实时荧光定量PCR技术

摘要： 我国农业产业快速发展,基因工程技术可以保证转基因植物的品质改良,大规模转基因产品也会引起人民群众过度担忧.为了完善转基因产品标签制度的构建水平,及时制定快速准确的定量检测方法,运用实时荧光定量PCR技术对外源基因序列和直接外源基因进行快速检测,提高检测灵敏度,全面提升我国转基因食品检测工作开展水平.

摘要： 目的 寻找一种有效的实时荧光定量PCR方案,提高肝癌患者血清miR-122和miR-199的检出水平,提升基因检测准确性,分析其在肝癌诊断鉴别的意义.方法 遵循分组对照原则,研究时间为2018年2月～2021年3月,以登记初诊为肝癌的23例患者为研究组,仪器采用ABI 7300,选择同时期23例本人及家族无肿瘤病史的健康人群为健康组,两组人员均接受Po-ly(A)加尾法与基于S-poly(T) plus荧光定量PCR检测,比较二者检查敏感度以及健康人群与肝癌患者的miR-122和miR-199表达水平差异.结果 研究发现基于S-poly(T) plus荧光定量PCR检测技术的检查敏感度明显高于研究组,P＜0.05;肝癌患者血清基因中miR-122基因表达水平明显高于健康人群,其miR-199基因表达水平低于健康人群,P＜0.05,数值差异具有统计学意义.结论 在肝癌检查诊断中,运用ABI7300仪器辅助实现改良S-poly(T) plus荧光定量PCR检测技术,有助于提高早期肝癌的诊断效率,为临床后续治疗方案的制定提供良好基础.

摘要： 目的:手足口病患者通过实时荧光定量PCR技术进行检查病原体,从而对本地的病毒流行学特征进行了解,从而对手足口病进行防治.方法:以2017年-2019年的334例手足口病的患者为研究对象,通过实时荧光定量PCR技术进行检查患者标本中的肠道病毒通用型、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CA16),判断实时荧光定量PCR技术的检查准确性.结果:2017年,肠道病毒通用型阳性率为54.9％(56/102),EV71阳性率为25.5％(26/102),CA16的阳性率为19.6％(20/102);2018年,肠道病毒通用型阳性率为61.7％(74/120),EV71阳性率为18.3％(22/120),CA16的阳性率为20.0％(24/120);2019年,肠道病通用型阳性率为62.5％(70/112),EV71阳性率为0.0％(0/112),CA16的阳性率为37.5％(42/112).结论:通过实时荧光定量PCR技术对手足口病患者的病原体进行监测,可以对手足口病患者的病原学进行有效诊断,帮助患者进行早期治疗,预测该区域的手足口病的主要病原体,方便及时采取预防措施.

摘要： 目的:手足口病患者通过实时荧光定量PCR技术进行检查病原体,从而对本地的病毒流行学特征进行了解,从而对手足口病进行防治。方法:我院在2019年2月到2020年2月,这一期间内,一共收治了60例疑似手足口病的患者,以患者的年龄作为分组依据,分别分为三岁以下组(n=37)和3-6岁组(n=23),通过实时荧光定量PCR技术进行检查患者标本中的肠道病毒通用型、肠道病毒71型、柯萨奇病毒A组16型,判断实时荧光定量PCR技术的检查准确性。结果:通过实时荧光定量PCR技术检查后,肠道病毒通用型的阳性率:76.7%(46/60),三岁以下组的检查阳性率为86.5%(32/37),3-6岁组的检查阳性率为60.9%(14/23),三岁以下组的检查阳性率高于3-6岁组,肠道病毒通用型的阳性率为66.7%(40/60),柯萨奇病毒A组16型的阳性率为18.3%(11/60)。结论:通过实时荧光定量PCR技术对手足口病患者的病原体进行监测,可以对手足口病患者的病原学进行有效诊断,帮助患者进行早期治疗,预测该区域的手足口病的主要病原体,方便及时采取预防措施。

摘要： 鳕鱼是经济价值高和营养价值高的重要食用鱼类, 但由于市场上鱼类俗名混乱问题, 以及不同鱼种之间价值的巨大差异, 错误标识鳕鱼产品或以次充好的现象时有发生, 有可能因为含有过敏原成分或有毒成分造成食品安全风险.因此, 需要快速可靠的鳕鱼成分鉴定方法和来保障市场监管.目前, 鳕鱼及其制品的鉴定方法主要为 DNA 检测技术.本文主要介绍了 DNA 指纹图谱限制性片段长度多态性聚合酶链反应(cleaved amplification polymorphism sequence-tagged sites, PCR-RFLP)技术、DNA条形码技术、环介导等温扩增技术和实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点、在鳕鱼及其制品鉴定中的应用, 最后讨论了鳕鱼及其制品鉴定方法的发展趋势和监管建议.

摘要： 我国农业产业快速发展,基因工程技术可以保证转基因植物的品质改良,大规模转基因产品也会引起人民群众过度担忧.为了完善转基因产品标签制度的构建水平,及时制定快速准确的定量检测方法 ,运用实时荧光定量PCR技术对外源基因序列和直接外源基因进行快速检测,提高检测灵敏度,全面提升我国转基因食品检测工作开展水平.

摘要： 流感病毒具有普遍存在的复制自身和重组能力.不仅具有高传染性,而且传播速度非常快,这使流感成为世界公共卫生的重大威胁.近年来,世界范围内流行性感冒的频繁爆发,需要快速控制和治疗流行性感冒,这就要求在流感疾病控制中快速检测出每一种流行性感冒病毒,因此笔者在本文中研究了目前流感检测方法研究进展.

摘要： 实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析.该技术具有操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、快速高效、全封闭反应、高通量等特点.随着现代医学和分子生物学的飞速发展,该技术已在兽医诊断研究及临床应用方面发挥着越来越大的作用.文章对FQ-PCR的原理、分类以及在猪重大疫病的诊断应用进行了综述.

摘要： 实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析.该技术具有操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、快速高效、全封闭反应、高通量等特点.随着现代医学和分子生物学的飞速发展,该技术已在兽医诊断研究及临床应用方面发挥着越来越大的作用.文章对FQ-PCR的原理、分类以及在猪重大疫病的诊断应用进行了综述.

摘要： 实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析.该技术具有操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、快速高效、全封闭反应、高通量等特点.随着现代医学和分子生物学的飞速发展,该技术已在兽医诊断研究及临床应用方面发挥着越来越大的作用.文章对FQ-PCR的原理、分类以及在猪重大疫病的诊断应用进行了综述.

摘要： 实时-反转录多聚酶链式反应(rRT-PCR)是分子诊断和研究领域广泛应用的一种方法。灵敏、特异、快速地检测和定量病毒RNA，使其成为人类和动物重要病毒性抗原的诊断必不可少的工具。将该分析方法与自动液相处理平台结合起来进行核酸提取，提高了效率，试样处理量更加标准，减少了交叉感染的可能。通过内标进一步验证试验结果的可信性。以这些特性为基础，已建立并验证了大量有效的针对重要家畜流行性疾病的rRT-PCR系统。在此讨论了该分析方法在病毒诊断、疾病控制和方法的改进。

摘要： 实时-反转录多聚酶链式反应(rRT-PCR)是分子诊断和研究领域广泛应用的一种方法。灵敏、特异、快速地检测和定量病毒RNA，使其成为人类和动物重要病毒性抗原的诊断必不可少的工具。将该分析方法与自动液相处理平台结合起来进行核酸提取，提高了效率，试样处理量更加标准，减少了交叉感染的可能。通过内标进一步验证试验结果的可信性。以这些特性为基础，已建立并验证了大量有效的针对重要家畜流行性疾病的rRT-PCR系统。在此讨论了该分析方法在病毒诊断、疾病控制和方法的改进。

摘要： 实时-反转录多聚酶链式反应(rRT-PCR)是分子诊断和研究领域广泛应用的一种方法。灵敏、特异、快速地检测和定量病毒RNA，使其成为人类和动物重要病毒性抗原的诊断必不可少的工具。将该分析方法与自动液相处理平台结合起来进行核酸提取，提高了效率，试样处理量更加标准，减少了交叉感染的可能。通过内标进一步验证试验结果的可信性。以这些特性为基础，已建立并验证了大量有效的针对重要家畜流行性疾病的rRT-PCR系统。在此讨论了该分析方法在病毒诊断、疾病控制和方法的改进。

摘要： 实时-反转录多聚酶链式反应(rRT-PCR)是分子诊断和研究领域广泛应用的一种方法。灵敏、特异、快速地检测和定量病毒RNA，使其成为人类和动物重要病毒性抗原的诊断必不可少的工具。将该分析方法与自动液相处理平台结合起来进行核酸提取，提高了效率，试样处理量更加标准，减少了交叉感染的可能。通过内标进一步验证试验结果的可信性。以这些特性为基础，已建立并验证了大量有效的针对重要家畜流行性疾病的rRT-PCR系统。在此讨论了该分析方法在病毒诊断、疾病控制和方法的改进。

摘要： 目的:分析慢性髓性白血病(CML)相关抗原特异性TCR基因修饰T细胞后体外特异性细胞毒活性.方法：利用核转染技术将TCR重组质粒转染至HLA-A11阳性正常人T细胞中,流式细胞术检测外源TCR的表达情况;利用Ca-lein-AM释放试验检测TCR基因修饰T细胞的特异性细胞杀伤作用,实时荧光定量PCR技术检测T细胞的颗粒酶和穿孔素基因的表达情况和ELISPOT检测INF-γ的分泌情况.

摘要： 目的:分析慢性髓性白血病(CML)相关抗原特异性TCR基因修饰T细胞后体外特异性细胞毒活性.方法：利用核转染技术将TCR重组质粒转染至HLA-A11阳性正常人T细胞中,流式细胞术检测外源TCR的表达情况;利用Ca-lein-AM释放试验检测TCR基因修饰T细胞的特异性细胞杀伤作用,实时荧光定量PCR技术检测T细胞的颗粒酶和穿孔素基因的表达情况和ELISPOT检测INF-γ的分泌情况.

摘要： 目的:分析慢性髓性白血病(CML)相关抗原特异性TCR基因修饰T细胞后体外特异性细胞毒活性.方法：利用核转染技术将TCR重组质粒转染至HLA-A11阳性正常人T细胞中,流式细胞术检测外源TCR的表达情况;利用Ca-lein-AM释放试验检测TCR基因修饰T细胞的特异性细胞杀伤作用,实时荧光定量PCR技术检测T细胞的颗粒酶和穿孔素基因的表达情况和ELISPOT检测INF-γ的分泌情况.

摘要： 本发明公开了一种荧光检测光学系统、实时荧光定量PCR仪；属于分子诊断检测仪器领域；其技术要点：M通道组件包括：M个单通道组件；所述单通道组件包括：单色LED灯、准直透镜、激发光系统滤光片、聚焦透镜、发射光纤；所述N试剂孔检测组件包括：N个单试剂孔检测组件；所述每个单试剂孔检测组件包括：发射光纤、反应池、接收光纤组件、接收端滤光片组件、锥形导光棒、光电传感器；所述M通道组件的每个单通道组件的发射光纤均连接到塑料导光棒的第一端；N试剂孔检测组件的每个单试剂孔检测组件包括发射光纤均连接到塑料导光棒的第二端。本发明旨在提供一种荧光检测光学系统、实时荧光定量PCR仪，大幅提高检测效率。

摘要： 本发明涉及采用实时荧光定量PCR技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的引物、探针和方法，可有效解决人类血液中布鲁氏菌定量检测的问题，其解决的技术方案是，采用实时荧光定量PCR技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的引物和探针，引物和探针序列是：上游引物:5’‑GGAAGGTTCAGAAACAACCAC‑3’，下游引物：5’‑GTTGTAACCGGCCTGAACAC‑3’，探针：5’‑FAM‑TGCTGCTCCAGTTGACACCTTCTCG‑BHQ1‑3’，本发明稳定性良好、灵敏度高、特异性强，采用实时荧光定量PCR技术，可准确检测出人类血液中布鲁氏菌含量，对布病的准确诊断及防控策略的制定有重要意义。

摘要： 本发明属于生物检测技术领域，涉及一种应用实时荧光定量PCR技术对猪瘟病毒进行定量检测的方法。本发明通过从含有猪瘟病毒的组织或细胞培养液中提取RNA核酸，应用自行设计的引物和探针特异性检测并定量猪瘟病毒。本发明包括设计的特异性引物序列和荧光探针序列，以及与之配套的定量PCR反应体系和反应程序，及检测样品的结果判定方法。本发明并解决了传统检测猪瘟兔化弱毒疫苗株使用的活兔体定型热方法存在的各种不足，可以快速对猪瘟病毒进行检测和定量，用于猪瘟疫苗质量监控及合理化配苗等领域，并可为猪瘟病毒的早期快速诊断提供有力的工具，具有快速，准确、特异性好、灵敏度高的优点，可以进行定性、定量检测，具有很强的推广性和实用性。

摘要： 本发明公开了一种荧光检测光学系统、实时荧光定量PCR仪；属于分子诊断检测仪器领域；其技术要点：M通道组件包括：M个单通道组件；所述单通道组件包括：单色LED灯、准直透镜、激发光系统滤光片、聚焦透镜、发射光纤；所述N试剂孔检测组件包括：N个单试剂孔检测组件；所述每个单试剂孔检测组件包括：发射光纤、反应池、接收光纤组件、接收端滤光片组件、锥形导光棒、光电传感器；所述M通道组件的每个单通道组件的发射光纤均连接到塑料导光棒的第一端；N试剂孔检测组件的每个单试剂孔检测组件包括发射光纤均连接到塑料导光棒的第二端。本发明旨在提供一种荧光检测光学系统、实时荧光定量PCR仪，大幅提高检测效率。

摘要： 本发明提供了一种三重荧光定量PCR引物探针组与三重荧光定量PCR试剂盒，涉及生物技术领域。本发明的PCR引物探针组包括SEQ ID NO.1所示的APP‑F、SEQ ID NO.2所示的APP‑R、SEQ ID NO.3所示的APP‑探针，SEQ ID NO.4所示的HPS‑F、SEQ ID NO.5所示的HPS‑R、SEQ ID NO.6所示的HPS‑探针，SEQ ID NO.7所示的Pm‑F、SEQ ID NO.8所示的Pm‑R、SEQ ID NO.9所示的Pm‑探针。将该引物探针组制备成试剂盒，可特异的同时检测APP、HPS和Pm，灵敏度能达到10拷贝/μl。

摘要： 本发明公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：第一步，以待测样品的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，获得PCR扩增产物；第二步，检测扩增产物的荧光信号；第三步，以检测结果的Ct值判定样品中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。本发明还公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测试剂盒，可以用于定性检测蔬菜中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。

摘要： 一种用于检测水貂圆环病毒的荧光定量PCR引物组和荧光定量PCR试剂盒，涉及水貂圆环病毒检测领域，包括：MiCV荧光定量PCR反应液、阳性质控品和阴性质控品；MiCV荧光定量PCR反应液包括上下游引物、TBPremix Ex TaqTMII和ddH2O；上游引物：5'‑AGGGCCTTTGGGCATCATTG‑3'；下游引物：5'‑CCCGCCTGCAAACTGAAGAA‑3'。本发明根据水貂圆环病毒的Cap基因保守序列设计引物，通过反应体系和条件优化建立了基于SYBR Green II的实时荧光定量PCR技术并组装试剂盒，该试剂盒具有稳定性好、敏感性和特异性较高等优点。

摘要： 本发明属于D型流感病毒检测技术领域，具体涉及D型流感病毒荧光定量PCR与LAMP荧光定量PCR引物对及其应用。D型流感病毒主要感染动物中包括猪和牛，对畜牧业的发展具有一定的威胁，提供稳定可靠的检测方法具有重要的意义。本发明提供了一种用于D型流感病毒实时荧光定量PCR检测的引物序列及相应的试剂盒，该引物针对D型流感病毒HE基因中的保守序列进行设计，能够实现良好的检测特异性和灵敏度，敏感性比普通PCR和荧光定量LAMP均高100倍，可以实现大量通用样品的检测，可对D型流感病毒进行快速、高敏感度的实时荧光定量PCR检测，对于提高D型流感病毒的检测精度具有重要的意义。

摘要： 本发明提供了一种鉴别肝螺杆菌的荧光定量PCR方法，将包含有PCR引物的反应体系进行荧光定量PCR反应；PCR引物包括上游引物和下游引物；反应体系包括以下组分：上游引物，下游引物，SYBR Premix Ex TaqⅡ，ROX Reference DyeⅡ，样品DNA模版，ddH

摘要： 本实用新型公开了一种荧光定量PCR光学激发装置及成像装置、荧光定量PCR仪，其中荧光定量PCR光学激发装置包括光源，该光源的出光方向上设有激发光滤光片和二向色镜，还包括设于激发光滤光片与二向色镜之间的光均匀化透镜组；所述光均匀化透镜组包括平行透镜、复眼透镜和积分透镜，激发光滤光片、平行透镜、复眼透镜、积分透镜、二向色镜沿光源的出光方向依次设置；所述光源为宽光谱光源。本实用新型能够获得照度均匀的激发光，并能够在不同的光谱通道进行检测，使用寿命长，光源更换次数少；成像效果好；尤其适用于微流体芯片的荧光定量PCR检测。