尖吻蝮蛇

摘要： 尖吻蝮蛇常见于武夷山和皖南山区,其毒素成分复杂、主要以血液毒素为主.尖吻蝮蛇咬伤后易出现凝血功能异常,从而引发消耗性凝血病,以及毒素破坏血脑屏障、中毒性脑细胞损伤等,导致继发性脑功能障碍,从而引起神经功能障碍甚至死亡,预后极差.临床治疗措施主要有抗蛇毒血清的应用、血液透析治疗以及联合中医治疗、高压氧辅助治疗等,以改善患者症状及预后.目前,国内外对尖吻蝮蛇咬伤继发脑损伤的相关报道均较少,且针对继发神经功能障碍疗效欠佳的相关文献罕有报道.本文就尖吻蝮蛇咬伤继发脑损伤机制及诊治的相关文献进行复习并作一综述,为临床诊疗提供参考.

摘要： 采用乳液聚合法制备了一系列基于N-异丙基丙烯酰胺(NIPAm)含有不同功能性单体的纳米凝胶粒子(NPs),使用透射电子显微镜和动态光散射仪表征其形貌和分散性能.通过蛋白酶实验和SDS-PAGE电泳实验,筛选对尖吻蝮蛇毒蛋白有抑制作用的功能性纳米粒子.在血清存在的环境中进一步探索了NPs对蛇毒的抑制作用,并采用MTT细胞实验,探究NPs的生物相容性.结果表明,合成的多种NPs分散性良好(PDI<0.1);蛋白酶实验发现,含有N-丙烯酰基苯丙氨酸(Aphe)的poly(NIPAm-Aphe)NPs对尖吻蝮蛇毒的抑制作用较好,可以达到80％;且电泳实验进一步证明了NPs对蛇毒的吸附作用.在血清存在的环境中(<40 mg/mL时),NPs对尖吻蝮蛇毒的抑制作用仍然维持可观水平(50％).细胞活性实验证明,NPs生物相容性良好,细胞存活率均可达到95％以上,具备作为人工合成抗体的应用潜力.

摘要： 通过对1例校园内疑似毒蛇咬伤后中毒、病情恶化死亡的病例进行回顾性调查分析,以增进对尖吻蝮蛇的性状、栖息捕食规律,蛇毒的毒性以及咬伤中毒后的病理变化,流行病学特征等的了解.有助于对毒蛇咬伤中毒致死案例的法医学鉴定.

摘要： 测定了异蛇(尖吻蝮)蛇油的酸值、碘值、皂化值等理化指标,并基于pH值、起泡能力、泡沫稳定性、气味、软硬度等品质量化评价指标,通过单因素实验及正交优化得到了异蛇蛇油与永州薄荷精油复配手工皂的最佳工艺.结果发现,永州尖吻蝮蛇油的酸值(KOH)为2.3、碘值(I)为54.4、皂化值(KOH)为210.1;蛇油与碱液质量体积比(g:mL)1:2条件下,手工皂制取最佳工艺为碱液质量分数20％、皂化温度75°CC、蛇油与薄荷精油的质量比100:3,此工艺条件下制得的手工皂各项质量评价指标表现优异.研究结果可为永州异蛇与薄荷这两种地方特色资源的综合利用与协同开发提供实验依据.

摘要： 目的 观察人工饲养子一代尖吻蝮蛇的越冬繁殖与冬眠周期性节律关系.方法 对已发育成熟的尖吻蝮蛇子一代蛇,研究其在非冬眠温度(25～29°C)和冬眠温度(11～14°C)条件下,交尾、产卵与冬眠情况.结果 保持正常冬眠条件饲养的子一代尖吻蝮蛇,可以正常产卵并孵化,而破坏冬眠条件的则不能正常产卵.结论 维持尖吻蝮蛇的冬眠周期性节律对尖吻蝮蛇的繁殖具有重要意义.

摘要： 为了检测小鼠血管壁上是否含有与尖吻蝮蛇出血毒素Ⅰ(AaH Ⅰ)结合的靶蛋白,按照前人的方法纯化出血毒素Ⅰ,制备其抗血清,采用免疫组织化学的方法检测动物血管壁上是否含有与尖吻蝮蛇AaH Ⅰ结合的靶蛋白.显微镜观察表明,血管壁出现显色环,说明尖吻蝮蛇AaHⅠ与血管壁上的某种蛋白质特异性结合.因此,小鼠血管壁上存在结合尖吻蝮蛇AaHⅠ的靶蛋白,尖吻蝮蛇AaH Ⅰ进入动物体内先结合靶蛋白,然后进一步引起出血.

摘要： 徐长卿（Cynanchum paniculatum）作为一种传统中草药,被广泛应用于毒蛇咬伤治疗,然而其疗效的科学实验证据缺乏,治疗的分子机制也不清楚.本文采用有机溶剂萃取、柱层析及高效液相色谱法（HPLC）相结合,从徐长卿中筛选出和分离得到一个功效组分,经质谱和核磁共振鉴定为丹皮酚原苷.动物活体实验与组织病理切片观察表明,该组分显著地抑制尖吻蝮（Deinagkistrodon acutus）蛇毒引起的出血、水肿及肌肉组织坏死等活性.体外酶活检测显示,丹皮酚原苷可以抑制尖吻蝮蛇毒水解纤维蛋白原活性和PLA2活性.进一步采用分子模拟软件技术,揭示出丹皮酚原苷是通过与蛇毒中主要成分金属蛋白酶和PLA2发生相互作用,从而抑制尖吻蝮蛇毒发挥致伤作用.本研究首次揭示了中草药徐长卿治疗蛇伤的分子机制,为中医治疗毒蛇咬伤使用徐长卿找到了科学实验证据,也为蛇伤药物的研发提供了新的思路.

摘要： 目的：：寻找在制备出血毒素抗血清中电泳后染色凝胶的好方法。方法：按照前人的方法从皖南产尖吻蝮蛇毒中初步分离3种出血毒素：AaHⅠ、AaHⅡ和AaHⅣ并获得3种粗提取的出血毒素,用制备电泳的方法进一步纯化AaHⅠ、AaH Ⅱ和AaH Ⅳ,对每种出血毒素,配制6块制备电泳板并进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用6种不同的染色方法分别染色,将含出血毒素的凝胶切下,磨细后直接免疫注射小鼠并获得抗血清,用ELISA检测和中和出血毒素出血活性两种方法检测抗血清的质量。结果：不同染色方法制备的抗血清中有效IgG浓度不同,用无毒型蛋白质快速染色试剂盒染色制备的抗血清有效IgG浓度最高。结论：用无毒型蛋白质快速染色试剂盒染色是制备抗血清最好的染色方法。%Objective:In order to look for a good method for preparation of hemorrhagin antiserum. Methods: Three kinds of hemorrhagins including AaH Ⅰ, AaH Ⅱ, and AaH Ⅳ were purified from Agkistrodon acutus venom according to predecessors's methods and crude AaH Ⅰ, AaH Ⅱ and AaH Ⅳ were obtained. Preparation electrophoresis was used to purify AaH Ⅰ,AaH Ⅱand AaH Ⅳ further. As for an hemorrhagin, six different dyeing methods were used to dye PAGE gel and the gel contained hemorrhagin was obtained respectively. The ground gel contained hemorrhagin was used to immune mice and its antiserum was obtained. Antiserums quality was tested through ELISA test and neutralization of the hemorrhagic activities of corresponding hemorrhagin. Results:Effective IgG concentration in different antiserum was different and effective IgG made through non toxic type protein fast stain reagent kit was higher than others. Conclusion:Non toxic type protein fast stain reagent kit is the best dyeing method among the six dyeing methods.

摘要： 为了测定动物血管壁上是否含有对尖吻蝮蛇出血毒素有高亲和力的靶蛋白,从4种蛋白质提取试剂盒种筛选1种试剂盒,提取11种动物的血管壁蛋白质,用血管壁蛋白质作为抗原,采用ELISA检测方法测定提取的血管壁蛋白质是否含有与尖吻蝮蛇出血毒素有高亲和力的靶蛋白.结果表明:三种酸性出血毒素(AaH Ⅰ、AaHⅡ和AaHⅣ)对11种动物血管壁提取蛋白的检测结果为阳性,碱性出血毒素(AaHⅢ)对11种动物血管壁提取蛋白的检测结果基本上为阴性.因此,动物体内,特别是作为尖吻蝮蛇食物来源的动物体内血管壁上可能含有与尖吻蝮蛇出血毒素有高亲和力的靶蛋白.

摘要： 尖吻蝮蛇是我国十大剧毒蛇之一,其毒液主要作用于血液系统引起出血、肿胀与局部组织坏死。当前,生物信息学高速发展,使全世界的生物学研究数据和成果得到共享。本文主要从尖吻蝮蛇蛇毒中的出血毒素的生物信息学上进行分析论述。

摘要： 用高效液相色谱分析方法,发现皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子I(ACFI)与活化凝血因子X(FXa)的结合反应依赖于Ca,天然ACFI在没有钙离子存在条件下不能与FXa形成复合物.Ca对维持ACFI的构象,和在其与FXa的结合反应中起着重要作用.

摘要： 本发明公开了一种高活性尖吻蝮凝血酶的制备方法。该方法将蛇毒粗品经超滤膜超滤后通过阴离子柱层析，以磷酸缓冲液洗脱后，再通过分子筛凝胶柱除热源与脱盐，最终得到高活性、高纯度的凝血酶。本发明方法与现有技术相比具有以下优点：该方法适合大规模生产、操作简单、效率高；制备的尖吻蝮属凝血酶产品产率高达8％，纯度高达99％以上，比活力不低于180U/mg。

摘要： 本发明属于生物化学中的多肽领域，涉及尖吻蝮蛇抗凝血因子XI多肽及其应用，该多肽由尖吻蝮蛇（Deinagkistrodon acutus）蛇毒腺转录组数据库中筛选得到一段Kunitz型多肽序列，对其进行构建表达得到具有抗血栓活性的多肽，其可以用于制备作为抗血栓药物的应用。

摘要： 本发明公开了一种规模化人工饲养尖吻蝮蛇的方法及其装置，涉及尖吻蝮蛇饲养技术领域，解决了现有技术中仿自然饲养法存在的尖吻蝮蛇生长缓慢、成活率低、利用率低的技术问题。本发明规模化人工饲养尖吻蝮蛇的方法，将尖吻蝮蛇彼此独立放置于养殖杉木箱中，并将放置有尖吻蝮蛇的养殖杉木箱彼此重叠，通过控制养殖房内的室内温湿度使尖吻蝮蛇无需冬眠和夏眠，处于持续生长状态，并且在预设时间内为放置于养殖杉木箱中的尖吻蝮蛇填喂饲料。本发明的方法不仅可以提高尖吻蝮蛇的生长速度和成活率，还能使尖吻蝮蛇常年进食，从而实现持续利用。

摘要： 本发明公开了一种鉴定尖吻蝮蛇毒出血毒素种数的简便方法，先制备梯度聚丙烯酰胺凝胶两块，按常规方法配制浓缩胶，不加梳子，制得两块相同的凝胶板块；然后将2块分别插进完全相同的两个电泳槽中，在向每个电泳槽加预处理好的尖吻蝮蛇毒，其中一块电泳板正常电泳，另一块电泳板正、负极对调，二块板同时电泳，正常电泳板中溴酚蓝到达凝胶底部后，电泳同时结束，取下两块凝胶先染色在用蒸馏水脱色，直到清晰地出现蛋白质蓝色条带为止，将每个蛋白质条带切割下来，加人生理盐水于研钵中磨细，再注射到小鼠腹部皮下，1h后解剖，观察有几条出血明显的条带，即表示尖吻蝮蛇含多少种出血毒素。本发明方法检测过程方便、结果稳定，检测时间短。

摘要： 本发明提供了一种尖吻蝮蛇血凝酶‑C，其是从尖吻蝮蛇蛇毒中分离得到的一种血凝酶，分子量29213.4D，等电点5.7。该酶由α、β两条链构成，链间由二硫键连接，其中α链具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，β链具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明尖吻蝮蛇血凝酶为丝氨酸蛋白酶。本发明丝氨酸蛋白酶是用以下纯化方法获得，包括通过硫酸铵分级沉淀预处理去除不溶物及杂蛋白，再通过两次阴离子交换柱层析，收集活性洗脱峰，经透析、超滤浓缩及脱盐后即得高纯度蛇毒血凝酶，其比活力不低于40U/mg蛋白，HPLC分析纯度可达95%以上，以蛇毒原料重量计纯化收得率为0.4%－0.5%。

摘要： 本发明公开了一种基于改良双抗体夹心ELISA法的尖吻蝮蛇蛇毒检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：步骤一：初步提纯，采用饱和硫酸铵方法初步纯化马抗尖吻蝮蛇血浆中的马抗尖吻蝮蛇IgG；步骤二：重复提纯，采用亲和层析法对马抗尖吻蝮蛇IgG进一步层析纯化，收集目标峰对应的抗体，再次过柱层析提纯，得到较纯的马抗尖吻蝮蛇IgG；步骤三：包被抗体，取部分步骤二纯化后的抗体作为包被抗体，包被到48孔板中；步骤四：标记抗体，取部分步骤二纯化后的抗体与辣根过氧化物酶(HRP)进行反应获得辣根过氧化物酶标记抗体(HRP‑IgG)，以此作为夹心抗体；步骤五：包装试剂盒，将步骤三中包被好的48孔板真空密封后与步骤四的夹心抗体装入盒中备用，试剂盒制备完成，可用于检测人或动物血清中是否含有尖吻蝮蛇毒素。

摘要： 本发明属于生物化学中的多肽领域，涉及尖吻蝮蛇抗凝血因子XI多肽及其应用，该多肽由尖吻蝮蛇（Deinagkistrodon acutus）蛇毒腺转录组数据库中筛选得到一段Kunitz型多肽序列，对其进行构建表达得到具有抗血栓活性的多肽，其可以用于制备作为抗血栓药物的应用。

摘要： 本发明公开了一种尖吻蝮蛇蛇毒的提取方法及其提取装置，涉及蛇毒提取技术领域，解决了现有技术中常温人工挤压式提取法存在的蛇毒活性无法保证以及影响蛇的持续利用的技术问题。本发明的尖吻蝮蛇蛇毒的提取方法，采用诱导主动喷射法使尖吻蝮蛇自动喷出毒液，并且将尖吻蝮蛇自动喷出的毒液收集并存放于温度不高于4°C的器皿中。本发明尖吻蝮蛇蛇毒的提取方法采用诱导主动喷射法可以避免对尖吻蝮蛇造成伤害，提高蛇毒质量和尖吻蝮蛇的持续利用率，另一方面，将尖吻蝮蛇自动喷出的毒液收集并存放于温度不高于4°C的器皿中，并及时冷冻干燥处理，可使蛇毒保持良好的活性。

摘要： 本发明公开了一种规模化人工饲养尖吻蝮蛇的方法及其装置，涉及尖吻蝮蛇饲养技术领域，解决了现有技术中仿自然饲养法存在的尖吻蝮蛇生长缓慢、成活率低、利用率低的技术问题。本发明规模化人工饲养尖吻蝮蛇的方法，将尖吻蝮蛇彼此独立放置于养殖杉木箱中，并将放置有尖吻蝮蛇的养殖杉木箱彼此重叠，通过控制养殖房内的室内温湿度使尖吻蝮蛇无需冬眠和夏眠，处于持续生长状态，并且在预设时间内为放置于养殖杉木箱中的尖吻蝮蛇填喂饲料。本发明的方法不仅可以提高尖吻蝮蛇的生长速度和成活率，还能使尖吻蝮蛇常年进食，从而实现持续利用。

摘要： 本发明公开了一种具有抗口腔鳞癌活性的尖吻蝮蛇毒的纯化方法，包括如下操作步骤：1)将尖吻蝮蛇毒溶解、离心，经DE‑52柱层析，按紫外检测280nm光谱图检测，共获得七个峰的洗脱液，收集目标为IV峰的洗脱液，装入透析袋中，经双蒸水中脱盐、PEG6000中脱水，冻干后得初级产物Ⅰ，再进行下一步层析；2)将初级产物Ⅰ溶解、离心，经C‑25柱层析，按紫外检测280nm光谱图检测目标峰的所有洗脱液，装入透析袋中，经双蒸水中脱盐、PEG6000中脱水，冻干后得中级产物Ⅱ，再进行下一步层析；3)将中级产物Ⅱ溶解、离心，经G‑75柱层析，按紫外检测280nm光谱图检测目标峰的所有洗脱液，装入透析袋中，经双蒸水中脱盐、PEG6000中脱水，冻干后得目标产物具有抗口腔鳞癌活性的尖吻蝮蛇毒AAVC‑I。