大电导钙激活钾通道

摘要： 心律失常是心血管疾病领域的常见病、多发病之一,其发病机制与离子通道密切相关。钾离子通道在心肌细胞电兴奋过程中发挥重要作用。近年来,大电导钙激活钾通道(large-conductance Ca^(2+)-activated K^(+) channel,BK_(Ca)通道)对心律失常的影响成为一个新的研究方向,并受到广泛关注。本文对BK_(Ca)通道的生物学特性及其在心脏组织中的分布、影响心律失常的可能机制进行综述。

摘要： 目的探究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)表达水平与宫缩乏力性产后出血患者大电导钙激活钾通道(BKCa)、前列腺素(PGs)的相关性。方法回顾性选择2017年12月至2018年12月在恩施州土家族苗族自治州中心医院产科接受剖宫产的产妇88例,将宫缩乏力性产后出血的产妇41例设为研究组,将宫缩正常无产后出血的产妇47例设为对照组。剖宫产术中收集两组产妇子宫肌组织适量,采用等长张力测定方法检测子宫肌收缩力,采用酶联免疫吸附试验测定子宫肌组织中前列腺素E2(PGE2)、前列腺素F2α(PGF2α)、6-Keto-PGF1α、血栓烷B2(TXB2)、MAPK水平;采用RT-PCR检测子宫肌组织中BKCa通道α亚基和β亚基mRNA表达量;采用Pearson相关分析MAPK表达水平与宫缩乏力性产后出血患者BKCa、PGE2、PGF2α、6-Keto-PGF1α、TXB2的相关性。结果研究组产妇子宫肌的自发性及应用缩宫素后的收缩频率和收缩活动力以及收缩幅度明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组产妇子宫肌中PGE2、PGF2α、TXB2、MAPK水平明显低于对照组,6-Keto-PGF1α水平及BKCa通道α亚基和β亚基mRNA表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,MAPK表达水平与宫缩乏力性产后出血患者PGE2、PGF2α、TXB2含量呈正相关(r=0.568、0.517、0.659,P<0.05),与6-Keto-PGF1α、BKCa通道α亚基和β亚基含量呈负相关(r=-0.724、-0.506、-0.623,P<0.05)。结论MAPK表达水平与宫缩乏力性产后出血患者6-Keto-PGF1α、BKCa通道α亚基和β亚基含量呈负相关,MAPK表达水平与宫缩乏力性产后出血患者PGE2、PGF2α、TXB2含量呈正相关,MAPK表达下调可能会增加6-Keto-PGF1α、BKCa通道α亚基和β亚基表达导致宫缩乏力性产后出血发生。

摘要： 目的 探讨大电导钙激活钾通道(BKCa)基因敲除后大鼠胰腺转录组基因表达及信号转导通路变化,分析BKCa基因在胰腺中的作用.方法 3只BKCa基因敲除成年雌性SD大鼠(BKCa敲除组)由首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系王伟教授馈赠,设3只野生型成年雌性SD大鼠为野生组.取完整的胰腺组织,提取总RNA,采用转录组测序技术进行测序、差异分析软件DESeq2筛选BKCa敲除组和野生组胰腺组织间的差异表达基因,利用基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对差异表达基因进行生物功能富集分析.采用RT-PCR法对富集分析出的关键基因进行验证.结果 BKCa敲除组和野生组大鼠胰腺样本共检测到18258个基因,经DESeq2软件筛选出348个表达差异基因,其中200个基因在BKCa敲除组胰腺中高表达,148个基因低表达.GO数据库显示214个差异表达基因富集在56个GO条目,其中24个涉及生物学过程,18个涉及细胞组分,14个涉及分子功能;KEGG数据库显示348个差异表达基因中15个富集于PI3K/Akt信号通路,经RT-PCR验证,其关键基因Hsp90abl、Hsp90aal、Foxo3a、Colla2在BKCa敲除组胰腺组织的表达显著高于野生组(P＜0.0001),而Thbsl、Pik3r1和Ppp基因表达差异无统计学意义.结论 在转录组水平上筛选出BKCa敲除组与野生组大鼠差异表达基因,其显著富集于PI3K/Akt信号通路,为预测BKCa在胰腺中发挥的功能提供了线索.

摘要： 目的:探讨大电导钙激活钾通道(BKCa)是否参与转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的心肌纤维化过程,以及在这一过程中的作用机制.方法:分离培养乳大鼠心室成纤维细胞,并根据TGF-β1的不同浓度(5 ng/ml组、10 ng/ml组),以及在10 ng/ml TGF-β1基础上加入不同浓度TGF-β1受体特异阻断剂SB431542(0.1μmol/L组、1μmol/L组、10μmol/L组)进行分组,处理后提取蛋白及RNA,应用蛋白免疫印迹(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组TGF-β1受体蛋白,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、BKCa蛋白和信使RNA(mRNA)的表达情况.单通道及全细胞膜片钳技术记录TGF-β1作用24 h前后的BKCa电流特点及其变化情况.结果:TGF-β15 ng/ml组和10 ng/ml组均上调TGF-β1受体蛋白,α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和mRNA的表达,10 ng/ml组TGF-β1下调BKCa蛋白和mRNA的表达.与TGF-β110 ng/ml组相比,在10 ng/ml TGF-β1基础上加入SB4315421μmol/L组、10μmol/L组下调TGF-β1受体蛋白,α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和mRNA的表达,加入SB43154210μmol/L组上调BKCa蛋白和mRNA的表达,差异均具有统计学意义.此外,单通道及全细胞膜片钳技术记录结果表明TGF-β1预处理24 h后可明显抑制成纤维细胞上BKCa电流.结论:BKCa可能参与了TGF-β1诱导乳大鼠心室成纤维细胞纤维化通路,其机制可能是TGF-β1抑制了成纤维细胞上BKCa的电流.这提示BKCa可能是防治心肌纤维化的潜在靶点.

摘要： 目的·探索细胞外钾在短时间内浓度的变化对小鼠远端肾小管离子通道钠氯共转运体(sodium chloride co-transporter,NCC)、大电导钙激活钾通道(large conductance Ca2+-activated K+channel,BK)活性的影响.方法·6只8～10周龄的无特定病原体动物(specific pathogen free,SPF)级C57BL/6小鼠取肾后获得肾片,并随机放入正常钾溶液、高钾溶液、氯化钡溶液和氯化铷溶液中进行孵育.通过蛋白质印迹法观察在不同浓度钾离子溶液及不同时间下,肾片NCC蛋白的表达丰度及磷酸化水平变化,以及经2种钾离子溶液孵育2 h后肾片BK中总蛋白和膜蛋白的表达变化.结果·与正常钾溶液相比,经高钾溶液孵育5、15、30 min后NCC磷酸化水平显著下降(均P<0.05);而经氯化钡或氯化铷干预后,NCC磷酸化水平亦受到显著抑制(均P<0.05).经2种钾离子溶液处理2 h后,BK核心亚基α和β4的总蛋白表达间无明显变化,且BKα亚基的膜蛋白表达间亦无显著差异.结论·细胞外高浓度的钾离子可直接下调NCC的磷酸化水平,且该下调可能是为下游离子通道的迅速排钾做准备.

摘要： 大电导Ca^2+激活的K+通道(large conductance Ca^2+-activated K^+channels,big Ca^2+-activated K^+channel,BKC)属于跨膜蛋白,也称为BKCa、Slo1、KCa、KCa1.1或MaxiK通道[1]。BKC广泛表达于哺乳动物各种组织,但其功能仍不清楚[2]。它在许多肿瘤细胞中异常表达,并在肿瘤侵袭和转移等过程中起着重要作用。胶质瘤是最常见的原发性恶性脑肿瘤,尽管积极采取手术联合放、化疗,平均寿命仍不足14个月,5年生存率仍然低于10%,与肿瘤浸润转移、复发和对放化疗不敏感、易耐药等密切相关。作用于离子通道的药物可以逆转多药耐药,因而离子通道可作为潜在的抗肿瘤靶点[3]。本文就胶质瘤BKC研究进展进行综述。

摘要： 目的 观察慢性心力衰竭(CHF)大鼠室旁核内大电导钙激活钾通道(BKCa)的变化及其与交感神经活动的关系.方法 雄性Wistar大鼠,6～7周龄,随机数字表法分为2组,即假手术组和CHF组.通过结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠CHF模型,假手术组仅穿线不结扎.建模术后2周,对大鼠行下丘脑室旁核慢性灌注BKCa选择性阻断剂IBTX术,取假手术组和CHF组大鼠各24只,进一步分成8个亚组,即假手术+溶剂人工脑脊液(aCSF)组、CHF+aCSF组、假手术+IBTX低剂量组、CHF+IBTX低剂量组、假手术+IBTX中剂量组、CHF+IBTX中剂量组、假手术+IBTX高剂量组和CHF+IBTX高剂量组,每组6只大鼠,IBTX低、中、高剂量分别为0.125、1.25、12.5 nmoll.另取建模术后2周大鼠,行下丘脑室旁核微量注射病毒术,取假手术组和CHF组大鼠各12只,进一步分成4个亚组,即假手术病毒对照组、假手术基因敲减KCNMB4组、CHF病毒对照组和CHF基因敲减KCNMB4组,每组6只大鼠.超高分辨率小动物超声实时影像系统测定各组大鼠心功能指标,包括左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期容积(LVEDV)和左心室舒张末期内径(LVEDD)等.进一步对大鼠行右侧颈总动脉插管,通过PowerLab生物信号采集与分析系统,采集大鼠的平均动脉压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)和左心室舒张末期压(LVEDP)等指标.在肾脏部位游离出肾交感神经,记录肾交感神经放电(RSNA),心电图采用标Ⅱ导联记录,同步得到心率.分别记录在药物或病毒干预后4周上述各指标变化.待超声心动图、血液动力学和肾交感神经记录结束后,经大鼠腹主动脉采血,ELISA法测定大鼠血浆去甲肾上腺素(NE)及血清N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)水平.取血结束后取大鼠心脏及肺脏称重,计算右心室体重比和肺重比.对大鼠心脏进行伊文思蓝染色,计算大鼠心肌梗死面积.免疫荧光和Western blot法检测大鼠室旁核内KCNMB4蛋白表达量.实时荧光定量聚合酶链反应检测大鼠下丘脑室旁核BKCa基因表达量.结果 (1)抑制下丘脑室旁核BKCa功能对大鼠心功能、血液动力学、交感驱动和组织解剖学指标的影响:CHF+aCSF组及CHF+IBTX低剂量、中剂量和高剂量组大鼠LVEF和左心室短轴缩短率均明显低于相应的假手术各组(P均＜0.05),LVEDP均明显高于相应的假手术各组(P均＜0.05),左心室最大收缩速率(+dp/dt)均明显低于相应的假手术各组(P均＜0.05).假手术+IBTX中剂量和高剂量组大鼠肾交感神经放电和心率均明显高于假手术+aCSF组,假手术+IBTX低剂量、中剂量和高剂量组大鼠MAP和血浆NE水平均明显高于假手术+aCSF组(P均＜0.05).CHF+IBTX低剂量、中剂量和高剂量组大鼠肾交感神经放电和血浆NE水平明显高于CHF+aCSF组(P均＜0.05),CHF+IBTX中剂量和高剂量组大鼠MAP和心率均明显高于CHF+aCSF组(P均＜0.05).CHF+aCSF组及CHF+IBTX低剂量、中剂量和高剂量组大鼠右心室体重比和肺重比均明显高于相应的假手术各组(P均＜0.05).(2)CHF组大鼠下丘脑室旁核内KCNMB4基因及蛋白亚基表达量:CHF组大鼠下丘脑室旁核内KCNMB4 mRNA和蛋白表达量以及KCNMB4阳性神经元数量均明显少于假手术组(P均＜0.05).(3)下丘脑室旁核内KCNMB4敲减对大鼠交感驱动、心功能和组织解剖学指标的影响:微量注射病毒后4周,假手术基因敲减KCNMB4组和CHF病毒对照组大鼠的LVEDD均明显大于假手术病毒对照组(P均＜0.05),而CHF基因敲减KCNMB4组则进一步大于CHF病毒对照组(P＜0.05),假手术基因敲减KCNMB4组和CHF病毒对照组大鼠的LVEF和左心室短轴缩短率则均低于假手术病毒对照组(P均＜0.05),而CHF基因敲减KCNMB4组则进一步低于CHF病毒对照组(P＜0.05).假手术基因敲减KCNMB4组和CHF病毒对照组大鼠的LVSP和+dp/dt均明显低于假手术病毒对照组(P均＜0.05),而CHF基因敲减KCNMB4组上述指标则进一步低于CHF病毒对照组(P＜0.05),假手术基因敲减KCNMB4组和CHF病毒对照组大鼠的LVEDP明显高于假手术病毒对照组(P＜0.05),而CHF基因敲减KCNMB4组则进一步高于CHF病毒对照组(P＜0.05).假手术基因敲减KCNMB4组大鼠的MAP、肾交感神经放电、心率和血浆NE水平均明显高于假手术病毒对照组(P均＜0.05),而CHF基因敲减KCNMB4组上述指标则均高于假手术病毒对照组和CHF病毒对照组(P均＜0.05).假手术基因敲减KCNMB4组和CHF病毒对照组大鼠右心室体重比和肺重比均明显高于假手术病毒对照组(P均＜0.05),而CHF基因敲减KCNMB4组上述指标则进一步高于CHF病毒对照组(P均＜0.05).(4)下丘脑室旁核内KCNMB4敲减对KCNMB4蛋白亚基表达量的影响:假手术基因敲减KCNMB4组、CHF病毒对照组和CHF基因敲减KCNMB4组大鼠下丘脑室旁核内KCNMB4蛋白表达水平均明显低于假手术病毒对照组(P均＜0.05),且CHF基因敲减KCNMB4组进一步低于CHF病毒对照组(P＜0.05).结论 CHF大鼠室旁核内BKCa表达下调、功能钝化,而其可能参与介导了交感传出神经活动增强,与心衰状态下心功能进一步恶化有关.%Objective To elucidate the association between large conductance calcium-activated potassium channels (BKCa) in the paraventricular hypothalamic nucleus (PVN) and sympathetic outflow in rats with chronic heart failure (CHF).Methods Male Wistar rats (6-7 weeks old) were randomized to sham operated group and CHF group (coronary artery ligation).Two weeks after operation,BKCa inhibitor Iberiotoxin (IBTX) was infused into PVN by osmotic minipumps,rats were divided into following groups:sham + aCSF,CHF + aCSF,sham + low dose IBTX (0.125 nmoll),CHF + low dose IBTX,sham + moderate dose IBTX(1.25 nmoll),CHF+moderate dose IBTX,sham+ high dose IBTX (12.5 nmoll),and CHF+ high dose IBTX (n=6 each).Additional rats were grouped as follows:sham + vehicle,sham + KCNMB4 knockdown (by rAAV2-KCNMB4 shRNA virus injection in PVN),CHF + vehicle,CHF + KCNMB4 knockdown group (n=6 each).The cardiac function was determined by echocardiography,left ventricular hemodynamics were measured invasively,renal sympathetic nerve activity (RSNA) was recorded at 6 weeks after coronary artery ligation or sham operation.The contents of norepinephrine (NE) and N-terminal pro-B-type natriuretic peptide (NT-proBNP) in plasma were determined by enzyme-linked immunosorbent assay.The protein and mRNA expression of KCNMB4 in PVN were measured by immunofluorescence staining,Western blot,and real-time PCR,mRNA expression of BKCa in PVN was detected by real-time PCR.Results Compared with the sham operation group,the cardiac function of the heart failure group was significantly reduced (P＜0.05),and the plasma NE and the serum NT-proBNP were significantly elevated (P＜0.05).The protein and mRNA expression of KCNMB4 in PVN were obviously down-regulated in CHF rats (P＜0.05).After perfusion of IBTX or KCNMB4 knockdown by microinjection of rAAV2-KCNMB4 shRNA virus,right ventricular weight/body weight and lung weight/body weight ratio as well as left ventricular end-diastolic diameter were increased and left ventricular ejection fraction was decreased (all P＜0.05),the sympathetic driving indexes was increased in sham rats,changes of these parameters further aggravated in CHF rats (P＜0.05).KCNMB4 knockdown further downregulated protein expression in PVN of CHF rats.Conclusion Downregulation and blunted function of BKCa in PVN may contribute to sympathoexcitation and deterioration of cardiac function in rats with chronic heart failure.

摘要： 目的：血管平滑肌细胞上的大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated potassium channels,BKCa)的活动直接参与了血管平滑肌的舒缩调节,在血压维持中起重要作用.在天然细胞上有关B&Ca通道的动力学特性、通道调控点、药物作用靶点等的研究存在一定的局限性,将BKCa通道蛋白重建到平面双分子层脂质膜(Panar lipid bilayers,PLBMs)上的研究可作为补充.本实验旨在摸索建立稳定的PLBMs制备方法，并摸索将克隆的血管平滑肌细胞BKCa通道蛋白融合其上进行单通道电流研究。rn 方法：通过不同PLBMs制备实验和重建到PLBMs上的BKCa的单通道实验进行研究。rn 结果：结果与转染有BKCaα亚基的人胚肾(HEK293)细胞上的BKce单通道膜片钳实验结果基本一致，但与文献报道一致，其Ca2+敏感范围有一定变化。rn 结论：(1)涂抹法可用于平面双分子层脂质膜的制备。(2)平面双分子层脂质膜技术可用于BKca通道的药理学和动力学特性的研究。（3)重建后的BKCa具有电导值大，电压依赖性，Ca2+敏感性和K+选择性。(4)目前制备的BKCa脂蛋白体含有其他蛋白。

摘要： 越来越多的证据表明低至中度饮酒可保护机体减轻后续严重的缺血再灌注损伤,即酒精预适应(ethanolpreconditioning,EtOH-PC),但其潜在机制尚不完全清楚.大电导钙激活钾通道(largeconductancecalcium-activated K+channels,BKCa)是KCa家族的一员,在神经元细胞膜及线粒体膜均有表达.有研究发现,心肌细胞线粒体膜BKCa通道激活具有心脏保护作用.但BKCa通道的激活是否参与了酒精预适应的神经保护作用尤其是对线粒体功能的影响尚不清楚.

摘要： 目的：本文旨在研究β-雌二醇(β-estradio1,β-E2)对动脉平滑肌大电导钙激活钾通道(large-conductance Ca2+-activated potassium channels,β-雌二醇)的作用,并比较绝经前女性非高血压(pre-menopause women non-hypertension,PNH)组、绝经后女性非高血压(post-menopause women non-hypertension,NH)组及绝经后女性原发性高血压(post-menopause women essential hypertension,EH)组肠系膜动脉平滑肌细胞上BKCa及STOCs对β-E2敏感性变化,从而探讨β-E2、BKCa与女性原发性高血压之间的关系.rn 方法：取女性患者手术切除物中的肠系膜动脉，应用急性酶分离法分离女性肠系膜动脉平滑肌细胞，按动脉平滑肌细胞的来源分为PNH组、NH组及EH组，采用穿孔全细胞膜片钳技术研究β-E2及其受体(ER)抑制剂ICI182780对BKca和STOCs的作用。rn 结果：肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa和STOCS的开放具有电压依赖性和钙依赖性，可被IbTX所阻断。100EunollLp-E2能够显著增加PNH, NH和EH组BKCa的电流密度和STOCs的幅度和频率，且β-E2处理后PNH组和NH组对β-E2反应性比较，NH组较PNH组低:绝经后女性NH组和EH组对β-E2反应性比较，EH组较NH低。ICI182780可部分抑制β-E2对BKca通道的增强作用。rn 结论:β-E2能够通过激活ER显著增强女性HMASMC的BKCa功能，而高血压可以削弱β-E2对动脉平滑肌BKca功能的增强作用。

摘要： 目的：检测原发性高血压患者与非高血压患者肠系膜动脉BK通道蛋白质表达水平的差异。方法：提取人肠系膜动脉平滑肌蛋白质，用western blot方法检测BK通道α、β亚单位及GAPDH蛋白质的表达。以GAPDH蛋白质为内参，用Quantity One软件泳道/条带轨迹定量法对结果进行定量分析，结果数据用SPSS17.0软件进行独立样本T检验。结果：10例高血压患者组(HT)及12例非高血压患者组(NT)肠系膜动脉平滑肌检测显示，BK通道α亚单位蛋白质在高血压患者中相对表达量为0.6027±0.2074，非高血压患者相对表达量为0.4671±0.2182; P>0.05，未达到显著差异水平。高血压患者β亚单位相对表达量为0.5214±0.2737，非高血压患者相对表达量为0.9503±0.2907; P<0.01，达到极显著差异水平。结论：Western blot结果显示，原发性高血压患者与非高血压患者BK通道α亚单位蛋白质表达水平没有明显差异，原发性高血压患者β亚单位蛋白质表达水平明显低于非高血压患者，本文结果与沪州医学院心肌电生理研究室前期进行的高血压患者肠系膜动脉平滑肌BK通道mRNA表达水平结果一致。由此，凸显了β亚单位蛋白质表达量下调对高血压病发生的重要性，可能是高血压发生的重要机制之一，揭示了BK通道β亚单位作为高血压病新的治疗靶点的重要价值。

摘要： 目的：研究尿嘧啶三磷酸(uridine 5'-triphosphate，UTP)对急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞自发性瞬时外向电流(spontaneous transient outward currents，STOCs)的作用，探讨UTP产物三磷酸肌醇(inositol 1，4，5-trisphosphate，IP3)对大电导钙激活钾通道(Large-conductance Ca2+-activated potassium channels，BKCachannels)的作用机制。方法：采用全细胞穿孔膜片钳技术，记录急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞STOCs的变化。结果：①UTP(40 μmol/L)可明显激活猪冠状动脉平滑肌细胞的STOCs(P0.05;n=7)。③L型电压依赖性钙通道(L-voltage-dependentCa2+ channels，L-VDCCs)阻断剂Verapamil(20 μmol/L)和CdCl2(200μmol/L)不影响UTP对STOCs活性的调节(P>0.05;n=8)。④UTP(40μmol/L)预处理细胞后，PKC的特异性阻断剂BisI(1μmol/L)可明显激活STOCs的活性，使其频率较加药前增加了88.19±36.91％(P0.05)。结论：UTP主要通过PLC-IP3信号通路激活急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞的STOCs，IP3Rs和RyRs介导的细胞内Ca2+释放在此过程中发挥了重要作用。

摘要： 目的：通过Overlapping PCR法构建Flag与EGFP双标记表达质粒pcDNA3.1-Flag-hBK-EGFP (Flag-hBK-EGFP),使用电生理、分子生物学和细胞生物学的方法研究该表达质粒在研究BKca通道转运功能中的应用.rn 方法：以pcDNA3.1-hBK为模板,使用Overlapping PCR分别将Flag标签插入到BKca通道胞外环S1-S2区域和EGFP连接到BKca通道的C端(胞内),构建Flag与EGFP双标记表达质粒Flag-hBK-EGFP.将Flag-hBK-EGFP通过脂质体转染至HEK-293细胞，构建稳定的表达系。进而使用膜片钳技术验证其电生理学特性，Westernblot检测其蛋白表达，激光共聚焦显微镜检测其在细胞中的定位，流式细胞术检测其在细胞膜上的表达(使用不透膜处理，荧光二抗检测Flag的荧光强度)及占细胞总表达量(GFP的荧光强度)的比例。rn 结果:表达质粒Flag-hBK-EGFP测序正确。 Westernblot能够检测到相应的蛋白表达，通道的电生理学特性与不带Flag和EGFP标签的基本一致;免疫荧光法能够检测到通道在细胞中的表达与定位，能够明显的看出通道在细胞膜上的表达。通过流式细胞术也能检测通道在细胞膜上的表达并能计算得到膜上的表达比例。rn 结论:成功构建稳定表达的Flag与EGFP双标记表达质粒Flag-hBK-EGFP的HEK-293细胞系，并具有不带标签的BKCa通道相似的电生理学特性，可以很好的用于通道蛋白转运研究。

摘要： 目的：通过Overlapping PCR法构建Flag与EGFP双标记表达质粒pcDNA3.1-Flag-hBK-EGFP (Flag-hBK-EGFP),使用电生理、分子生物学和细胞生物学的方法研究该表达质粒在研究BKca通道转运功能中的应用.rn 方法：以pcDNA3.1-hBK为模板,使用Overlapping PCR分别将Flag标签插入到BKca通道胞外环S1-S2区域和EGFP连接到BKca通道的C端(胞内),构建Flag与EGFP双标记表达质粒Flag-hBK-EGFP.将Flag-hBK-EGFP通过脂质体转染至HEK-293细胞，构建稳定的表达系。进而使用膜片钳技术验证其电生理学特性，Westernblot检测其蛋白表达，激光共聚焦显微镜检测其在细胞中的定位，流式细胞术检测其在细胞膜上的表达(使用不透膜处理，荧光二抗检测Flag的荧光强度)及占细胞总表达量(GFP的荧光强度)的比例。rn 结果:表达质粒Flag-hBK-EGFP测序正确。 Westernblot能够检测到相应的蛋白表达，通道的电生理学特性与不带Flag和EGFP标签的基本一致;免疫荧光法能够检测到通道在细胞中的表达与定位，能够明显的看出通道在细胞膜上的表达。通过流式细胞术也能检测通道在细胞膜上的表达并能计算得到膜上的表达比例。rn 结论:成功构建稳定表达的Flag与EGFP双标记表达质粒Flag-hBK-EGFP的HEK-293细胞系，并具有不带标签的BKCa通道相似的电生理学特性，可以很好的用于通道蛋白转运研究。

摘要： 目的：通过Overlapping PCR法构建Flag与EGFP双标记表达质粒pcDNA3.1-Flag-hBK-EGFP (Flag-hBK-EGFP),使用电生理、分子生物学和细胞生物学的方法研究该表达质粒在研究BKca通道转运功能中的应用.rn 方法：以pcDNA3.1-hBK为模板,使用Overlapping PCR分别将Flag标签插入到BKca通道胞外环S1-S2区域和EGFP连接到BKca通道的C端(胞内),构建Flag与EGFP双标记表达质粒Flag-hBK-EGFP.将Flag-hBK-EGFP通过脂质体转染至HEK-293细胞，构建稳定的表达系。进而使用膜片钳技术验证其电生理学特性，Westernblot检测其蛋白表达，激光共聚焦显微镜检测其在细胞中的定位，流式细胞术检测其在细胞膜上的表达(使用不透膜处理，荧光二抗检测Flag的荧光强度)及占细胞总表达量(GFP的荧光强度)的比例。rn 结果:表达质粒Flag-hBK-EGFP测序正确。 Westernblot能够检测到相应的蛋白表达，通道的电生理学特性与不带Flag和EGFP标签的基本一致;免疫荧光法能够检测到通道在细胞中的表达与定位，能够明显的看出通道在细胞膜上的表达。通过流式细胞术也能检测通道在细胞膜上的表达并能计算得到膜上的表达比例。rn 结论:成功构建稳定表达的Flag与EGFP双标记表达质粒Flag-hBK-EGFP的HEK-293细胞系，并具有不带标签的BKCa通道相似的电生理学特性，可以很好的用于通道蛋白转运研究。

摘要： 目的：通过Overlapping PCR法构建Flag与EGFP双标记表达质粒pcDNA3.1-Flag-hBK-EGFP (Flag-hBK-EGFP),使用电生理、分子生物学和细胞生物学的方法研究该表达质粒在研究BKca通道转运功能中的应用.rn 方法：以pcDNA3.1-hBK为模板,使用Overlapping PCR分别将Flag标签插入到BKca通道胞外环S1-S2区域和EGFP连接到BKca通道的C端(胞内),构建Flag与EGFP双标记表达质粒Flag-hBK-EGFP.将Flag-hBK-EGFP通过脂质体转染至HEK-293细胞，构建稳定的表达系。进而使用膜片钳技术验证其电生理学特性，Westernblot检测其蛋白表达，激光共聚焦显微镜检测其在细胞中的定位，流式细胞术检测其在细胞膜上的表达(使用不透膜处理，荧光二抗检测Flag的荧光强度)及占细胞总表达量(GFP的荧光强度)的比例。rn 结果:表达质粒Flag-hBK-EGFP测序正确。 Westernblot能够检测到相应的蛋白表达，通道的电生理学特性与不带Flag和EGFP标签的基本一致;免疫荧光法能够检测到通道在细胞中的表达与定位，能够明显的看出通道在细胞膜上的表达。通过流式细胞术也能检测通道在细胞膜上的表达并能计算得到膜上的表达比例。rn 结论:成功构建稳定表达的Flag与EGFP双标记表达质粒Flag-hBK-EGFP的HEK-293细胞系，并具有不带标签的BKCa通道相似的电生理学特性，可以很好的用于通道蛋白转运研究。

摘要： 目的：通过Overlapping PCR法构建Flag与EGFP双标记表达质粒pcDNA3.1-Flag-hBK-EGFP (Flag-hBK-EGFP),使用电生理、分子生物学和细胞生物学的方法研究该表达质粒在研究BKca通道转运功能中的应用.rn 方法：以pcDNA3.1-hBK为模板,使用Overlapping PCR分别将Flag标签插入到BKca通道胞外环S1-S2区域和EGFP连接到BKca通道的C端(胞内),构建Flag与EGFP双标记表达质粒Flag-hBK-EGFP.将Flag-hBK-EGFP通过脂质体转染至HEK-293细胞，构建稳定的表达系。进而使用膜片钳技术验证其电生理学特性，Westernblot检测其蛋白表达，激光共聚焦显微镜检测其在细胞中的定位，流式细胞术检测其在细胞膜上的表达(使用不透膜处理，荧光二抗检测Flag的荧光强度)及占细胞总表达量(GFP的荧光强度)的比例。rn 结果:表达质粒Flag-hBK-EGFP测序正确。 Westernblot能够检测到相应的蛋白表达，通道的电生理学特性与不带Flag和EGFP标签的基本一致;免疫荧光法能够检测到通道在细胞中的表达与定位，能够明显的看出通道在细胞膜上的表达。通过流式细胞术也能检测通道在细胞膜上的表达并能计算得到膜上的表达比例。rn 结论:成功构建稳定表达的Flag与EGFP双标记表达质粒Flag-hBK-EGFP的HEK-293细胞系，并具有不带标签的BKCa通道相似的电生理学特性，可以很好的用于通道蛋白转运研究。

摘要： 本发明提供通过利用调节中电导钙激活钾(SK4)通道表达、活性或功能的试剂用于调控细胞-细胞融合的组合物和方法。在一些实施方案中，本发明所述的组合物和方法抑制多核破骨细胞形成和细胞-细胞融合，尤其是涉及巨噬细胞的细胞融合。在此类实施方案中，所述组合物可包括SK4通道的抑制性核酸、单克隆抗体或者小分子抑制剂，可用于预防和/或治疗多种疾病或障碍，包括骨丢失、自身免疫和炎性疾病或障碍、植入物和移植排斥，以及癌症转移。在其他实施方案中，本发明所述的组合物和方法激活细胞-细胞融合。本发明还提供筛选SK4通道调节剂(抑制剂或激活剂)的方法，所述SK4通道调节剂调控细胞-细胞融合(特别是巨噬细胞的细胞融合)。

摘要： 本发明提供通过利用调节中电导钙激活钾(SK4)通道表达、活性或功能的试剂用于调控细胞-细胞融合的组合物和方法。在一些实施方案中，本发明所述的组合物和方法抑制多核破骨细胞形成和细胞-细胞融合，尤其是涉及巨噬细胞的细胞融合。在此类实施方案中，所述组合物可包括SK4通道的抑制性核酸、单克隆抗体或者小分子抑制剂，可用于预防和/或治疗多种疾病或障碍，包括骨丢失、自身免疫和炎性疾病或障碍、植入物和移植排斥，以及癌症转移。在其他实施方案中，本发明所述的组合物和方法激活细胞-细胞融合。本发明还提供筛选SK4通道调节剂(抑制剂或激活剂)的方法，所述SK4通道调节剂调控细胞-细胞融合(特别是巨噬细胞的细胞融合)。

摘要： 本发明涉及用作小电导钙激活钾通道(SK通道)调节剂的2－(苯基氨基)苯并咪唑衍生物。在其他方面中，本发明涉及这些化合物在药物制备中的用途以及涉及包含本发明化合物的药物组合物。

摘要： 式(1)的咪唑化合物或其药学上可接受的盐是用于治疗尿频、尿失禁等的大电导钙激活K通道开启剂，其中环A是苯或杂环环；G是烷硫基、烷基磺酰基、任选取代的苯基、或任选取代的杂环环基团等；环C为咪唑；R

摘要： 本发明公开了包含式(I)化合物或其药用盐作为活性成分的大电导钙－激活K通道的开启剂：其中环A是含有O，N或S中任何一个的5－元杂环，该环可以被R

摘要： 本实用新型公开了一种基于大电导钙离子激活钾通道的药物筛选试剂盒，包括试剂盒体，所述试剂盒体内部嵌入有缓冲泡沫塑料垫，且缓冲泡沫塑料垫下方铺设有干燥层，所述缓冲泡沫塑料垫通过电机凹槽嵌入有测量电极，所述缓冲泡沫塑料垫通过检测仪凹槽嵌入有钙离子浓度校测仪，所述缓冲泡沫塑料垫通过烧杯凹槽嵌入有测量烧杯。本实用新型中，通过在试剂盒内部嵌入有钙离子浓度检测仪，可以通过钙离子浓度检测仪对钙离子浓度进行检测，使得该基于大电导钙离子激活钾通道的药物筛选试剂盒即可以通过钙离子浓度检测仪进行检测，也可以通过试剂瓶进行染色检测，从而相互进行对比，提高了检测的准确度和精度。

摘要： 本发明公开了一种大电导钙激活钾通道阻断剂——Martentoxin及其制备方法和用途。本发明的Martentoxin是由37个氨基酸组成的单链多肽，它的分子量为4060道尔顿，等电点为9.5。本发明还提供了运用分子筛凝胶过滤、离子交换柱层析和高效液相色谱等进行提纯该多肽的方法。还提供了基因克隆该多肽的方法。本发明的多肽是一个优良的钾通道阻断剂。

摘要： 本发明涉及医药技术领域，具体为一种Omega‑3制备大电导钙激活钾通道开放剂的方法，包括以下制备步骤：步骤一：富集EPA和DHA；步骤二：皂化；步骤三；制备混合脂肪酸；步骤四：银离子络合；步骤五：解离络合物；步骤六：蒸发提纯；步骤七：制备母液。有益效果为：本发明采用银离子作为络合剂，利用Omega‑3中物质双键数的不同，实现EPA和DHA分离，并采用氯化钠作为沉淀剂回收银离子，避免银离子损失，富集后的DHA纯度达85%，收率达69%，能耗低，操作简单，条件温和，周期短，收率高。

摘要： 本发明属中药领域，涉及中药姜黄主要活性成分姜黄素的新的药用用途，具体涉及姜黄素在制备钾通道开放剂中的用途，尤其是姜黄素作为大电导钙激活钾通道开放剂的新用途。本发明经细胞实验结果证明，所述的姜黄素具有开放大电导钙激活钾通道的作用，包括：对该通道电流的增大作用，对该通道蛋白的总表达和表面表达的增加作用，抑制该通道蛋白的降解途径，增强其稳定性的作用。所述的姜黄素进一步可制备新的大电导钙激活钾通道开放剂药物，用以制备治疗平滑肌功能紊乱相关疾病的药物，包括治疗膀胱过度活动症、胃蠕动过强等平滑肌功能紊乱相关疾病的药物。

摘要： 本发明公开了一种大电导钙激活钾通道阻断剂——Martentoxin及其制备方法和用途。本发明的Martentoxin是由37个氨基酸组成的单链多肽,它的分子量为4060道尔顿,等电点为9.5。本发明还提供了运用分子筛凝胶过滤、离子交换柱层析和高效液相色谱等进行提纯该多肽的方法。还提供了基因克隆该多肽的方法。本发明的多肽是一个优良的钾通道阻断剂。