小分子RNA

摘要： 目的探讨miR-30a-3p通过调控转录因子OCT-1对肝细胞癌(HCC)的分子机制,为临床HCC的诊治提供理论参考和依据。方法通过在线生物信息学数据库miRDB预测OCT-1是miR-30a-3p潜在的靶基因,进一步构建OCT-1的表达载体以及OCT-1突变的表达载体进行miR-30a-3p与OCT-1的靶标确证研究。定量聚合酶链式反应(qPCR)检测OCT-1下游因子的表达水平;同时,Transwell实验、平板克隆实验检测miR-30a-3p对HCC细胞增殖、转移与侵袭的抑制作用;液相色谱-质谱联用技术检测miR-30a-3p对分子靶向药物索拉非尼(Sorafenib)在HCC细胞中的代谢与清除速率;MTT实验检测miR-30a-3p对Sorafenib杀伤HCC细胞的影响。结果 miR-30a-3p能够通过碱基互补配对与OCT-1 mRNA的3’非翻译区(3’UTR)结合并下调OCT-1的表达,进一步qPCR检测发现OCT-1下游基因的表达水平降低。miR-3 0a-3p能够通过抑制OCT-1及其下游转移、侵袭相关基因的表达抑制HCC细胞的转移与侵袭作用,同时miR-30a-3p能够通过抑制OCT-1及其下游耐药相关基因的表达延缓Sorafenib在HCC细胞中的代谢与清除,并上调HCC细胞对Sorafenib的敏感性。结论本研究阐明了miR-3 0a-3p调控OCT-1在HCC细胞中的作用,OCT-1有望成为HCC治疗的有效治疗靶标。

摘要： 小分子RNA在农作物的生长、发育、抗病、抗旱、抗寒等生命过程中发挥着重要作用,也是抵抗生物胁迫和非生物胁迫的关键种质资源,长久以来农业科技领域一直致力于开发高效、省时、高通量的小分子RNA检查、表达和沉默技术。该文基于大麦条纹花叶病毒载体,建立了一种在麦类作物体内瞬时高效沉默小分子RNA的技术体系,以期为研究麦类作物小分子RNA的生物学功能提供可选择的技术方法。

摘要： 脓毒症是由感染引起宿主反应失调致危及生命的疾病,具有发病率高、病死率高、发病机制复杂的特点,其早期诊断一直是医学研究的热点问题。目前,常用的脓毒症实验室指标无法提供病原微生物信息。小分子RNA(miRNA)是生物体生理和病理条件下存在的微小RNA,在不同的致病微生物感染患者中呈差异表达,为脓毒症的早期诊断提供了新方向。该文就miRNA在脓毒症病原微生物诊断中的应用综述如下。

摘要： cqvip:外泌体由Johnstone从绵羊的网织红细胞中经过离心获取,其直径40~150 nm,具有靶向传递信息的能力[1]。外泌体是由细胞内部的核内体与细胞膜融合后经胞吐作用释放的膜性小泡[2],脂质双分子层的结构可以保护其内部的蛋白质、小分子RNA(MicroRNA,miRNA)等遗传物质不被分解和破坏[3-4]。外泌体广泛存在于破骨细胞[5]、成骨细胞[6]、间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)[7]等骨改建主要效应细胞中,通过调控骨效应细胞中关键信号分子影响骨改建过程[8]。

摘要： 目的分析乳腺癌外泌体中小分子RNA(small RNA)的表达。方法采用NextSeq CN500测序仪检测乳腺癌细胞株外泌体和人正常乳腺上皮细胞株外泌体中small RNA的表达,DEGseq R包分析各small RNA表达差异,log2FC>1,FDR<0.05为差异有统计学意义。结果乳腺癌细胞株外泌体相对人正常乳腺上皮细胞株外泌体、34种微小RNA(miRNA)、39种转运RNA来源的小RNA(tsRNA)、和17种tsRNAs表达上调;104种miRNAs、21种与Piwi蛋白相作用的RNA和21种tsRNAs表达上调。结论乳腺癌细胞株外泌体与人正常乳腺上皮细胞株外泌体间small RNA存在表达差异。

摘要： 目的 探讨储存红细胞中表达降低的circRNA靶基因预测及其与储存损伤的关系.方法 3(人)份血样来自健康无偿献血者血液制备的悬浮红细胞,滤除白细胞后均分为新鲜组(0 d),4°C储存20 d红细胞组(储存组);对2组标本用高通量测序检测,选取下降明显的10个circRNA做PCR验证,用circBase和mirTarBase完成数据库注释与靶向预测,并将miRNA可能作用的mRNA也进行了关联分析,以此筛选到可能与储存损伤密切相关的circRNA.结果 20 d与0 d组对比,hsa_circ_0005413、hsa_circ_0008937、hsa_circ_0040340、hsa_circ_0003126、hsa_circ_0007995、hsa_circ_0023937、novel_circ_0000402、hsa_circ_0028281表达量显著下降(P<0.05);hsa-miR-7160-5p、hsa-miR-122-5p、hsa-miR-4534的表达量显著上升(P<0.05);CASP8、CDK4、TMOD3显著下降(P<0.05).生物信息学分析显示这些circRNA的靶基因参与红细胞凋亡与抗凋亡、红细胞膜的稳定、红细胞氧化损伤、铁代谢等生理过程.结论 本研究构建了几个差异表达的circRNA-miRNA-mRNA网络,发现hsa_circ_0005413-hsa-miR-7160-5p-CASP8、hsa_circ_0040340-hsa-miR-122-5p-CDK4、hsa_circ_0007995-hsa-miR-4534-TMOD3可能参与了红细胞储存损伤的生物学过程.

摘要： Kenko家用血液检测仪Kenko是一款小型的家用血液自检仪,它通过检测小分子RNA的活性来预判疾病的征兆。用户通过APP订阅相关医疗服务,便能够及早发现自身的癌症、心血管疾病、糖尿病、胆固醇等疾病,便于医生对症下药及早治疗。Kenko大小与饭盒相当,内部是一个托盘和微型摄像头。

摘要： 花粉直感是指从受精至种子萌发期间花粉基因型直接影响种子与果实发育及表型特征产生差异的现象,其不仅影响双受精后形成的胚乳和胚产生差异,亦可影响果实的成熟期、形状、大小、色泽、风味及内在营养物质含量产生差异等.因此,关于花粉直感现象的研究对以果实或种子为主要收获对象的果树生产有着重要意义,可为生产上授粉品种的配置、产量的增加、内外品质的改善等提供理论依据;同时在果树遗传学、生理学和育种学上均有重要的理论价值.当前,许多果树种植者和园艺学家都已认识到花粉直感的实践重要性与理论价值,但他们对花粉直感的研究主要集中于现象观察阶段.花粉直感效应的表现形式多种多样,其形成更是一个错综复杂的过程,与果树学其他领域方向的研究相比,其研究还处于起步阶段,系统深入的研究十分缺乏,对其形成机理知之甚少,利用程度远远不够.为此,文中从种子与果实生长发育过程中内源激素与多胺含量的变化、关键品质物质合成相关酶活性的变化、花粉mRNA转移及综合分析等方面概述了花粉直感效应形成的机理,分析了相关研究的现状和存在的不足,提出了以花粉直感效应形成的生命过程为线索从分子水平研究花粉直感效应形成机理的研究思路,并对今后的研究方向进行了展望,为将来进一步开展花粉直感效应及产生机理的研究及在生产中更高效、更广泛地利用花粉直感效应提高果树产量及品质提供参考依据.

摘要： 近日,西南大学植物保护学院王进军教授团队在《美国科学院院刊》上在线发表了"miR-9b调控蚜虫翅型分化与翅发育"的研究论文,发现小分子RNA介导生物胁迫因子调控蚜虫翅型分化与翅发育的分子机制,研究结果有利于寻获新的小分子RNA控制剂靶标,为蚜虫类害虫防控提供新的思路。

摘要： 目的：探讨煤焦沥青烟提取物(Coal Tar Pitch Smoke Extracts,CTPE)诱导BEAS-2B细胞恶性转化过程中TRAF2mRNA表达的调控机制. 方法：构建THP-1细胞和BEAS-2B细胞的共培养模型,用CTPE处理共培养模型,细胞培养至第9代时加入TNF-α中和抗体和JNK激酶抑制剂SP600125,继续培养至第15代,设立共培养模型CC15组、TNF-α中和抗体组、JNK激酶抑制剂SP600125组,同代培养的BEAS-2B细胞为对照组,用Real-TimePCR方法检测各组细胞中TRAF2mRNA的相对表达水平. 结果：TNF-α中和抗体组和SP600125抑制剂组TRAF2mRNA相对表达水平(分别为1.73±0.04、1.88±0.05)均高于对照组(1.07±0.06),低于CC15组(2.23±0.09),差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论：CTPE可能通过TNF-α上调了TRAF2mRNA的表达水平,TRAF2和AP-1之间可能存在反馈作用.

摘要： 目的：探讨煤焦沥青烟提取物(Coal Tar Pitch Smoke Extracts,CTPE)诱导BEAS-2B细胞恶性转化过程中TRAF2mRNA表达的调控机制. 方法：构建THP-1细胞和BEAS-2B细胞的共培养模型,用CTPE处理共培养模型,细胞培养至第9代时加入TNF-α中和抗体和JNK激酶抑制剂SP600125,继续培养至第15代,设立共培养模型CC15组、TNF-α中和抗体组、JNK激酶抑制剂SP600125组,同代培养的BEAS-2B细胞为对照组,用Real-TimePCR方法检测各组细胞中TRAF2mRNA的相对表达水平. 结果：TNF-α中和抗体组和SP600125抑制剂组TRAF2mRNA相对表达水平(分别为1.73±0.04、1.88±0.05)均高于对照组(1.07±0.06),低于CC15组(2.23±0.09),差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论：CTPE可能通过TNF-α上调了TRAF2mRNA的表达水平,TRAF2和AP-1之间可能存在反馈作用.

摘要： 目的：探讨煤焦沥青烟提取物(Coal Tar Pitch Smoke Extracts,CTPE)诱导BEAS-2B细胞恶性转化过程中TRAF2mRNA表达的调控机制. 方法：构建THP-1细胞和BEAS-2B细胞的共培养模型,用CTPE处理共培养模型,细胞培养至第9代时加入TNF-α中和抗体和JNK激酶抑制剂SP600125,继续培养至第15代,设立共培养模型CC15组、TNF-α中和抗体组、JNK激酶抑制剂SP600125组,同代培养的BEAS-2B细胞为对照组,用Real-TimePCR方法检测各组细胞中TRAF2mRNA的相对表达水平. 结果：TNF-α中和抗体组和SP600125抑制剂组TRAF2mRNA相对表达水平(分别为1.73±0.04、1.88±0.05)均高于对照组(1.07±0.06),低于CC15组(2.23±0.09),差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论：CTPE可能通过TNF-α上调了TRAF2mRNA的表达水平,TRAF2和AP-1之间可能存在反馈作用.

摘要： 目的：探讨煤焦沥青烟提取物(Coal Tar Pitch Smoke Extracts,CTPE)诱导BEAS-2B细胞恶性转化过程中TRAF2mRNA表达的调控机制. 方法：构建THP-1细胞和BEAS-2B细胞的共培养模型,用CTPE处理共培养模型,细胞培养至第9代时加入TNF-α中和抗体和JNK激酶抑制剂SP600125,继续培养至第15代,设立共培养模型CC15组、TNF-α中和抗体组、JNK激酶抑制剂SP600125组,同代培养的BEAS-2B细胞为对照组,用Real-TimePCR方法检测各组细胞中TRAF2mRNA的相对表达水平. 结果：TNF-α中和抗体组和SP600125抑制剂组TRAF2mRNA相对表达水平(分别为1.73±0.04、1.88±0.05)均高于对照组(1.07±0.06),低于CC15组(2.23±0.09),差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论：CTPE可能通过TNF-α上调了TRAF2mRNA的表达水平,TRAF2和AP-1之间可能存在反馈作用.

摘要： 目的：探讨煤焦沥青烟提取物(Coal Tar Pitch Smoke Extracts,CTPE)诱导BEAS-2B细胞恶性转化过程中TRAF2mRNA表达的调控机制. 方法：构建THP-1细胞和BEAS-2B细胞的共培养模型,用CTPE处理共培养模型,细胞培养至第9代时加入TNF-α中和抗体和JNK激酶抑制剂SP600125,继续培养至第15代,设立共培养模型CC15组、TNF-α中和抗体组、JNK激酶抑制剂SP600125组,同代培养的BEAS-2B细胞为对照组,用Real-TimePCR方法检测各组细胞中TRAF2mRNA的相对表达水平. 结果：TNF-α中和抗体组和SP600125抑制剂组TRAF2mRNA相对表达水平(分别为1.73±0.04、1.88±0.05)均高于对照组(1.07±0.06),低于CC15组(2.23±0.09),差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论：CTPE可能通过TNF-α上调了TRAF2mRNA的表达水平,TRAF2和AP-1之间可能存在反馈作用.

摘要： 目的：探讨煤焦沥青烟提取物(Coal Tar Pitch Smoke Extracts,CTPE)诱导BEAS-2B细胞恶性转化过程中TRAF2mRNA表达的调控机制. 方法：构建THP-1细胞和BEAS-2B细胞的共培养模型,用CTPE处理共培养模型,细胞培养至第9代时加入TNF-α中和抗体和JNK激酶抑制剂SP600125,继续培养至第15代,设立共培养模型CC15组、TNF-α中和抗体组、JNK激酶抑制剂SP600125组,同代培养的BEAS-2B细胞为对照组,用Real-TimePCR方法检测各组细胞中TRAF2mRNA的相对表达水平. 结果：TNF-α中和抗体组和SP600125抑制剂组TRAF2mRNA相对表达水平(分别为1.73±0.04、1.88±0.05)均高于对照组(1.07±0.06),低于CC15组(2.23±0.09),差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论：CTPE可能通过TNF-α上调了TRAF2mRNA的表达水平,TRAF2和AP-1之间可能存在反馈作用.

摘要： 目的：探讨煤焦沥青烟提取物(Coal Tar Pitch Smoke Extracts,CTPE)诱导BEAS-2B细胞恶性转化过程中TRAF2mRNA表达的调控机制. 方法：构建THP-1细胞和BEAS-2B细胞的共培养模型,用CTPE处理共培养模型,细胞培养至第9代时加入TNF-α中和抗体和JNK激酶抑制剂SP600125,继续培养至第15代,设立共培养模型CC15组、TNF-α中和抗体组、JNK激酶抑制剂SP600125组,同代培养的BEAS-2B细胞为对照组,用Real-TimePCR方法检测各组细胞中TRAF2mRNA的相对表达水平. 结果：TNF-α中和抗体组和SP600125抑制剂组TRAF2mRNA相对表达水平(分别为1.73±0.04、1.88±0.05)均高于对照组(1.07±0.06),低于CC15组(2.23±0.09),差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论：CTPE可能通过TNF-α上调了TRAF2mRNA的表达水平,TRAF2和AP-1之间可能存在反馈作用.

摘要： 研究白藜芦醇对镍染毒小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)损伤的保护作用.将细胞分为镍染毒组和白藜芦醇干预组,染毒组给予终浓度分别为0.00、100.00、200.00、400.00μg/ml的三氧化二镍(Ni2O3)混悬液.干预组在染毒前加入白藜芦醇溶液(终浓度为20μmol/L)预处理2h,其他处理与染毒组一致.采用MTT法检测细胞生长抑制率;实时定量PCR(real time,RT-PCR)法检测细胞中环氧合酶-2(COX-2mRNA)基因的表达水平.结果显示,随着染毒浓度的升高,染毒组和干预组细胞生长抑制率均明显增加.在100.00、200.00、400.00μg/ml浓度时,干预组抑制率均低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05).在100、200、400μg/ml浓度时,染毒组COX-2基因相对表达量分别为8.27±1.10、9.68±2.01、14.63±4.05;干预组COX-2基因相对表达量分别为4.18±0.18、5.25±1.10、7.34±0.96.干预组COX-2基因相对表达量均低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05).本研究结果表明,随着镍染毒浓度的增加,NIH/3T3细胞损伤程度增加、COX-2mRNA表达水平增高,而白藜芦醇对镍所致的细胞损伤具有一定的保护作用.

摘要： 研究白藜芦醇对镍染毒小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)损伤的保护作用.将细胞分为镍染毒组和白藜芦醇干预组,染毒组给予终浓度分别为0.00、100.00、200.00、400.00μg/ml的三氧化二镍(Ni2O3)混悬液.干预组在染毒前加入白藜芦醇溶液(终浓度为20μmol/L)预处理2h,其他处理与染毒组一致.采用MTT法检测细胞生长抑制率;实时定量PCR(real time,RT-PCR)法检测细胞中环氧合酶-2(COX-2mRNA)基因的表达水平.结果显示,随着染毒浓度的升高,染毒组和干预组细胞生长抑制率均明显增加.在100.00、200.00、400.00μg/ml浓度时,干预组抑制率均低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05).在100、200、400μg/ml浓度时,染毒组COX-2基因相对表达量分别为8.27±1.10、9.68±2.01、14.63±4.05;干预组COX-2基因相对表达量分别为4.18±0.18、5.25±1.10、7.34±0.96.干预组COX-2基因相对表达量均低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05).本研究结果表明,随着镍染毒浓度的增加,NIH/3T3细胞损伤程度增加、COX-2mRNA表达水平增高,而白藜芦醇对镍所致的细胞损伤具有一定的保护作用.

摘要： 研究白藜芦醇对镍染毒小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)损伤的保护作用.将细胞分为镍染毒组和白藜芦醇干预组,染毒组给予终浓度分别为0.00、100.00、200.00、400.00μg/ml的三氧化二镍(Ni2O3)混悬液.干预组在染毒前加入白藜芦醇溶液(终浓度为20μmol/L)预处理2h,其他处理与染毒组一致.采用MTT法检测细胞生长抑制率;实时定量PCR(real time,RT-PCR)法检测细胞中环氧合酶-2(COX-2mRNA)基因的表达水平.结果显示,随着染毒浓度的升高,染毒组和干预组细胞生长抑制率均明显增加.在100.00、200.00、400.00μg/ml浓度时,干预组抑制率均低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05).在100、200、400μg/ml浓度时,染毒组COX-2基因相对表达量分别为8.27±1.10、9.68±2.01、14.63±4.05;干预组COX-2基因相对表达量分别为4.18±0.18、5.25±1.10、7.34±0.96.干预组COX-2基因相对表达量均低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05).本研究结果表明,随着镍染毒浓度的增加,NIH/3T3细胞损伤程度增加、COX-2mRNA表达水平增高,而白藜芦醇对镍所致的细胞损伤具有一定的保护作用.

摘要： 考虑在治疗和预防A型流感病毒中尤其有效的抗病毒组合物和方法。还呈现细胞测定以识别具有抗病毒性质的小分子化合物，特别是其涉及独立于其他A型流感成分检测哺乳动物细胞中的A型流感RNA‑依赖性RNA聚合酶活性。优选的测定允许识别不破坏正常细胞活性的病毒复制抑制剂。

摘要： 本发明涉及一种微小分子RNA‑30b‑5p作为分子靶标用于抗乙型肝炎病毒相关肝细胞癌的用途。本发明公开了一种miR‑30b‑5p作为靶分子在制备抗HBV相关肝细胞癌药物中的应用。通过抑制miR‑30b‑5p转录或使其失去与靶基因结合的功能，从而抑制HBV相关肝癌细胞的生长和侵袭。

摘要： 本发明提供一种小分子miRNA‑1247‑5p稳定过表达肝癌细胞系的建立方法及其对肝癌细胞株新陈代谢的调控作用，很可能成为预防与治疗肿瘤的标志物。越来越多的证据表明，microRNA可作为一种癌基因或抑癌基因，参与调控多种癌症的发生和发展过程。本发明通过构建慢病毒侵染肿瘤细胞模型的实验证明，miRNA‑1247‑5p对肿瘤细胞株HepG2增殖、迁移和侵袭等具有明显抑制作用，具有调控细胞周期及新陈代谢的作用，因此miR‑1247‑5p很可能成为肿瘤预防与治疗的全新靶点；并且通过靶基因预测数据库及双荧光素酶报告系统证实miR‑1247‑5p发挥细胞调控作用，是通过特异性靶向抑制癌基因无翅型MMTV整合位点家族成员3(WNT3)的表达来实现的。

摘要： 考虑在治疗和预防A型流感病毒中尤其有效的抗病毒组合物和方法。还呈现细胞测定以识别具有抗病毒性质的小分子化合物，特别是其涉及独立于其他A型流感成分检测哺乳动物细胞中的A型流感RNA‑依赖性RNA聚合酶活性。优选的测定允许识别不破坏正常细胞活性的病毒复制抑制剂。

摘要： 本发明涉及一种微小分子RNA‑30b‑5p作为分子靶标用于抗乙型肝炎病毒相关肝细胞癌的用途。本发明公开了一种miR‑30b‑5p作为靶分子在制备抗HBV相关肝细胞癌药物中的应用。通过抑制miR‑30b‑5p转录或使其失去与靶基因结合的功能，从而抑制HBV相关肝癌细胞的生长和侵袭。

摘要： 本发明提供一种小分子miRNA-1247-5p稳定过表达肝癌细胞系的建立方法及其对肝癌细胞株新陈代谢的调控作用，很可能成为预防与治疗肿瘤的标志物。越来越多的证据表明，microRNA可作为一种癌基因或抑癌基因，参与调控多种癌症的发生和发展过程。本发明通过构建慢病毒侵染肿瘤细胞模型的实验证明，miRNA-1247-5p对肿瘤细胞株HepG2增殖、迁移和侵袭等具有明显抑制作用，具有调控细胞周期及新陈代谢的作用，因此miR-1247-5p很可能成为肿瘤预防与治疗的全新靶点；并且通过靶基因预测数据库及双荧光素酶报告系统证实miR-1247-5p发挥细胞调控作用，是通过特异性靶向抑制癌基因无翅型MMTV整合位点家族成员3(WNT3)的表达来实现的。

摘要： 本发明公开了一种用于提取或检测样本中小分子RNA的核酸组合物及其试剂盒和方法，涉及核酸检测技术领域，该核酸组合物包括固相载体、捕获探针和封闭探针，所述固相载体上固定有单链寡核苷酸；所述捕获探针包括有与所述单链寡核苷酸反向互补的序列以及与靶基因反向互补的序列；所述封闭探针能够与所述捕获探针或其部分反向互补。该核酸组合物在无需提取总RNA的情况下，能够对样本中微量的目标小分子RNA进行捕获分离并进行测序文库构建，其产物可直接应用于高通量测序检测，具有快速、灵敏、高效的优点，可高通量地实现多种小分子RNA的精准检测。

摘要： 本发明公开了一种调控红火蚁工蚁个体分工的小分子RNA及其应用。RNA的核苷酸序列为：5’‑GACGGGUGUGCUCUAGUUUCA‑3’。本发明筛选得到一种调控红火蚁工蚁个体分工的小分子RNA‑miRNA‑279c‑5p，觅食型工蚁在上调miR‑279c‑5p的表达后，对红火蚁幼虫或蛹产生了育幼行为，改变工蚁巢内外行为而达到害虫防治的目的。添加含miRNA‑279c‑5p的饵剂更容易通过社会性昆虫的交哺行为在整个蚁巢传递，达到害虫防治的目的。

摘要： 本发明涉及生命科学和生物医药领域，公开了一种可促进受损心脏的心肌细胞增殖的小分子RNA序列，含有如SEQ ID No.1所示序列。这种小分子RNA具有能够促进受损心脏心肌细胞的增殖，可用于制备促进心肌细胞增殖的药物、治疗或辅助治疗心脏病的药物，尤其是用于治疗或辅助治疗心肌梗死的药物，具有较好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种小分子RNA的高通量测序文库构建方法，其包括步骤：提取待测样品中的RNA；使用polyA加尾酶和MMLV逆转录酶，结合带有polyT的逆转录引物对所述RNA进行加尾和逆转录，得到反应体系产物，所述反应体系产物包括合成的cDNA第一链；利用外切酶I清除反应体系产物中剩余的逆转录引物；对所述cDNA第一链进行变性后与末端突出的双链DNA接头进行连接，得到连接产物；对所述连接产物用USER酶处理，得到处理后cDNA；对处理后cDNA进行PCR扩增，得到高通量测序文库。本发明实现了对血浆中极其微量的small RNA的文库构建，本发明不依赖于RNA5’端为磷酸化修饰，因而可以对更多不同类型的RNA进行文库构建。