Wolbachia

摘要： 【目的】共生菌Wolbachia在烟粉虱种群分化和物种形成中起重要作用。旨在采用荧光原位杂交技术,明确初生共生菌Portiera和次生共生菌Wolbachia在烟粉虱体内的分布。【方法】利用2种共生菌的特异性荧光探针对烟粉虱整虫进行荧光原位杂交,研究其在烟粉虱不同发育阶段的分布;在磷酸缓冲液中对烟粉虱成虫腹部进行组织解剖,利用优化的荧光原位杂交流程对获得的组织样本进行荧光染色、观察。【结果】对烟粉虱整虫进行荧光染色,在烟粉虱各个发育阶段虫体中均检测到Portiera和Wolbachia的荧光信号;在卵和若虫中,这2种共生菌集中分布于含菌细胞中,在成虫中,这2种共生菌所在的具体位置不清晰;成虫腹部组织染色结果显示,Portiera和Wolbachia除集中分布于含菌细胞中外,在卵巢中也有分布。【结论】利用本研究优化建立的昆虫组织染色方法,可以清晰观察烟粉虱成虫卵巢及含菌细胞中Portiera和Wolbachia的分布,可为其他昆虫及组织内共生菌的荧光染色观察提供参考。

摘要： 化学感受蛋白(Chemosensory proteins,CSPs)在昆虫化学通讯及其他生理过程中发挥重要功能。茶尺蠖与其近缘种灰茶尺蠖是茶园重要鳞翅目害虫,对我国茶叶的安全生产造成严重危害。研究化学感受蛋白直系同源基因在茶尺蠖两近缘种间的表达,有助于研发同时针对该两种害虫的绿色防控技术。通过荧光定量qRT-PCR分析了EoblCSP8直系同源基因EgriCSP8在灰茶尺蠖中的表达分布。结果表明,EgriCSP8与EoblCSP8具有保守的幼虫期高表达模式,EgriCSP8主要表达于灰茶尺蠖3龄幼虫头部。进一步比较Eobl-EgriCSP8在茶尺蠖两近缘种间的表达发现,EoblCSP8在茶尺蠖中的表达量显著高于EgriCSP8在灰茶尺蠖中的表达量。此外,还分析了沃尔巴克氏体菌(Wolbachia)及挥发物诱导对Eobl-EgriCSP8表达的影响,发现Wolbachia显著影响EgriCSP8在灰茶尺蠖中的表达。该结果证实Wolbachia参与调控昆虫CSPs基因的表达,为后续揭示Wolbachia介导CSPs表达,参与调控茶尺蠖两近缘种化学感受及与茶树的协同进化提供了新的研究思路。

摘要： Objective:To determine the prevalence of mosquito larvae in campus areas and the infection rate of endosymbiotic bacteria,Wolbachia in mosquito larvae.Method:The mosquito larvae samples were collected in residential areas and academic buildings of Suranaree University of Technology located in Northeastern Thailand during 2017-2018.Mosquito species identification was performed using GLOBE mosquito protocols and Rattanarithikul&Panthusiri’s keys.The gene encoding for the surface protein of Wolbachia was amplified by PCR and confirmed by DNA sequencing.Results:Armigeres sp.is the highest proportion of mosquito larvae followed by Culex spp.,Aedes albopictus,Aedes aegypti,and Toxorynchites spp.,respectively.Aedes aegypti have breeding sites mostly in the containers found indoors,whereas the main breeding sites of Aedes albopictus were found in both outdoors and indoors.The House Index and Breteau Index for Aedes spp.was more than 5%and 20%,respectively,in both areas,indicating that these areas are dengue sensitive.The highest proportion of Wolbachia infection was found in the larvae of Culex spp.(86.21%),followed by Aedes albopictus(69.23%)and rarely detected in Aedes aegypti(9.09%).Conclusion:The present study reported the first natural infection of Wolbachia in mosquito larvae in Thailand.Our result suggested that the mosquito species containing higher proportion of Wolbachia are less likely to be vectors for dengue.Therefore,Wolbachia transfection in mosquito larvae could be applied as a biocontrol for dengue and other mosquito-borne disease prevention.

摘要： 蚊媒传染病指的是由蚊子来传播的传染病,主要包括登革热、寨卡、疟疾等。一种新型的控制和预防蚊媒传染病的方式是利用内共生菌Wolbachia(沃尔巴克氏)来阻断病源体的传播。本文建立了一个新的常微分方程模型研究Wolbachia氏菌在蚊群中的传播。应用常微分方程定性理论,证明了模型解的非负性和有界性,给出了平衡点存在条件;在各种不同的参数条件下,得到了平衡点的全局稳定性态;讨论了Wolbachia氏菌能够成功入侵野生蚊群的条件;在特殊参数的情况下得到Wolbachia能够成功入侵的初值阈值,为释放携带Wolbachia氏菌的蚊子提供新的策略。最后用数值模拟验证了相关结论。

摘要： 为揭示高温处理对感染W olbachia米蛾生殖发育及生理特性的影响,本研究测定不同温度和时间组合处理条件下米蛾体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)三种保护酶的活性,同时在室温25°C和高温31°C下,观察米蛾的孵化率、化蛹率、羽化率、雌蛾率、产卵量和发育历期等指标,统计米蛾的生物学特性.结果表明:在室温和高温条件下,米蛾的孵化率、化蛹率、羽化率、雌蛾率均无显著差异,但严重影响了米蛾成虫的产卵量和发育历期.而在31°C处理条件下,其体内SOD含量逐渐升高,35°C条件CAT含量急剧下降,在25°C处理条件下其保护酶系统处于平衡状态.高温会影响感染Wolbachia米蛾的发育历期,产卵量和繁殖量并且会破坏米蛾体内保护酶的平衡,高温对感染W olbachia米蛾的生殖方式影响不显著.

摘要： [目的]为丰富赤眼蜂Trichogramma的种类资源,明确野外新采集的一种赤眼蜂的种类,探明该赤眼蜂所感染Wolbachia的类型.[方法]采用挂米蛾Corcyra cephalonica卵卡法在华南农业大学树木园诱集到两批赤眼蜂,通过形态鉴定和PCR扩增ITS2序列并测序分析的分子鉴定手段对野外采集的赤眼蜂材料进行种类鉴定;通过PCR扩增Wolbachia的外膜蛋白基因(wsp)序列,检测赤眼蜂体内Wolbachia的感染情况;通过PCR扩增wsp序列和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)对检测到的赤眼蜂体内的Wolbachia进行同源性分析.[结果]所诱集到的两批赤眼蜂均被鉴定为安荔赤眼蜂Trichogramma oleae Voegelé & Pointel,体内Wolbachia的感染率达100％.该Wolbachia株系与安荔赤眼蜂(前南斯拉夫品系)、短管赤眼蜂T.pretiosum(乌拉圭品系)以及T.deion(荷兰品系)体内Wolbachia亲缘关系较近,属于B超组Sib亚组,对应MIST序列型为ST486.[结论]安荔赤眼蜂T.oleae为中国野外首次发现,是完全感染Wolbachia的产雌孤雌生殖品系.本研究为害虫生物防治提供了一种新的天敌种类资源,并为进一步探明Wolbachia与赤眼蜂的互作提供了研究材料.

摘要： 沃尔巴克氏体(Wolbachia)作为最成功的胞内共生菌之一,它能感染很多节肢动物与线虫,并影响宿主的繁殖来增加其自身的传播.目前,有关Wolbachia与宿主相互作用的研究主要集中在其对宿主生殖功能的调控上.除了生殖系统外,Wolbachia也能感染宿主的体细胞,对宿主嗅觉、取食、学习与记忆、睡眠等多方面行为产生影响.然而,Wolbachia对宿主取食节律的影响还未见报道.本研究通过透射电镜和荧光原位杂交实验发现,wMel Wolbachia广泛分布于黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)的大脑中.同时,我们利用Multibeam(MB5-MB)果蝇活性监测器检测果蝇取食节律.结果发现,不论是感染Wolbachia,还是未感染Wolbachia对照组的果蝇,雌性果蝇比雄性果蝇出现在靠近食物端的次数更多,即取食偏好更高;感染Wolbachia的雌性果蝇,与对照组相比,在夜晚(ZT19-23)的取食偏好更高;相反的,感染Wolbachia的雄性果蝇,与对照组相比,在下午至夜晚(ZT15-23)的取食偏好更低,而在上午(ZT1-9)的取食偏好更高,表明Wolbachia感染对果蝇的取食节律有影响,本文为Wolba-chia对无脊椎动物宿主行为影响的研究提供一定参考价值.

摘要： [目的]双斑长跗萤叶甲Monolepta hieroglyphica为多食性害虫,可取食为害多种农作物.本研究旨在探究中国南方地区分布的双斑长跗萤叶甲地理种群的遗传多样性、遗传结构及种群间的遗传分化程度与基因流水平,探究共生菌Wolbachia 在中国南方双斑长跗萤叶甲地理种群中的多样性和感染情况.[方法]以线粒体COⅡ基因作为分子标记,对中国南方双斑长跗萤叶甲14个地理种群403头个体的COⅡ基因片段进行PCR扩增及测序,分析单倍型多样性(Hd)、种群间遗传分化指数(Fst)和基因流(Nm),并进行分子方差分析(AMOVA)以及Tajima'sD和Fu's Fs中性检验,构建单倍型中介网络关系图及系统发育树.PCR扩增Wolbachia的wsp基因,对供试种群进行Wolbachia感染率检测,并利用获得的wsp基因序列进行Wolbachia株系区分和系统发育分析.[结果]在供试的双斑长跗萤叶甲403头个体中共检测到23种COⅡ基因单倍型,在系统进化上分成两大分支.总种群Hd为0.748,各种群的Hd在0.394～0.782间.中性检验结果表明种群在进化上遵循中性模型,在较近的历史时期内没有经历明显的群体扩张事件.总种群的Fst为0.2481,Nm为0.76,AMOVA结果表明种群间的遗传分化主要来自种群内部,占方差比率的73.75％.种群间的遗传距离与地理距离间无显著相关性(R=0.2898,P=0.0640).14个地理种群的Wolbachia感染率在92.59％～100％之间,平均感染率为97.60％;基于wsp 基因序列,在检测的感染个体中共发现6种Wolbachia株系(wMhie1～wMhie6),均属于A大组,这6种株系与已知的代表性株系区别明显而在系统发生树中单独聚为一个分支.[结论]中国南方双斑长跗萤叶甲种群遗传多样性较高,多数种群间存在明显的遗传分化,种群间基因交流较低,遗传分化与地理隔离之间无显著相关性.Wolbachia在中国南方双斑长跗萤叶甲种群中具有很高的感染率及丰富的感染类群.

摘要： 蚊媒传染病是指由蚊子传播的传染病,主要包括登革热,疟疾等。一种新型的控制和预防蚊媒传染病的方式是利用内共生菌Wolbachia (沃尔巴克氏)来阻断病源体的传播。本文建立了一个新的时滞微分方程模型研究Wolbachia氏菌在蚊群中的传播。首先证明了模型解的非负性和有界性,给出了平衡点的存在条件;在各种不同的参数条件下,得到了平衡点的稳定性态;分析了Hopf分支存在的充分条件;利用中心流形定理和规范型理论给出了确定Hopf分支周期解方向和稳定性的计算公式。最后用数值模拟验证了理论结果。

摘要： 沃尔巴克氏体(Wolbachia)作为最成功的胞内共生菌之一,它能感染很多节肢动物与线虫,并影响宿主的繁殖来增加其自身的传播。目前,有关Wolbachia与宿主相互作用的研究主要集中在其对宿主生殖功能的调控上。除了生殖系统外,Wolbachia也能感染宿主的体细胞,对宿主嗅觉、取食、学习与记忆、睡眠等多方面行为产生影响。然而,Wolbachia对宿主取食节律的影响还未见报道。本研究通过透射电镜和荧光原位杂交实验发现,wMel Wolbachia广泛分布于黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)的大脑中。同时,我们利用Multibeam(MB5-MB)果蝇活性监测器检测果蝇取食节律。结果发现,不论是感染Wolbachia,还是未感染Wolbachia对照组的果蝇,雌性果蝇比雄性果蝇出现在靠近食物端的次数更多,即取食偏好更高;感染Wolbachia的雌性果蝇,与对照组相比,在夜晚(ZT19-23)的取食偏好更高;相反的,感染Wolbachia的雄性果蝇,与对照组相比,在下午至夜晚(ZT15-23)的取食偏好更低,而在上午(ZT1-9)的取食偏好更高,表明Wolbachia感染对果蝇的取食节律有影响,本文为Wolbachia对无脊椎动物宿主行为影响的研究提供一定参考价值。

摘要： Wolbachia是广泛存在于节肢动物体内的一类细胞质遗传的共生微生物，通过多种方式调控其宿主的生殖行为和影响宿主种群的适合度，包括诱导细胞质不亲和、孤雌生殖、雌性化、杀雄以及改变宿主生殖力、缩短成虫期寿命、降低活动能力等。本文综述了近年来有关Wolbachia的研究成果，论述了这类微生物在害虫防治中的应用潜力以及发展趋势。

摘要： Wolbachia是广泛存在于节肢动物体内的一类细胞质遗传的共生微生物，通过多种方式调控其宿主的生殖行为和影响宿主种群的适合度，包括诱导细胞质不亲和、孤雌生殖、雌性化、杀雄以及改变宿主生殖力、缩短成虫期寿命、降低活动能力等。本文综述了近年来有关Wolbachia的研究成果，论述了这类微生物在害虫防治中的应用潜力以及发展趋势。

摘要： Wolbachia是广泛存在于节肢动物体内的一类细胞质遗传的共生微生物，通过多种方式调控其宿主的生殖行为和影响宿主种群的适合度，包括诱导细胞质不亲和、孤雌生殖、雌性化、杀雄以及改变宿主生殖力、缩短成虫期寿命、降低活动能力等。本文综述了近年来有关Wolbachia的研究成果，论述了这类微生物在害虫防治中的应用潜力以及发展趋势。

摘要： Wolbachia是广泛存在于节肢动物体内的一类细胞质遗传的共生微生物，通过多种方式调控其宿主的生殖行为和影响宿主种群的适合度，包括诱导细胞质不亲和、孤雌生殖、雌性化、杀雄以及改变宿主生殖力、缩短成虫期寿命、降低活动能力等。本文综述了近年来有关Wolbachia的研究成果，论述了这类微生物在害虫防治中的应用潜力以及发展趋势。

摘要： Wolbachia是广泛存在于节肢动物体内的一类细胞质遗传的共生微生物，通过多种方式调控其宿主的生殖行为和影响宿主种群的适合度，包括诱导细胞质不亲和、孤雌生殖、雌性化、杀雄以及改变宿主生殖力、缩短成虫期寿命、降低活动能力等。本文综述了近年来有关Wolbachia的研究成果，论述了这类微生物在害虫防治中的应用潜力以及发展趋势。

摘要： 研究表明桑天牛卵啮小蜂有孤雌生殖现象,后代都为雄性。Wolbachia是广泛分布于节肢动物体内的一类共生茵,它们参与多种调控寄主的生殖活动机制。通过对wsp、 ftsZ和16S rDNA基因的特异性扩增,在米蛾的DNA中分别扩增出约600bp、1000bp和900bp的片断,验证了米蛾体内已感染了Wolbachia;而在桑天牛卵啮小蜂Aprostocetus prolixus的DNA中未扩增出任何片断,表明Wolbachia在桑天牛卵啮小蜂体内未被感染或感染率极低。

摘要： 研究表明桑天牛卵啮小蜂有孤雌生殖现象,后代都为雄性。Wolbachia是广泛分布于节肢动物体内的一类共生茵,它们参与多种调控寄主的生殖活动机制。通过对wsp、 ftsZ和16S rDNA基因的特异性扩增,在米蛾的DNA中分别扩增出约600bp、1000bp和900bp的片断,验证了米蛾体内已感染了Wolbachia;而在桑天牛卵啮小蜂Aprostocetus prolixus的DNA中未扩增出任何片断,表明Wolbachia在桑天牛卵啮小蜂体内未被感染或感染率极低。

摘要： 研究表明桑天牛卵啮小蜂有孤雌生殖现象,后代都为雄性。Wolbachia是广泛分布于节肢动物体内的一类共生茵,它们参与多种调控寄主的生殖活动机制。通过对wsp、 ftsZ和16S rDNA基因的特异性扩增,在米蛾的DNA中分别扩增出约600bp、1000bp和900bp的片断,验证了米蛾体内已感染了Wolbachia;而在桑天牛卵啮小蜂Aprostocetus prolixus的DNA中未扩增出任何片断,表明Wolbachia在桑天牛卵啮小蜂体内未被感染或感染率极低。

摘要： 研究表明桑天牛卵啮小蜂有孤雌生殖现象,后代都为雄性。Wolbachia是广泛分布于节肢动物体内的一类共生茵,它们参与多种调控寄主的生殖活动机制。通过对wsp、 ftsZ和16S rDNA基因的特异性扩增,在米蛾的DNA中分别扩增出约600bp、1000bp和900bp的片断,验证了米蛾体内已感染了Wolbachia;而在桑天牛卵啮小蜂Aprostocetus prolixus的DNA中未扩增出任何片断,表明Wolbachia在桑天牛卵啮小蜂体内未被感染或感染率极低。

摘要： 在室内采用选择性方法,研究了感染有Wolbachia和没有感染Wolbachia的松毛虫赤眼蜂品系对三种寄主卵选择性.结果表明,两赤眼蜂品系对米蛾卵和柞蚕卵的选择性明显高于亚洲玉米螟卵,已经丧失了对亚洲玉米螟的选择和寄生能力;但两赤眼蜂品系之间没有显著差异.

摘要： 本发明公开了一种检测鉴定昆虫体内Wolbachia感染的特异性引物、方法和试剂盒。所述特异性扩增引物Tw16s1，包括正向引物F和反向引物R，其序列依次如SEQ ID NO：1～2所示。所述检测方法为：S1.提取待测昆虫总DNA；S2.以S1的DNA为模板，利用所述引物进行PCR扩增反应；S3.将S2的PCR扩增反应产物电泳检测，从而进行判断。本发明所述引物特异性强，扩增产物为单一目的片段，而且灵敏度高，能筛选出假阴性、非特异性的样品，从而提高检出率。从提DNA到获得结果仅需要4个小时左右。可以精确、快速地发现检测出样品中是否受Wolbachia感染，为进一步得用进行疾病预防和对昆虫进行生殖调控提供基础。

摘要： 本发明提供了一种将昆虫外源共生菌Wolbachia人工转染至柑橘木虱中的方法。主要步骤为：首先制备粘贴板：将无底纸的永久性双面涂胶透明胶带粘到载玻片上，稍微压紧。其次在体视镜下把新鲜的烟粉虱卵挑出，排列于粘贴板上并用卤代烃油700封住，把柑橘木虱低龄若虫腹面朝上粘贴在同一块粘贴板上。然后在烟粉虱产卵后3h的烟粉虱卵的卵柄处，抽取卵质，注射入柑橘木虱低龄若虫腹面胸板与腹板间。注射完毕后，将柑橘木虱若虫接到干净的九里香嫩梢上培养。本发明针对烟粉虱卵及其内共生菌沃尔巴克氏菌的分布特点，建立有效的注射方法，能够提高显微注射后柑橘木虱体内外源共生菌沃尔巴克氏菌的含量，方便卵质的抽取及注射。

摘要： 一种利用内共生菌Wolbachia的生殖调控作用对灰茶尺蛾进行遗传防治的方法，属于灰茶尺蛾防治方法技术领域。其包括以下步骤：（1）防治对象鉴定；（2）防治地块灰茶尺蛾发生量和发生期的预测；（3）不携带Wolbachia的灰茶尺蛾纯化品系建立；（4）蛹或成虫的释放。该方法对环境、对茶叶质量安全，并且防治效果良好。

摘要： 本发明公开了磺胺嘧啶对在感染Wolbachia的短管赤眼蜂生殖行为中的应用。本发明提供了磺胺嘧啶在清除动物体内共生Wolbachia或降低Wolbachia滴度中的应用。本发明首次发现单独使用含有1.0mg/ml磺胺嘧啶的蜂蜜水饲喂短管赤眼蜂，能够很好的去除短管赤眼蜂携带的Wolbachia，这种方法更方便、省时，并且获得完全雄性后代。这将为进一步利用Wolbachia调控节肢动物生殖方式奠定基础，有很好的应用价值和推广意义。

摘要： 本发明公开了一种快速定量检测蚊子组织中沃尔巴克氏体(Wolbachia)的引物及其试剂盒和方法。本发明首先分离获取含有沃尔巴克氏体(Wolbachia)的不同组织，提取沃尔巴克氏体(Wolbachia)基因组DNA；采用沃尔巴克氏体(Wolbachia)特异性的PCR引物对沃尔巴克氏体(Wolbachia)DNA进行Real-time PCR检测。本发明的实现有利于大量、迅速地定量分析含沃巴克氏体(Wolbachia)的组织样品，从而使我们能方便地大规模监测大地域范围的沃尔巴克氏体(Wolbachia)在蚊子组织中的分布。

摘要： 本发明公开一种用于胚胎注射转染的沃尔巴克氏体(Wolbachia)的提取方法。它是将解剖含有沃尔巴克氏体的昆虫，获得其卵巢，置于SPG缓冲液中；再将卵巢匀浆，用SPG缓冲液冲洗收集，然后置于离心机中离心100g～1000g，1min～10min，取上清再离心5000g～15000g，5～20min，去除上清，沉积物再用SPG缓冲液冲悬，再离心100g～1000g，1min～10min，取上清，即得到纯化的沃尔巴克氏体，该纯化的沃尔巴克氏体即可用于蚊子的胚胎注射。本发明的方法中沃尔巴克氏体的来源(含有沃尔巴克氏体的昆虫卵巢组织)丰富，并且容易获取，整个方法操作简便，可控性极强，非常容易在规定的时间内获取大量的沃尔巴克氏体用于胚胎注射转染，从而节省了大量的时间和精力，提高了工作效率，有利于迅速的建立转染有沃尔巴克氏体的蚊株。

摘要： 本发明提供了一种将昆虫外源共生菌Wolbachia人工转染至柑橘木虱中的方法。主要步骤为：首先制备粘贴板：将无底纸的永久性双面涂胶透明胶带粘到载玻片上，稍微压紧。其次在体视镜下把新鲜的烟粉虱卵挑出，排列于粘贴板上并用卤代烃油700封住，把柑橘木虱低龄若虫腹面朝上粘贴在同一块粘贴板上。然后在烟粉虱产卵后3h的烟粉虱卵的卵柄处，抽取卵质，注射入柑橘木虱低龄若虫腹面胸板与腹板间。注射完毕后，将柑橘木虱若虫接到干净的九里香嫩梢上培养。本发明针对烟粉虱卵及其内共生菌沃尔巴克氏菌的分布特点，建立有效的注射方法，能够提高显微注射后柑橘木虱体内外源共生菌沃尔巴克氏菌的含量，方便卵质的抽取及注射。

摘要： 本发明公开了磺胺嘧啶对在感染Wolbachia的短管赤眼蜂生殖行为中的应用。本发明提供了磺胺嘧啶在清除动物体内共生Wolbachia或降低Wolbachia滴度中的应用。本发明首次发现单独使用含有1.0mg/ml磺胺嘧啶的蜂蜜水饲喂短管赤眼蜂，能够很好的去除短管赤眼蜂携带的Wolbachia，这种方法更方便、省时，并且获得完全雄性后代。这将为进一步利用Wolbachia调控节肢动物生殖方式奠定基础，有很好的应用价值和推广意义。

摘要： 本发明公开了一种检测鉴定昆虫体内

摘要： 一种利用内共生菌