小孢子培养

摘要： 以12份不同基因型青萝卜品种为供试材料,采用游离小孢子培养技术,研究基因型、培养基类型、激素浓度配比、4°C冷处理时间及32.5°C热激处理时间对青萝卜小孢子胚诱导的影响,为青萝卜高频胚诱导提供参考依据,从而完善青萝卜游离小孢子培养技术体系。结果显示,在相同培养条件下,只有SX1、SX8与SX11三份材料获得了胚状体,其余材料未获得胚状体,且不同供试材料间小孢子胚诱导率差异显著,表明基因型是决定青萝卜小孢子胚诱导成功的关键因素之一;利用1/2NLN-13型培养基配套指定激素配比(0.2 mg·L^(-1)6-BA+1 mg·L^(-1) NAA)培养时,材料SX1、SX8与SX11小孢子出胚率最高,基本确定了青萝卜小孢子培养的最适培养基类型及最佳激素浓度组合;此外,4°C冷处理1 d和32.5°C热激处理2 d,材料SX1与SX11小孢子出胚率最高,确定了小孢子胚诱导最佳冷处理和热激处理条件。

摘要： 以3份大麦DH(Double haploids)新品系(K09-4、K1和A7-20)及其亲本为供试材料,采用营养液水培和大田种植方式,分别在苗期和成熟期对其进行鉴定,其中苗期主要调查地上部干重和Na^(+)∕K^(+),成熟期主要调查产量及构成因素,并对3份新品系的制啤品质进行检测。结果表明:3个新品系A7-20、K1、K09-4在苗期盐胁迫处理后,地上部干重相对值分别为0.279、0.213、0.130,Na^(+)∕K^(+)比值分别为1.587、3.067、4.136,表明其耐盐性高于其亲本或介于双亲之间;大田成熟期平均产量分别为6587.95 kg∕hm^(2)、6846.75 kg∕hm^(2)、6940.52 kg∕hm^(2),均高于对照品种‘花30’;制啤品质检测显示:3份新品系啤酒大麦品质和啤酒麦芽品质均达到国家优级标准。综上,3份大麦DH新品系苗期和成熟期耐盐性均较亲本有显著提升,且制啤品质均达到优级,表明结合诱变∕杂交育种技术和小孢子盐胁迫筛选培养技术可定向改良大麦品种。

摘要： 以10个品种青梗菜为材料,研究小孢子培养中影响胚发生和胚成苗的关键因素。结果表明,青梗菜基因型不同,其胚胎发生能力差异很大,平均每蕾产胚0.17~6.42个。接种前低温预处理有利于胚状体的诱导,4°C处理1 d小孢子胚诱导率最高。接种后高温热激处理是小孢子成胚的关键,33°C处理1~2 d诱导效果最佳,超过此范围则小孢子胚诱导率明显降低。1/2 NLN培养基中添加低浓度激素能明显促进小孢子成胚,以0.20 mg/L NAA+0.05 mg/L 6-BA的外源激素组合诱导效果最好;激素浓度过高反而会抑制小孢子胚胎发生。不同发育类型的胚状体,小孢子胚成苗率明显不同,子叶形胚最易再生成苗,其他类型胚分化困难、再生能力差。

摘要： 小孢子培养已成为十字花科蔬菜育种工作中的一项重要应用技术。本文综述了十字花科蔬菜小孢子培养的研究进展,探讨了诱导小孢子成胚的内因和外因及胚状体转化成苗的影响因素,小孢子再生植株倍性鉴定方法及加倍方式,阐述了小孢子再生植株DH群体在抗病抗逆、基因定位、筛选突变体及新品种培育等方面的应用研究,并提出了相关问题和展望。

摘要： 单倍体育种是当前非常重要的育种技术之一.辣椒单倍体育种技术包括:花药培养技术和小孢子培养技术.单倍体通过自然加倍和人工加倍,为新品种培育、DH群体构建和遗传分析、遗传图谱构建提供了重要的材料.笔者论述了辣椒花药培养和小孢子培养2种单倍体诱导技术的研究进展、存在的问题以及存在的潜在价值,旨在为辣椒育种提供参考,促进辣椒单倍体育种技术的进一步发展和完善.

摘要： 以西藏地区优良主栽春青稞品种'喜马拉22号'为材料,对供体植株小孢子再生体系建立的关键环节进行优化.结果表明:'喜马拉22号'在上海能正常完成整个生育期,其籽粒结实率在97％以上;供体植株幼苗期低温春化处理,可以显著提高后期游离小孢子培养获得的愈伤组织产量,对株高、穗密度和单株产量等的提高也有一定促进作用;诱导培养基中麦芽糖最适质量浓度为90 g∕L,2,4-D最适质量浓度为1.5 mg∕L;获得的加倍单倍体植株约占再生植株总数的60％.建立了'喜马拉22号'小孢子培养植株再生体系,获得了加倍单倍体株系.

摘要： 为探究盐预处理对大麦种子萌发和小孢子培养的影响,以大麦耐盐品种花11和盐敏感品种花30为材料,比较了它们在不同盐浓度预处理下,种子萌发过程中的发芽率、主根长以及小孢子培养过程中的愈伤组织产量差异,同时对2个品种在小孢子时期响应盐胁迫的4个关键基因的表达进行了研究。结果显示:花30的种子和小孢子在无NaCl和低浓度NaCl预处理时,对盐胁迫的耐受性均低于花11,但经高浓度NaCl(萌发期为15 g/L,小孢子时期为300 mg/L)预处理后,花30的种子和小孢子对高浓度盐胁迫的耐受性均显著增强,且发芽率、主根长和愈伤产量均显著高于花11;通过对2个品种在盐预处理下的发芽率、主根长以及愈伤产量相对值的相关性分析发现,2个品种在种子萌发期和小孢子时期响应盐预处理的相对值呈显著正相关。同时,在小孢子培养阶段,经过300 mg/L NaCl预处理后,花30中小热激蛋白基因HvsHSP1和翻译起始因子1基因HveIF1A的表达量在高浓度盐胁迫下较花11显著上调。因此,供试品种间在种子萌发过程和小孢子培养过程对盐预处理的响应差异在某种程度上可能具有一致性,HvsHSP1和HveIF1A基因可能与盐敏感品种在小孢子时期响应NaCl盐诱导存在关系。

摘要： 植物小孢子培养技术是获得单倍体的一种高效的方法,已成为现代育种的重要手段之一。本文综述了影响小孢子胚状体诱导及植株再生的主要影响因素,提出了该技术需要解决的问题,以期为今后植物小孢子技术的进一步研究和更广泛的应用提供参考。

摘要： 随着大白菜基因组序列的释放,其分子生物学的研究进入了功能基因组阶段,突变体库的构建是研究功能基因组学的重要基础.为了在相同的遗传背景下创制出大白菜突变体,选取大白菜'福田50'DH系中处于单核靠边期的花蕾,用60Co-γ射线进行辐照处理,辐射剂量分别为20,40和60Gy,将辐射后的花蕾进行游离小孢子培养.经培养共获得1483株再生植株(M0),采用流式细胞仪对再生植株进行了倍性鉴定.通过Mo和M1两个世代鉴定,获得了包括了株型变异、花器官变异和雄性不育等在内的6个稳定遗传的突变材料,突变率为0.41％.这些突变体不仅为育种研究提供了新的种质资源,也为大白菜功能基因组学的研究提供良好的物质材料.

摘要： 通过游离小孢子培养能快速获取DH系，可应用于常规育种、进行遗传结构分析、同时还可以开展突变体的诱导和筛选、遗传转化等方面的研究。但是影响青花菜小孢子培养胚胎发生的因子很多，到目前为止,在青花菜上还没有建立起一套高效、稳定、实用的技术体系，从而限制了该技术的广泛应用。本文以前人的研究与自己的实际为基础，着重从供体植株(基因型、生理状况、花粉发育时期)、预处理(低温、高温等)、培养基(培养基种类、碳源、激素等)等方面对影响青花菜游离小孢子胚胎发生的因子进行探讨，以期为建立高效的青花菜小孢子培养技术提供参考依据。

摘要： 以同源四倍体青花菜为试材,进行了游离小孢子培养的胚胎诱导条件及胚胎发育途径的研究.结果表明:基因型是影响四倍体青花菜小孢子胚芽诱导率的重要因子,基因型A36的出胚率最高,达到28.5个蕾-1；热激胁迫(32.5°C)诱导小孢子从配子体发育途径向胚胎发生途径转换，其小孢子胚胎发育途径为典型的单核期小孢子经对称分裂产生胚胎的途径(B途径)；4°C低温预处理1d或2d结合32.5°C热激ld后，对称分裂和多细胞团增加，供试基因型小孢子出胚率显著提高。

摘要： 本文综述了近年国内外关于芸薹属蔬菜游离小孢子培养中自然加倍发生机理、影响加倍的因素及人工加倍技术方面的研究进展，旨在为提高双单倍体发生率提供技术参考。

摘要： 以20份类型丰富的F1及亲本甘蓝为试材,探讨了不同甘蓝类型、F1及其亲本材料、供体植株的生长温度、供体植株的花期、高温热激时间、NLN培养基pH等因素对甘蓝小孢子胚胎产量及质量的影响，为建立高效、完善的结球甘蓝小孢子培养技术体系提供依据。结果表明：不同叶球类型对小孢f的产胚率无明显相关性，但不旧栽培季节及熟性的甘蓝品种间却存在显著差异，其中春秋类型的早、中熟甘蓝要明显好于晚熟的越冬甘蓝；用产胚能力强与产胚能力弱的材料分别做亲本杂交，所得杂交种的出胚率介于两亲本之间，表明小孢子产胚能力是一种受基因调控的遗传性状；供体植株的生长温度对于结球廿蓝胚状体的产生并无显著影响；从胚胎发生频率及胚胎质量来说，初花后10 d内(开花初期至盛花中期)是取样的最佳花期阶段；对于大多数摹冈型而言，32.5°C热激预培养48 h较24 h更有利于胚胎发生，热激32.5°C48 h并结合NLN-pH6.2为最佳处理组合，比目前在甘蓝类蔬菜中常用的32.5°C24h+NLN-pH 5.8的培养体系在基因型反应范围及胚胎发生频率方面都有显著提高。

摘要： 对22份萝卜材料进行游离小孢子培养,12份获得了胚状体,3份获得再生植株,出胚基因型范围达54.5％,出胚材料中90％以上为杂种一代。4°C低温预处理0.3d,4个处理间小孢子出胚率无明显差异;不同萝卜品种适宜的热激温度及时间有所不同;培养基中加入1.2滴0.5％的活性炭和一定浓度的6-BA可以显著促进小孢子诱导产生胚;发育健康的子叶型胚状体成苗率为100％;胚状体萌发、分化早期的适宜培养基为B5+2％蔗糖+1.2％琼脂,后期可逐渐将琼脂浓度降低。FCM测定小孢子植株自然加倍率为30％,单倍体占少数,四倍体与混倍体均为30％。

摘要： 以10个球茎甘蓝品种(系)为试材,采用游离小孢子培养方法,研究胚状体发生、发育、成活影响因素的结果表明,基因型是影响胚状体发生的关键因素,不同基因型间出胚率最大可相差8.6倍;初花期为最理想的取蕾时期;不同基因型对激素的反应不同,6-BA的适宜浓度为0.2 mg·L-1;胚状体发育程度和整齐度与基因型有关;子叶期为最佳的转接时期。

摘要： 为了建立甘蓝型油菜小孢子培养的高效技术体系，研究了温室栽培条件下不同取材部位、花粉密度、热激温度和时间对产胚率的影响。结果表明，从主枝、一次分枝和二次分枝取材进行小孢子培养均可获得胚状体，但产胚率和有效胚率以主枝和一次分枝较高；密度为1蕾花粉/毫升时培养效果较好；热激温度和时间为32°C和3d时有效胚率最高。

摘要： 选用4份不同类型的结球甘蓝为试材，研究温度、甘露醇、水解酪蛋白(CH)、秋水仙素4种预处理对结球甘蓝小孢子存活率、出胚率及成苗率的影响。结果表明：4°C低温处理对甘蓝小孢子存活率无显著影响；培养基中添加8％甘露醇小孢子存活率最高；适宜浓度的水解酪蛋白和秋水仙素处理也可以提高小孢子的存活率，处理天数因基因型不同有一定差异；预处理产生的小孢子成活率与小孢子出胚率和后期成苗率呈正相关。

摘要： 诸多因素影响着甘蓝游离小孢子的培养技术，其小孢子供体植株生长环境温度或株龄对出胚率是否影响成为本研究目的。在露地栽植成株与半成株，温室栽植成株高温24°C、28°C、32°C处理和相同品种成株移栽温室与露地栽培，游离花蕾小孢子培养比较出胚数。结果表明，甘蓝半成株较成株适宜作为游离小孢子培养的花蕾供体：供体植株在温室和28°C高温下生长，有利获得较高的出胚率，出胚率增加0.69胚/蕾～15.16胚/蕾。

摘要： 本发明提供了一种南瓜游离小孢子诱导培养基及诱导培养方法，其培养基配方含有KNO3、MgSO4∙7H2O、KH2PO4、Ca(NO3)2∙4H2O、MnSO4∙4H2O、Na2‑EDTA、FeSO4∙7H2O、H3BO3、ZnSO4∙7H2O、KI、AgNO3、Na2MoO4∙2H2O、CuSO4∙5H2O、CoCl2∙6H2O、腺嘌呤、L‑谷氨酰胺、维生素B1、维生素B6、Vc、烟酸、肌醇、甘氨酸、环鸟苷酸、谷胱甘肽、甲基亚硝基脲、蔗糖、植物凝胶、6‑BA、NAA、甘露醇、聚乙二醇、水解蛋白和植物硫化激动素PSK‑α，本发明显著提高了南瓜游离小孢子胚性愈伤诱导效率，促进了南瓜花培育种体系建立。

摘要： 本发明公开了一种甘蓝型油菜小孢子苗水培培养液及越夏培养的方法，步骤包括将甘蓝型油菜小孢子苗接入培养液中进行水培；待小孢子苗长至三叶一心时更换为添加了终浓度为0.1‑0.5mg/L多效唑的培养液；此后每30天更换一次添加有相同多效唑浓度的培养液；大田移栽前20天更换一次未添加多效唑的培养液；十月中旬开始，将水培种植的小孢子苗移栽至试验田中并进行土壤灌溉。本发明提供的方法降低油菜小孢子苗越夏过程中由于传统B5培养基污染问题造成的幼苗损失，在小孢子再生植株发育成型后摆脱无菌环境，彻底解决了后期由于污染造成的损失，节约小孢子苗越夏的药品试剂费用。

摘要： 本发明公开了促进黄瓜小孢子分裂的方法以及黄瓜小孢子的培养方法。本发明公开的促进黄瓜小孢子分裂的方法包括：在33°C下利用纤维素酶和果胶酶处理处于单核靠边期的黄瓜小孢子2小时，以促进黄瓜小孢子分裂。利用本发明的促进黄瓜小孢子分裂的方法，不仅可以克服黄瓜小孢子壁障碍，还不影响小孢子内容物的完整性与活性，所得小孢子可以分裂与进一步发育，实现小孢子的培养，本发明的方法以及植物小孢子的培养方法可以用于制备黄瓜单倍体以及单倍体胚。

摘要： 本发明涉及植物组织培养技术领域，公开了一种提高子叶胚得出率的油菜小孢子培养基和培养方法，所述培养基为固液双层培养基，所述培养基上层为NLN13液体培养基，所述培养基下层为B5培养基改良的固体培养基。所述培养方法采用两步法培养油菜小孢子，第一步采用NLNM液体培养基培养，第二步采用固液双层培养基培养。本发明显著提高了子叶胚的得出率，而且保证了子叶胚的质量，进而提高小孢子培养获得双单倍体植株的效率。

摘要： 本发明提供了一种芹菜小孢子诱导培养基及小孢子诱导培养方法，所述芹菜小孢子诱导培养基由一定含量的大量元素、微量元素、铁盐、有机成分、促进因子、植物生长调节剂所组成。所述芹菜小孢子诱导培养方法包括以下步骤：（1）花蕾选取和预处理；（2）小孢子悬浮液的制备；（3）小孢子诱导培养，并且在小孢子诱导培养过程中进行特定电磁波辐照处理。本发明的小孢子诱导培养基专门适用于芹菜小孢子培养，再结合本发明的诱导方法可以成功获得芹菜小孢子愈伤组织，为今后的芹菜单倍体育种奠定了物质基础。

摘要： 本发明提供了一种烟草小孢子诱导培养基及烟草小孢子培养方法，所述培养基由特定成分配比和含量比例的养分、有机添加物、无机添加物、植物生长调节剂、凝固剂、活性炭等所构成。所述烟草小孢子培养方法的步骤包括：花药取材与低温预处理、培养基的灭菌、消毒与花粉提取、花粉接种与变温诱导、愈伤分化与继代培养、炼苗与移栽。该烟草小孢子诱导培养基及烟草小孢子培养方法特异性针对烟草小孢子培养的要求，诱导效率高，培养效果好，大大加快了烟草小孢子培养育种进程。

摘要： 本发明涉及大白菜游离小孢子培养技术领域，公开了一种适宜四倍体大白菜游离小孢子培养的花蕾筛选方法和四倍体大白菜游离小孢子的提取方法。取四倍体大白菜花序由外向内的第三圈花蕾，其花瓣长度和花药长度之比小于等于1/2，该方法得到的花蕾进行游离小孢子的提取，小孢子处于单核靠边期，适宜四倍体大白菜游离小孢子培养，能够为四倍体大白菜游离小孢子再生植株的培育提供技术基础。

摘要： 本发明涉及植物组织培养技术领域，公开了一种提高子叶胚得出率的油菜小孢子培养基和培养方法，所述培养基为固液双层培养基，所述培养基上层为NLN13液体培养基，所述培养基下层为B5培养基改良的固体培养基。所述培养方法采用两步法培养油菜小孢子，第一步采用NLNM液体培养基培养，第二步采用固液双层培养基培养。本发明显著提高了子叶胚的得出率，而且保证了子叶胚的质量，进而提高小孢子培养获得双单倍体植株的效率。

摘要： 本发明提供了一种荞麦游离小孢子诱导培养基及诱导培养方法，其中诱导培养包括以下成分：KNO3、NH4H2PO4、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、K2SO4、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、Na2MoO4·2H2O、Na2‑EDTA、FeSO4·7H2O、盐酸硫胺、盐酸吡哆醇、烟酸、D‑生物素、乙酰胆碱、亚精胺、脯氨酸、甘氨酸、谷胱甘肽、肌醇、乙酰丁香酮、表儿茶素、Dicamba、KT、氢化可的松、Ag2S2O3、椰乳、MES、活性炭和麦芽糖。诱导培养方法包括以下步骤：a）取样与预处理；b）小孢子分离纯化；c）游离小孢子培养。本发明初步研究了影响荞麦游离小孢子诱导培养的因素，成功诱导出小孢子来源的愈伤组织，为荞麦游离小孢子培养体系的建立奠定基础。

摘要： 本发明提供了一种用于荞麦游离小孢子培养的分化培养基，其配方包括KNO3、NH4NO3、KH2PO4·H2O、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O、Fe‑EDDHA、H3BO3、KI、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、Na2MoO4·2H2O、维生素B1、维生素B6、烟酸、维生素A、维生素C、肌醇、甘氨酸、水解干酪素、姜黄素、延胡索酸、茉莉酸甲酯、6‑BA、NAA、KT、泊洛沙姆、氯化镧、香蕉泥、冬青提取液、麦芽糖、植物凝胶。将该分化培养基应用于荞麦游离小孢子培养的植株再生，绿苗产量平均可达83.65株/100mg，经过生根培养可获得完整再生植株，再生植株驯化后移栽成活。本发明为游离小孢子培养技术在荞麦育种和遗传研究等方面的应用奠定基础。