小鹅瘟病毒

摘要： 为快速检测小鹅瘟病毒,以小鹅瘟病毒VP3基因保守片段为靶点,利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA)建立了一种准确高效的小鹅瘟病毒RPA恒温快速检测方法,对检测方法的灵敏度、特异性进行评价,并与传统PCR和Real-time PCR方法进行比较。结果表明,该检测方法可检测到10 copies/μL的病毒核酸,具有较高的灵敏度;只特异性地扩增小鹅瘟病毒,而与鹅副黏病毒、鹅源鸭瘟病毒、小鹅流行性感冒病毒、鹅副伤寒病毒、大肠杆菌和曲霉菌均未发生交叉反应,特异性良好;变异系数低于6%,具有很好的重复性;临床样品检测中与Real-time PCR符合率为99%。该方法可以很好地应用于小鹅瘟的大规模临床样本检测,为小鹅瘟病毒的高通量检测和流行病学调查提供技术手段。

摘要： 番鸭细小病毒病是由细小病毒(MPV)引起的雏番鸭的一种急性传染病,是目前对番鸭饲养业中危害最严重的传染病之一。临床主要表现腹泻、喘气和运动障碍。番鸭细小病毒的生物学特征与小鹅瘟病毒(GPV)相似,交叉中和试验可以区分MPV和GPV。MPV能够抵抗乙醚、胰蛋白酶、酸和热等灭活因子作用,但对紫外线照射很敏感。

摘要： 鸭圆环病毒和新型呼肠孤病毒是鸭场常见的两种病毒,这两种病毒在近几年对于鸭的危害越来越严重。有很多养殖户反应,即便是注射了疫苗,仍然不能防止该病的发生和流行,主要原因是这两种病均属于免疫抑制性疾病。另外,新型小鹅瘟病毒、腺病毒、鸭坦布苏病毒、鸭星状病毒、鹅星状病毒和鸭肝炎病毒都可以垂直传播,以致养鸭业的发展受到严重的阻碍。以下,笔者重点介绍4种常见且对养鸭业危害严重的垂直传播疾病和防控措施。

摘要： 根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定,经审查,批准武汉科前生物股份有限公司等25家单位申报的猪伪狂犬病病毒g B蛋白阻断ELISA抗体检测试剂盒等5种兽药产品为新兽药,核发《新兽药注册证书》,发布产品工艺规程、质量标准、说明书和标签,自发布之日起执行。批准普莱柯生物工程股份有限公司等5家单位申报的小鹅瘟病毒精制蛋黄抗体等3种兽药产品变更注册,自发布之日起执行。

摘要： 2019～2020年从广东肇庆地区的部份鹅场中收集到12份疑似小鹅瘟病例,对疑似小鹅瘟病例进行病原核酸鉴定,对阳性病例进行病毒分离和VP1基因的序列扩增和遗传进化分析.结果表明,12份疑似小鹅瘟病例中,共检测到7份阳性样品,阳性检测率为58.3％.从阳性病例样本中分离获得7株小鹅瘟病毒毒株,其中1株与Ⅰa亚群毒株核苷酸序列相似性高达99.1％～99.3％,另6株则聚类形成此前未报道过的新亚群,本文将其命名为Ⅰf亚群.本研究结果进一步完善了我国广东地区小鹅瘟的流行病学信息,为本地区小鹅瘟病毒的流行病学调查及该病的综合防控奠定理论基础.

摘要： 本试验采用间接免疫荧光(IFA)检测临床表现肠栓塞的疑似小鹅瘟病死雏鹅的肝、脾和胰腺等组织,随后取IFA阳性病料进一步进行病毒的分离和鉴定。结果显示:病死雏鹅组织的冰冻切片IFA检测呈小鹅瘟病毒(GPV)阳性反应;将病料接种番鸭胚分离到3株病毒(命名为GPV NP1、GPV NP2和GPV NP5);分离毒接种MDEF细胞并盲传3代出现细胞病变且GPV IFA为阳性;分离毒与抗GPV单抗致敏胶乳能产生特异性凝集反应,LPA效价达1∶32;全基因序列分析发现,分离毒与鹅源经典GPV强毒株(DY16、RC16)的核苷酸序列同源性高达99.7%以上;与鸭短喙矮小综合征分离株(M15、SC16)及GPV弱毒疫苗株(SYG61v)同源性为92.8%~94.3%。结果表明该分离毒株为鹅细小病毒经典毒株。本试验揭示了我国目前雏鹅群流行GPV基因组特征,为有效防控小鹅瘟病提供了依据。

摘要： 为获得含有E盒基序(E-box)缺失突变体病毒全基因组的番鸭小鹅瘟病毒(MDGPV) PT株缺失病毒并分析其生物学特性,本研究以含有MDGPV PT株全长感染性DNA克隆的质粒pMDGPVPT为模板,通过重叠延伸PCR方法将5'-末端倒置重复序列(5'-ITR)第315位E-box缺失,获得感染性重组质粒pPT-Ed315-320.pPT-Ed315-320经卵黄囊接种转染9日龄番鸭胚后拯救出缺失病毒rMDGPV-Ed315-320.生物学特性试验显示,rMDGPV-Ed315-320感染番鸭胚后能够引起其特征性病变,与其亲本病毒株PT相比,rMDGPV-Ed315-320的毒价及其在番鸭胚中增殖能力均有所下降,但在番鸭胚成纤维细胞中的复制能力增强.本研究为进一步了解5,-ITR中E-box的缺失与MDGPV致病力之间的关系奠定了基础.

摘要： In order to elucidate the effect of compound Chinese herbal medicine on immune and antioxidant functions of goslings infected with Goose parvovirus, 60 healthy 7-day-old goslings were chosen in this experiment and were given complete feed, which were randomly divided into control group (each given 1 mL purified water twice a day), infection group (each intramuscular inoculation with 0. 3 mL of GPV-contained allantoic fluid and given 1 mL purified water twice a day), and treatment group (each intramuscular inoculation with 0. 3 mL of GPV-contained allantoic fluid and given 1 mL oral liquid of compound Chinese herbal medicine twice a day). Each group had 20 individuals. After the start of the experiment, relative indexes on the immune and antioxidant functions of goslings were detected on day 5, 10 and 15 post treatment. The results showed that compound Chinese herbal medicine could make an increase (P＜0. 05) on the contents of immunoglobulins IgG, IgM and IgA, and on the activity of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px), and an decrease (P＜0. 05) on the content of malondialdehyde (MDA) in GPV-infected goslings on day 10 and 15. The results suggested that oral liquid of compound Chinese herbal medicine could effectively improve the immune and antioxidant functions of goslings infected with GPV.%为了阐明复方中草药对感染小鹅瘟病毒 (GPV) 雏鹅的免疫和抗氧化功能的影响, 试验选取健康7日龄雏鹅60只, 均饲喂全价饲料, 随机分为对照组 (每只雏鹅灌服1 mL纯化水, 每日2次) 、感染组 (每只雏鹅肌肉接种0.3 mL含小鹅瘟病毒的尿囊液, 每只灌服1 mL纯化水, 每日2次) 和治疗组 (每只雏鹅肌肉接种0.3 mL含小鹅瘟病毒的尿囊液, 每只灌服1 mL复方中草药口服液, 每日2次), 每组20只.试验开始后, 分别在第5天、第10天、第15天时检测各组雏鹅免疫和抗氧化功能的相关指标.结果表明:复方中草药能使感染小鹅瘟病毒10, 15天的雏鹅体内免疫球蛋白IgG、IgM、IgA含量和超氧化物歧化酶 (SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 活性显著提高 (P＜0.05), 丙二醛 (MDA) 含量显著下降 (P＜0.05) .说明复方中草药口服液能够有效提高感染小鹅瘟病毒雏鹅的免疫和抗氧化功能.

摘要： 本实验取3批实验室试制的卵黄抗体,琼扩效价为1:16,按0.5 mL/只接种1、3日龄易感雏鹅,分别在注射抗体后1、3、5和7日攻毒,观察攻毒保护情况.结果显示:1日龄雏鹅注射抗体后1日攻毒保护率为96.67%,3日攻毒保护率为100%,5日攻毒保护率为86.67%,7日攻毒保护率为76.67%;3日龄雏鹅注射抗体后1日攻毒保护率为100%,3日攻毒保护率为96.67%,5日攻毒保护率为86.67%,7日攻毒保护率为80%.以免疫攻毒保护率不低于80%为标准,本研究确定小鹅瘟病毒卵黄抗体的被动免疫保护期为5日,随着时间的延长,保护作用逐渐减弱.

摘要： 在完成小鹅瘟病毒卵黄抗体实验室研究的基础上,于2015年中间试制5批卵黄抗体,经检验合格后,分别在3个鹅场,总计21600只雏鹅进行了田间试验.结果表明,在实验观察期内,未发生小鹅瘟病毒感染,且无任何不良方应,3个鹅场的免疫组在生产性能方面与非免疫雏鹅均无显著差异;免疫攻毒组雏鹅攻毒保护率为98%.证明研制的小鹅瘟病毒卵黄抗体安全、有效.

摘要： 从山东潍坊某患病鹅群中分离到一株病毒(WF-1104)。根据小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因全序列，设计了一对特异性引物，提取病毒DNA进行PCR反应，成功扩增出1663 bp的特异条带。将PCR产物纯化后，与pMD18-T载体连接，连接产物转化大肠杆菌感受态细胞DH5α中，经Amp筛选和PCR鉴定后，对阳性克隆进行测序。测序结果表明该小鹅瘟病毒毒株的VP3基因片段与GenBank已公布的GPV相应序列的同源性在95．8％～99．5％之间。

摘要： 本试验通过细胞病变观察和间接免疫荧光鉴定小鹅瘟病毒(GPV)细胞适应株，采用MTT法研究了板蓝根多糖(IRPS)在鹅胚成纤维细胞(GEF)上的抗GPV作用，试验设阻断感染组、抑制增殖组及直接杀灭组。结果表明：100～750ug·mL-1的IRPS对GPV有显著的阻断感染和直接杀灭作用，400～750ug·mL-1时有一定的抑制病毒增殖的作用。

摘要： 本试验通过细胞病变观察和间接免疫荧光鉴定小鹅瘟病毒(GPV)细胞适应株，采用MTT法研究了板蓝根多糖(IRPS)在鹅胚成纤维细胞(GEF)上的抗GPV作用，试验设阻断感染组、抑制增殖组及直接杀灭组。结果表明：100～750μg·mL-1的IRPS对GPV有显著的阻断感染和直接杀灭作用，400～750μg·mL-1时有一定的抑制病毒增殖的作用。

摘要： PCR扩增小鹅瘟病毒(Goose Parvovirus,GPV)CHv株VP3基因并克隆入pMD 18-T-Simple载体,亚克隆正向插入到真核表达质粒pcDNA3.1(+)CMV启动子下游多克隆位点,经PCR和HindⅢ与BamH Ⅰ双酶切鉴定表明成功构建了GPV VP3基因疫苗(pcDNA3.1-GPV-VP3)。该疫苗以200μg/只肌注免疫Balb/c小鼠和鹅,同时分别设肌注PBS和pcDNA3.1(+)作为对照,于免疫后第30、45、60、75、90、105天应用鸭胚原代成纤维细胞(DEF)进行微量中和试验检测小鼠和鹅血清抗100TCID50 GPV的抗体效价。结果表明,pcDNA3.1-GPV-VP3免疫小鼠第30天可检测到抗GPV的中和抗体,抗体效价缓慢上升至90天达到高峰(平均1:135.8)后下降,105天仍高于75天；免疫鹅的中和抗体效价呈现与小鼠类似的规律,第90天达到高峰(平均1:98.5)。因此,pcDNA3.1-GPV-VP3具有良好的免疫原性,肌注免疫小鼠和鹅后能够诱发产生抗GPV的中和抗体,有进一步开展临床研究和应用的前景。

摘要： 本研究将鸭胚成纤维细胞传代两次，提取细胞总RNA;利用Clontech SMART技术，以LD-PCR合成双链cDNA;利用同源重组方法，将纯化后的双链cDNA在酵母细胞Y187内构建cDNA文库。结果表明，细胞总RNA的0D260nm／OD2802nm为2．0，文库容量达到5×106cfu，插入的双链cDNA的平均大小为0．65 Kb，文库的重组率为100％。该cDNA文库构建的成功，为筛选与小鹅瘟病毒结合的细胞蛋白奠定了基础。

摘要： 本试验根据GenBank发表的小鹅瘟病毒B株基因序列,设计了两对VP3基因的特异性引物,进行PCR扩增,建立了小鹅瘟病毒套式PCR诊断方法,该方法能特异性地扩增出406 bp的小鹅瘟病毒VP3基因片段而对其他病毒基因组DNA均没有扩增出条带。本方法对病料中小鹅瘟病毒基因组DNA的最小检测量为O．02175 fg/ul。通过对延边地区疑似小鹅瘟的80只病死雏鹅进行了检测,阳性检出率为95％。结果表明,本试验建立的小鹅瘟病毒套式PCR诊断方法具有极高的敏感性和特异性且检出率极高。可作为一种有效的临床诊断方法。

摘要： 从患1病雏鹅的病料样本中分离鉴定出一株小鹅瘟野毒。采用鹅胚扩增病毒，以琼脂扩散试验从感染鹅胚尿囊液中检出小鹩瘟病毒抗原，以感染鹅胚尿囊液人工接种8日龄健康雏鹅。雏鹅表现出典型小鹅瘟临床症状和剖检特征。此方法可用于小鹅瘟的诊断、鉴别和流行病学调查。

摘要： 从扬州郊区某鹅场死亡的，具有小鹅瘟典型病变的雏鹅肝、脾、肠病料中分离到一株病毒(Yz-0703株)。经过琼扩试验鉴定，该毒株能与GPV阳性血清发生沉淀反应，电镜观察病毒颗粒呈球性，粒径约20nm，无囊膜;人工感染雏鹅，引起100%的发病和死亡，并与自然病例有相似的症状和病变。该毒株的鹅胚半数致死量(ELD50)为10-6.15/0.2mL，最小致死量病毒致死鹅胚的平均时间(MDT)为93.6h。

摘要： 将小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)以每只6μg、3μg、1μg三个剂量分别用基因枪轰击免疫三组BALB/c小鼠,通过免疫组织化学法检测pcDNA-GPV-VP3在BALB/c小鼠组织中的动态表达规律。结果:免疫后3h即可在三个基因枪免疫组免疫部位的皮肤细胞细胞核中发现pcDNA-GPV-VP3的表达产物,于1d-1wk表达产物最多,表达可以持续到9wk；1wk-4wk内心、肾、肝细胞细胞核中可以检测到pcDNA-GPV-VP3的表达产物；pcDNA-GPV-VP3表达产物的量与免疫剂量之间较弱的正比关系。研究表明:通过基因枪免疫小鼠后,pcDNA-GPV-VP3可在小鼠体内快速地表达；基因枪免疫小鼠的方法具有高效和可靠的优点。

摘要： 应用DFA、IFA和VI三种方法对20羽人工感染番鸭病料中的GPV抗原进行检测，比较了三者之间的符合率。结果显示：DFA和病毒分离的符合率为100％;DFA和IFA的符合率为95％;IFA和病毒分离的符合率为95％;三者之间的总符合率为95％。表明DFA具有较好的特异性和准确性，可代替IFA和VI用于GPV抗原的鉴定和临床快速诊断番鸭或鹅的小鹅瘟病。

摘要： 应用鹅胚传代细胞系和生物反应器培养小鹅瘟病毒的方法，属于兽用生物制品技术领域。其包括以下工艺步骤：1）种细胞的培养；2）繁殖病毒用细胞的悬浮培养；3）病毒的培养与收获。本发明可以缩短生产周期，降低人员配置，污染几率低，占地面积小，并且得到的病毒滴度高，批间差异小。

摘要： 本发明涉及一种用二重PCR技术对感染番鸭群中小鹅瘟病毒(Goose Parvovirus，GPV)和番鸭细小病毒(Muscovy Duck Parvovirus，MDPV)进行快速鉴别诊断的试剂盒及检测方法。本发明含有Taq DNA聚合酶(5U/μL)、10×PCR buffer、Mg

摘要： 本发明公开了一种检测小鹅瘟病毒、鹅副黏病毒、鸭瘟病毒的引物组及其试剂盒和检测方法。所述引物组包括鹅细小病毒检测引物、鹅副黏病毒检测引物和鸭瘟病毒检测引物。所述试剂盒包括上述引物组。本发明建立的多重PCR检测方法可准确检测小鹅瘟病毒、鹅副黏病毒、鸭瘟病毒的单一或混合感染，检测精度高，在病毒鉴别领域具有重要优势。

摘要： 本发明公开了一种表达小鹅瘟病毒VP2的重组鸭瘟病毒及其构建方法和应用，该重组鸭瘟病毒的基因组中插入有小鹅瘟病毒VP2基因，所述小鹅瘟病毒VP2基因的核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。所述构建方法包括：(1)将pDEV-vac中gfp基因的CMV启动子替换成EF1启动子，获得pDEV-EF1；(2)将Pcmv-VP2-BGH-pA表达框插入pDEV-EF1，获得pDEV-VP2；(3)将pDEV-VP2转染鸡胚成纤维细胞，拯救获得所述重组鸭瘟病毒。所述重组鸭瘟病毒与亲本毒株相比，其病毒蚀斑大小不具有显著差异，说明小鹅瘟病毒VP2基因的插入不影响鸭瘟病毒在鸡胚成纤维细胞上的增殖特性。所述重组鸭瘟病毒感染鸡胚成纤维细胞后成功表达小鹅瘟病毒VP2。所述重组病毒使番鸭成功免疫产生相应抗体，为鸭瘟病毒-小鹅瘟病毒二联疫苗的研制奠定了基础。

摘要： 应用鹅胚传代细胞系和生物反应器培养小鹅瘟病毒的方法，属于兽用生物制品技术领域。其包括以下工艺步骤：1）种细胞的培养；2）繁殖病毒用细胞的悬浮培养；3）病毒的培养与收获。本发明可以缩短生产周期，降低人员配置，污染几率低，占地面积小，并且得到的病毒滴度高，批间差异小。

摘要： 用鹅胚成纤维细胞系培养小鹅瘟病毒的方法。属于兽用生物制品领域。它解决了现有的小鹅瘟病毒培育方法生产效率较低的问题。该方法步骤如下：原代细胞培养：取发育良好的鹅胚，经剪成小块并洗涤后消化，经洗涤后吹打分散消化细胞，得到细胞悬液，培养至细胞形成完整单层后，得到原代细胞；鹅胚成纤维细胞系的建立：将鹅胚成纤维原代细胞弃去培养液，洗涤、消化，培养至形成完整单层细胞，得到F1代细胞，可传3代；繁殖与收获：将形成70%单层的F1～F4代细胞接毒，当75%以上细胞出现病变时，收获繁殖病毒。本发明收获的病毒液量是原代细胞接毒培养量的255倍，较细胞形成100%单层时接毒培养收获的病毒液毒价高10~100倍。

摘要： 应用鹅胚传代细胞系和生物反应器培养小鹅瘟病毒的方法，属于兽用生物制品技术领域。其包括以下工艺步骤：1）种细胞的培养；2）繁殖病毒用细胞的悬浮培养；3）病毒的培养与收获。本发明可以缩短生产周期，降低人员配置，污染几率低，占地面积小，并且得到的病毒滴度高，批间差异小。

摘要： 本发明提供了一种小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒二联卵黄抗体的制备方法，该技术方案首先利用由小鹅瘟病毒GPV‑HB株所制备的灭活疫苗和市售的小鹅瘟病毒活疫苗共同作为小鹅瘟病毒抗原，利用番鸭细小病毒MDPV‑FJ株所制备的灭活疫苗单独作为番鸭细小病毒抗原，免疫共分三次，小鹅瘟活疫苗和自制小鹅瘟灭活苗基础免疫一次，强化免疫两次，每次间隔三周，每次每种疫苗免疫1ml/只；番鸭细小病毒病免疫次数及间隔同上，但较小鹅瘟免疫时间推迟一周，免疫剂量为1ml/只。通过以上抗原及免疫手段，能使高免蛋中两种抗体的效价均达到较高水平。利用本发明所制备的卵黄抗体可对小鹅瘟和番鸭细小病毒病实现同时防治，而且具有极高的保护率。

摘要： 本发明涉及一种用二重PCR技术对感染番鸭群中小鹅瘟病毒(Goose Parvovirus，GPV)和番鸭细小病毒(Muscovy Duck Parvovirus，MDPV)进行快速鉴别诊断的试剂盒及检测方法。本发明含有Taq DNA聚合酶(5U/μL)、10×PCR buffer、Mg

摘要： 本发明提供一种改造的小鹅瘟病毒Cap蛋白及其制备方法和应用，属于生物工程技术领域，本发明将小鹅瘟病毒Cap蛋白N端21‑36位富含精氨酸的肽段删除，删除区域引入一个通用T细胞表位以促进免疫原性，获得改造的小鹅瘟病毒Cap蛋白的氨基酸序。将改造的小鹅瘟病毒Cap蛋白基因与表达载体连接后转染HEK293细胞，实现小鹅瘟病毒Cap蛋白的高效可溶性表达，表达的蛋白自发组装成病毒样颗粒，可用于小鹅瘟病毒基因工程亚单位疫苗、卵黄抗体等产品的开发。