外源DNA

摘要： 以外源DNA供体高粱、变异新品系89122和春小麦品种陇春13号为试验受体,3种杂草水浸提液为试验供体,通过正向和逆向化感抑制敏感性测试与评价,分析3种作物的遗传变异特性和化感潜力,评估小麦化感抑草潜力变异特性及遗传机制,为实现小麦抗杂草潜力的遗传改良提供理论支撑。结果表明,高粱DNA导入受体春小麦陇春13号后,其后代在农艺性状等方面发生变异,其对供试杂草的化感敏感性也发生变异;3种杂草水浸提液对3种供试作物种子萌发、幼苗形态特征和物种水平均有不同程度的抑制作用,且抑制作用随处理浓度的增大而增强,具有明显的浓度依赖性;灰绿藜除在种子萌发阶段对高粱的化感抑制作用较弱外,在其他作物幼苗生长阶段的化感抑制作用均明显强于稗和狗尾草,印证了灰绿藜在农田杂草群落中较强适应性主要表现在其对作物幼苗生长阶段的影响,而非种子萌发阶段。灰绿藜通过化感抑制作用实现自身竞争力提升,成为本区域的优势杂草,进一步拓宽了其生态位宽度,它在农田生态群落中的多维影响力强于稗和狗尾草。供试作物种子萌发阶段的敏感性要大于幼苗生长阶段,表现在其发芽指数的敏感性要大于萌发率,说明供试农田杂草通过降低种子发芽指数、延长发芽时间来发挥化感作用,这意味着推迟与其竞争的作物种子的萌发时间,降低竞争作物的种子萌发率,必然会提升该杂草在农田生态群落中的生态位宽度,进而达到提升杂草自身竞争力的目的,这也是杂草自身物种生态位及其生态位构建的重要手段。

摘要： 肺炎双球菌具有多糖荚膜充当生物体毒力因子,转入R型菌的是S型菌染色体上带有荚膜基因的DNA片段.本文较详细地介绍R型菌转化为感受态细胞、感受态细胞摄取外源DNA、以及外源DNA进入细胞中进行同源重组的机理.同时补充介绍了转化、接合、转导三种外源DNA进入细菌的方式.

摘要： 显微注射法是目前应用最广泛的转基因小鼠制备技术,但其效率较低,提高显微注射法制备转基因小鼠的效率有重要意义.外源DNA浓度、小鼠品系均是影响转基因小鼠制备效率的因素,但目前较多文献采用KN小鼠进行转基因小鼠制备效率的优化,对C57/BL6小鼠研究较少.本实验以C57/BL6小鼠为对象,分别进行2.5 ng/μl、5.0 ng/μl的外源DNA浓度原核注射.结果显示,2.5 ng/μl组的怀孕率、出生率、小鼠阳性率、转基因效率均显著高于5.0 ng/μl组的结果(P＜0.05).结论:通过原核注射方式获得C57/BL6转基因小鼠,注射的外源DNA浓度2.5 ng/μl效果较好.

摘要： Tomato seeds were treated in different concentrations of soybean DNA and temperature. Changes of a series of physiological indexes of the offsprings were observed. The content of chlorophyll of offsprings was determined by uv spectrophotometry. Polypropylene gel electrophoresis (PAGE)was used to analyze the peroxidase isozyme (SOD) of plants. Results showed that content of total chlorophyll was increased compared with contrast. When the DNA concentration was 136.50μg/mL and tomato seeds were soaked lightly at 4°C, content of total chlorophyll had the biggest changes with increase of 116%. Band of peroxidase isozyme (SOD) was consistent. There was no new band, but the activity of enzyme was changed.%通过提取大豆DNA，采用浸胚法在不同的浓度和温度下来处理番茄种子，观察后代植株一系列生理指标的变化，通过用紫外分光光度法测定后代植株叶绿素含量，用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)对植株同工酶（SOD)进行分析，发现经处理的番茄种子，后代植株性状产生变异：叶绿素总含量与对照相比出现增加，其中DNA浓度为136.50μg/mL经4°C浸泡避光处理的番茄种子总叶绿素含量变化最大，比对照增加了116%；同工酶（SOD)谱带一致，没有新的谱带出现，但酶活发生了变化。

摘要： 为研究真鲷(Pagrus major)精子在外源DNA下的生理特性和转染效果,探索真鲷精子介导转基因技术,作者通过计算机辅助分析外源DNA环境下(不同孵育时间、DNA长度、DNA浓度)真鲷精子活率和运动速度的变化,进一步采用 PCR 和荧光探针的方法检测外源 DNA 与真鲷精子的结合情况,并通过人工授精来评价外源 DNA 能否转染精子并传递至 F0代。结果表明：外源 DNA 浓度、孵育时间及DNA长度对精子活率无显著影响。在5μg/106个精子的高浓度10 kb DNA下孵育12 h,真鲷精子仍具有(75.89±5.55)%的精子活率,平均直线速度(70.97±6.37)μm/s,与对照组无显著差异,但精子平均曲线速度显著下降,比对照组低21.85μm/s。真鲷精子与带Fluorescein荧光素的DNA片段共孵育后,部分精子在荧光显微镜下观察到绿光。将DNA孵育后精子进行人工授精表明经过1µg DNA/106个精子孵育后的受精率和孵化率无显著下降,通过PCR法并没有在外源DNA处理的精子和F0代中检测到目的基因,表明外源DNA虽然能够吸附在真鲷精子表面,但并不足以携带进入卵子产生转基因后代。%The effect of exogenous DNA ((DNA concentrations, DNA length and incubation time)) on the motility of red seabream (Pagrus major) sperm was studied using computer-assisted sperm analysis (CASA). Sperm fertility was evaluated by artificial insemination (AI). The polymerase chain reaction (PCR) and sperm treatment with Fluorescein-DNA were performed to assess the ability of spermatozoa to bind and internalize exogenous DNA. There was no significant difference in the percentage of motile sperm (MOT) between the DNA treated group and control group. The MOT was maintained at (75.89±5.55)% after treatment with high concentrations of DNA (5μg/106 spermatozoa), whereas the curvilinear velocity and straight line velocity of sperm were decreased by 30.78μm/s and 20.52μm/s, respectively. Green fluorescence was observed in sperm incubated with Fluorescein-DNA, however, no transgene signal was found in DNA treated sperm and embryos after AI through PCR. This result indicates that the exogenous DNA binding to the sperm of red seabream can't be carried into the egg and transgenic offspring.

摘要： 通过花粉管通道介导玉米、稗草总DNA导入4个冬小麦品种(系)9411,955159,96266,鲁麦21中,研究外源DNA导入对转基因D1代种子萌发和植株生长的影响.结果表明:各受体的转基因D1代T1(导入玉米DNA)、T2(导入稗草DNA)处理的种子发芽势和发芽率与对照ck相比呈显著或极显著降低,而T1和T2间无显著差异；以冬小麦9411和鲁麦21为受体的T1株高和ck相比差异极显著,而T2株高与ck间差异不显著；96266为受体的T1处理的第1节间长与对照相比差异显著；9411 T1和T2处理稳长与ck相比差异均达到极显著水平.

摘要： 目的 通过对大量显微注射实践工作中相关数据的分析,寻求DNA片段长度与制备转基因小鼠整合效率的相关性的规律.方法 随机抽样29个制备转基因的项目的资料进行相关性分析.结果 制备转基因小鼠的整合效率随着DNA片段长度增加而降低.根据回归方程,如果片段长度能控制在6000 bp以内基本上可以维持10％左右的整合阳性率(P＜0.001).结论 制备转基因小鼠的DNA片段长度与整合效率之间存在负相关.%Objective To analysis the relevance of foreign DNA length to integration efficiency on the randomly gathering data in preparation of transgenic mouse. Methods The statistics analysis was performed on 29 randomly gathered data of generation of transgenic mouse. Result According the regression equation of statistics analysis in this paper, the integration efficiency of foreign DNA was increased with the shorter length of foreign DNA (P<0.001). The foreign DNA fragments integrated into mouse chromosome DNA with 10% efficiency when the length of foreign DNA were less than 6 000 bp. Conclusion There is a negative correlationbetween integration efficiency and foreign DNA length in microinjection.

摘要： Pollen tube pathway was direct translation technology which useed plant antilogous egg cells or fertilized egg cells as the transformation object.It was a distinctive transgenic technology. This test added GeneFinderTM nucleic acid dye to exogenous DNA, after introduction exogenous DNA,ultraviolet imager showed the light different comparison of corn filament at different stage, which could observe the deformation path of exogenous DNA at different stage, so this way provided another new testing way to study introduction path of exogenous DNA.%花粉管通道法是一种借助于植物自身卵细胞或受精卵为转化对象的直接转化技术，是一种颇具特色的转基因技术。本试验将GeneFinder^（TM）核酸染料加入外源DNA中，通过紫外成像仪对外源DNA导入后不同时期玉米花丝在亮度上的对比差异来观察外源DNA不同时间段所通过的路径变化，因而为研究外源DNA导入路径提供了一种新的试验方法。

摘要： 论述了植物基因工程育种技术的突破性研究进展,对植物基因工程育种前景进行了展望,提出了若干尚待解决的问题.

摘要： 采用子房注射法对‘紫宝石’蝴蝶兰进行外源DNA导入研究,结果表明:不同时期注射和不同注射处理方式对‘紫宝石’蝴蝶兰的落果率影响不同,对胚座组织和种子的GUS染色率的影响也不同,在授粉后65d、以2％DMSO为缓冲液、注射400μg·mL-1浓度质粒时,种子的GUS染色率最高达6.14％.选取各注射时期无菌播种后获得的1000个原球茎经系列浓度的潮霉素筛选后发现,在授粉后65d进行注射时获得的抗性植株最多,为31株,转化率为3.1％.切取转化植株幼叶及幼根进行GUS检测,均为阳性;随机挑选7株幼苗进行PCR检测,均能扩增出GUS基因和HPT基因条带,说明外源基因已经整合到植株基因组内.子房注射法在‘紫宝石’蝴蝶兰转基因中的成功应用,能为兰科植物育种提供一种简单高效的途径.

摘要： 采用子房注射法对‘紫宝石’蝴蝶兰进行外源DNA导入研究,结果表明:不同时期注射和不同注射处理方式对‘紫宝石’蝴蝶兰的落果率影响不同,对胚座组织和种子的GUS染色率的影响也不同,在授粉后65d、以2％DMSO为缓冲液、注射400μg·mL-1浓度质粒时,种子的GUS染色率最高达6.14％.选取各注射时期无菌播种后获得的1000个原球茎经系列浓度的潮霉素筛选后发现,在授粉后65d进行注射时获得的抗性植株最多,为31株,转化率为3.1％.切取转化植株幼叶及幼根进行GUS检测,均为阳性;随机挑选7株幼苗进行PCR检测,均能扩增出GUS基因和HPT基因条带,说明外源基因已经整合到植株基因组内.子房注射法在‘紫宝石’蝴蝶兰转基因中的成功应用,能为兰科植物育种提供一种简单高效的途径.

摘要： 采用子房注射法对‘紫宝石’蝴蝶兰进行外源DNA导入研究,结果表明:不同时期注射和不同注射处理方式对‘紫宝石’蝴蝶兰的落果率影响不同,对胚座组织和种子的GUS染色率的影响也不同,在授粉后65d、以2％DMSO为缓冲液、注射400μg·mL-1浓度质粒时,种子的GUS染色率最高达6.14％.选取各注射时期无菌播种后获得的1000个原球茎经系列浓度的潮霉素筛选后发现,在授粉后65d进行注射时获得的抗性植株最多,为31株,转化率为3.1％.切取转化植株幼叶及幼根进行GUS检测,均为阳性;随机挑选7株幼苗进行PCR检测,均能扩增出GUS基因和HPT基因条带,说明外源基因已经整合到植株基因组内.子房注射法在‘紫宝石’蝴蝶兰转基因中的成功应用,能为兰科植物育种提供一种简单高效的途径.

摘要： 采用子房注射法对‘紫宝石’蝴蝶兰进行外源DNA导入研究,结果表明:不同时期注射和不同注射处理方式对‘紫宝石’蝴蝶兰的落果率影响不同,对胚座组织和种子的GUS染色率的影响也不同,在授粉后65d、以2％DMSO为缓冲液、注射400μg·mL-1浓度质粒时,种子的GUS染色率最高达6.14％.选取各注射时期无菌播种后获得的1000个原球茎经系列浓度的潮霉素筛选后发现,在授粉后65d进行注射时获得的抗性植株最多,为31株,转化率为3.1％.切取转化植株幼叶及幼根进行GUS检测,均为阳性;随机挑选7株幼苗进行PCR检测,均能扩增出GUS基因和HPT基因条带,说明外源基因已经整合到植株基因组内.子房注射法在‘紫宝石’蝴蝶兰转基因中的成功应用,能为兰科植物育种提供一种简单高效的途径.

摘要： 将高粱、玉米、谷子、小麦、长穗偃麦草、大麦、硬粒小麦等33份材料的基因组DNA通过花粉管通道法转入36份普通栽培春小麦和冬小麦，从1988到2009年，共做导入组合462份,处理小花数58200个，最后获得种子32769枚，平均结实率65.61%，产生变异株2085个，变异率为6.01%。产生的变异主要归纳为:叶色、粒色、穗型、株高、抗锈性、育性、熟性、籽粒生产力、千粒重9个方面,创造了大量具有利用价值的变异材料，同时选育出一系列的小麦新品系，对51份外源春小麦品系材料进行了抗条锈性苗期混合菌、成株期分小种及混合菌鉴定。结果表明,全生育期表现抗病的有23份，占鉴定材料总数的45.09%，其中表现免疫近免疫的有99508-3-3-2-1-1-3等9份，占鉴定材料总数的17.65%；表现免疫到高抗的有97510-6-5-1-1-5-5-1等4份，占鉴定材料总数的7.84%；表现免疫到中抗的有2001502-23-26等10份，占鉴定材料总数的19.6%。

摘要： 将高粱、玉米、谷子、小麦、长穗偃麦草、大麦、硬粒小麦等33份材料的基因组DNA通过花粉管通道法转入36份普通栽培春小麦和冬小麦，从1988到2009年，共做导入组合462份,处理小花数58200个，最后获得种子32769枚，平均结实率65.61%，产生变异株2085个，变异率为6.01%。产生的变异主要归纳为:叶色、粒色、穗型、株高、抗锈性、育性、熟性、籽粒生产力、千粒重9个方面,创造了大量具有利用价值的变异材料，同时选育出一系列的小麦新品系，对51份外源春小麦品系材料进行了抗条锈性苗期混合菌、成株期分小种及混合菌鉴定。结果表明,全生育期表现抗病的有23份，占鉴定材料总数的45.09%，其中表现免疫近免疫的有99508-3-3-2-1-1-3等9份，占鉴定材料总数的17.65%；表现免疫到高抗的有97510-6-5-1-1-5-5-1等4份，占鉴定材料总数的7.84%；表现免疫到中抗的有2001502-23-26等10份，占鉴定材料总数的19.6%。

摘要： 将高粱、玉米、谷子、小麦、长穗偃麦草、大麦、硬粒小麦等33份材料的基因组DNA通过花粉管通道法转入36份普通栽培春小麦和冬小麦，从1988到2009年，共做导入组合462份,处理小花数58200个，最后获得种子32769枚，平均结实率65.61%，产生变异株2085个，变异率为6.01%。产生的变异主要归纳为:叶色、粒色、穗型、株高、抗锈性、育性、熟性、籽粒生产力、千粒重9个方面,创造了大量具有利用价值的变异材料，同时选育出一系列的小麦新品系，对51份外源春小麦品系材料进行了抗条锈性苗期混合菌、成株期分小种及混合菌鉴定。结果表明,全生育期表现抗病的有23份，占鉴定材料总数的45.09%，其中表现免疫近免疫的有99508-3-3-2-1-1-3等9份，占鉴定材料总数的17.65%；表现免疫到高抗的有97510-6-5-1-1-5-5-1等4份，占鉴定材料总数的7.84%；表现免疫到中抗的有2001502-23-26等10份，占鉴定材料总数的19.6%。

摘要： 将高粱、玉米、谷子、小麦、长穗偃麦草、大麦、硬粒小麦等33份材料的基因组DNA通过花粉管通道法转入36份普通栽培春小麦和冬小麦，从1988到2009年，共做导入组合462份,处理小花数58200个，最后获得种子32769枚，平均结实率65.61%，产生变异株2085个，变异率为6.01%。产生的变异主要归纳为:叶色、粒色、穗型、株高、抗锈性、育性、熟性、籽粒生产力、千粒重9个方面,创造了大量具有利用价值的变异材料，同时选育出一系列的小麦新品系，对51份外源春小麦品系材料进行了抗条锈性苗期混合菌、成株期分小种及混合菌鉴定。结果表明,全生育期表现抗病的有23份，占鉴定材料总数的45.09%，其中表现免疫近免疫的有99508-3-3-2-1-1-3等9份，占鉴定材料总数的17.65%；表现免疫到高抗的有97510-6-5-1-1-5-5-1等4份，占鉴定材料总数的7.84%；表现免疫到中抗的有2001502-23-26等10份，占鉴定材料总数的19.6%。

摘要： 本文概括总结了黑龙江省20余年农作物分子育种的研究进展。重点介绍了利用花粉管通道技术,即外源DNA直接导入技术进行农作物分子育种的研究背景、应用效果及其成果产业化进展。

摘要： 本文概括总结了黑龙江省20余年农作物分子育种的研究进展。重点介绍了利用花粉管通道技术,即外源DNA直接导入技术进行农作物分子育种的研究背景、应用效果及其成果产业化进展。

摘要： 本发明涉及人体内含有外源重组DNA来源的转录本、DNA片段、或其翻译产物，及其检测方法和应用。具体地，人体内来自于外源重组DNA的氨苄青霉素抗性基因的一种转录本(rAmp)能够与内源酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)基因的转录本发生反式剪接，从而形成一种独特的新转录本及其翻译产物。本发明还提供了检测人体内是否含外源重组DNA来源的转录本、DNA片段、或其翻译产物的方法和应用。

摘要： 本发明提供了一种向莴苣叶绿体中导入外源DNA的方法，包括：利用SEQ ID NO：2所示序列或者包括SEQ ID NO：2所示序列3’端的不小于1kb的片段、SEQ ID NO：3所示序列或者包括SEQ ID NO：3所示序列5，端的不小于1kb的片段、外源DNA片段以及一种载体质粒来构建一个重组载体质粒，并使插入到载体质粒上的外源DNA片段位于所述的两个片段之间；利用所构建的重组载体质粒DNA转化莴苣细胞；培养转化的细胞成为植株。本发明还提供了用于该方法的莴苣叶绿体DNA片段。

摘要： 本发明公开了一种对抗外源压力、保护DNA的护肤基质及其制备方法和应用。该护肤基质包括以下质量百分比的组分：1,3‑丁二醇10~20%、马齿苋提取物5~30%、卤虫提取物5~30%、聚γ‑谷氨酸钠1~5%、透明质酸钠0.5‑2%，余量为水。本发明的护肤基质，通过马齿苋提取物和卤虫提取物功能性成分的协同增效作用，达到了很好的抗炎症和抗光老化效果，有效减少皱纹的生成及皮肤的弹性损失，改善肌肤细纹，同时兼具保护DNA的功效。同时，本发明提供的护肤基质的制备方法简单，操作方便，活性成分充分释放，能够保证最终获得性质均一且质量稳定的护肤基质产品，该制备方法科学规范，易于操作，适于标准化生产和推广应用。

摘要： 本申请提供了一种对基因组中高效稳定地定点整合大片段外源DNA，例如300kb以上大片段外源DNA的方法。所述方法包括目的基因片段的获得、克隆、定点整合和筛选等过程。

摘要： 本发明提供了一种用于高效筛选无外源DNA的基因编辑作物的病毒载体及其构建方法和应用，涉及植物基因编辑技术领域；将特异靶向PDS基因的一段sgRNA插入到TRV2载体中。不含有Cas9外源基因的T1代植株中，由于没有Cas9的切割，叶片仍保持正常的绿色；由此，依据叶片颜色的变化，就可以直观高效地分离出在T1代具有遗传突变的不含Cas9的番茄植株。本发明所述方法可以在T1代中高效筛选已完成目标基因编辑的无转基因植物(效率达80％以上)，省时省力，这将对基础研究和作物改良的基因组编辑技术产生积极影响。

摘要： 本发明公开了一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法，包括以下步骤：S1、安全靶点筛选及靶点绑定gRNA切割效率验证；S2、构建同源臂供体质粒，并获得定点整合转基因细胞系；S3、外源DNA定点整合转基因猪的构建。本发明在供体质粒中引入gRNA靶点序列，利用细胞内转录gRNA诱导Cas9核酸酶切割靶基因同时，线性化供体质粒，大大简化试验步骤，节约人力，且有利于提高共转染效率。本发明定点整合所用载体较少，同源臂大小适中，更有利于获得转基因细胞系，将高效定点整合技术，高活力定点转基因细胞培育技术与体细胞克隆技术结合，有利于定点整合转基因动物高效制备，加快转基因动物新品种培育速度。

摘要： 本发明涉及人体内含有外源重组DNA来源的转录本、DNA片段、或其翻译产物，及其检测方法和应用。具体地，人体内来自于外源重组DNA的氨苄青霉素抗性基因的一种转录本(rAmp)能够与内源酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)基因的转录本发生反式剪接，从而形成一种独特的新转录本及其翻译产物。本发明还提供了检测人体内是否含外源重组DNA来源的转录本、DNA片段、或其翻译产物的方法和应用。

摘要： 本发明提供了一种向莴苣叶绿体中导入外源DNA的方法，包括：利用SEQ ID NO：2所示序列或者包括SEQ ID NO：2所示序列3’端的不小于1kb的片段、SEQ ID NO：3所示序列或者包括SEQ ID NO：3所示序列5’端的不小于1kb的片段、外源DNA片段以及一种载体质粒来构建一个重组载体质粒，并使插入到载体质粒上的外源DNA片段位于所述的两个片段之间；利用所构建的重组载体质粒DNA转化莴苣细胞；培养转化的细胞成为植株。本发明还提供了用于该方法的莴苣叶绿体DNA片段。

摘要： 本发明公开了实现转基因家蚕杂交一代生殖细胞外源DNA自动删除的重组表达载体及其制备方法和应用，首先构建由家蚕生殖腺特异表达基因启动子调控GAL4基因表达的转基因激活载体和由UAS元件调控下游FLP基因表达的转基因效应载体，然后将转基因激活载体和效应载体分别转化家蚕并筛选单拷贝转基因家蚕建立激活系和效应系，再将激活系与效应系家蚕杂交获得双转基因杂交一代家蚕，最终获得基因组中不含目标外源DNA序列的后代家蚕，从而既可实现外源有益蛋白在转基因家蚕特定组织或器官中的表达，又可避免转基因在后代蚕种保留所带来的生物安全隐患。

摘要： 本发明公开了一种提高外源DNA转化玉米效率的方法。在玉米人工授粉后，除去雌穗里层苞叶及全部花丝，套上密封的容器，并固定好，将整个玉米植株倒转过来，固定或悬挂，在密封的容器内加外源DNA溶液，让无花丝的雌穗浸泡在DNA溶液中，最后复原玉米植株。本发明是一种外源DNA溶液浸泡长、导入路径短、充分利用花粉管通道提高外源DNA转化玉米效率的方法，容易操作、成本低廉。