多巴胺神经元

摘要： 神经干细胞具备自我更新能力,可在特定环境下定向分化为神经元和胶质细胞,通过分泌神经营养因子、调控神经炎症、增强神经元可塑性等机制修复帕金森病(PD)多巴胺神经元损伤。目前PD治疗主要是多巴胺替代治疗,但不能阻止PD病情进展,且不能彻底根治。干细胞在PD中具有较好的治疗前景,尤其神经干细胞优势引起较多关注。尽管神经干细胞移植在PD治疗中取得了一定的效果,但临床中的应用仍受到很多条件限制。本文就神经干细胞基因修饰在PD治疗中的研究进展进行综述,旨在探讨神经干细胞治疗PD的关键调控机制。

摘要： 目的:利用七氯对斑马鱼多巴胺神经元的影响,建立斑马鱼帕金森病(PD)模型。方法:将斑马鱼鱼卵分为正常对照组(不予干预),750μmol/L 6-羟基多巴胺(6-OHDA)组和不同浓度七氯组(1 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL、1000 ng/mL、10000 ng/mL),分别恒温孵育,每24 h观察胚胎发育情况并记录直到受精后120 hpf(h post fertilization,hpf),在120 hpf做行为学测定,然后实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定多巴胺通路酪氨酸羟化酶(TH2)的相对表达量。结果:与正常对照组比较,6-OHDA组幼体出现发育迟缓、脊柱弯曲,运动距离缩短(P<0.05),TH2基因表达降低(P<0.05);与正常对照组比较,1~100 ng/mL七氯组幼体发育无明显变化,但运动距离缩短(P<0.05),TH2基因表达降低(P<0.05),1000~10000 ng/mL七氯组出现色素沉着分布和脊柱弯曲,而且运动距离更短(P<0.05)、TH2基因表达更低(P<0.05),变化具有浓度依赖性;与6-OHDA组比较,1000~10000 ng/mL七氯组运动距离更短,TH2基因表达更低,其中10000 ng/mL七氯组运动距离缩短和TH2基因表达降低有统计学差异(P<0.05)。结论:传统PD模型造模药物6-OHDA和1000~10000 ng/mL七氯都可通过影响多巴胺神经元功能成功建立斑马鱼PD模型,其中10000 ng/mL七氯的造模效果比6-OHDA更显著。

摘要： 目的 探究帕金森病(PD)模型中p150Glued蛋白的表达及分布.方法 选取20只雄性C57/BL6成年小鼠随机分为PD小鼠模型组[腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),20 mg/kg]和空白对照组(腹腔注射与模型组等体积生理盐水),每组10只.免疫荧光染色检测两组小鼠中脑黑质致密部酪氨酸羟化酶(TH)和p150Glued的表达差异.另选取MN9D细胞分为PD细胞模型组[不同浓度的1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)作用细胞48 h]和空白对照组(加等体积的磷酸缓冲盐溶液替代),利用MTT比色法检测MN9D细胞存活率,蛋白质印迹技术(Western blot)及免疫荧光染色检测p150Glued在细胞中的表达.结果 在PD小鼠模型中,与对照组相比,黑质区域TH阳性神经元细胞数量减少,p150 Glued表达量降低.在PD细胞模型中,p150Glued在胞体中异常聚集,其聚集体与微管蛋白共定位.与对照组相比较,MPP+可下调MN9D细胞中p150Glued蛋白的表达,并随着MPP+的浓度增加,p150Glued蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 p150Glued可能是诱导多巴胺神经元凋亡及影响PD发病的一个重要因素.

摘要： 目的 评价二甲基姜黄素、黄芩苷、紫檀芪对异烟肼导致斑马鱼神经损伤的保护作用.方法 挑选受精后2h(2 hpf)的斑马鱼胚胎,设置对照组(胚胎培养用水处理)、异烟肼组(4mmol/L)、二甲基姜黄素(0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/L)组、黄芩苷(0.1、0.2、0.5、1.0 μmol/L)组、紫檀芪(0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/L)组,异烟肼分别与不同浓度的药物共处理120 h,用Zebrabox斑马鱼行为分析仪分析斑马鱼幼鱼行为学轨迹变化,荧光显微镜下观察斑马鱼幼鱼多巴胺神经元的发育情况.结果 与对照组比较,异烟肼组运动轨迹明显减少,运动总距离和低速、中速运动距离均显著下降(P＜0.01),运动速度明显降低;神经节长度显著降低(P＜0.01).与异烟肼组比较,二甲基姜黄素组运动轨迹明显增加,斑马鱼运动状态主要为低速运动,各浓度的二甲基姜黄素组斑马鱼总运动距离和低速运动距离均显著增加(P＜0.01),运动速度明显增加,0.5、2.0、4,0 μmol/L的二甲基姜黄素组中速运动距离显著增加(P＜0.01);黄芩苷组运动轨迹明显增加,0,1、0.2、0.5和1.0 μmol/L的黄芩苷组斑马鱼总运动距离和低速运动距离均显著增加(P＜0.0l),运动速度明显增加;0.5和1.0 μmol/L紫檀芪组运动轨迹明显增加,紫檀芪0.5 μmol/L组的总运动距离和低速运动距离均显著增加(P＜0.01),紫檀芪0.5和1.0 μmol/L浓度组运动速度明显增加.与异烟肼组比较,二甲基姜黄素和黄芩苷各浓度组多巴胺相对神经节长度显著增加(P＜0.01);紫檀芪1 μmol/L组相对神经节长度显著增加(P＜0.01).结论 二甲基姜黄素、黄芩苷和0.5、1.0 μmol/L紫檀芪对异烟肼导致的斑马鱼神经损伤有明显保护作用.

摘要： 探讨鼠尾草酸(carnosic acid,CA)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydro-pyridine,MPTP)诱导的多巴胺神经元损伤的保护作用.通过体外培养小鼠多巴胺能神经元,分为对照组(试剂空白组)、模型组(MPTP处理组)、药物组(高、中、低剂量CA处理组)和阳性对照组.采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测神经元活力;用酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)抗体进行免疫荧光染色,共聚焦显微镜下观察细胞形态;生化法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量和丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;实时荧光聚合酶链式反应(RT-PCR)检测神经元凋亡相关基因caspase 3 mRNA的表达;免疫蛋白印迹(Western blot,WB)检测总caspase-3和剪切型caspase-3的表达.结果 显示,与模型组比较,中、高浓度CA处理组神经元活力明显增强,神经元形态良好,培养液中LDH漏出减少、胞内MDA的生成减少,SOD活性增强,caspase-3 mRNA蛋白的表达显著下调.CA预处理对MPTP诱导的多巴胺神经元损伤具有保护作用,其机制可能与抑制神经元氧化损伤,阻止caspase-3异常升高有关.

摘要： 目的 探究联苄基化合物20C在帕金森病(PD)小鼠体内的保护作用.方法 通过1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶/丙磺舒(MPTP/p)小鼠模型,应用爬杆测试评价小鼠的运动能力;通过高效液相色谱(HPLC)检测20C对小鼠脑内多巴胺(DA)含量和代谢的影响;应用免疫组织化学和Western印迹法评价20C对小鼠黑质和纹状体神经元数量和活性的影响以及对小鼠脑内α-突触核蛋白(α-syn)及其聚集态、硝化和磷酸化形式含量变化的影响;通过透射电镜观察该化合物对小鼠黑质超微结构的影响;应用免疫荧光化学检测20C对黑质小胶质细胞和星形胶质细胞的影响.结果 20C改善行为缺陷,减少DA消耗,减少多巴胺能神经元丢失,保护血脑屏障结构,改善突触核蛋白功能障碍,抑制胶质细胞活化,调节NF-κB信号和NOD样受体蛋白(NLRP)3炎症小体途径.结论 20C通过减少突触核蛋白功能障碍和调节突触核蛋白相关的炎症反应对MPTP/p模型小鼠发挥保护作用.

摘要： 帕金森病是常见的神经系统退行性疾病,线粒体功能障碍是帕金森病发病中的一个重要环节.艾地苯醌是一种线粒体靶向药物,具有较强的抗氧化能力,能有效改善线粒体功能.本文从线粒体功能障碍与帕金森病的关系、艾地苯醌药理机制、艾地苯醌在帕金森病中的应用进行综述,旨在深入探讨艾地苯醌在帕金森病中的应用价值及其潜在的疾病修饰作用.

摘要： 目的探讨红景天苷对MPTP诱导的帕金森病小鼠模型神经元及自主神经功能的保护作用。方法将成年雄性C57/6J小鼠随机分为对照组(正常小鼠)、不用药的PD模型组(单纯模型组)、红景天苷治疗的PD模型组(红景天苷干预组,在MPTP给药前2周开始喂食溶解在饮用水中的红景天苷,40 mg·kg-1·d-1),每组6~8只。采用MPTP(10 mg/kg)腹腔注射建模,每天给药1次,连续给药4 d,在最后一针注射后的第7天处死小鼠。处死小鼠前,于麻醉状态下给予升压药和降压药,记录其血压及心率情况。处死小鼠后取待检脑组织,利用免疫组化法计数3组小鼠中脑黑质(substantia nigra pars compacta,SNpC)区、脑干孤束核(nucleus tractus solitaril,NTS)区和脑干延髓腹外侧(rostral ventrolateral medullary,RVLM)区的多巴胺神经元并比较分析。多组间的比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果3组小鼠仅SNp C区神经元计数的差异有统计学意义(F=81.920,P0.05)。3组小鼠心率变异性指标(交感神经活性、副交感神经活性以及两者比值)的差异均无统计学意义(F=0.97、1.57、1.05,均P>0.05)。3组小鼠麻醉状态下急性颈动脉插管压力反射斜率的差异均无统计学意义(F=1.500、1.940,均P>0.05)。结论红景天苷对于MPTP导致的SNp C纹状体多巴胺神经元的死亡具有保护作用,可以明显抑制PD的病理进程,但对自主神经功能无保护作用。

摘要： 目的 探讨红景天苷对MPTP诱导的帕金森病小鼠模型神经元及自主神经功能的保护作用.方法 将成年雄性C57/6J小鼠随机分为对照组(正常小鼠)、不用药的PD模型组(单纯模型组)、红景天苷治疗的PD模型组(红景天苷干预组,在MPTP给药前2周开始喂食溶解在饮用水中的红景天苷,40 mg·kg-1·d-1),每组6～8只.采用MPTP(10 mg/kg)腹腔注射建模,每天给药1次,连续给药4 d,在最后一针注射后的第7天处死小鼠.处死小鼠前,于麻醉状态下给予升压药和降压药,记录其血压及心率情况.处死小鼠后取待检脑组织,利用免疫组化法计数3组小鼠中脑黑质(substantia nigra pars compacta,SNpC)区、脑干孤束核(nucleus tractus solitaril,NTS)区和脑干延髓腹外侧(rostral ventrolateral medullary,RVLM)区的多巴胺神经元并比较分析.多组间的比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 3组小鼠仅SNpC区神经元计数的差异有统计学意义(F=81.920,P0.05).3组小鼠心率变异性指标(交感神经活性、副交感神经活性以及两者比值)的差异均无统计学意义(F=0.97、1.57、1.05,均P>0.05).3组小鼠麻醉状态下急性颈动脉插管压力反射斜率的差异均无统计学意义(F=1.500、1.940,均P>0.05).结论 红景天苷对于MPTP导致的SNpC纹状体多巴胺神经元的死亡具有保护作用,可以明显抑制PD的病理进程,但对自主神经功能无保护作用.

摘要： 目的 基于斑马鱼帕金森症(Parkinson's disease,PD)模型,研究一种抗氧化活性十肽YSQLENEFDR(Tyr-Ser-Gln-Leu-Glu-Asn-Glu-Phe-Asp-Arg)的抗帕金森症活性.方法 实验分为空白对照组,50μmol·L-11-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-terahydropyridine,MPTP)诱导组以及50μmol·L-1 MPTP和不同浓度(2、10、50 mg·L-1)的十肽共处理组.受精后4d(day post fertiliza-tion,dpf),用荧光显微镜观察并记录各实验组转基因斑马鱼多巴胺神经元和脑部血管的发育情况;5dpf时,用Zebrabox斑马鱼行为分析仪分析野生型斑马鱼行为并通过qRT-PCR检测帕金森相关基因的表达变化.结果 与空白对照组相比,MPTP处理组斑马鱼出现多巴胺神经元缺失、脑部血管损伤、帕金森状行为和帕金森相关基因表达异常.与MPTP处理组比较,共处理组斑马鱼表现出多巴胺神经元缺失减少、脑部血管损伤降低、帕金森状行为缓解的表征,相关基因表达趋于正常.结论 抗氧化活性十肽YSQLENEFDR具有抗帕金森症活性.

摘要： 中枢神经系统内的多种不同的尼古丁受体与多种中枢神经系统功能和疾病有关.尼古丁能引起脑内多巴胺神经元的兴奋性,提高并引起脑内多巴胺的释放,增加而调节中枢神经系统功能.在最近的研究中,利用制药公司最新的技术优势,从电生理学和神经药理学方面,证明了尼古丁是主要作用于α4β2受体上而调控多巴胺神经元的功能.这一发现成果对于未来治疗与多巴胺系统有关的中枢神经系统疾病的尼古丁新药的研制是非常有启示作用的.

摘要： 目的：研究报道人体脐带血单个核细胞(hUCB-MNC)对神经系统疾病具有神经保护作用.为了探讨hUCB-MNC细胞对帕金森氏病的移植治疗作用,我们将hUCB-MNC移植到6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的大鼠PD模型研究hUCB-MNC细胞的治疗效果和作用机制. 方法：从新生儿脐带血中分离hUCB-MNC细胞,移植到6-OHDA诱导产生的大鼠PD模型的纹状体,根据运动转圈数评估大鼠在细胞移植后不同时间的运动行为情况. 结果：移植hUCB-MNC细胞后改善了PD模型大鼠的运动缺陷,可以减少阿朴吗啡(apomorphine)诱导的大鼠转圈数.通过免疫组化实验表明hUCB-MNC细胞可以分化为神经元和多巴胺神经元. 结论：实验表明hUCB-MNC细胞在大鼠PD模型中分化成多巴胺神经元起到治疗的效果.

摘要： 目前治疗帕金森病的药物多巴胺替代治疗主要是对症治疗,不能逆转疾病的进程.本研究观察知母活性成分异菝葜皂苷元(SMI)能否预防和逆转帕金森病模型的中脑多巴胺神经元变性,并且进一步研究其保护的分子机制.制备慢性MPTP损伤小鼠模型,腹腔注射DMSO配制的丙磺舒(250mg/kg),0.5h后再皮下注射无菌生理盐水配制的MPTP(15mg/kg).结果表明，SMI对正常小鼠的运动功能的影响无统计学意义。与正常对照组相比，模型组小鼠的运动能力显著降低，其行为学成绩降为正常对照组的73.7%。SMI能够改善帕金森病模型行为学，增加TH阳性神经元数目和DAT密度，下调D1受体密度，上调D2受体密度，能够明显增加纹状体GDNF水平，SMI有可能是一个很有潜力的抗PD药物。

摘要： 多年来,人们一直非常重视对DA神经元的研究,并进行了大量的工作.本文将简要总结和介绍近几年来啮齿类动物中脑DA神经元发育方面的研究成果.

摘要： 本发明涉及从人羊膜上皮细胞中诱导分化出多巴胺能神经元的方法，该方法包括以下步骤：取新鲜人胎盘，将人羊膜剥离，用生理盐水反复冲洗除后，用无菌D-hank’s液浸泡，再用生理盐水漂洗；将人羊膜置于0.25％胰蛋白酶溶液中，在36.5°C-37.5°C温度下消化；用含有10％胎牛血清的DMEM/F12终止上述人羊膜在胰蛋白酶溶液中的消化，然后用细胞筛对上述溶液进行过滤，收集得到的细胞为人羊膜上皮细胞；分离所获得的人羊膜上皮细胞，用10％无胎牛血清的培养基对分离出来的上述人羊膜上皮细胞进行体外传代培养；选择生长状态良好的3或4或5或6代人羊膜上皮细胞，然后用神经干细胞分化培养基继续培养；收获上述多巴胺能神经元样细胞。

摘要： 本发明涉及一种从非神经细胞转化制备保留年龄特征的多巴胺能神经元的方法。本发明的制备方法优化了关键的细胞直接转分化基因组合及调控表达水平的启动子，包装可以高效感染各种年龄供体源细胞的病毒，并采用合适的包被基质促进供体源细胞及转化后的神经细胞贴壁生长，并利用含有可以促进转分化的小分子化合物与生长因子的诱导分化培养液，在10‑14天内经过若干次更换分化培养液后转分化得到大量的多巴胺能神经元，最后经过分离纯化获得高纯度的多巴胺能神经元。

摘要： 本发明部分基于化学上定义的由人多能干细胞(hPSC)生成神经干细胞(NSC)和多巴胺能(DA)神经元的方法。本发明的所述DA神经元可衍生自hPSC和NSC。本发明还提供了用于由人多能干细胞衍生神经干细胞和多巴胺能神经元的试剂和试剂盒。

摘要： 本发明提出一种将人神经干细胞体外定向诱导分化为多巴胺能神经元的方法，该方法包括：人神经干细胞的贴壁培养；多巴胺能神经元前体细胞的诱导；多巴胺能神经元的定向诱导；人神经干细胞和多巴胺能神经元前体细胞的冻存和复苏。通过本发明的步骤，可以在体外获得丰富的多巴胺能神经元，与目前众多多巴胺能神经元生产方式相比，具有成本低廉、安全性高、生产效率高、可操作性强的特点。这一体外多巴胺能神经元生产方式，为多巴胺能神经元临床移植治疗帕金森氏症的应用提供新的思路。

摘要： 本发明涉及一种生物工程技术，具体地说是一种利用基因重组病毒诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化的方法：重组慢病毒载体构建；神经干细胞的分离、培养及鉴定；重组病毒转染NSCs；重组慢病毒转染NSCs的鉴定；重组病毒转染NSCs：取传代3次后的NSCs消化制备成单细胞悬液，接种至培养板中；转染TH+Brn4基因重组慢病毒；加入慢病毒和ploybrene，摇晃混匀后将培养板置培养箱中培养，12小时后更换新鲜分化培养基；同时用嘌呤霉素进行筛选，以获得稳定转染的细胞；本发明的优点在于：通过构建目的基因TH和Brn4的慢病毒载体，转染NSCs后外源性基因能在细胞内稳定表达；分化后产生高比例的TH阳性多巴胺能神经元；Brn4能促进神经营养因子的高表达，且具有抑制细胞凋亡的功能。

摘要： 本发明涉及从人羊膜上皮细胞中诱导分化出多巴胺能神经元的方法，该方法包括以下步骤：取新鲜人胎盘，将人羊膜剥离，用生理盐水反复冲洗除后，用无菌D-hank’s液浸泡，再用生理盐水漂洗；将人羊膜置于0.25％胰蛋白酶溶液中，在36.5°C-37.5°C温度下消化；用含有10％胎牛血清的DMEM/F12终止上述人羊膜在胰蛋白酶溶液中的消化，然后用细胞筛对上述溶液进行过滤，收集得到的细胞为人羊膜上皮细胞；分离所获得的人羊膜上皮细胞，用10％无胎牛血清的培养基对分离出来的上述人羊膜上皮细胞进行体外传代培养；选择生长状态良好的3或4或5或6代人羊膜上皮细胞，然后用神经干细胞分化培养基继续培养；收获上述多巴胺能神经元样细胞。

摘要： 本发明涉及用于指示中脑多巴胺神经前体细胞或神经元的报告系统及方法。具体而言，本发明涉及一种包含双报告基因的经遗传修饰的细胞，其能够高效准确指示向中脑多巴胺神经细胞的分化或转分化，从而用于诱导产生中脑多巴胺神经前体细胞及神经元过程中的分选和分化条件或转分化条件的优化。本发明还涉及产生所述经遗传修饰的细胞的方法，以及所述经遗传修饰的细胞用于分化或转分化产生中脑多巴胺神经前体细胞的用途。

摘要： 本发明涉及一种从非神经细胞转化制备保留年龄特征的多巴胺能神经元的方法。本发明的制备方法优化了关键的细胞直接转分化基因组合及调控表达水平的启动子，包装可以高效感染各种年龄供体源细胞的病毒，并采用合适的包被基质促进供体源细胞及转化后的神经细胞贴壁生长，并利用含有可以促进转分化的小分子化合物与生长因子的诱导分化培养液，在10‑14天内经过若干次更换分化培养液后转分化得到大量的多巴胺能神经元，最后经过分离纯化获得高纯度的多巴胺能神经元。

摘要： 本发明涉及医学领域，公开了一种神经干细胞增殖和诱导其分化为多巴胺能神经元的培养基以及应用和增殖诱导方法。本发明增殖培养基以DMEM/F12为基础培养基，其中包括人胰岛素、孕酮、氢化可的松、地塞米松、雌二醇、转铁蛋白、EGF、FGF、CTGF、B‑NGF、VEGF、大豆胰酶抑制剂、L‑谷胱甘肽、油酸、吐温80、磷脂酸、亚硒酸钠、三七总皂苷、白藜芦醇、氯化锂、胆固醇、WNT3a、谷氨酰胺。本发明采用多种适宜、成本低廉、来源广泛的组分组成一种新神经干细胞培养基，其能够显著提高神经干细胞的增殖速度，同时在其基础上添加其他多种诱导分化组分，可见神经干细胞诱导分化为多巴胺能神经元，并显著提高其分化比例。

摘要： 本发明涉及干细胞治疗技术领域的干细胞分化技术，特别涉及一种诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经元的方法：取1-2代前脑来源的神经干细胞用神经干细胞基础培养基培养至神经球直径0.5-1mm大小时，更换培养基为诱导培养基使细胞贴壁生长，培养3-10天后获得多巴胺能神经元；诱导培养基中含有诱导剂aFGF，TPA，毛喉素，普拉克索,BMP-7。利用诱导培养基培养前脑神经干细胞后，神经干细胞分化为多巴胺能神经元的比例达到了30%，大大提高了其分化率，神经元分泌多巴胺的分泌量提高了20倍以上，前脑神经干细胞被有效的诱导为多巴胺能神经元。