊是一种发酵虫草菌丝体制剂,具有补肾保肺、固精益气等功效,临床应用广泛,核苷酸是其中一类主要有效成份。本文通过使用高效液相色谱(HPLC)方法同时测定该制剂中尿苷、鸟苷和腺苷的含量。采用Shiseido Capcell C18 AQ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇(A)-0.05 mol/L KH_(2)PO_(4)水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,检测波长260 nm。结果表明,尿苷、鸟苷和腺苷在各自范围内线性关系良好(r=1.0000),平均加样回收率分别为99.29%、98.86%和99.10%,同时该方法对色谱柱耐用性良好。样品测定结果显示,金水宝胶囊中3种核苷酸的总含量为2.31~2.70mg/粒。在上述研究基础上2020年版《中国药典》中对金水宝胶囊的质量标准进行修订,解决了原标准中核苷酸含量测定项指标成份单一、方法复杂等问题,具有重要应用价值。

摘要： 嘧啶核苷包括尿苷和胞苷,是生产抗病毒和抗肿瘤药物的重要中间体.为获得胞苷高产菌,该研究以高产尿苷的大肠杆菌UR6为出发菌株,利用CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术对其进行了一系列的代谢工程改造.结果显示,cdd、cmk和ygdH 3个基因的敲除阻断了胞苷及其前体物的主要降解途径,使胞苷产量达到了2.8 g/L,而尿苷产量基本无变化;突变体PyrHecj(D93A)和PyrGcgl(D160E、E162、E168K)的引入结合nudG基因的双拷贝有效增强了胞苷合成途径,使胞苷产量提高至5.6 g/L,尿苷产量降低至9.3 g/L;引入酵母菌的5′-核苷酸酶PHM8使尿苷的产量提高至11.5 g/L,而对胞苷的积累影响不大;乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶和尿苷酸激酶的融合表达,增强了尿苷酸到胞苷的合成通量,使胞苷产量进一步提升至7.2 g/L,尿苷产量降低至8.2 g/L.最终所得菌株可用于胞苷和尿苷联产,具有较好的工业化应用前景.

摘要： 目的:建立金线莲中12个核苷类成分(胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、鸟嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、2'-脱氧鸟苷、β-胸苷、腺苷和2'-脱氧腺苷)含量的HPLC测定方法,并采用聚类分析法比较不同来源金线莲核苷类成分组成和含量差异.方法:采用Uitimate(R) XB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长260 nm,柱温30°C,进样量10 μL.采用聚类分析法评价不同批次金线莲中核苷类成分的化学模式.结果:12个核苷类成分质量浓度分别在考察的线性范围内与峰面积呈良好的线性关系(r＞0.999 4);建立的方法精密度、重复性和稳定性良好;加样回收率为95.0％～114.6％(RSD≤4.8％).对52批金线莲样品中12个核苷类成分进行测定,其含量较高的主要为腺苷、尿苷、鸟苷、胞苷(均值大于300 μg·g-1),聚类分析发现不同来源金线莲核苷成分具有4类化学表型,含量之间存在差异.结论:建立的金线莲中12个核苷类成分的含量测定方法准确、可靠,可以为金线莲核苷类多指标质量控制体系提供新的技术手段.

摘要： 目的:建立山药饮片HPLC指纹图谱,通过研究不同剂量60Co-γ射线辐照前后HPLC指纹图谱的变化,评价山药饮片辐射灭菌的可行性.方法:采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 ml·min-1,检测波长258 nm,柱温30°C.分别采用辐照剂量4,6,8,10 kGy对山药饮片粉末进行静态辐照,应用配对t检验对各辐照剂量前后指纹图谱中共有峰的相对保留时间和单位供试品量的峰面积进行统计学分析.结果:通过方法学考察及10批样品的测定,建立了山药饮片的HPLC指纹图谱,共确认了7个共有峰,通过与对照品比对,指认了其中3个色谱峰,分别为尿苷、腺苷与鸟苷,各批样品图谱相似度均大于0.945.经过8,10 kGy剂量辐照后,山药指纹图谱中色谱峰的相对保留时间和单位供试品量的峰面积与辐照前相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:建立的山药指纹图谱方法准确、可靠.山药辐照灭菌时辐照剂量不超过6 kGy为宜.

摘要： 目的 对茯苓配方颗粒、猪苓配方颗粒标准汤剂进行质量评价.方法 采集不同产地茯苓、猪苓饮片,分别制备两者配方颗粒标准汤剂,酸水解其中的多糖组分,对水解后单糖进行衍生化处理.HPLC法分析单糖组成,建立相应指纹图谱.以栀子苷为内标,HPLC法测定标准汤剂中尿苷、鸟苷、腺苷含有量.结果 2种配方颗粒标准汤剂中单糖组成具有明显差异.22批茯苓HPLC指纹图谱中有5个共有峰(甘露糖、核糖、葡萄糖、半乳糖、岩藻糖),相似度0.890～0.999;20批猪苓HPLC指纹图谱中有8个共有峰(7个为甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖),相似度0.853～0.999.尿苷、鸟苷、腺苷分别在1～100、0.5～5、1～ 100 μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.999 9),平均加样回收率96.66％ ～ 101.54％,RSD 1.30％ ～ 1.85％.结论 本研究将多糖水解后单糖组成的HPLC指纹图谱和核苷的含有量测定相结合,可用于茯苓配方颗粒、猪苓配方颗粒标准汤剂的质量评价.

摘要： 尿苷广泛应用于食品、保健品、化妆品和医药行业,尤其作为多种抗病毒抗肿瘤药物的中间体,具有极其重要的医药价值.微生物发酵法是公认的工业化生产尿苷的理想方法,其研究的瓶颈在于获得高产尿苷的优良菌种.本研究采用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术对野生型大肠杆菌E.coli W3110进行了系统的代谢工程改造:将B.subtilis A260的嘧啶核苷操纵子基因整合在E.coli W3110基因组上,构建了菌株E.coli W3110(UR1),该菌株具备了胞外积累尿苷的能力;接着敲除尿苷分解代谢相关的基因,构建了菌株E.coli W3110(UR3),阻断了尿苷的降解;最后改造天冬氨酸和PRPP的合成和代谢相关途径,构建了菌株E.coli W3110(UR5).该菌株在5L发酵罐上发酵64h,可积累尿苷70g/L,是目前报道的发酵法生产尿苷的最高水平,为尿苷发酵生产的产业化奠定了坚实基础.

摘要： 本文对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)F126尿苷发酵的培养基和发酵条件进行优化.实验确定甘油作为最优的发酵碳源,酵母粉和谷氨酸钠作为最优的发酵氮源.酵母粉的添加方式为底料1％(m/v)、流加2％(m/v),谷氨酸钠的添加方式为底料2％(m/v)、流加4％(m/v).发酵过程中控制pH和溶氧值维持在6.4和10％更有利于菌体的产苷.上述优化条件下,尿苷产量可达到25g/L,乙偶姻的产量可达到50g/L.采取尿苷联产乙偶姻的发酵策略可有效提高原料利用率,降低成本,在工业化应用上具有重要意义.

摘要： 以野生型枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)TJ374为出发菌株,采用DES(硫酸二乙酯)及UV(紫外)诱变处理,筛选具有5FUr(5-氟尿嘧啶抗性)、2TUr(2-硫尿嘧啶抗性)、6AUr(6-氮尿嘧啶抗性)标记的菌株,获得一株尿苷产生菌Tk237,36°C摇瓶发酵72h最高可产尿苷1.76g/L.

摘要： 以尿苷类化合物(Ⅰ)为原料,大规模制备2,2'-脱水尿苷类化合物(Ⅱ)的方法,具有以下独特之处:(1)以碳酸二酯作脱水剂,在无水DMF(或DMA)中,在不大于120°C温度下,完成脱水反应;(2)反应结束后回收溶剂,以重复利用;(3)在回收溶剂后的残留物中加入沸点较高的混合溶剂,搅拌析出产品(Ⅱ);(4)粗品Ⅱ可再经混合溶剂处理,即可得到合格的化合物(Ⅱ);(5)混合溶剂可回收再利用.本法三废较少,工艺过程安全.

摘要： 本文设计了将尿苷通过化学方法引接到杯芳烃母体上,作为对特定核苷的分子识别因子,进而研究其对核酸的仿酶催化,分子传输及DNA或RNA定点切割.另外,以杯芳烃为原料,合成得到对叔丁荃杯芳烃尿苷衍生物.

摘要： 建立HPLC法测定龙眼肉中腺苷.尿苷和腺嘌呤的含量.采用NucleosilC18反相柱(250mm×4mm),以0.01mol/L的[H2PO4:乙腈-92:8为流动相,流速为1mL/min,检测波长为254nm,柱温40°C,用外标法,测定了龙眼肉中腺苷、尿苷和腺嘌呤的含量.分析中选取腺苷的线性苑围(0.1-20.0)μg/mL,相关系数r=0.9999,回收率94.59％,RSD3.10％;尿苷的线性苑围(0.05-10.0)μg/mL,相关系数r=1,回收率97.49％,RSD4.50％;腺嘌呤线性范围(0.05～10.0)μg/mL,相关系数r=1,回收率103.11％,RSD1.90％.该方法简便快速,线性关系良好.

摘要： 目的:建立HPLC法测定龙眼肉中腺苷、尿苷和腺嘌呤的含量.方法:采用Nucleosil C18 反相柱(250 mm×4 mm),以0.01 mol/L的KH2PO4:乙腈=92:8为流动相,流速为1 ml/min,检测波长为254 nm,柱温40°C,用外标法,测定了龙眼肉中腺苷、尿苷和腺嘌呤的含量.结果与结论:分析中选取腺苷的线性范围0.1～20.0 μg/ml,相关系数r=0.9999,回收率94.59％,RSD3.10％;尿苷的线性范围0.05～10.0 μg/ml,相关系数r=1,回收率97.49％,RSD 4.50％;腺嘌呤线性范围0.05～10.0 μg/ml,相关系数r=1,回收率103.11％,RSD1.90％.该方法简便快速,线性关系良好.

摘要： 本发明涉及一种制备尿苷酸用酶制剂以及酶催化制备尿苷酸的方法，该制备方法采用含尿苷的料液为底物，加入具有尿苷激酶和聚磷酸激酶活性的大肠杆菌细胞破碎液、六偏磷酸钠、硫酸镁和少量ATP，在pH 8.0，温度30°C的反应条件下进行酶促反应合成尿苷酸。在上述偶联催化反应体系中，尿苷激酶负责催化尿苷和ATP生成尿苷酸，同时伴随着ATP去磷酸化形成ADP。聚磷酸激酶负责催化六偏磷酸钠和ADP形成ATP，从而实现反应中ATP的再生。本发明提供的尿苷酸生产方法具有原料价格低廉，周期短，操作简便，绿色环保，产率高的优点，具有良好的工业应用价值。

摘要： 本发明涉及医药技术领域，涉及曲氟尿苷或曲氟尿苷替匹嘧啶组合物的医药用途，具体涉及曲氟尿苷或曲氟尿苷替匹嘧啶组合物在制备治疗血液疾病药物中的应用，具体涉及曲氟尿苷或曲氟尿苷替匹嘧啶组合物在制备治疗β血红蛋白基因缺损或基因突变导致的血液疾病的药物中的应用。所述的曲氟尿苷替匹嘧啶组合物由曲氟尿苷和替匹嘧啶组成，其重量组成比为：1:1‑4:1。所述的曲氟尿苷或曲氟尿苷替匹嘧啶组合物还可以和药学上可接受的载体制备成药物组合物用于制备治疗血液疾病的药物。

摘要： 本发明涉及RNA的化学合成领域，公开C4′‑氟代尿苷亚磷酰胺单体及其C4′‑氟代尿苷定点修饰的RNA的制备方法。该C4′‑氟代尿苷亚磷酰胺单体的化学结构如式(1)所示。本发明所述的C4′‑氟代尿苷亚磷酰胺单体用于制备C4′‑氟代尿苷定点修饰的RNA，在研究C4′‑氟代RNA的生化性质等方面有着广泛的应用前景。式(1)中“DMTr‑”为二甲氧基三苯甲基，“N(iPr)2‑”为N,N‑二异丙基胺基，“TBDMS”为叔丁基二甲基氯硅烷。

摘要： 本发明公开了一种尿苷二磷酸葡萄糖及尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的生物合成方法。本发明以可溶淀粉为主要初始原料，将高温α‑葡聚糖磷酸化酶和高温糖‑1‑磷酸核苷酸化酶分别在大肠杆菌中重组表达，利用表达后的菌体高温全细胞催化合成尿苷二磷酸葡萄糖。在此基础上，将高温尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶在大肠杆菌中重组表达，偶联上述尿苷二磷酸葡萄糖的合成体系高温全细胞催化合成尿苷二磷酸葡萄糖醛酸，同时在尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的合成体系中引入高温NADH氧化酶的全细胞催化体系，构成高温NAD+/NADH循环系统，以减少辅酶NAD+的使用。本发明利用高温全细胞催化的方式，成功避免合成过程中菌体各种代谢通路的干扰，减少纯化难度。

摘要： 本发明公开了一种从含尿苷的催化液中分离提取尿苷的方法，包括以下步骤：(1)将含尿苷的催化液与聚乙二醇混合后分液，下层为尿苷催化液；(2)所得尿苷催化液经纳滤，收集纳滤透过液；(3)所得纳滤透过液经蒸发浓缩，得到尿苷浓缩液；(4)所得尿苷浓缩液调节pH后，加入晶种，搅拌析晶。本发明中的结晶体系为水体系，不必增加任何试剂，降低结晶成本。本发明的结晶过程在12h以内完成获得亮白色晶体，一次结晶收率大于60％，经多次结晶或嵌套结晶后总结晶收率在90％以上，同时晶体的纯度大于98％，产品质量、收率、成本高于现有技术。

摘要： 本发明公开了一种普拉特链霉菌(Streptomyces platensis)DHE020，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO.23602，保藏日期为2021年10月14日。所述普拉特链霉菌可同时发酵产假尿苷和1‑甲基‑假尿苷，具有工业化生产潜力。

摘要： 本发明提供了一种生产尿苷的重组微生物以及利用该重组微生物生产尿苷的方法。其中，对尿苷的降解及利用基因进行了敲除，这些基因编码核糖核苷水解酶，尿苷磷酸化酶，核苷磷酸化酶，胞苷/尿苷激酶以及核苷转运蛋白。同时，对尿苷生物合成途径中的关键酶进行了过表达，包括降解胞苷三磷酸到胞苷单磷酸的胞苷三磷酸焦磷酸化酶，以及催化尿苷单磷酸到尿苷的尿苷单磷酸磷酸化酶。此外，对嘧啶核苷途径进行了基因工程改造，解除合成途径的反馈抑制。通过生物发酵方法将重组菌株在5升发酵罐可达到20g/L以上的尿苷产量，可以实现工业化的量产，同时尿苷的生产成本低和减少污染少，绿色环保，具有较高的推广应用价值。

摘要： 本发明涉及一种制备尿苷酸用酶制剂以及酶催化制备尿苷酸的方法，该制备方法采用含尿苷的料液为底物，加入具有尿苷激酶和聚磷酸激酶活性的大肠杆菌细胞破碎液、六偏磷酸钠、硫酸镁和少量ATP，在pH 8.0，温度30°C的反应条件下进行酶促反应合成尿苷酸。在上述偶联催化反应体系中，尿苷激酶负责催化尿苷和ATP生成尿苷酸，同时伴随着ATP去磷酸化形成ADP。聚磷酸激酶负责催化六偏磷酸钠和ADP形成ATP，从而实现反应中ATP的再生。本发明提供的尿苷酸生产方法具有原料价格低廉，周期短，操作简便，绿色环保，产率高的优点，具有良好的工业应用价值。

摘要： 本发明涉及RNA的化学合成领域，公开C4′‑氟代尿苷亚磷酰胺单体及其C4′‑氟代尿苷定点修饰的RNA的制备方法。该C4′‑氟代尿苷亚磷酰胺单体的化学结构如式(1)所示。本发明所述的C4′‑氟代尿苷亚磷酰胺单体用于制备C4′‑氟代尿苷定点修饰的RNA，在研究C4′‑氟代RNA的生化性质等方面有着广泛的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种尿苷二磷酸葡萄糖及尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的生物合成方法。本发明以可溶淀粉为主要初始原料，将高温α‑葡聚糖磷酸化酶和高温糖‑1‑磷酸核苷酸化酶分别在大肠杆菌中重组表达，利用表达后的菌体高温全细胞催化合成尿苷二磷酸葡萄糖。在此基础上，将高温尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶在大肠杆菌中重组表达，偶联上述尿苷二磷酸葡萄糖的合成体系高温全细胞催化合成尿苷二磷酸葡萄糖醛酸，同时在尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的合成体系中引入高温NADH氧化酶的全细胞催化体系，构成高温NAD+/NADH循环系统，以减少辅酶NAD+的使用。本发明利用高温全细胞催化的方式，成功避免合成过程中菌体各种代谢通路的干扰，减少纯化难度。