S-腺苷甲硫氨酸

摘要： 目的 观察糖氧剥夺/复氧复糖(OGD/R)大鼠星形胶质细胞中DNA甲基转移酶(DNMT)3a、组织型纤溶酶原激活物(tPA)表达与细胞凋亡变化,以及S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的干预作用.方法 培养并鉴定大鼠皮质星形胶质细胞,将细胞分为对照组、OGD/R组、OGD/R+SAM组.对照组常规培养.OGD/R组、OGD/R+SAM组以缺糖缺氧3 h后再复氧复糖24 h建立OGD/R细胞模型,OGD/R+SAM组在OGD/R过程中细胞培养基始终保持有50μmol/L的SAM.使用DNA甲基化试剂盒检测各组DNMT活性,采用RT-PCR法检测各组细胞中的DNMT3a、tPA mRNA,采用Western blotting法检测DNMT3a、tPA、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白.结果 OGD/R组DNMT活性、DNMT3a mRNA和蛋白表达低于对照组,tPA mRNA和蛋白表达高于对照组(P均<0.05);OGD/R+SAM组DNMT活性、DNMT3a mRNA表达高于OGD/R组,tPA mRNA和蛋白表达低于OGD/R组(P均<0.05).OGD/R组Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax低于对照组,Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达高于对照组(P均<0.05);OGD/R+SAM组Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax高于OGD/R组,Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达低于OGD/R组(P均<0.05).结论 OGD/R的星形胶质细胞DNA甲基化水平降低,tPA表达上调,促进细胞凋亡;SAM干预可逆转OGD/R导致的上述改变.

摘要： 肠道干细胞的更新和再生是维持肠上皮高度活跃性和可塑性的关键,并受肠腔中各种营养素的直接调控.蛋氨酸作为一种必需的膳食分子,具有促进肠细胞蛋白质合成、增强肠上皮屏障功能、控制肠细胞氧化状态和调节肠黏膜免疫反应等功能.蛋氨酸或其一碳代谢产物S-腺苷甲硫氨酸的缺失,会通过下调Wnt/β-连环蛋白和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白敏感型复合体1(mTORC1)等信号转导途径抑制肠道干细胞分裂,致使肠上皮形态和功能紊乱.本文就蛋氨酸的吸收和代谢过程,及其对肠道黏膜屏障功能和肠道干细胞增殖分化的影响作一综述,旨在为蛋氨酸调控肠道更新和再生的临床和生产应用提供参考.

摘要： 为探索解淀粉芽孢杆菌中mtnN基因编码的S-腺苷高半胱氨酸核苷酶对S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)合成的影响,通过基因敲除技术和反义RNA抑制技术构建了针对mtnN基因的系列工程菌株.与出发菌株HZ-12相比,缺失mtnN基因的菌株SAM产量和生物量分别下降了51％和26％,说明完全阻断该基因不利于菌体的生长和产物的合成.进一步通过反义RNA微调抑制mtnN基因的表达,与对照菌株HZ-12/pHY300相比,所构建的反义RNA工程菌HZ-12/pHY-mtnNasRNA-1、HZ-12/pHY-mtnNasRNA-2和HZ-12/pHY-mtnNasRNA-3生物量没有显著性变化,且其SAM产量分别达到14.58、12.27 mg/L和12.49 mg/L,相比对照分别提高了44％、22％和24％.本研究不仅阐释了mtnN基因对SAM合成的影响规律,而且为SAM高产工程菌株的构建提供了新的思路.

摘要： 在高密度培养条件下,考察不同pH值环境对产朊假丝酵母生物合成S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)的影响.结果 发现弱酸胁迫(pH 3.5)有利于提升酵母细胞的SAM和GSH合成能力,实现SAM和GSH联合高产.通过对关键酶活性、能量物质供给和胞内氧化还原环境进行测定,发现弱酸胁迫提高了SAM合成酶、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶、己糖激酶、ATP合成酶以及过氧化氢酶的活性,提高了胞内NADH和ATP的水平和再生能力,为SAM和GSH的过量合成提供了充足的物质和能量保障.研究结果揭示了弱酸胁迫促进SAM和GSH生物合成的生理机制,也为类似小分子活性化合物的过量合成提供可行的思路.

摘要： 建立了同时检测大鼠肝脏中S-腺苷甲硫氨酸(SAM)和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)的高效液相色谱-串联质谱法。肝脏样品匀浆后用5.0 mmol/L NH4Ac+0.4%HAc+2%甲醇提取,采用CORTES UPLC-C18+柱分离,在电喷雾电离正离子模式(ESI+)下,以多反应监测(MRM)检测,外标法定量。SAM在0.1~2.0μg/mL范围内线性关系良好(R2=0.997);SAH在0.01~0.20μg/mL范围内线性关系良好(R2=0.999);SAM和SAH的方法定量限(S/N>10)分别为0.250、0.025μg/g;幼年SD大鼠肝脏中SAM和SAH的含量分别为86.34±5.54μg/g、17.73±2.24μg/g;相对标准偏差分别是6.4%和11.5%。该方法灵敏度高、特异性强,适用于大鼠肝脏组织中SAM和SAH的同时测定。

摘要： S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是参与生物体众多生化反应的生理活性物质,酵母胞内ATP的水平是限制胞内SAM合成的因素之一。在酿酒酵母CGMCC 2842中克隆并过表达Adk1基因,发现Adk1基因的过表达使得酵母胞内ATP水平提高47.1%,SAM积累量提高47%;发酵16 h向发酵液中添加6 g·L^-1柠檬酸钠,异柠檬酸脱氢酶基因mRNA水平和IDH酶活显著提高,在发酵24 h时胞内ATP水平提高39.4%,与对照相比,SAM积累量和对生物量得率分别提高79%和78.8%,表明胞内ATP水平的提高促进Met转化为SAM,这为ATP代谢调控而改善SAM合成提供有力的理论依据。

摘要： 为降低S-腺苷甲硫氨酸的生产成本,构建了同时表达腺苷激酶、腺苷酸激酶和乙酸激酶3种酶的重组大肠杆菌菌株用于ATP的合成,并对ATP的转化条件进行了优化,优化后的反应体系为:腺苷30 mmol/L,乙酰磷酸二锂盐135 mmol/L,硫酸镁5 mmol/L,硼砂50 mmol/L,菌体2 g/L(湿重),反应液初始pH7.5,反应温度为35°C,反应时间为3 h,反应转化率可以达到99％ 以上.按照上述反应体系进行5 L放大,反应结束后再投入65 mmol/L D,L-甲硫氨酸和50 g/L(湿重)表达腺苷甲硫氨酸合成酶的重组大肠杆菌菌体,并补加15 mmol/L硫酸镁,转化18 h S-腺苷甲硫酸浓度能达到8.7 g/L,转化率达到72.5％.

摘要： 以黄瓜品种“津研四号”为试验材料,研究了S-腺苷甲硫氨酸(SAM)对断根后黄瓜苗期不定根发生、植株生长和生理代谢的影响.结果表明,断根黄瓜幼苗基部用50μmol·L-1的SAM溶液浸泡5min,能显著促进不定根的生长发育、叶绿素的积累、光合作用的增强以及提高植株对N、P、K的吸收能力,促进了黄瓜幼苗的生长.进一步分析表明,SAM处理上调了黄瓜下胚轴内多胺和生长素相关基因的表达水平及物质积累,可能是SAM促进黄瓜不定根发生和幼苗生长发育的机理.

摘要： 以黄瓜品种“津研四号”为试验材料,研究了S-腺苷甲硫氨酸(SAM)对断根后黄瓜苗期不定根发生、植株生长和生理代谢的影响.结果表明,断根黄瓜幼苗基部用50μmol·L-1的SAM溶液浸泡5min,能显著促进不定根的生长发育、叶绿素的积累、光合作用的增强以及提高植株对N、P、K的吸收能力,促进了黄瓜幼苗的生长.进一步分析表明,SAM处理上调了黄瓜下胚轴内多胺和生长素相关基因的表达水平及物质积累,可能是SAM促进黄瓜不定根发生和幼苗生长发育的机理.

摘要： 以黄瓜品种“津研四号”为试验材料,研究了S-腺苷甲硫氨酸(SAM)对断根后黄瓜苗期不定根发生、植株生长和生理代谢的影响.结果表明,断根黄瓜幼苗基部用50μmol·L-1的SAM溶液浸泡5min,能显著促进不定根的生长发育、叶绿素的积累、光合作用的增强以及提高植株对N、P、K的吸收能力,促进了黄瓜幼苗的生长.进一步分析表明,SAM处理上调了黄瓜下胚轴内多胺和生长素相关基因的表达水平及物质积累,可能是SAM促进黄瓜不定根发生和幼苗生长发育的机理.

摘要： 以黄瓜品种“津研四号”为试验材料,研究了S-腺苷甲硫氨酸(SAM)对断根后黄瓜苗期不定根发生、植株生长和生理代谢的影响.结果表明,断根黄瓜幼苗基部用50μmol·L-1的SAM溶液浸泡5min,能显著促进不定根的生长发育、叶绿素的积累、光合作用的增强以及提高植株对N、P、K的吸收能力,促进了黄瓜幼苗的生长.进一步分析表明,SAM处理上调了黄瓜下胚轴内多胺和生长素相关基因的表达水平及物质积累,可能是SAM促进黄瓜不定根发生和幼苗生长发育的机理.

摘要： 以黄瓜品种“津研四号”为试验材料,研究了S-腺苷甲硫氨酸(SAM)对断根后黄瓜苗期不定根发生、植株生长和生理代谢的影响.结果表明,断根黄瓜幼苗基部用50μmol·L-1的SAM溶液浸泡5min,能显著促进不定根的生长发育、叶绿素的积累、光合作用的增强以及提高植株对N、P、K的吸收能力,促进了黄瓜幼苗的生长.进一步分析表明,SAM处理上调了黄瓜下胚轴内多胺和生长素相关基因的表达水平及物质积累,可能是SAM促进黄瓜不定根发生和幼苗生长发育的机理.

摘要： 目的:建立同时测定小鼠肝脏中S-腺苷甲硫氨酸(SAM)和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)的高效液相色谱法. 方法:小鼠肝脏称重,用手持匀浆器快速乳化肝脏,再加4倍体积的0.6mol/L高氯酸超声,离心取上清液过膜,以50mmol/LNaH2PO4缓冲液、10mmol/L庚烷磺酸钠和20％(V/V)甲醇为流动相,选用VenusiIMP-C 18(250mm×4.6mm,5μm)柱进行色谱分离,流速为1.0ml/min,柱温为30°C,UV检测波长254nm. 结果:SAM和SAH在检测范围内浓度与峰面积线性关系良好(r＞0.9990);方法平均回收率在92.20％～101.38％,相对标准偏差(RSD)在2.88％～6.78％.小鼠肝脏中SAM和SAH的含量分别为3.14～6.09mg/L(31.47～61.03nmol/g)和1.29～3.10mg/L(13.38～32.15nmol/g). 结论:该方法适用于小鼠肝脏中SAM和SAH的含量检测,方法简便,结果可靠.

摘要： 目的:建立同时测定小鼠肝脏中S-腺苷甲硫氨酸(SAM)和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)的高效液相色谱法. 方法:小鼠肝脏称重,用手持匀浆器快速乳化肝脏,再加4倍体积的0.6mol/L高氯酸超声,离心取上清液过膜,以50mmol/LNaH2PO4缓冲液、10mmol/L庚烷磺酸钠和20％(V/V)甲醇为流动相,选用VenusiIMP-C 18(250mm×4.6mm,5μm)柱进行色谱分离,流速为1.0ml/min,柱温为30°C,UV检测波长254nm. 结果:SAM和SAH在检测范围内浓度与峰面积线性关系良好(r＞0.9990);方法平均回收率在92.20％～101.38％,相对标准偏差(RSD)在2.88％～6.78％.小鼠肝脏中SAM和SAH的含量分别为3.14～6.09mg/L(31.47～61.03nmol/g)和1.29～3.10mg/L(13.38～32.15nmol/g). 结论:该方法适用于小鼠肝脏中SAM和SAH的含量检测,方法简便,结果可靠.

摘要： 目的:建立同时测定小鼠肝脏中S-腺苷甲硫氨酸(SAM)和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)的高效液相色谱法. 方法:小鼠肝脏称重,用手持匀浆器快速乳化肝脏,再加4倍体积的0.6mol/L高氯酸超声,离心取上清液过膜,以50mmol/LNaH2PO4缓冲液、10mmol/L庚烷磺酸钠和20％(V/V)甲醇为流动相,选用VenusiIMP-C 18(250mm×4.6mm,5μm)柱进行色谱分离,流速为1.0ml/min,柱温为30°C,UV检测波长254nm. 结果:SAM和SAH在检测范围内浓度与峰面积线性关系良好(r＞0.9990);方法平均回收率在92.20％～101.38％,相对标准偏差(RSD)在2.88％～6.78％.小鼠肝脏中SAM和SAH的含量分别为3.14～6.09mg/L(31.47～61.03nmol/g)和1.29～3.10mg/L(13.38～32.15nmol/g). 结论:该方法适用于小鼠肝脏中SAM和SAH的含量检测,方法简便,结果可靠.

摘要： 目的:建立同时测定小鼠肝脏中S-腺苷甲硫氨酸(SAM)和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)的高效液相色谱法. 方法:小鼠肝脏称重,用手持匀浆器快速乳化肝脏,再加4倍体积的0.6mol/L高氯酸超声,离心取上清液过膜,以50mmol/LNaH2PO4缓冲液、10mmol/L庚烷磺酸钠和20％(V/V)甲醇为流动相,选用VenusiIMP-C 18(250mm×4.6mm,5μm)柱进行色谱分离,流速为1.0ml/min,柱温为30°C,UV检测波长254nm. 结果:SAM和SAH在检测范围内浓度与峰面积线性关系良好(r＞0.9990);方法平均回收率在92.20％～101.38％,相对标准偏差(RSD)在2.88％～6.78％.小鼠肝脏中SAM和SAH的含量分别为3.14～6.09mg/L(31.47～61.03nmol/g)和1.29～3.10mg/L(13.38～32.15nmol/g). 结论:该方法适用于小鼠肝脏中SAM和SAH的含量检测,方法简便,结果可靠.

摘要： S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM),是一种广泛存在于植物、动物、微生物活细胞内一种作用仅次于ATP的重要生理活性物质.SAM在细胞内主要起着转甲基、转硫和转氨丙基的作用;临床上,对于肝病、抑郁症、关节炎、肌纤维痛和阿尔茨海默等都具有一定的治疗和预防效果,目前广泛应用于医药行业和保健品行业.其制备方法主要有化学法、酶促法及发酵法三种,其中通过酵母属微生物发酵积累SAM,再从中分离、提纯SAM是目前工业生产的主要途径.为实现国内SAM工业化生产,采用新的基因工程策略构建高效、稳产SAM菌株具有重要意义.

摘要： 本发明涉及一种制备固定化腺苷甲硫氨酸合成酶和腺苷甲硫氨酸的方法，技术特征在于：将氨基树脂载体Seplite LX-1000HA与戊二醛溶液交联，再经过戊二醛交联的氨基树脂载体与重组腺苷甲硫氨酸合成酶溶液反应，得到固定化腺苷甲硫氨酸合成酶；本发明使用的氨基树脂载体蛋白固定率高，固定化腺苷甲硫氨酸合成酶的酶活力回收率高，稳定性和连续操作性能优良。利用该固定化腺苷甲硫氨酸合成酶生产腺苷甲硫氨酸，反应操作简单，生产周期短，产物纯化容易，而且固定化酶可以重复利用，大幅度降低生产成本并提高生产效率，为腺苷甲硫氨酸的工业化生产提供了一条新的途径。

摘要： 本发明公开了一种S-腺苷甲硫氨酸发酵生产方法及D-甲硫氨酸分离方法，该方法是在酵母生产S-腺苷甲硫氨酸过程中，利用廉价DL-甲硫氨酸代替L-甲硫氨酸，而且可将DL-甲硫氨酸中的D-甲硫氨酸分离出来加以利用。本发明优点在于降低发酵法生产S-腺苷甲硫氨酸的成本的同时可以分离得到具有广泛用途的D-甲硫氨酸。

摘要： 本发明提供从粗糙脉孢菌获得的S-腺苷甲硫氨酸-6-N-赖氨酸-甲基转移酶，编码其的多核苷酸，包含所述多核苷酸的载体和宿主细胞，以及通过培养所述宿主细胞而生产三甲基赖氨酸的方法。

摘要： 本发明涉及一种制备固定化腺苷甲硫氨酸合成酶和腺苷甲硫氨酸的方法，技术特征在于：将氨基树脂载体Seplite LX-1000HA与戊二醛溶液交联，再经过戊二醛交联的氨基树脂载体与重组腺苷甲硫氨酸合成酶溶液反应，得到固定化腺苷甲硫氨酸合成酶；本发明使用的氨基树脂载体蛋白固定率高，固定化腺苷甲硫氨酸合成酶的酶活力回收率高，稳定性和连续操作性能优良。利用该固定化腺苷甲硫氨酸合成酶生产腺苷甲硫氨酸，反应操作简单，生产周期短，产物纯化容易，而且固定化酶可以重复利用，大幅度降低生产成本并提高生产效率，为腺苷甲硫氨酸的工业化生产提供了一条新的途径。

摘要： 本发明涉及含两个表达载体的腺苷甲硫氨酸高产菌株的构建方法及利用此菌株发酵生产腺苷甲硫氨酸的关键技术。本发明把影响腺苷甲硫氨酸表达的两个载体转入同一宿主菌得到重组菌株GS115/pPIC－SAM2、pGAPZ－SAM2。此菌株在丙三醇及甲醇的诱导下，成功克服了培养后期腺苷甲硫氨酸累积量下降等缺陷，其产量是含单一表达载体菌株的两倍。结合新的发酵培养基配方，1000L发酵罐中腺苷甲硫氨酸产量达14－16g/L发酵液，远高于国内研究水平。发酵所用培养基均为工业试剂，成本低廉。各项指标都达到了工业化生产的要求。

摘要： 提供了用于生产目标物质，诸如香草醛和香草酸的方法。通过使用具有目标物质生产能力的微生物从碳源或目标物质的前体生产目标物质，其中微生物已经以NCgl2048蛋白的活性得以降低的方式进行了修饰。

摘要： 本发明公开了一种S-腺苷甲硫氨酸发酵生产方法及D-甲硫氨酸分离方法，该方法是在酵母生产S-腺苷甲硫氨酸过程中，利用廉价DL-甲硫氨酸代替L-甲硫氨酸，而且可将DL-甲硫氨酸中的D-甲硫氨酸分离出来加以利用。本发明优点在于降低发酵法生产S-腺苷甲硫氨酸的成本的同时可以分离得到具有广泛用途的D-甲硫氨酸。

摘要： 本发明提供涉及SAM检测和制备的新方法及新SAHH酶活性在该方法中的应用。还提供涉及新SAHH的其它方法，组合物及试剂盒。

摘要： 本发明提供从粗糙脉孢菌获得的S－腺苷甲硫氨酸－6－N－赖氨酸－甲基转移酶，编码其的多核苷酸，包含所述多核苷酸的载体和宿主细胞，以及通过培养所述宿主细胞而生产三甲基赖氨酸的方法。

摘要： 本发明提供S-腺苷甲硫氨酸甲酯与hAdoMetDC F223A的复合物的晶体结构，所述hAdoMetDC F223A是一种消除F7、腺嘌呤和F223的芳香族环堆积的突变体。此突变体与所述酯所形成的结构表明，配体利用与F7的π-π相互作用、与Glu67主链的氢键以及静电相互作用的帮助，仍能维持顺式(syn)构象。已合成数种在腺嘌呤的8位具有各种取代基的AdoMet底物类似物，并分析其抑制hAdoMetDc的能力。为了理解这些结果，已通过实验方式确定所述酶抑制剂复合物的虚拟模型以及在活性位点具有5’-脱氧-5’-[N-甲基-N-[2-(氨基氧基)乙基]氨基-8-甲基]腺苷(MAOEMA)和5’-脱氧-5’-[N-甲基-N-[4-(氨基氧基)丁基]氨基-8-乙基]腺苷(MAOBEA)的人AdoMetDC的晶体结构。